OPG基因敲除小鼠骨量及微结构的改变

目的 研究小鼠OPG基因敲除对其骨质量及微结构的影响.方法 HE、扫描电镜、四环素荧光及显微CT观察OPG基因敲除小鼠骨微结构的改变;DXA仪测定小鼠股骨标本的总体骨密度和骨矿含量.结果 与野生型小鼠相比,OPG基因敲除小鼠松质骨与皮质骨均出现明显的骨丢失,伴显著的骨微结构破坏;总体骨密度和骨矿含量减少.结论 OPG-/-小鼠发生明显骨丢失,骨微结构破坏.     

ApoE与动脉粥样硬化的关系及ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

载脂蛋白E是血浆脂蛋白的重要组成成份,在脂蛋白代谢中发挥重要作用.动脉粥样硬化是目前危害人类健康的主要疾病,血脂异常是其发病及进展中重要因素之一.载脂蛋白E通过不同机制对动脉粥样硬化起到一定的抑制作用.随着基因工程动物的广泛应用,ApoE基因敲除小鼠逐渐成为动脉粥样硬化研究领域中应用最多的动物模型.现就近几年有关载脂蛋白E与动脉粥样硬化的关系以及ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用作一综述.     

ApoE基因缺陷鼠免疫、血液稳态和抗氧化功能改变

目的:探讨载脂蛋白E(apoproteinE,ApoE)功能障碍对脂质代谢、血液稳态、脾T淋巴细胞亚群及自由基代谢的影响.方法:以ApoE基因缺陷(ApoE0)鼠为实验模型,以相同遗传背景的C57BL/6J鼠为对照,对比血浆中有关指标的不同.结果:与对照组比较,ApoE0鼠的总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白胆固醇(10w density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平均高于正常对照鼠(P＜0.05),而ApoE0鼠的高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)仅为正常对照鼠的1/5(P＜0.01);ApoE0鼠的血浆组织纤溶酶原激活物活性(tissue plasminogen activator activity,tPAa)增加18.3%(P＞0.05),纤溶酶原激活抑制剂活性(plasminogen activatorinhibitor activity,PAIa)下降19.6%(P＜0.05),使tPAa/PAIa升高55%(P＜0.01);ApoE0鼠的凝血酶原活性、凝血酶活性和纤溶酶活性分别升高54.2%(P＜0.01)、135%(P＜0.01)和37.6%(P＜0.01),而纤溶酶原活性降低24.3%(P＜0.01);ApoE0鼠CD4+和CD8+分别降低17.2%(P＜0.05)和58.9%(P＜0.01),CD4+/CD8+升高146%(P＜0.01);ApoE0鼠血浆超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活性降低17.5%(P＜0.01),MDA水平增加29.8%(P＜0.01),肝脏SOD活性有下降趋势(P ＞0.05),而丙二醛(malonadehyde,MDA)含量升高99%(P＜0.01);两种鼠血管的SOD活性和MDA水平差异无显著性(P＞0.05).结论:ApoE基因缺陷鼠造成脂质代谢紊乱,还使凝血和纤溶功能亢进、淋巴细胞亚群比例失调及血浆氧化-抗氧化平衡破坏等异常.利用这一模型进行的有关研究应同时考虑由于ApoE功能障碍引起的这些变化.     

老年人载脂蛋白E基因多态性、骨密度和骨量丢失

目的：探讨老年人载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与髋骨密度（BMD）、骨丢失的关系。方法：随机选取沈阳市60岁以上汉族健康老年人100名,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RELP）方法检测ApoE基因型,用DPX-L双能X线吸收仪（Lunar,USA）分别在2000年和2005年两次测量研究对象髋部骨密度。结果：该人群ApoE基因型频率分布为E2/3：17%,E3/3：66%,E3/4：15%,E4/4：1%,没有E2/2和E4/4型。等位基因频率分部为ε2：8%,ε3：84%,ε4：8%。无论男女携带ApoE4基因组和不携带ApoE4基因组间年龄、身高和体重均无差异。在2000年,携带ApoE4基因组和不携带ApoE4基因组两组股骨颈、大转子和Ward区的骨密度经身高、体重和年龄校正后,男女均没有显著性差异;相同分析各部位年骨丢失率也没有显著性差异。结论：该人群ApoE基因型与髋部骨密度无明显相关性。     

骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征

目的研究我国自行开发的骨保护素（OPG）基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据。方法将野生型OPG（OPG^-WT）小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠（OPG^-/-）分成3组（每组6只）,分别检测其血清碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）及骨钙素（OC）水平,并行骨密度测定、X线摄片、扫描电镜检查和生物力学测试,将所得数据进行统计学分析。结果OPG^-/-小鼠的骨密度、股骨刚度和最大折断负荷均显著降低（P〈0．01）,血清ALP和ACP明显升高（P〈 0．01）,OC在早期与对照组无明显差异。OPG^-/-小鼠在X线平片上表现为骨量减少,骨小梁稀疏或塌陷,骨皮质变薄。扫描电镜观察到OPG^-/-小鼠骨小梁变细、变尖,骨小梁间隙增大,部分骨小梁塌陷。结论OPG^-/-小鼠骨吸收活性增强伴继发性成骨活性提高,符合高转换型骨质疏松的特征,具有明显的优点,为研究OPG／OPGL／RANK体系提供了新的平台,有可能成为一种新的模型用于高转换型骨质疏松症的实验研究。     

丹参酮ⅡA对ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制

目的观察丹参酮ⅡA对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠肝脏脂质沉积及相关基因表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗As作用及可能机制。方法20只ApoE-/-小鼠随机分成模型组、丹参酮ⅡA组,10只C57BL／6J小鼠作为李白对照组。模型组、丹参酮ⅡA组给予高脂饲料喂养,空白对照组给予普通饲料。丹参酮ⅡA组每日灌胃丹参酮ⅡA（30mg／kg）、模型组、空白对照组灌予等量生理盐水灌胃。全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量。HE和油红O染色观察小鼠肝脏组织结构变化以及脂质沉积情况,RT-PCR法检测肝脏低密度脂蛋白受体（LDL-R）、卯磷脂胆固醇脂酰转移酶（LCAT）基因mRNA水平,Westernblotting法检测肝脏内LDL-R、LCAT蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低,肝脏形成大量脂质沉积,肝脏LDL-R、LCAT基因mRNA和蛋白水平显著下调。与模型组相比,丹参酮ⅡA组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著下降,HDL-C水平显著升高,肝脏脂质沉积明显减少,肝脏LDL-R、LCAT基因mRNA和蛋白水平显著上调。结论丹参酮ⅡA具有调节血脂和减少肝脏内脂质沉积的作用,其机制可能与调控LDL-R和LCAT基因表达相关。     

骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响

目的 探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系.方法 建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清 OPG 和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价.结果 与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05).OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05).结论 OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平.     

骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响

目的探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系。方法建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清OPG和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价。结果与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05)。OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05)。结论OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平。     

半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血脂及抗氧化功能的影响

目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变形成早期血清脂质水平、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组和半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,每组6只。除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周。处死小鼠,ELISA法检测血脂水平,黄嘌呤氧化酶法检测SOD活力,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,HE染色观察主动脉形态学变化。结果半枝莲总黄酮中、高剂量组血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平明显低于模型组,高剂量组高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平明显高于模型组（P〈0.05或0.01）。半枝莲总黄酮3个剂量组的MDA含量较模型组显著减少,SOD活性表达水平较模型组显著升高（均P〈0.01）。结论半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,升高SOD活性,降低MDA含量,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF及MMP-9表达的影响

目的观察南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化斑块形成的早期阶段主动脉壁中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为南蛇藤素干预组和对照组,每组6只,均给予高脂饮食饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别予以2mg.kg-1.d-1南蛇藤素和相当剂量的溶剂二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,每日1次,连续用药4周;小鼠处死后行主动脉连续石蜡切片,HE染色观察组织形态学改变,测定ApoE基因敲除小鼠主动脉根部粥样斑块面积,同时采用免疫组化方法观察主动脉壁MIF和MMP-9蛋白表达的强度。结果图像分析测量结果显示对照组形成了早期斑块;南蛇藤素干预组斑块面积较对照组明显减小(P<0.01),斑块面积/动脉壁横切面积也明显降低(P<0.01);南蛇藤素干预组与对照组比较,MIF、MMP-9的表达均明显降低(P<0.01)。结论南蛇藤素可能通过下调ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF、MMP-9表达,发...     

健康儿童载脂蛋白E基因表达的研究

目的探讨健康儿童外周血单核细胞载脂蛋白E基因表达及其与载脂蛋白E基因型之间的关系.方法采用竞争性逆转录-聚合酶链反应方法分析46例正常健康儿童外周血单核细胞的载脂蛋白E基因表达,采用改良的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测载脂蛋白E基因型.结果载脂蛋白E基因能在健康儿童外周血单核细胞表达,健康儿童载脂蛋白E基因表达量为(0.47±0.15)moles/mole GAPDH mRNA,载脂蛋白E基因表达量没有明显的性别差异(P＞0.05).健康儿童载脂蛋白E基因型分布不均,E 3/3(32例),E 2/3(8例)及E4/3(6例),未见E 2/2、E 2/4、E4/4.载脂蛋白ε2、ε3、ε4等位基因的频率分别是0.09、0.85、0.06.与ε3等位基因携带者比较,ε 2等位基因携带者载脂蛋白E基因表达量上调,ε4等位基因携带者的载脂蛋白E基因表达量下调[分别为(0.47±0.12)moles/mole GAPDH mRNA、(0.42±0.10)moles/mole GAPDH mRNA、(0.28±0.09)moles/mole GAPDHmRNA,P均＜0.05].结论载脂蛋白E基因能在健康儿童周围血单核细胞表达,载脂蛋白E基因多态性影响健康儿童外周血单核细胞载脂蛋白E基因表达水平.     

PCR-SSCP法测定人载脂蛋白E基因型

目的：建立一种既可以测定人载脂蛋白E常见基因型，又可以筛查罕见异构体的新方法。方法：利用RFLP和SSCP法对人载脂蛋白E编码基因的PCR扩增产物进行基因型的检测和分析，采用双脱氧DNA链合成终止法进行PCR产物直接测序，确认基因型的测定结果。结果：两种方法测得的基因型结果完全相符，并经测序证实结果正确。结论：PCR-SSCP法对于单碱基突变的高检出率使其具有筛查罕见异构体的可能，同时该法还可以准确快捷地进行人载脂蛋白E常见基因型的测定。     

载脂蛋白E基因变异与颈动脉粥样硬化及血脂的关系

目的探讨颈动脉粥样硬化(CAS)与载脂蛋白E(apoE)基因多态性的关系。方法采用聚合酶链反应一限制性长度多态技术(PCR-RFLP)检测103例CAS患者和108例健康对照者的apoE的基因型及等位基因分布频率,同时检测其血脂水平。结果CAS组apoE基因型E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4和E4/4的频率分别为0%、11.7%、1.9%、47.6%、35.6%和2.9%,apoE等位基因ε2、ε3和ε4的频率依次为5.8%、66.0%和28.2%;而对照组相应基因频率分别为2.8%、16.7%、0.9%、65.7%、13.9%、0和9.3%、82.4%、8.3%;两组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,CAS组apoE基因E3/4和等位基因ε4的频率明显增高,而E3/3、ε3的频率则明显降低(P<0.05)。结论apoE等位基因ε4在CAS患者中出现的频率显著增高,很可能是引发CAS的潜在危险因子。     

载脂蛋白 E 与陈旧性心肌梗死患者血脂浓度的关系

目的　探讨载脂蛋白E与陈旧性心肌梗死患者血脂浓度的关系。方法　55例陈旧性心肌梗死患者及47例对照组血浆载脂蛋白E浓度用免疫比浊法测定。结果　陈旧性心肌梗死患者血浆载脂蛋白E水平（5.21±1.46mg/dl）较对照组（4.12± 1.72mg/dl）显著增高（t =12.01,Ｐ<0.05）。但没有发现载脂蛋白E与陈旧性心肌梗死患者血脂浓度存在显著统计学相关关系 （r =0.06~0.67,Ｐ>0.05）。结论　陈旧性心肌梗死患者血浆载脂蛋白E浓度显著增高,但它与血脂水平并无显著统计学相关关系。     

载脂蛋白B、E基因多态性与浙南几种常见疾病的相关性分析

目的:探讨载脂蛋白B、E(ApoB、E)基因频率与浙南地区几种常见疾病的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,检测浙南地区41例Ⅱ型糖尿病、68例高血压病、26例冠心病、40例脑出血、40例脑梗死、23例再生障碍性贫血患者和60例正常人的ApoB、E基因的多态性.结果:Ⅱ型糖尿病组ApoB基因X ,E-等位基因频率高于正常对照组(P＜0.05),再生障碍性贫血组X ,E-等位基因频率明显高于正常对照组(P＜0.01).冠心病组X 等位基因频率与正常对照组比较有统计学意义(P＜0.05).脑梗死组、冠心病组和高血压病组ApoE基因ε4等位基因频率较正常组增高(P＜0.05).结论:ApoB、E基因多态性与浙南地区几种常见疾病有密切的相关性,可作为危险因子来早期预测疾病的易感人群.     

载脂蛋白E基因多态性与颈动脉粥样硬化相关性的研究进展

高血脂及颈动脉粥样硬化是脑血管疾病的重要危险因素。研究发现血浆中的载脂蛋白E可以调节脂质代谢过程,并维持胆固醇代谢平衡,与血脂水平及颈动脉粥样硬化的进展密切相关。载脂蛋白E基因存在多态性,不同的等位基因对血脂水平及颈动脉粥样硬化的影响不同,对脑血管病的发生、发展、预后判断以及二级预防均有重要意义。本文对载脂蛋白基因的多态性、其与高脂血症及颈动脉粥样硬化之间的关系进行总结,并对近年来国内外关于这一领域的基因治疗研究进展进行综述。     

载脂蛋白E上3个氨基酸缺失-脂蛋白肾病相关的基因突变

目的 通过对3例脂蛋白肾病患者(其中2例为母子,1例与他们无血缘关系)的载脂蛋白E(apoE)基因的分析,研究脂蛋白肾病的发病机制。方法 使用限制性酶切片段长度多态性的方法分析3例患者及其中一些家系成员的apoE的基因型,对患者的apoE进行DNA测序。结果 该3例脂蛋白肾病患者均携带一个apoE的突变体(3个氨基酸的缺失)。结论 该突变与脂蛋白肾病有关,在中国汉族人可能为脂蛋白肾病的致病性基因突变。     

载脂蛋白E基因多态性与急性心肌梗死及血胆固醇水平的关系

目的：探讨载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性与急性心肌梗死及血胆固醇水平的关系，方法：５０例急性心梗患者及１００便正常人，采用聚合酶链反应－－限制性片段长度分析ＡｐｏＥ的基因型，并按标准酶法及免疫学方法测定血脂和载脂蛋白。结果：Ｅ４等位基因及基因型频率在病例中均明显高于对照组，而在病例组中共Ｅ４患者血脂固醇也高于Ｅ３．３患者。结论：本研究表明ＡｐｏＥ基因多态性与急性心梗相关，并影响血胆固醇水平。     

血液透析患者载脂蛋白E基因多态性与血脂水平检测

目的 探讨血液透析患者脂代谢紊乱的临床特征及载脂蛋白(Apo)E基因多态性对脂代谢的影响。方法 采用生化方法检测血液透析组(112例血液透析患者)和对照组(372名健康体检者)的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)、载脂蛋白(Apo)A1、ApoB、ApoE和脂蛋白(Lp)(a)水平，采用多聚合酶链反应—限制性片断长度(PCR—RFLP)法检测ApoE基因多态性。结果 与对照组相比，血液透析组脂代谢紊乱主要表现为血清TG水平显著增高，高于正常者33．0％；HDL—C水平显著降低，低于正常者10．4％。相关分析显示，TG水平与血清白蛋白水平、透析时体外循环血流量显著相关；HDL—C与尿素清除指数(KT／V)显著相关。血液透析组中，高血压的发生率为73．6％，心血管疾病为25．0％。血液透析组中，伴心血管疾病者的TG水平显著高于无心血管疾病者，伴高血压者与无高血压者血脂水平的差异无显著性。ApoE基因多态性检测结果显示，ApoE基因型ε3／3及等位基因ε3发生频率最高。血液透析组与对照组的差异无显著性。对照组与血液透析组的ApoE基因型ε3／4 ε4／4者TC、TG、LDL—C水平较高。结论 血液透析患者脂代谢紊乱主要表现为血清TG、ApoB水平显著增高，HDL—C等指标显著降低。伴心血管并发症的患者TG水平显著高于无并发症者。TG水平与血清白蛋白水平及透析时体外循环血流量显著相关；HDL—C与KT／V显著相关。血液透析患者ApoE等位基因ε4的携带者易发生脂代谢紊乱。     

载脂蛋白E基因表型与慢性硬膜下血肿关系的初步研究

目的:探讨载脂蛋白E基因表型与慢性硬膜下血肿(CSDH)的关系。方法:采用聚合酶链—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对65例CSDH患者外周血的ApoE基因型进行分析。结果:65例患者ApoE基因型分别为E2/E26例、E3/E314例、E4/E48例、E2/E37例、E2/E411例、E3/E419例。与对照组相比E4的频率明显高于对照组,E3的频率明显低于对照组。结论:E4为慢性硬膜下血肿的危险因素,检测ApoE基因型有助于确认高危人群;E3可能对慢性硬膜下血肿形成有保护作用。