眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化、性质鉴定及细胞毒性测定

目的从眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶（LAAO）,测定其理化性质及细胞毒性。方法采用Superdex75凝胶层析、Phenyl-SepharoseFF疏水层析、ResourceS离子交换层析分离纯化LAAO;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及C18反相色谱鉴定纯度并测定相对分子量;CCK8法测定细胞毒性。结果舟山眼镜蛇蛇毒经凝胶层析、疏水层析、离子交换层析及C18反相色谱后获得LAAO（暂定名NA-LAAO）,在非还原和还原条件下相对分子质量均为58kD左右;具有明显的抑制人胃癌MGC-803细胞增殖作用。结论从眼镜蛇毒中纯化得到LAAO,其具有明显的细胞毒性。     

猪肾二胺氧化酶的纯化

目的 获得高活性的二胺氧化酶制品。方法 分离猪肾皮质、匀浆、加热、(NI--~)：S04沉淀、透析、DEAESepharoseFastF10w离子交换层析、S。phacryls一200凝胶层析。结果猪肾皮质经上述方法后可以获得比si弘1a公司比活高10倍的二胺氧化酶制剂。结论猪肾皮质经匀浆、加热、(NH4)2S04沉淀、透析、离子交换层析、凝胶层析可以获得高活性的二胺氧化酶。     

高纯度凝血酶的分离纯化

目的 利用猪血浆制备高纯度凝血酶.方法 使用DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离猪血浆获得凝血酶原后,用CaCl2激活凝血酶原生成凝血酶.获得的凝血酶粗制品经2次SP-Sepharose FF阳离子交换层析获得高纯度凝血酶.结果 2次层析后的凝血酶的比活为2 546 IU/mg,是凝血酶粗制品的8倍,得率为54％.快速蛋白液相层析检测表明,2次层析后的凝血酶纯度达89％.结论 猪血浆通过1次DEAE-Sepharose FF和2次SP-Sepharose FF离子交换层析可得到高纯度凝血酶.     

梅毒螺旋体重组抗原TpN47的纯化工艺研究

目的 以含有TpN47基因的表达菌体为原料,纯化梅毒螺旋体重组抗原TpN47,并提高产品收率.方法 表达菌体经超声破碎后离心取沉淀,沉淀变性溶解后采用金属螯合亲和层析进行纯化.通过对层析异常现象的分析和优化层析工艺操作提高收率.结果 所得纯品经SDS-PAGE分析表明可用于检测梅毒相关抗体,优化后的操作工艺使产品收率大幅提高.结论 利用金属螯合亲和层析可纯化得到符合要求的梅毒螺旋体重组抗原TpN47,通过改善层析操作提高目标蛋白收率是可行的.     

大肠杆菌表达的重组人肿瘤坏死因子的分离纯化

对表达在大肠杆菌里的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）进行分离纯化。方法：采用疏水相互作用层析和离子交换层析。结果：考察了影响疏水相互作用层析纯化的因素,优化了层析操作条件;样品经疏水相互作用层析后,少量残余的杂蛋白可通过离子交换层析除去。结论：获得了比活性为 ２． ８９×１０~７ｕ／ｍｇ的 ｒｈＴＮＦ－α,总回收率为４０．６％。     

静注人免疫球蛋白层析纯化条件的优化

目的  利用响应面法对Fractogel EMD TMAE介质在静注人免疫球蛋白层析纯化中的应用条件进行优化,确立最佳层析参数。方法  采用双因素三水平响应面法设计层析参数pH值和电导率,用双缩脲法和高效液相色谱法分别测定蛋白浓度和分子大小分布,以蛋白回收率、单体＋二聚体含量评价纯化效果,获得最优层析参数并进行验证。结果  优化的层析纯化平衡和上样条件为pH 5.40,电导率1.05 mS/cm。在该条件下以血浆组分Ⅱ为原料,层析后蛋白回收率为（96.6±3.1）%,IgG单体＋二聚体比例为（99.98±0.02）%,IgA含量为（2.6±1.1）mg/L,IgM含量为（4.5±1.4）mg/L。结论  采用经响应面法优化后的Fractogel EMD TMAE层析条件,可用于纯化血浆组分Ⅱ制备静注人免疫球蛋白制品。     

发酵液中重组人血清白蛋白的纯化

采用摇瓶培养重组毕赤氏酵母（Pichia pastoris）表达并分泌重组人血清白蛋白（recombinant human se-rum alburmin，rHSA）至胞外，发酵液经（NH4）2SO4沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤分离纯化rHSA，纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带。     

重组人白细胞介素-6层析穿流液回收处理工艺研究

目的采用中低压液相层析分离纯化重组人白细胞介素（rhIL-6），回收处理废液以提高产品收率。方法采用阴离子层析介质Q—sepharoseFF和Q—sepharoseHP纯化大肠杆菌来源的rhIL-60结果所得纯品经高效液相色谱法和SDS—PAGE分析表明，纯度大于95％，rhIL-6收率为14％。结论对Q—sepharoseFF层析的穿流液进行超滤浓缩、变性、复性处理。再进行层析可提高rhIL-6的收率。     

红豆杉浸膏在氧化铝催化下紫杉醇的生成研究

目的 :研究在氧化铝层析初分离红豆杉浸膏中紫杉醇增量的来源。方法 :采用C18 硅胶反相层析、氧化铝层析及硅胶层析等方法对物料进行处理 ,HPLC分析紫杉醇的含量。结果 :紫杉醇增量主要来源于红豆杉浸膏中 7 表 紫杉醇的碱性氧化铝催化下的异构化。结论 :优化 7 表 紫杉醇的异构化条件 ,可以增加 7 表 紫杉醇向紫杉醇的转化。     

中华绒螯蟹主要变应原的纯化与应用分析

目的分离纯化中华绒螯蟹的主要变应原蛋白并对其进行免疫学鉴定和应用分析。方法中华绒螯蟹蛋白采用DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤纯化,各组分用蟹过敏症患者血清以ELISA方法分析免疫反应性,活性组分用免疫印迹法测定其相对分子质量和免疫学活性。结果纯化得到两种中华绒螯蟹变应原,在ELISA检测中显示良好的免疫反应性,其相对分子质量分别为76 000和66 000。结论经离子交换层析和分子筛层析纯化的中华绒螯蟹主要变应原保持良好的免疫学活性,可作为特异性抗原应用于ELISA诊断试剂的制备。     

pH梯度洗脱高速逆流色谱制备性分离决明子中的橙黄决明素和大黄酸

目的建立一种从决明子提取物中分离特征性成分橙黄决明素的高效制备性分离方法。方法采用高速逆流色谱技术,针对目的化合物选择合适的两相溶剂体系,水相为流动相并采用pH梯度洗脱。结果采用制备性高速逆流色谱技术一次性从150mg决明子提取物中分离得到了28mg橙黄决明素以及30mg大黄酸,其纯度分别为98.7%和95.5%。结论采用pH梯度洗脱的方法能快速的分离得到中草药中的蒽醌类化合物。     

应用快速色谱技术构建少数民族大复方组分库的方法学研究

目的建立少数民族药大复方全组分的快速制备方法,为有效成分的高通量筛选提供大量样品。方法应用快速色谱仪,以蒙药白脉散乙酸乙酯提取部位为研究对象,采用线性梯度洗脱法快速划段制备一系列色谱组分,采用高效液相色谱法对分离效果进行评价。结果从该复方乙酸乙酯部位获得29个色谱组分,该方法对组方中不同性质的物质起到了较好的分离与富集效果。结论快速色谱技术可用于构建民族复方药物组分库,这将有利于攻克民族药大复方药效物质基础研究难题。     

刘寄奴质量标准修订

修订刘寄奴质量标准,采用性状、显微鉴别法,结合薄层色谱法,鉴别真伪;同时测定浸出物,评价优劣。该方法操作简便,专属性强,设置指标合理,可用于刘寄奴的质量评价和质控。     

Detection of minor constituents in TongMai Granules using NP×RP off-line two-dimensional liquid chromatography coupled with orbitrap mass spectrometry

TongMai Granules is a Chinese medicine patent drug to treat cardiovascular diseases. It is prepared from the water extract of Dan-shen, Chuan-xiong and Ge-gen. The main compounds of TongMai Granules are isoflavone glycosides, isoflavones, and phenolic acids. However, it is difficult to detect low-polar compounds such as tanshinones and phthalides though they may also contribute to the therapeutic effect. In this work, an off-line two-dimensional chromatography method was developed to enrich the minor constituents in TongMai Granules. The extract was subjected to an SEP-PAK silica SPE column and eluted with petroleum ether, ethyl acetate–methanol (6:1, v/v), and methanol, successively. The three fractions were then analyzed using ultra-high performance liquid chromatography coupled with orbitrap mass spectrometry (UHPLC/orbitrap-MS). The isoflavones from Ge-gen, phenolic acids from Dan-shen and phthalides from Chuan-xiong were distributed in different fractions. A total of 131 compounds, including 59 from Ge-gen, 26 from Dan-shen, 43 from Chuan-xiong, and 3 common ones from Dan-shen and Chuan-xiong were tentatively identified. Among them, 26 compounds were identified by comparing with reference standards. This study set a good example for comprehensive analysis of the constituents in traditional Chinese medicine formula.     

超临界CO2萃取结合柱层析法提取和纯化丹参中的丹参酮ⅡA

目的:优化用超临界CO2从丹参中萃取丹参酮ⅡA的工艺条件,并建立纯化丹参酮ⅡA的柱层析法。方法:以HPLC法测定丹参酮ⅡA的含量。采用正交试验优化超临界CO2萃取丹参酮的条件,考察夹带剂用量、萃取压力、萃取温度和分离温度对提取效果的影响。用100~200目的中性氧化铝柱层析,以苯进行洗脱,收集相关流份,减压回收溶剂后经无水乙醇重结晶得到丹参酮ⅡA晶体。结果:超临界CO2萃取丹参酮ⅡA的最优条件为:夹带剂用量120 ml,萃取压力20 MPa,萃取温度50℃,分离温度35℃。柱层析后重结晶得到纯度为93.49%的丹参酮ⅡA晶体。结论:超临界CO2萃取丹参酮具有操作简便、方法可靠、切实可行、无有机溶剂残留的优点,结合柱层析法可获得高纯度晶体。     

强力脑清素片薄层色谱鉴别的探讨

目的：建立强力脑清素片的薄层色谱鉴别方法,为制定其质量控制标准提供实验依据。方法：采用薄层色谱鉴别法鉴别处方中的主要成分五味子流浸膏（五味子乙素、五味子甲素）,以甲苯：乙酸乙酯（9：1）为展开剂。结果：处方中的五味子流浸膏（五味子乙素、五味子甲素）的薄层色谱具有鉴别特征。结论：薄层色谱鉴别本品方法简单可靠。专属性、重现性好。可作为强力脑清素片的质量控制指标。     

胶束电动毛细管色谱法测定头孢克肟的含量

目的建立测定头孢克肟含量的胶束电动毛细管色谱方法。方法采用非涂渍石英毛细管51cm×75μm;运行缓冲液为含100mmol·L^-1十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液（70mmol·L^-1,pH7.0）;压力进样5s,分离电压15kV,柱温25℃,检测波长254nm,选择乙酰苯胺为内标。结果头孢克肟在6.08～777.98μg·mL^-1内,线性关系良好（r=0.9993）。头孢克肟的最低检测限为1.03μg·mL^-1,最低定量限为3.43μg·mL^-1;含量测定结果与HPLC所得结果没有显著性差异。结论胶束电动毛细管色谱法分析头孢克肟的含量,方法准确、简便、灵敏,与HPLC具有互补性。     

龙胆提取物质量标准研究

目的研究龙胆提取物中龙胆苦苷的含量测定和鉴别方法,制定提取物的质量标准。方法采用薄层层析法和高效液相法,对提取物中的龙胆苦苷进行定性鉴别和含量测定。结果通过方法学系统考察和样品的含量测定,建立了龙胆提取物中龙胆苦苷的含量测定方法,测得龙胆苦苷的线性范围为15.84~1014μg·mL-1,回归方程Y=159014.83+20306106.76X,r=0.9997,平均回收率为96.57%,RSD为1.78%。结论本实验建立的鉴别和含量测定方法具有专属性强,重现性好,无明显干扰等优点,是控制本品内在标准较理想的方法。     

大孔吸附树脂联用硅胶柱层析法分离纯化冬凌草甲素

目的:建立大孔吸附树脂联用硅胶柱层析法分离纯化冬凌草甲素的工艺流程。方法:将冬凌草粉碎,用95%乙醇提取,浓缩成浸膏;以冬凌草甲素含量为指标,采用大孔吸附树脂联用硅胶柱层析法分离纯化冬凌草甲素,并用红外光谱、熔点测定和高效液相色谱(HPLC)法对重结晶产品的纯度和结构进行分析和表征。结果:优化的工艺为采用苯乙烯型大孔吸附树脂(HZ-841)先对浸膏进行粗分离,再选取乙酸乙酯-石油醚(6:4,V/V)为洗脱溶剂,石油醚-丙酮(2:3,V/V)为重结晶溶剂进行硅胶柱分离纯化,在此条件下,得到的冬凌草甲素含量为96.11%,提取率达到0.86‰。结论:所选工艺简单、可行,使用溶剂安全、无毒,提取效率高,可用于分离纯化冬凌草甲素。     

薄层色谱溶剂系统的最优化方法

本文以模糊聚类分析法对81种常用溶剂进行分类,并根据最相邻原理从中优选出二十种色谱分析常用溶剂。再据此结果,以均匀设计试验法和最优化方法——单纯形法为手段,进行溶剂系统的最优化设计。并提出一个改良的色谱优化函数。经初步验证,这是一种比较有效与实用的系统化方法,尚未见国内外报道。本法不仅适用于薄层色谱,也适用于纸色谱及柱型液相色谱。