新生大鼠脑缺氧缺血模型心肌细胞凋亡的研究

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后不同时段心肌细胞凋亡情况。方法　结扎新生 7日龄大鼠右颈总动脉后放入 8%低氧舱 2h制成HIBD模型 ,应用AnnexinV/PI双染流式细胞技术检测缺氧缺血 (HI)后 1、4、18、2 4、4 8、72h及 7d心肌细胞凋亡情况。结果　HI后各HI组心肌细胞的凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,72hHI组凋亡率又显著高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,表明HI后 7d内各组大鼠心肌均存在超出正常凋亡 ,尤以 72hHI组凋亡率最高。结论　新生大鼠HIBD后 1h～ 7d内心肌细胞均存在明显凋亡 ,以HI后 72h更明显 ,提示对缺氧缺血性脑病新生儿保护心肌减少心肌凋亡的治疗应至少用至生后 7d     

葡萄糖对围生期脑缺氧缺血损伤作用的研究进展

葡萄糖不仅是人类(包括动物)在生理条件下维持脑代谢活动的极其重要和唯一的有机能量物质,也是提供胎儿和新生儿脑发育和脑代谢活动的重要物质。研究显示,因缺氧缺血(HI)引起葡萄糖供应中断,是导致不可逆脑损伤的关键原因,因而葡萄糖在围生期脑缺氧缺血损伤(HIBD)中的作用已日益受到关注。全面深刻了解葡萄糖在围生期HIBD中的作用,不仅有助于加深对该病的认识,也可为临床治疗提供必要的依据。     

新生大鼠脑缺氧缺血后细胞色素C释放与凋亡的关系

目的　探讨未成熟脑在缺氧缺血 (HI)后细胞色素C释放的时相变化及细胞色素C释放与半胱天冬酶的激活和DNA损伤的关系。方法　 7日龄Wistar新生大鼠在缺氧缺血后不同时间点处死取脑 ,部分脑组织进行手工匀浆分离胞浆和线粒体成分进行Western蛋白印迹检查 ,部分进行组织切片用于细胞色素C免疫组化染色和免疫荧光双染色。结果　Western蛋白印迹显示线粒体中细胞色素C在HI后 1h未见明显变化 ,HI后 14hHI侧较对侧 (H)减少 4 6 % ;而HI侧脑组织胞浆中细胞色素C的含量在HI后 1h已明显增加 ,在HI后 14h增加更明显。免疫组化结果显示大脑皮层细胞色素C阳性细胞数在HI后 1h为 8 4± 1 8个 /高倍视野 ,明显高于正常对照的 1 5± 0 8个 /高倍视野(P <0 0 1) ,并随HI后恢复时间的延长阳性细胞逐渐增加 ,在HI后 14h达到峰值 (2 9 0± 5 2个 /高倍视野 ) ;而TUNEL阳性细胞数在HI后 1h为 14± 3个 /高倍视野 ,明显高于正常对照的 1 5± 0 8个 /高倍视野 (P <0 0 1) ,在HI后 2 4h达到峰值 (2 86± 86个 /高倍视野 )。荧光染色发现细胞色素C释放与活性半胱天冬酶 3仅在HI后早期同时染色 ,并且阳性细胞表现为核浓缩 ,随HI后恢复时间的延长 ,细胞色素C的阳性细胞明显少于活性半胱天冬酶 3的阳性细胞 ;细胞色素C与TUNEL     

抑制因子kB与神经细胞凋亡

核因子（NF）－kB是一种广泛存在的核转录因子，它参与多种基因的转录调控，与细胞凋亡等生理病理过程关系密切。抑制因子kB(IkB)作为NF－kB的抑制子，在NF－kB活化的途径中起着最关键的分子开关作用，IkB家族包括IkBα,IkBβ,IkBε,IkBγ(p105)Bcl-3和IkBδ(p100）。各种刺激下神经元和胶质细胞中NF－kB的活化及靶基因转录不同，对细胞凋亡影响不同；神经元和胶质细胞IkBs代谢动力学也存在差异，选择性地针对IkBs亚型或其上游IkB激酶可能达到调控神经细胞凋亡的目的。     

核转录因子κB在神经母细胞瘤中的表达及临床意义

目的　研究核转录因子κB(NF κB)在神经母细胞瘤 (NB)中的表达及其临床意义。方法　标本取自华中科技大学同济医学院附属协和医院 1997～ 2 0 0 2年手术治疗的 2 9例NB患儿 ,年龄 5个月～ 7岁 ,平均 2岁 9个月。其中男 14例 ,女 15例。按Evans分期标准行临床分期 ,Ⅰ期 4例 ,Ⅱ期 5例 ,Ⅲ期 6例 ,Ⅳ期 8例 ,ⅣS期 6例。采用免疫组织化学SP法检测 2 9例NB组织中NF κBp6 5的表达 ,并分析NF κB表达与NB临床分期、病理类型和患儿术后生存时间的关系。 结果　 2 3例NB组织有NF κBp6 5表达 ,阳性检出率为79.3% ,主要表达于瘤细胞胞浆和部分瘤细胞的胞核。Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期、ⅣS期NF κB阳性检出率分别为 77.8%、92 .9%、5 0 .0 % ,各分期间差异均具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。NB组NF κB阳性率 (91.6 7% )显著高于节细胞神经母细胞瘤 (GNB)组(2 0 .0 % ) (P =0 .0 0 6 ) ;预后差组织型 (UFH)NF κB阳性率 (91.6 7% )显著高于预后好组织型 (FH)(70 .5 9% ) (P =0 .0 2 4 )。NF κBp6 5与患儿术后生存时间呈负相关 (n =13,r =- 0 .6 2 9)。结论　NF κB表达程度与NB发生、发展关系密切 ,是评估患儿预后的重要指标。     

缺氧诱导因子-1在缺氧细胞凋亡中的作用

缺氧是许多疾病发展过程中的一个重要病理生理因素。缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）是联系氧信号传导及反应的桥梁，它在多种细胞事件中起作用，如细胞存活、凋亡、细胞活性、细胞骨架结构、细胞黏附、红细胞生成、血管活性、转录调节、上皮稳定、药物抗性、能量代谢及pH调节等。细胞凋亡是由细胞内预存的细胞死亡程序引发的高度精密调节的、能量依赖性的、有序的细胞自杀过程，这一过程对消除机体内老化细胞及具有潜在性异常生长的细胞，以及保持机体处于稳态等中起着重要作用。     

cl-x, Bax mRNA在新生大鼠脑缺氧缺血后的表达及其与脑细胞凋亡的关系

探讨新生动物缺氧缺血性脑损伤后细胞死亡相关基因bcl-x,bax表达的变化规律及其与神经细胞凋亡的关系.建立新生大鼠缺氧缺血性脑病动物模型,应用快速竞争性RT-PCR及原位末端标记法观察脑缺氧缺血后不同时间点缺氧缺血侧大脑组织中hcl-x,baxmRNA的表达及神经细胞凋亡的情况.结果显示缺氧缺血后新生大鼠脑bcl-xsmRNA的表达自缺氧结束后即刻即有明显增强,24h达高峰,此后逐渐下降,7d时回复至正常基线水平.而baxmRNA的表达自缺氧缺血后2h开始明显增加,24h达高峰,7d时回复至正常基线水平.缺氧缺血侧脑组织中凋亡细胞数亦自缺氧缺血后6h明显增多,并于24h达高峰.bcl-xs,baxmRNA的表达高峰与缺氧缺血后脑细胞凋亡的高峰时相相吻合.缺氧缺血对bcl-xlmRNA的表达无影响.研究表明缺氧缺血可使新生大鼠脑bcl-xs,baxmRNA的表达增强和凋亡细胞增加,但对bcl-xlmRNA的表达无影响.bcl-xl/bax的比值在缺氧缺血后脑细胞凋亡的调控过程中起重要作用.     

bFGF对新生大鼠缺氧缺血后海马CA 1 区神经细胞凋亡的影响

为研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对新生大鼠缺氧缺血(HI)后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响,应用新生Wistar大鼠制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,用HE染色、电镜及原位缺口末端标记(TUNEL)法检测bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响.结果显示HE染色、电镜及TUNEL法均证实HI后海马存在选择性神经细胞凋亡,尤以CA 1区为重,CA 2和CA 3区病变较轻.TUNEL检测结果,bFGF治疗组阳性细胞数(15.23±14.2)低于未治疗组(25.12±20.25),差异显著(P＜0.05).因此,bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞确有保护作用.     

核转录因子-κB在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖中的作用。方法随机将体外培养的大鼠PASMC分为对照组、血小板源性生长因子(PDGF)刺激组、辛伐他汀干预组和辛伐他汀联合小白菊内酯(NF-κB抑制剂)干预组,每组6个样本。通过MTT比色法和流式细胞术检测PASMC的增殖及细胞周期;通过免疫组织化学检测NF-κB蛋白的表达并进行图像分析;通过RealTime PCR检测NF-κB m RNA的表达水平。结果 PDGF刺激组的各时间点MTT值,S期和G2+M期细胞比例,NF-κB蛋白及mRNA表达水平均较对照组显著升高(均P0.05);给予辛伐他汀干预后,上述各指标水平均较PDGF刺激组降低(均P0.05);辛伐他丁联合小白菊内酯干预后上述各指标下降更加明显,但与辛伐他汀干预组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论辛伐他汀能抑制PASMC的增殖和细胞周期进程;NF-κB可能在辛伐他汀对PASMC增殖的抑制中起重要作用。     

核转录因子Gli在恒河猴轮状病毒致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化中的调控作用

目的:研究sonic hedgehog(Shh)信号通路核转录因子Gli1/Gli2在恒河猴轮状病毒(RRV)感染致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化(EMT)中的调控作用。方法:通过RRV构建胆道闭锁小鼠模型,根据RNA干扰技术对Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达调控的不同,将实验小鼠分为正常组、模型组、Gl...     

核因子-kβ在高压氧治疗缺氧缺血性损伤中的作用

核因子-kβ(Nuclear factor-kβ，NF-kβ)是近年来发现的重要转录因子，可调控细胞因子、炎性蛋白的合成以及氧自由基的产生，在高压氧(Hyperbaric oxygen，HBO)治疗缺氧缺血性损伤(HID)及其损伤机制中起着关键作用，现综述如下：     

核转录因子FOXO3a在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用

目的：探讨核转录因子FOXO3a在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡中的作用及机制。方法：160只10日龄SD大鼠随机分为缺氧缺血（HI）组和假手术组,HI组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎后缺氧2.5?h;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理。两组在HI后0.5?h、2?h、4?h、8?h和24?h各处死16只大鼠取大脑皮层。应用Western blot定量检测FOXO3a总蛋白、胞核FOXO3a蛋白、胞浆FOXO3a蛋白及Bim蛋白表达。应用TUNEL染色法检测凋亡细胞。结果：与假手术组比较,HI组胞核FOXO3a蛋白于HI后0.5 h表达开始增高,随HI时间延长表达逐渐增高,24?h达高峰（P<0.01）;胞浆FOXO3a蛋白水平在HI后各时间点均低于假手术组（P<0.01）;Bim蛋白在HI后0.5 h表达升高,2?h达高峰,4?h开始降低,至8?h开始恢复至基线水平。TUNEL染色结果显示HI后4 h,凋亡细胞开始增多,24?h达高峰,各时间点凋亡指数均高于假手术组（均P<0.01）。结论：新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时FOXO3a自胞浆转位入胞核,诱导靶基因前凋亡蛋白Bim表达,Bim表达上调可能与神经元凋亡有关。     

地塞米松对脑缺氧缺血大鼠bid基因表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后bid基因表达及细胞凋亡的变化，地塞米松（DEX）对其的调控作用，从而阐明DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。方法 7d龄SD大鼠24只。随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX和NS组在缺血缺氧前12h腹腔内分别注射DEX、等量NS。通过建立新生大鼠HIBD动物模型，取实验侧大脑半球，采用RT-PCR技术检测脑bid基因表达，采用Tunel法检测凋亡细胞。结果 正常组无bid基因表达，HIBD组bid基因表达明显上调，凋亡细胞数明显增加（P〈0．01）；与HIBD组比较，DEX组bid基因表达明显下调，而凋亡细胞数明显减少（P〈0．01）。结论 脑缺氧缺血引起神经细胞凋亡可能与bid基因表达明显上调有关。DEX能通过下调bid基因表达，从而抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

一氧化氮合酶在脑缺氧缺血中的双重作用

一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在脑缺氧缺血（ＨＩ）中的双重作用已日益受到重视,本文分别阐述了三种不同亚型的ＮＯＳ在脑ＨＩ中的神经保护作用和神经毒性作用,并展望了ＮＯＳ抑制剂在ＨＩ脑损伤中的应用前景。     

抗氧化剂NAC抑制新生大鼠脑缺氧缺血损伤相关的神经细胞凋亡

目的 研究抗氧化剂（ＮＡＣ）对缺氧缺血脑损伤引起的神经细胞凋亡的作用。方法 利用新生大鼠缺氧缺血脑损伤的动物模型,通过末端转移枰介导的原位缺口标记（ＴＵＮＥＬ）法,检测并比较在有或无药物保护下脑皮质、海马中神经细胞凋亡的程度。结果 抗氧化剂（ＮＡＣ）处理显著减少缺氧缺血脑组织中凋亡阳性细胞数。结论 抗氧化剂ＮＡＣ可有效抑制缺氧缺血脑引起的神经细胞凋亡;氧化张力在缺氧缺血脑损伤的形成机制中可能起重要     

核因子-κB反义核酸对肾病大鼠肾小球硬化细胞凋亡的干预

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)反义核酸对阿霉素肾病大鼠肾小球细胞凋亡的干预作用.方法 SD雄性大鼠分成A组(假手术组)、B组(硬化组)、C组(正义核酸组)、D组(无义核酸组)及E组(反义核酸组)5组,每组6只.采用右肾切除加尾静脉注射阿霉素制成肾小球硬化动物模型.第8周各组大鼠给予不同的药物干预,在给药7 d后,应用免疫组化技术检测肾组织核转录因子κB p65(Nr-κB p65)、capase-3的表达,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾小球细胞凋亡指数.结果 E组NF-κB p65、caspase-3的表达及肾小球细胞凋亡指数与B组相比均明显降低.结论 NF-κB反义核酸通过肾动脉给药可直接抑制肾组织NF-κB的表达,抑制肾小球系膜细胞凋亡,延缓肾小球硬化的进程.     

环加氧酶—2在脑缺氧缺血再灌注损伤中的作用

环加氧酶 (ＣＯＸ)是催化花生四烯酸 (ＡＡ)合成前列腺素(ＰＧ)和血栓素 (ＴＸ)的限速酶[1] ,具有ＣＯＸ 1和ＣＯＸ 2两种亚型。ＣＯＸ 1亚型在体内广泛分布 ,其含量和活性也保持相对稳定。ＣＯＸ 2亚型的生成则受多种致病因子的诱导调节 ,故称为诱导型ＣＯＸ。近来研究证实 ,ＣＯＸ 2在新生儿脑缺氧缺血再灌注损伤的过程中扮演了重要的角色 ,本文就此进行综述。一、ＣＯＸ 2与脑缺氧缺血再灌注损伤　在全脑缺血2 0ｍｉｎ的成年大鼠模型中 ,缺血处理 4ｈ后 ,在大脑皮质及海马部位可见ＣＯＸ 2ｍＲＮＡ的生成 ,8ｈ左右达到高峰。海马ＣＡ1区…     

血红素氧化酶和内源性一氧化碳在新生鼠脑缺氧缺血中的作用

目的　研究血红素氧化酶 1(HO 1)、内源性一氧化碳 (CO)、环磷鸟苷 (cGMP)在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用及锌原卟啉 (Znpp)对其的治疗前景。 方法　制备缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生鼠模型和Znpp治疗模型。利用分光光度法测定新生大鼠缺氧缺血 (HI)后脑组织HO 1活性和血一氧化碳血红蛋白(COHb)含量 ,放免法检测脑cGMP水平 ,并观察脑组织形态学变化。结果　HI组在 1、4、12hHO 1活性、COHb及cGMP水平与对照组相比显著增高 (P <0 .0 1) ;Znpp组HO 1活性、COHb及cGMP水平明显低于HI组 (P <0 .0 1) ,但仍显著高于对照组 (P <0 .0 1)。脑组织病理改变显示HI组呈重度HI改变 ,Znpp组的病理改变明显减轻。结论　HI后HO 1、CO和cGMP明显增高 ;而Znpp可抑制HO活性 ,使CO和cGMP水平下降 ,减轻脑损伤 ,表明HO CO cGMP系统在缺氧缺血的病理生理过程起着重要作用     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠核因子κB表达与脑细胞凋亡的关系

目的观察核因子κB（NF—κB）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑细胞凋亡中的表达，探讨其HIBD后NF—κB与细胞凋亡的关系。方法新生7日龄SD大鼠48只，随机分为2组：假手术组和缺氧缺血（HI）模型组，各24只。HI组大鼠采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型，分别于手术后6、24、48、72h取脑组织切片，用免疫组织化学方法检测NF—κB在海马区的表达、TUNEL方法检测神经细胞凋亡。假手术组不作缺氧缺血处理，采用同样方法检测NF—κB。结果假手术组海马区有少量NF—κB表达，且有少量凋亡细胞，各时间点无明显变化（Pa〉0．05）；HI组NF—κB的表达在6h后开始增加，48h达高峰，并持续至72h（P〈0．05），与假手术组相比较差异有统计学意义（Pa〈0．05）；细胞凋亡在6h即开始增加，在24、48、72h逐渐增加，随时间变化差异有统计学意义（Pa〈0．05），与假手术组相比差异有统计学意义（Pa〈0．05）；直线相关回归分析HI组NF—κB表达与细胞凋亡呈显著正相关（各时点的r=0.478，0.552，0.641，0.627 Pa〈005．缩诊HTBn后NF—κB在海马区的持续活化对促进神经细胞凋亡起重要作用。     

一氧化氮合酶在脑缺氧缺血中的双重作用

一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在脑缺氧缺血（ＨＩ）中的双重作用已日益受到重视,本文分别阐述了三种不同亚型的ＮＯＳ在脑ＨＩ中的神经保护作用和神经毒性作用,并展望了ＮＯＳ抑制剂在ＨＩ脑损伤中的应用前景。