基因免疫诱导小鼠产生抗丙型肝炎病毒E2糖蛋白抗体

目的：通过基因免疫诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗Ⅲ型中国株ＨＣＶ来源Ｅ２糖蛋白的体液免疫应答。方法：质粒ｐ３Ｗ１４在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中能够表达Ｅ２糖蛋白，纯化该质粒并用于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠直接肌注，于加强注射后不同时相采血，以重组的Ｅ２糖蛋白检测特异性抗Ｅ２抗体。结果：接种ｐ３Ｗ１４质粒的小鼠中可检出抗Ｅ２抗体（５／６），抗体滴度１∶１５～１∶１２０。结论：采用含Ｅ２／ＮＳ１基因的质粒ＤＮＡ免疫，成功地诱导小鼠产生抗Ⅲ型株来源的Ｅ２抗体。     

白细胞介素-2基因对丙型肝炎病毒E2基因免疫效果的调节作用

目的 研究白细胞介素２（ＩＬ－２）基因对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建Ⅱ型ＨＣＶ Ｅ２基因的真核表达载体ｐ３Ｅ２，免疫组化法检测其在哺乳动物细胞中的表达情况。用ｐ３Ｅ２单独或连同ＩＬ－２真核表达质粒一起对ＢＡＬＢ／ｓ小鼠进行尾部皮下注射，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测Ｅ２抗体的产生情况。结果 Ｅ２蛋白在哺乳动物细胞中得到瞬时表达。应用ｐ３Ｅ２单独或连同ＩＬ     

Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2／N21基因的克隆与序列分析

目的 构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的真核表达载体,分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法 利用逆转 录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１基因片段,通过定向克隆将其克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果 构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的克隆,该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６     

丙型肝炎病毒2a型E2区基因cDNA的变异分析

目的 了解丙型肝炎病毒2a型基因组E2区序列的一级结构及变异特征，为进一步研究HCV包膜蛋白的生物学功能打下基础。方法 用逆转录套式多聚酶链反应(RT-nPR)法从1例NANB型肝炎患者血清中扩增出一条约1100bp的片段，以限制性内切酶EcoRI、HindⅢ双酶切后连入pUC19载体中，转化感受态细胞，经限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)和PCR法证实为阳性克隆后，用全自动序列分析仪测序。结果 测得约1100bp的核苷酸序列，其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列分别与HCV-1、HC-C2、HCV-BK、HC-J6、HC-J8相应序列作比较，显示分离株HCV在核苷酸水平上与以上分离株的同源性分别为63．1％、64．2％、64．1％、86．9％、69．3％，在氨基酸水平上的同源性分别为69．6％、70．7％、69．6％、86．2％、83．1％。结论 分离株(HCV-JF)与HC-J6同属2a型。     

丙型肝炎病毒E2基因激发小鼠细胞免疫的实验研究

目的 :研究丙型肝炎病毒E2基因接种能否诱导机体产生细胞免疫以及乙型肝炎病毒preS基因对其诱导细胞免疫能力的影响。方法 :以BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞株 (SP2 /O)为宿主细胞 ,建立表达丙肝病毒E2蛋白的靶细胞 ,将其注射于E2基因或 preS与E2融合蛋白基因免疫的小鼠腹腔 ,记录小鼠接种瘤细胞后的存活期 ,以小鼠存活期的长短作为反映基因免疫小鼠对HCVE2蛋白细胞免疫的有无或强弱的指标。结果 :靶细胞表达了相对分子质量约为 70 0 0 0的E2蛋白 ,E2基因接种小鼠的存活期长于对照组 ,单独E2基因接种组的存活期显著长于对照组 ,也长于 preS与E2融合蛋白基因免疫组。 结论 :E2基因接种能诱导细胞免疫 ,但与 preS融合后 ,其诱导细胞免疫的能力会降低。     

不同基因型的丙型肝炎病毒E2蛋白生物信息学分析

目的对不同基因型的丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白进行生物信息学比较分析。方法从GeneBank中获取不同基因型HCV的E2蛋白核苷酸与氨基酸序列,运用DNA Star,Clustal X,BioEdit等国际通用软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性,应用AntheProt5.0软件分析HCV E2蛋白二级结构。结果不同基因型E2蛋白氨基酸数在HCV蛋白中所占比例为10.93%~11.65%。不同基因型间E2蛋白基因核苷酸同源性为61.1%~74.8%,氨基酸同源性为64.0%~82.2%;不同基因型E2蛋白氨基酸序列比对显示3个高变异区域,分别为aa1~aa28(突变率为71.4%)、aa74~aa101(突变率为71.4%)和aa189~aa205(突变率为88.2%);不同基因型E2蛋白均富含潜在α螺旋(11%~21%)、β折叠(29%~43%)和卷曲结构(43%~51%)。结论不同基因型的HCV E2蛋白存在较大异质性。 更多还原     

E2 GLYCOPROTEIN OF GENOTYPE Ⅲ CHINESE ISOLATES OF HEPATITIS C VIRUS EXPRESSED IN MAMMALIAN CELL AS ANTIGEN FOR ANTI-E2 ANTIBODY DETECTION

Expression vector inserted with E2/NS1 gane derived from ganotype Ⅲ Chinese isolates of HCV was transfected into mammalian cells to express E2 glycoprotein. Expressed protein was used as antigen for anti-E2 antibody detection in 19 cases of hepatitis C patients by Western blot. It was first to express E2 glycoprotein of genotype Ⅲ Chinese hepatitis C virus isolates. For anti-E2 detection, 14 cases of patients were positive of antibodies against E2(73.7%). These results indicated that E2 glycoprotein expressed in mammalian cells had good immunoganicity and cross reactivity to serum infected with genotype Ⅱ Chinese hepatitis C virus isolates.     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E2与CD81分子的研究进展

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus;HCV)是黄病毒家族中的一种正链RNA病毒,全球大约有一亿七千万人慢性感染HCV.HCV的感染可导致慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌等肝部疾病,而且大多数HCV感染的病例还与冷球蛋白血症、B淋巴细胞增殖疾病相关.虽然目前对HCV的基因组及蛋白结构认识的比较清楚,但由于尚未建立一个完善的HCV体外培养系统,使得对HCV生活周期的认识停滞不前,HCV的致病机制也就成为期待解决的一个难题.     

合肥地区献血员中抗丙型肝炎抗体调查

<正> 丙型肝炎是输血后肝炎的重要原因,当前估计有5～10％的输血者将发生急性NANB。因此用特异性检测丙型肝炎病毒(HCV)方法筛选供血员,以降低输血后肝炎发生率问题倍受重视。文献报道各地献血员检测抗HCV结果悬殊。安徽地区献血员HCV感染率尚不清楚。为此,我们对合肥地区职业献血员342人进行了血清抗HCV调查,现将结果报道如下: 材料与方法检测对象342人均为既往无肝炎病史,一般体检合格,来我院定期献血的职业献血员,其中5例查ALT异常。检测抗HCV试剂(上海长征医学科学有限公司产品,批号031191)用ELISA法,检测系统中的固相反应板用我     

丙型肝炎病毒E2及preS融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ基因与ｐｒｅＳ２基因嵌合，嵌合基因免疫小鼠能产生抗ＨＣＶＣ蛋白的抗体，而单独接种ＨＣＶＣ基因则不能诱导小鼠产生抗Ｃ蛋白的抗体［１］。为研究ｐｒｅＳ能否增加ＨＣＶＥ２蛋白的免疫原性提供物质基础，我们在哺乳动物细胞稳定表达了Ｅ２?..     

丙型肝炎患者抗E2抗体的初步检测及其意义

为了探讨急、慢性丙型肝炎病人血清抗E2抗体的临床意义．用哺乳动物细胞表达的E2抗原，通过Westernblot检测丙型肝炎病人血清中抗E2抗体。结果37份急慢性丙型肝炎病人血清抗E2抗体在HCVRNA阳性者中检测为59.5％，其中急性患者中检出率为30％，慢性患者中检出率为70．3％。提示抗E2抗体可以作为检测HCV感染有价值诊断指标之一。     

不同基因型丙型肝炎病毒E1、E2蛋白生物信息学分析

目的对不同基因型的丙型肝炎病毒(HCV)的E1、E2蛋白进行生物信息学比较分析,以找出重要的生物信息学数据。方法从Gene Bank中获取不同基因型HCV的E1、E2蛋白核苷酸与氨基酸序列,运用DNA Star,ClustalX,Bio Edit等国际通用的软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性。在线软件TMHMM v2.0分析E1、E2蛋白跨膜区。AntheProt5.0软件分析二级结构。结果 E1氨基酸起始于aa 193—aa196和终止于aa 382—aa 383,E2蛋白氨基酸起始于aa 384和终止于aa 744—aa 754。不同基因型间E1、E2蛋白基因核苷酸同源性为59.7%~77.0%,氨基酸同源性为60.6%~82.8%。E1、E2蛋白存在3个跨膜区:E1存在2个跨膜区,位于aa 273—aa 293和aa 363—aa 383;E2蛋白存在1个跨膜区,位于aa 723—aa 744。二级结构分析发现不同型HCV E1、E2蛋白富含α螺旋(21%~30%),β折叠(26%~36%)和卷曲结构(43%~48%)。结论HCV E1、E2核苷酸和氨基酸序列表现为较大的异质性,其蛋白跨膜区富含α螺旋,胞外区以β折叠为主。     

酵母双杂合体系验证与丙型肝炎病毒E2蛋白相作用的蛋白

丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)是导致经血液传播非甲非乙型肝炎的主要病原,具有很强的宿主特异性,这有碍ＨＣＶ的体外培养及对病毒生活周期的研究,而其宿主特异性又决定于病毒入胞水平。因此,对ＨＣＶ的入胞机制的研究就尤为关键。ＨＣＶＥ2是ＨＣＶ病毒表面蛋白的主要组成部分并含有中和位点。被认为是ＨＣＶ与靶细胞相结合的位点。Ｅ1与Ｅ2在结构上是紧密相关的[1],由于上述两个原因,我们能够单独研究Ｅ2蛋白,来寻找与Ｅ2蛋白相作用的配体,据报道[2],丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)可能是通过肝细胞膜上的低密度脂蛋白受体(ＬＤＬＲ)进入肝细胞的,ＬＤＬＲ…     

β2糖蛋白Ⅰ、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体与抗磷脂综合征

β2糖蛋白Ⅰ（β2-glycoproteinⅠ,β2GPI）作为抗磷脂抗体（antiphosphohpidantibody,aPL）的主要靶抗原,在抗磷脂综合征（antiphospholipidsyndrome,APS）的血栓形成过程中发挥重要作用。     

肝病患者丙型肝炎病毒感染及C基因分型

以第２代抗体法分析急、慢性肝病患者中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染，并对ＨＣＶ阳性者以型别特异的逆录聚合酶链反应进行Ｃ基因分型。在６４４例肝病患者中，第２代抗体阳性率为肝癌７．３％，急性肝炎３．４％，慢性肝炎６．６％，肝硬化６．６％；非肝病患者１０６例中，阳性率为３．８％。慢性肝炎ＨＢＶ感染达８９．５％。４１例ＨＣＶ阳性者的Ｃ基因分显示：Ⅱ型占８５．４％、Ⅲ型７．３％、Ⅱ／Ⅲ混合型７．３％，未见其他型     

丙型肝炎病毒E2蛋白的高效表达及其临床应用

目的：在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）Ｅ２ 包膜蛋白,并对其进行初步纯化。用纯化的包膜蛋白检测ＨＣＶＲＮＡ 阳性血清中Ｅ２ 抗体,研究其检测Ｅ２ 抗体的敏感性和特异性。方法：将ＨＣＶＥ２ 蛋白基因克隆到原核表达载体中,并转化大肠杆菌。用ＩＰＴＧ 诱导细菌表达Ｅ２ 蛋白,经离子交换层析纯化蛋白。用纯化的包膜蛋白包被微孔板,经ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＣＶＲＮＡ阳性血清中的Ｅ２ 抗体。结果：在大肠杆菌表达了相对分子质量为４５ ０００ 的可溶性Ｅ２ 蛋白,占细菌总蛋白量的２１％ ,纯化后,蛋白纯度为８５％ 。用其检测ＨＣＶ 患者血清１７１ 例,Ｅ２ 抗体的检出率为６３％ 。在Ｅ２ 抗体阳性的血清中,部分为抗ＨＣＶ 阴性。结论：Ｅ２ 蛋白的表达及初步纯化的成功,可能用于临床检测。各基因型ＨＣＶＥ２ 包膜蛋白的抗体之间有交叉反应,在目前的抗ＨＣＶ 诊断试剂中加入可溶性、非融合Ｅ２ 包膜蛋白,可以改善抗ＨＣＶ 诊断试剂的特异性和敏感性。     

丙肝病毒高变区1相关基因免疫小鼠诱导细胞免疫反应的研究

1临床资料我院1998年1月至2004年7月因副乳腺住院治疗者共53例,其中男性3例.例1:男,47岁,专科检查发现右腋下-4 cm× 6 cm包块,表面无红肿、溃破,质软,无明显分界,无压痛,无波动感,活动度大,基底未扪及.患者家族中有多人患副乳腺.例2:男,51岁,因"右侧腋下肿大3个月余"入院.无意中发现右侧腋下肿大,无疼痛等不适感,自觉肿物逐渐增大.     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导抗体的产生

乙型肝炎病毒(HBV) 基因疫苗可打破人群对HBV 表面抗原(HBsAg) 疫苗免疫无应答或低应答而产生保护性抗体,并有可能成为治疗HBV 持续性感染的特异性基因治疗剂。我们用构建的MS2 - preS表达质粒pMIP、IL- 2 - preS原核表达质粒pIIP、IL- 2- preS真核表达质粒pCWIIP分别经小鼠尾部皮下接种。实验结果显示3 种质粒均能诱导小鼠产生抗- preS抗体,且pIIP与pCWIIP产生抗体量高于pMIP(SAS统计分析,P< 0 .01) ,这说明IL- 2 - preS基因疫苗在体内可能有多种生物学功能,同时产生协同作用。pCWIIP产生抗体量略高于pIIP(SAS统计分析,p > 0.05)