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目的 研究白细胞介素2(IL-2)基因对丙型肝炎病毒(HCV)E2基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建Ⅱ型HCV E2基因的真核表达载体p3E2,免疫组化法检测其在哺乳动物细胞中的表达情况。用p3E2单独或连同IL-2真核表达质粒一起对BALB/s小鼠进行尾部皮下注射,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测E2抗体的产生情况。结果 E2蛋白在哺乳动物细胞中得到瞬时表达。应用p3E2单独或连同IL 相似文献
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为了协同人白细胞介素-2与乙型肝炎病毒前S抗原的生物学功能,探索能打破持续性感染者对HBV表面抗原的免疫耐受,诱导机体对HBs-Ag和preSAg产生体液和细胞免疫应签的基因免疫与治疗药物,用基因重组方法构建了IL-02和HBV完整preSAg的真核表达合基因及表达质粒pCWIIP。pCWIIP转染的Cos-7细胞能分泌表达IL-2-preS融合蛋白,其表达效率与pCIIL-2转染的细胞表达IL- 相似文献
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为了协同白细胞介素- 2( I L- 2) 和乙型肝炎病毒( H B V) 前 S 抗原(pre S) 的多种生物学功能,用基因重组方法将表达 I L- 2pre S 的质粒p C W I I P 转染 Cos - 7 细胞。该细胞分泌表达的 I L- 2pre S 融合蛋白保留了 I L- 2 和pre S 抗原天然分子的生物学活性,且能增强pre S 抗原的免疫原性,产生协同作用,促进机体免疫应答。这可能为 H B V 持续性感染者寻找新的治疗方法提供理论基础与实验依据。 相似文献
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丙型肝炎病毒(HCV)C基因与preS2基因嵌合,嵌合基因免疫小鼠能产生抗HCVC蛋白的抗体,而单独接种HCVC基因则不能诱导小鼠产生抗C蛋白的抗体[1]。为研究preS能否增加HCVE2蛋白的免疫原性提供物质基础,我们在哺乳动物细胞稳定表达了E2?.. 相似文献
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Cos—7细胞表达IL—2—HBVpreS融合蛋白的免疫原性 总被引:1,自引:0,他引:1
为了协同白细胞介素-2和乙型肝炎病毒前S抗原的多种生物学功能,用基因重组方法将表达IL-2preS质粒pCWIIPLFNYIVS OS-7细胞。该细胞分泌表达的IL-2preS融合蛋白保留了IL-2和preS抗原天然分子的生物学活性,具有能增强preS抗原的免疫原性,产生协同作用,促进机体免疫应答。这可能为HBV持续性感染者寻找新的治疗方法提供理论基础与实验依据。 相似文献
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HBV中片段表面抗原及E抗原真核表达质粒的构建与体外表达 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)中片段表面抗原真核表达质粒和E抗原真核表达闰。方法 将编码HBV中片段表面抗原(preS2+S)的基因片段和E抗原(HBeAg_的基因片段分别插入真核细胞表达载体(pJW4303)中,构建成的重组体经筛选鉴定后,再转染哺乳动物细胞,检测表达产物。结果 电泳鉴定显示目的基因片段正确插入了表达载体。经筛选、纯化的阳性克隆转染哺乳动物细胞后可表达preS2+S和HBeAg 相似文献
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建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况。方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMS-CVE1中切下HCVE1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用WesternBLot方法对表达产物进行鉴 相似文献
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Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/N21基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因片段的真核表达载体,分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法 利用逆转 录套式PCR扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒(HCV)E2/NS1基因片段,通过定向克隆将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果 构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因片段的克隆,该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株HCV(HC-J6 相似文献
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丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RT-PCR和基因重组技术,从湖南地区丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清中克隆了HCV包膜蛋白基因片段(E1,E2/NS1)经与已知基因型的HCV-1,HCV-J,HCV-J6和HCV-J8进行核苷酸序列的比较分析,这些基因片段属1b型HCV基因。将克隆基因重组于表达质粒PMAL-CRI中,在大肠杆菌内进行高效表达,获得了融合蛋白MBP-E1,MBP-E2/NS1,经WestemBlot分析证实 相似文献
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目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白DNA疫苗诱导BALB/c小鼠体液免疫应答的效力,为研制应用于人类的HCV DNA疫苗提供实验依据。方法:将全长HCV核心蛋白基因插入真核表达质粒载体pcDNA3.1,构建HCV核心蛋白重组表达质粒pcDNA3.1HCVcore,肌注BALB/c小鼠,以ELISA法检测小鼠血清HCV抗体。以此重组质粒转染小鼠NIH3T3细胞,以HCV抗体阳性小鼠血清为捕获抗 相似文献
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反义基因转移表达及抗乙型肝炎病毒的作用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的观察重组逆转录病毒载体-包装细胞系统介导反义基因转移表达和抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法将HBVayw1402-2906片段和2839-1986片段反向插入重组逆转录病毒载体质粒,分别转染PA317包装细胞,分别感染NIH3T3细胞和2.2.15细胞。结果转导的NIH3T3细胞内有HBV反义RNA转录表达。HBV反义基因重组逆转录病毒感染2.2.15细胞后第3天,表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达量减少,感染后第5天,HBV抗原表达抑制率达高峰。preS/S片段反义基因转移后,HBsAg表达抑制率为71%,HBeAg抑制率为23%;preC/C片段反义基因转移后,HB-sAg表达抑制率为23%,HBeAg抑制率为59%。结论逆转录病毒载体-包装细胞系统能够介导HBV反义基因在真核细胞内转移和表达,并对HBV复制和表达均有抑制作用。 相似文献
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Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因片段的真核表达载体,分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法利用逆转录套式PCR扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒(HCV)E2/NS1基因片段,通过定向克隆将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因片段的克隆,该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株HCV(HC-J6)的同源性为88.37%,Ⅱ型中国株HCV(HC-C2)的同源性为70.69%,其推定的氨基酸同源性分别为89.29%和75.55%。结论基因的核苷酸一级结构在同一基因型中有较高的同源性,而不同基因型之间的同源性则相对较低。对不同基因型之间E2/NS1基因一级结构的研究将有助于HCV疫苗的研制。 相似文献
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乙型肝炎病毒核心基因克隆及其重组体的构建 总被引:6,自引:2,他引:4
目的:构建含乙型肝炎病毒(HBV)编码核心蛋白(HBcAg)的核心(C)基因的真核表达重组体,以进行核酸免疫及相关研究。方法:以含HBV(ayw亚型)全基因序列的质粒pHBV1为模板,用PCR的方法获得编码HBcAg的C基因片段(nt1889~2457),该基因片段两端设计了BanHI和EcoRI的限制性内切酶位点,以便通过定向克隆将其插入真核表达质粒载体pcDNA3相应的多克隆位点。结果:经Ba 相似文献
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乙型肝炎病毒前S1抗原(1—42)与核心抗原(1—144)在大肠?… 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 希望通过融合表达乙型肝炎病毒前S1抗原(preS1Ag)(1-42)及核心抗原(HBeAg)(1-144)提高预防性疫苗的细胞免疫活性,为开发HB治疗性疫苗探索一条有效途径。方法 采用PCR法获得在HBeAg(1-144)基因后连接PreS1Ag(1-42)基因的融合基因,然后将其插入表达载体pET-11d中,在大肠杆菌中进行表达。结果 获得了HBeAg(1-144)、preS1Ag(1-4 相似文献
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乙型肝炎病毒(HBV)基因疫苗可打破人群对HBV表面抗原(HBsAg)疫苗免疫无应答或低应答而产生保护性抗体,并有可能成为治疗HBV持续性感染的特异性基因治疗剂。我们用构建的MS2-preS表达质粒pMIP、IL-2-preS原核表达质粒pIIP、IL-2-priS真核表达质粒pCWIIP产生抗体量高于pMIP(SAS统计分析,P〈0.01),这说明IL-2-preS基因疫苗在体内可能有多种生物学 相似文献
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人类巨细胞病地人胚肺细胞HOX基因表达的影响 总被引:3,自引:1,他引:2
应用半定量RT-PCR技术研究人胚肺(HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现:HEL细胞表达HOXB7基因;HCMV感染后,其表达上调;用全反式维甲酸(ATRA)处理HEL细胞,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 相似文献