排卵前成熟卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响

目的 :探讨成熟卵泡液、促性腺激素对人类生殖泡期 (germinalvesicle,GV)不成熟卵母细胞体外成熟 (invitromaturation ,IVM)的影响。方法 :在基本培养液中加入 5 0 %成熟卵泡液 (folliclefluids ,FF) (Ⅰ组 )、或促性腺激素 (gonadotrophin ,Gn) (Ⅱ组 )或单用基本培养液即对照组 (Ⅲ组 )用于GV期卵母细胞的体外培养 ,观察成熟率及进一步发育能力。结果 :三组之间GVBD(生殖泡期破裂 )率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,MⅡ期率和受精率 ,Ⅰ、Ⅱ组明显高于Ⅲ组 (P <0 .0 1)、Ⅰ组与Ⅱ组之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组卵裂至 8细胞的比例为 6 2 .5 % ,明显高于Ⅱ组的33.3% (P <0 .0 1)。结论 :GV期卵母细胞尽管在基本培养液中可完成核成熟 ,但胞质不成熟 ,加入 5 0 %FF或Gn均能促卵母细胞的成熟 ,两者相比 5 0 %FF效果更好。     

绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响

目的　利用在培养液中添加绵羊卵泡液和次黄嘌呤 ,抑制卵母细胞GVBD发生 ,延长转录活性 ,从而使卵母细胞真正成熟 ,提高胚胎质量及生产效率。方法　利用体外成熟技术对有屠宰采集的绵羊卵母细胞进行培养 ,培养液中添加卵泡液及次黄嘌呤 ,检查成熟效果。结果　将卵母细胞培养在 5 0 %和 10 0 %的卵泡液中 ,2 4h后处于GV期的卵母细胞分别为 19% (8 4 2 )和 33 3% (13 39)。在含有 4mmol L次黄嘌呤的培养液中 ,2 4h后有2 1 6 % (16 74 )的卵母细胞处GV期 ,而对照组中只有 6 % (3 5 0 ) ,经过次黄嘌呤处理的卵母细胞多数都停滞于PⅠ期(44 6 % ,33 74 )。在 4mmol L次黄嘌呤培养液中添加FSH并未使受到抑制的卵母细胞诱导成熟。结论　卵泡液和次黄嘌呤只能在有限的程度上抑制减数分裂的重新启动 ,并对减数分裂的全过程都有影响 ,这种影响程度与抑制因子的浓度相关 ,存在明显的剂量效应。     

子宫内膜异位症患者卵泡液阻碍小鼠卵母细胞体外成熟及内异方药物血清的干预作用

目的 探讨子宫内膜异位症(EM)患者卵泡液阻碍小鼠卵母细胞发育的机制及中药内异方药物血清对此的干预作用.方法 临床获取EM不孕患者、输卵管因素导致不孕患者(对照组)卵泡液各10例样本,对小鼠行中药内异方灌胃获得药物血清,分别制备4组培养基:A组(空白对照)、B组(对照患者卵泡液)、C组(EM患者卵泡液)、D组(EM患者卵泡液十内异方药物血清).将小鼠生发泡(GV)期卵母细胞分别放入各组培养基中进行体外成熟(IVM)培养.观察并统计各组卵母细胞的成熟情况,通过荧光染色对细胞内活性氧(ROS)的水平进行分析比较.结果 C组卵母细胞的成熟率(42.5％)相较A组(81.7％)、B组(56.3％)、D组(51.0％)低(P＜0.05).C组卵母细胞平均荧光强度(0.056 8±0.025 1)高于A组(0.014 8±0.005 1,P＜0.05)和B组(0.037 1±0.010 2,P＜0.05);D组卵母细胞平均荧光强度(0.050 4±0.007 0)低于C组,但差异无统计学意义.结论 EM患者卵泡液能够阻碍小鼠卵母细胞成熟,其机制可能与EM卵泡液产生过多ROS而增强了卵母细胞内的氧化应激有关.内异方药物血清可改善EM患者卵泡液对小鼠卵母细胞发育的阻碍作用.     

卵泡液成分与卵母细胞质量相关性研究进展

在辅助生殖治疗过程中,正确评估卵母细胞的质量对于治疗结局具有重要意义。对卵母细胞质量的评估方法有许多种,卵泡液获取方便,是目前对卵母细胞质量评估的最理想非侵入性指标。所以,卵泡液因子在评估卵母细胞质量中备受关注。大量研究表明,卵泡液中的甾体激素水平、促性腺激素水平及卵泡液中一些细胞因子均与卵母细胞质量具有相关性。近年来,卵泡液蛋白组学、代谢组学的研究成为主要趋势,也有望成为卵母细胞评估的重要工具。     

人卵泡液中白血病抑制因子浓度及其对卵母细胞发育的影响

目的: 探讨人卵泡液中是否存在白血病抑制因子(LIF)及其对卵母细胞发育的影响. 方法: 采用ELISA法检测66例体外受精-胚胎移植患者取卵日卵泡液及其血清中LIF浓度,分析卵泡液中LIF浓度与卵母细胞发育的关系. 结果: 66份卵泡液中LIF浓度为(28.5±13.1) ng/L, 血清LIF浓度为(3.0±1.5) ng/L ,差异非常显著(P＜0.01),而且两者间无相关性(r=0.1915, P＞0.05). 含成熟卵母细胞的卵泡液中LIF浓度为(33.7±11.1)ng/L,含未成熟卵母细胞的卵泡液LIF浓度为(18.0±10.5)ng/L,两者比较差异非常显著(P＜0.01). 结论: 卵泡液中存在较高浓度的LIF,其对卵母细胞发育有促进作用.     

卵泡液代谢组学预测卵母细胞发育潜能的研究现状

卵泡液是由颗粒细胞、卵泡膜细胞等分泌物共同形成的,可作为卵母细胞生长发育的微环境或培养基。卵泡液中含有细胞、蛋白质、激素等物质,可以促进卵母细胞完成生长、发育、成熟等一系列生理活动。卵母细胞的质量是影响辅助生殖结局的关键因素,对提高临床妊娠率有重要价值。代谢组学分为靶向和非靶向分析技术,现如今通常利用磁共振成像、质谱检测技术等来检测卵泡液中的代谢物,包括葡萄糖、氨基酸、胆固醇,维生素等成份,进而评估与预测卵母细胞的发育和成熟。本文就卵泡液代谢组学预测卵母细胞发育潜能的研究现状做一综述。     

卵泡液微环境对卵母细胞发育的影响

卵泡液由血浆渗出物和卵巢局部分泌物组成,由于卵巢血管未穿过卵泡基膜,卵泡液直接提供了颗粒细胞和卵子的生存环境,在卵泡发育、成熟、排卵、闭锁过程中起重要的调控作用.随着辅助生殖技术(ART)的迅速发展,卵泡液微环境中调节卵子发育的激素和相关细胞因子的作用受到生殖医学界的广泛关注.     

卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合征中的应用研究

近年来随着辅助生育技术的不断发展 ,控制性超排卵得到越来越广泛的应用 ,在一个控制性超排卵周期获得较多的成熟卵母细胞有助于提高体外受精 胚胎移植的成功机会。但是控制性超排卵所需昂贵的治疗费用及其可能导致的一系列并发症(如中度或重度卵巢过度刺激综合征等 )也已引起人们越来越多的关注和重视[1] 。获取不成熟卵母细胞在体外成熟 (ｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ,ＩＶＭ) ,然后将成熟卵母细胞进行体外受精和胚胎移植 ,为人们解决上述问题提供了一条可能的途径。本研究从接受小剂量促卵泡生成素 (ｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕ…     

山羊卵泡大小对卵母细胞体外发育能力的影响

目的比较不同大小山羊卵泡的卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的能力。方法收集不同大小山羊卵泡的卵母细胞,分3组进行体外培养。Ⅰ组：卵泡直径≥5.0mm;Ⅱ组：卵泡直径3.0～4.9mm;Ⅲ组：卵泡直径〈3.0mm。观察各组卵母细胞体外成熟率、体外受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果3组卵母细胞体外成熟率与受精率差异无统计学意义（均P〉0.05）。Ⅲ组卵母细胞的卵裂率及囊胚形成率分别为53.8%和28.6%,均显著低于Ⅰ组和Ⅱ组（均P〈0.01）。结论在进行山羊未成熟卵体外成熟培养时,卵泡直径≥3mm的卵母细胞体外发育潜能较卵泡直径〈3mm的卵母细胞好。     

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据?方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟?胚胎发育?胚胎种植?临床妊娠及结局等方面的差异?结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率?优质胚胎率明显提高(P < 0.05或P < 0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平?虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率?妊娠率(临床妊娠率)?活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1?这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关?值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生?但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证?结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关?但系统尚需进一步优化,以保证其高效?安全?价廉?     

LH/EGF诱导ICR小鼠窦状卵泡卵母细胞体外成熟与排卵的研究

目的：利用医学研究常用ICR品系小鼠,在建立窦状卵泡体外培养体系的基础上,研究黄体生成素（luteinizing hormone,LH）与表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）诱导卵母细胞体外成熟及排卵的作用。方法：体外剥离得到大的窦状卵泡用于培养并建立适宜于研究诱导卵母细胞成熟及排卵的窦状卵泡体外培养模型,通过向培养液中添加LH和EGF诱导卵母细胞体外成熟与排卵。结果：成功构建了ICR小鼠窦状卵泡体外培养模型,发现LH或EGF单独处理均可诱导卵泡卵母细胞成熟和卵丘扩展,而两者共同作用才能够诱导卵泡体外排卵。结论：LH/EGF促进ICR小鼠窦状卵泡卵母细胞体外成熟与排卵。     

子宫内膜异位症患者卵泡液对小鼠成熟卵子体外受精的影响

目的：探讨子宫内膜异位症患者卵泡液对小鼠成熟卵母细胞体外受精的影响。方法：小鼠经HMG及HCG促排卵,处死后收集其输卵管内成熟卵母细胞。将收集到的卵母细胞随机分为三组进行体外受精：空白对照组：DMEM液＋10％胎牛血清＋50IU／ml青霉素＋50μg／ml链霉素;研究组：DMEM液＋10％胎牛血清＋50IU／ml青霉素＋50μg／ml。链霉素＋40％子宫内膜异位症患者卵泡液;对照组：DMEM液＋10％胎牛血清＋50IU／ml青霉素＋50μg／mL链霉素＋40％输卵管因素不孕患者卵泡液。观察三组卵子体外受精情况。结果：研究组、对照组及空白对照组体外受精率分别为68．28％,74％,78．5％。三组体外受精情况比较,无显著性差异（P〉0．05）。结论：子宫内膜异位症患者卵泡液对小鼠成熟卵母细胞的受精能力无明显影响。     

淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究

目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量.     

不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力

目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。     

卵泡液外泌体在卵泡细胞功能调节中的机制研究进展

卵泡液是卵泡细胞生长发育的内环境,其成分的变化与卵泡细胞的功能状态息息相关。近年来,人们发现在许多生物体液中都存在一种直径为30~150 nm的双层膜囊泡结构——外泌体（exosome）,并揭示了它在众多生理病理过程中的媒介作用。研究者也在卵泡液中鉴定出了外泌体成分,并发现它与卵泡细胞的生长发育有着密切的联系,并间接影响了卵母细胞状态,这对评估卵母细胞质量有着重要意义。     

姜黄素对新生大鼠卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对新生大鼠卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响。方法：雌性SD大鼠分为母鼠灌胃组（受孕11.5d母鼠灌胃姜黄素（100mg·kg^-1·d^-1）直至分娩,分别取出生后1、2和4d龄雌仔鼠卵巢）,新生鼠腹腔注射组（正常出生1d龄雌仔鼠腹腔注射姜黄素（100mg·kg^-1·d^-1）,连续4d,分别取出生后2、4d龄卵巢）和对照组（以母、幼均未用药的正常同天龄新生鼠的卵巢为对照）。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察不同发育阶段的卵泡比例,TUNEL染色检测卵巢内卵母细胞凋亡情况。结果：在1d龄卵巢中,母鼠灌胃组未装配卵泡比例明显低于对照组（P〈0.05）,而原始卵泡的比例明显增加（P〈0.05）;在2d龄卵巢中,新生鼠腹腔注射组未装配卵泡比例明显低于对照组（P〈0.05）,而原始卵泡比例则明显高于对照组（P〈0.05）;在4d龄卵巢中,新生鼠腹腔注射组的原始卵泡比例显著下降（P〈0.05）。早期初级和发育卵泡比例显著升高（P〈0.05）。在1、2d龄卵巢中,母鼠灌胃组和新生鼠腹腔注射组卵母细胞TUNEL阳性率均明显低于对照组（P〈0.05）。结论：姜黄素能加快新生大鼠卵母细胞巢破裂,促进原始卵泡的发育启动,同时能抑制卵母细胞凋亡,可能有益于延长卵巢的生殖寿命。     

影响人卵母细胞体外成熟因素的研究进展

卵母细胞体外成熟培养（In Vitro Maturation,IVM）是指将GV期或GV前期的卵母细胞在体外培养,达到次级卵母细胞（MII）,能够正常发育、受精和着床,包括完整的卵泡培养^[1]和单纯的卵丘复合体培养。在现代生殖领域中,IVM为降低患者促排卵并发症、降低治疗费用提供了解决途径,利用该技术可为一些高龄、卵巢早衰、卵巢切除和遗传病患者提供生殖机会,同时也有助于深入了解卵巢内不同发育阶段卵泡的发育机制和特点,但目前IVM的成功率还很低,要从根本上提高其成功率,必须对卵母细胞发育的相关影响因素进行研究和探讨。     

人卵泡液对体外培养鼠胚发育的影响

昆明种雌鼠经孕马血清促性腺激素（ＰＳＭＧ）和人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）超数排卵，与雄鼠交配后在注射ＨＣＧ４２ｈ获得晚期２－细胞鼠胚．置Ｈａｍ′ｓＦ~（１０）为主的培养液中，发育到囊胚的平均比率为６２．０％。实验组培养液中加入５％，１０％，１５％（Ｖ／Ｖ）人卵泡液，囊胚比率为２３．７％（Ｐ＜０．０５），１９．５％（Ｐ＜０．０５），１７．８％（Ｐ＜０．０５）。不同浓度卵泡液组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果表明：（１）２－细胞晚期鼠胚体外培养结果稳定，适宜作人胚胎及卵子体外培养条件的质量监控。（２）人卵泡液抑制鼠胚体外发育，且这种抑制与卵泡液浓度无关。