顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用

目的建立新生昆明小鼠离体顺铂耳毒性模型,研究顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用。方法分离生后3d的昆明小鼠耳蜗基底膜,在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察不同浓度顺铂对小鼠耳蜗毛细胞的损伤,同时应用Hoechst 33258染色技术检测耳蜗毛细胞的凋亡。结果不同浓度顺铂均可使小鼠耳蜗毛细胞发生凋亡的形态学变化。顺铂浓度为4mg·L-1时,耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率明显增大,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随着顺铂浓度的增高(8～64mg·L-1),耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.01)。结论应用新生昆明小鼠能建立可靠的离体顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗毛细胞凋亡,提示凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。     

顺铂体内注射对子代豚鼠耳蜗毛细胞的影响

[目的]了解孕晚期顺铂暴露是否会诱导子代豚鼠耳蜗毛细胞损伤.[方法]将孕晚期豚鼠12只随机分为两组,在孕50 d至56 d,顺铂组经腹膜腔注射顺铂1,5mg/kg·d,对照组注射生理盐水1.5 mg/kg·d.出生后14d,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)和Caspase-3免疫组化染色检测毛细胞凋亡情况.[结...     

bFGF对豚鼠庆大霉素耳毒性的对抗作用

给豚鼠中耳局部交替注射ｂＦＧＦ和庆大霉素，与交替注射生理盐水和庆大素组对照，发现实验组听力损失有眼震缩短率均明显小于对照组。扫描电镜发现：实验组耳蜗Ｃｏｒｔｉ‘ｓ器仅见听毛轻度粘连，对照组Ｃｏｒｔｉ’ｓ器内，外毛细胞散在性坏死脱落，残留毛的毛严重粘连，丧失；实验组前庭纤毛排列不整、部分缺失，对照组前庭大部分毛细胞坏死脱落，残留毛细胞纤毛大部分丧失。提示：，ｂＦＧＦ对豚鼠庆大霉素耳毒性有一定对抗作用     

顺铂耳蜗毒性作用机制的研究进展

顺铂主要用于治疗头颈部和泌尿生殖系统的恶性肿瘤，内耳毒性是其主要毒副作用之一，防治其毒性是耳鼻咽喉科研究领域的重要课题。目前研究表明，一氧化氮与顺铂耳蜗毒性密切相关。现将顺铂耳蜗毒性机制的研究进展综述如下。     

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素所致豚鼠耳蜗损害的拮抗作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素所致活体豚鼠耳蜗损害的拮抗作用。方法 豚鼠皮下注射庆大霉素连续１０ｄ,造成内耳损伤。实验组同时腹腔注射ｂＦＧＦ,对照组则注射生理鼻水。检测两组豚鼠的听功能,耳蜗行扫描电镜观察。结果 扫描电镜观察所见对照组耳蜗损伤明显重于实验组,对照组ＡＲＢ听阈较实验组高。     

川芎嗪对顺铂所致耳蜗毒性保护作用的实验研究

目的 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在川芎嗪(TMP)拮抗顺铂(CDDP)耳毒性中的表达情况,探讨顺铂耳毒性的致病机制及川芎嗪对顺铂耳毒性的防护作用.方法 选取50只健康豚鼠,随机分为对照组、顺铂组和中药组,各组动物均于用药前及停药后测试听觉脑干诱发电位(ABR),利用免疫组织化学方法测定各组耳蜗内iNOS的表达情况.结果 对照组ABR阈值(40.94±6.75)db,顺铂组ABR阈值为(76.26±4.54)db,中药组ABR阈值为(58.98±5.82)db,3组比较差异具有显著性(P<0.01);免疫组化结果显示iNOS在对照组不表达,顺铂组Corti氏器和螺旋神经节细胞胞浆内有强阳性表达,中药组有阳性表达,3组比较差异具有显著性(P<0.01).结论 川芎嗪可以通过抑制iNOS的表达来对抗顺铂的耳毒性.     

顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞钙激活的钾电流的作用的初步研究

目的：研究顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾电流的作用,方法：应用膜片钳技术从单离的逐鼠耳蚋外毛细胞获得钙激活的钾通道记录,并观察顺铂对它的作用,结果：结果表明该通道活动受到细胞外的浓度为10^-5M的顺铂的抑制,结论：豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾通道是顺铂的作用位点之一。     

川芎嗪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究

目的探讨活血化瘀中药川芎嗪是否对顺铂的耳毒性具有保护作用。方法将听力正常的30只豚鼠随机分为3组,每组10只。对照组：生理盐水3 ml/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂组：顺铂3 mg/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂加川芎嗪组：先腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）3天,从第4天起腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）后再注射顺铂3 mg/（kg.d）6天。给药前后通过听觉脑干诱发电位（ABR）检测豚鼠听功能的变化;然后在麻醉状态下断头取耳蜗,半数标本切片后用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测耳蜗内细胞凋亡情况;半数标本进行耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态及酶学变化。结果顺铂组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损,琥珀酸脱氢酶（SDH）活性减弱,有部分毛细胞凋亡,与对照组及川芎嗪组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。顺铂加川芎嗪组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损较轻,凋亡细胞较少,与顺铂组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论川芎嗪能降低顺铂的耳毒性。     

干细胞因子和碱性成纤维细胞生长因子在体外对间充质干细胞的作用

目的研究干细胞因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外对间充质干细胞(MSC)的作用特点,探索体外大量培养间充质干细胞的方法和条件。方法用梯度离心和贴壁培养法分离MSC,进行表面分化抗原的鉴定。培养体系中分别加入SCF、bFGF或SCF bFGF,用MTT实验和检测细胞周期来观察细胞的增殖情况。结果加入SCF和bFGF后MSC的增殖活性增强,两种因子作用强度相近,两者合用刺激增殖的效果未见增强。结论SCF和bFGF有刺激MSC增殖的作用,可以在一定程度上延迟MSC在体外培养过程中的退化现象。     

Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9在胎膜早破中的作用

目的:通过检测自发性胎膜早破患者、正常分娩产妇和择期剖宫产产妇胎膜中凋亡因子Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位,探讨凋亡因子Caspase-3-、8-、9在自发性胎膜早破中的作用。方法:取自发性胎膜早破未发动分娩行剖宫产的患者的胎膜(即胎膜早破组)8例,正常经阴道分娩产妇的胎膜(即阴道分娩组)8例以及无产科并发症择期剖宫产的产妇的胎膜(即剖宫产组)8例,其中,阴道分娩组和剖宫产组均作为对照组。应用免疫组化方法(SP法)对三组胎膜中Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位进行检测,同时在光学显微镜下观察胎膜组织形态学的改变,在透射电镜下观察胎膜细胞超微结构的变化。结果:Caspase-3,-9蛋白在3组胎膜中均表达,Caspase-3,-9蛋白主要表达在羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养层细胞,少数表达于网状细胞和间叶细胞,均为胞浆表达,胎膜早破组Caspase-3蛋白表达量(OD)为[(62.86±3.83)×10-2],高于阴道分娩组[(42.33±2.99)×10-2]和剖宫产组[(20.97±2.94)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组Caspase-9蛋白表达量为[(52.20±3.28)×10-2],高于阴道分娩组[(25.87±5.52)×10-2]和剖宫产组[(17.65±1.78)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-8在3组几乎不表达。胎膜早破组胎膜在光镜下观察发现组织形态学发生明显改变,电镜下可观察到大量凋亡细胞。结论:Caspase-9和Caspase-3分别作为凋亡的线粒体途径的启动因子和效应因子,在胎膜早破中表达明显增高,超微结构也观察到大量凋亡细胞。因此推测线粒体途径的凋亡在胎膜早破发病机制中可能起到一定的作用。     

bFGF在高血压大鼠不同时期心肌细胞表达变化的研究

目的:以Dahl高血压大鼠为研究对象,观察碱性成纤维生长因子(bFGF)在高血压不同阶段心肌细胞的分布变化,以期为高血压性心脏病的研究提供理论基础和新治疗途径.方法:通过免疫组织化学方法,观察bFGF在心肌组织切片中的表达变化情况,计算单位面积心肌组织bFGF的阳性细胞数.结果:bFGF免疫细胞在DahlS和DahlR组大鼠的心肌细胞中均有表达,DahlS组bFGF阳性细胞数均较同时期DahlR组增多(P＜0.01),DahlS组自10周起至12周bFGF阳性细胞数逐渐增多(P＜0.01),DahlR组在高血压不同时期bFGF无显著性变化(P＞0.05).结论:在高血压和血压正常时,bFGF在心肌细胞上均有表达,并随高血压的病程延长呈上升趋势.     

Caspase-9和Bax在胃癌组织中的表达及其意义

目的：探讨凋亡基因Caspase-9和Bax在胃癌中的表达与意义。方法：应用免疫组化S—P法检测Caspase--9和Bax在57例胃癌及48例非癌胃黏膜组织中的表达。结果：Caspase--9蛋自在胃癌组织中阳性表达率为40．35％,非癌胃黏膜组织的阳性表达率70．83％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;Bax蛋白在胃癌组织中阳性表达率为35．09％,非癌胃黏膜组织阳性表达率为72：92％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;高中分化腺癌组Caspase--9和Bax蛋白的阳性表达率明显高于低分化腺癌组及粘液癌组,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）;Bax和Caspase--9蛋白在胃癌组织中的表达与淋巴结转移、浸润深度、临床病理分期均无明显关系（P〉0．05）;在胃癌组织Caspase--9表达阳性的23例中有Bax表达阳性17例,在胃癌组织Bax表达阴性37例中Caspase--9表达阴性31例,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Caspase--9和Bax在胃癌组织中表达降低,提示二者可能与胃癌的发生或发展相关;随着胃癌分化程度的降低,Caspase--9和Bax的表达降低,提示二者可能与胃癌的恶性程度有关;胃癌组织中Caspase--9和Bax表达有关,推测Bax激活Caspase--9的线粒体通道受抑可能参与胃癌的发生。     

Livin与Caspase-9在胃癌组织中的表达及临床意义

目的为探讨Livin和Caspase-9在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化染色方法检测56例胃癌组织及56例正常胃黏膜中Livin和Caspase-9的蛋白表达。结果胃癌标本Livin和Caspase-9的阳性表达率分别为68%、18%,与正常胃黏膜阳性表达率(5.4%、62.5%)比较有显著性差异(P<0.05)。Livin的表达,随着胃癌病理变化进展、程度的发展,阳性表达率增高,Caspase-9的表达,随着胃癌病理变化进展、程度的发展,阳性表达率降低,两者比较有显著性差异(P<0.05)。组织标本中Livin和Caspase-9表达呈负相关性。结论Livin和Caspase-9在胃癌的发生、发展中起着重要的作用,可能会成为胃癌的分子标志物或胃癌治疗的新分子靶点。     

bFGF对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对人毛囊黑素细胞 (Hairfolloclemelanocyte ,HFM )增殖活化和黑素合成的影响。方法　体外培养正常人HFM ,观察不同浓度bFGF(0 3～ 1 2ng ml)对HFM形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。结果　bFGF处理HFM 7d后 ,HFM树突增多延长 ,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显著高于对照组 (P <0 0 1) ,以 0 6ng ml组为著。结论　bFGF能诱导HFM增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成增加     

针灸通督法对缺血性脑卒中患者Caspase-3、Caspase-9水平影响的临床研究

[目的]通过观察针灸通督、常规针刺、药物三种疗法对缺血性脑卒中患者细胞凋亡相关指标Caspase-3（半胱天冬氨酸蛋白酶-3）、Caspase-9（半胱天冬氨酸蛋白酶-9）水平的影响和临床疗效的差异,探讨针灸通督疗法治疗缺血性脑卒中的作用机制.[方法]将120例缺血性脑卒中患者随机分为针灸通督组（A组）、常规针刺组（B组）、药物对照组（C组）,各组患者在治疗前后均进行Caspase-3、Caspase-9、神经功能缺损、ADL（日常生活活动能力）检测,并将其结果进行对比分析.[结果]三种疗法均有不同程度的降低Caspase-3、Caspase-9活性、改善神经功能缺损及ADL的作用,有显著性差异（P＜0.05）,且灸通督组各观察指标改善明显,与常规针刺组、药物对照组相比,有显著或非常显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）.[结论]针灸通督疗法具有抑制细胞凋亡、促进患者神经功能恢复和改善患者日常生活活动能力的作用,其作用机制可能与减少患者脑神经元凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达有关.     

柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为及海马Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响

目的探讨柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为学及海马Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响。方法 60只2~3月龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组,每组15只。采用慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)结合孤养方式复制大鼠抑郁模型。从造模第2天开始,氟西汀组(1.2 mg/kg)及柴胡皂苷组(25 mg/kg)进行灌胃给药,每日1次。于实验21 d,分别进行敞箱实验及糖水消耗量实验检测大鼠行为学改变;采用免疫组化法及RT-PCR法检测大鼠海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达水平。结果造模21 d后,与对照组相比,模型组大鼠行为学指标明显降低(P0.05);与模型组比较,氟西汀组与柴胡皂苷组大鼠行为学指标明显改善(P0.05);免疫组化及PCR检测结果显示,海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因表达,模型组与对照组比较表达明显增强(P0.05),氟西汀组及柴胡皂苷组与模型组比较表达明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论柴胡皂苷可有效改善大鼠抑郁样行为,其机制可能与抑制海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白表达有关。     

噪声对大鼠蜗核酸性纤维母细胞生长因子活性的影响

目的：研究不同强度噪声暴露后成年大鼠蜗核酸性纤维母细胞生长因子（ａＦＧＦ）样免疫反应。方法：噪声暴露后用定量免疫细胞化学方法。结果：１３０ｄｄＢ噪声暴露后１ｄ（１３０ｄＢＳＰＬ，８ｋＨｚ白噪声），ａＦＧＦ样免疫反应明显下降，其下降水平持续１－２月。１２０ｄＢ噪声暴露后１ｄ（１２０ｄＢＳＰＬ，８ｋＨｚ白噪声），ａＦＧＦ样免疫反应也下降，但在１－２月内恢复，蜗核神经元ａＦＧＦ样免疫反应光密度变化民听觉     

Noise-induced nitrotyrosine increase and outer hair cell death in guinea pig cochlea

Background Modern research has provided new insights into the biological mechanisms of noise-induced hearing loss,and a number of studies showed the appearance of increased reactive oxygen species (ROS...