去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响.方法 人工合成survivin基因ASODN和正义ODN(SODN),并行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径转染SMMC-7721;分别用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA和蛋白表达;用MTT法检测ASODN对SMMC-7721增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;倒置显微镜观察细胞形态变化.结果 SMMC-7721可强表达survivin mRNA和蛋白;ASODN呈浓度依赖性抑制survivin mRNA和蛋白表达及SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M期.SODN对survivin mRNA和蛋白及SMMC-7721的增殖、细胞周期无明显抑制作用.结论 脂质体介导转染survivin ASODN可抑制细胞增殖、使细胞阻滞于G2/M期,从而促进细胞凋亡.     

索拉菲尼联合华蟾素对离体肝癌细胞株SMMC-7721的协同抑制效应观察

目的探讨索拉非尼与华蟾素对离体肝癌细胞株SMMC-7721协同作用的机制。方法将离体肝癌细胞株SMMC-7721分成四组,索拉非尼组予索拉非尼6.0μmol/L干预,华蟾素组予华蟾素0.6μmol/L干预,联合组予索拉非尼和华蟾素联合干预（剂量同前）,对照组不做任何干预。MTT法检测四组细胞增殖抑制率,FCM法检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测M c l-1 mRNA表达,W estern b lot法检测M c l-1蛋白表达。结果联合组细胞增殖抑制率及凋亡率均明显高于索拉非尼组和华蟾素组,索拉非尼组和华蟾素组均明显高于对照组（P均〈0.05）。索拉菲尼组及联合组M c l-1 mRNA的表达均明显低于对照组（P均〈0.05）,而华蟾素与对照组相比差异无显著性;索拉菲尼、华蟾素及联合组M c l-1蛋白表达均明显低于对照组（P均〈0.05）。结论索拉非尼联合华蟾素对SMMC-7721细胞显示出协同抑制作用,其机理可能为抑制M c l-1蛋白表达。     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）在体外对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用CCK-8比色法检测不同浓度（25、50、100、200μmol/L）RSG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;实时荧光定量PCR法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果RSG对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率与浓度呈正相关。肝癌HepG2细胞的凋亡率与RSG浓度呈正相关;与对照组比较,加药组S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高（P均〈0.05）。100、200μmol/L RSG组的凋亡细胞较对照组明显增加,且浓度越高增加越显著。RSG干预肝癌HepG2细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调,而Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达上调。结论RSG可通过激活PPARγ、调节Bcl-2和Bax的水平而在体外抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡。     

复方苦参注射液对人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞作用的实验研究

选用人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞,分别采用MTT法、流式细胞仪检测复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞体外增殖抑制率、细胞周期、凋亡率的影响。提示18．75～300μl／ml的复方苦参注射液在作用48h时对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的增殖抑制率在12．3％～82．5％,随着浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐上升,呈剂量依赖性。复方苦参注射液终浓度75μl／ml作用后的人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞G0～G1期明显增高,S期、G2～M期的细胞比例明显减少,凋亡率（58．21％）明显高于对照组（4．17％）。提示复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用,并影响细胞周期,促进其凋亡。     

羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的机制

目的:讨论羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖及促进其凋亡作用机制.方法:使用不同浓度(0、2、5、10、20μg/m L)的羽扇豆醇在不同处理时间(24、36、48 h)下,处理S M M C-7721细胞株后,通过MTT法检测SMMC-7721细胞增殖情况;对使用不同浓度的羽扇豆醇处理48 h后的SMMC-7721细胞,利用流式细胞仪检测S M M C-7721细胞的细胞周期以及细胞凋亡情况,还使用Western blot检测细胞细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear a n t i g e n,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2(B-c e l l lymphoma-2,Bcl-2)基因及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白的表达情况,最后我们通过免疫组织化学的方式检测在裸鼠体内接种的SMMC-7721细胞瘤体的微血管密度(microvessel density,M V D)值,检测羽扇豆醇对抑制肿瘤血管生成的作用.结果:相较于对照组,通过不同浓度的羽扇豆醇处理后的SMMC-7721细胞增殖水平均受到不同程度的抑制,而且既显示出量效关系又显示出时效关系;受到羽扇豆醇体外诱导处理后的SMMC-7721细胞能够使G0/G1期受到阻滞,甚至出现凋亡现象,SMMC-7721细胞的PCNA和Bcl-2蛋白表达情况下调,Bax蛋白的表达情况上调(P0.05).肿瘤瘤体MVD值下降(P0.01).结论:SMMC-7721细胞的增殖会因为羽扇豆醇的处理而受到抑制,并且还会因为羽扇豆醇的处理而出现凋亡.羽扇豆醇还可以抑制肿瘤瘤体血管生成.     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法分别用低、中、高浓度5-Aza-CdR处理AGS,对照组不处理。CCK-8检测AGS细胞增殖状态,流式细胞仪检测AGS细胞周期及凋亡率,MSP检测AGS中DAPK基因启动子甲基化状态,RT-PCR和Western blot法分别检测AGS中的DAPKmRNA及其蛋白。结果低、中、高浓度组AGS细胞增殖速度显著低于对照组（P均〈0.05）,并呈浓度、时间依赖性（P均〈0.05）。5-Aza-CdR使AGS细胞停滞在G0/G1期（P均〈0.05）,细胞凋亡率增加（P均〈0.05）。对照组DAPK基因启动子表现甲基化状态,低、中、高浓度组DAPK基因启动子被逆转成未甲基化状态。低、中、高浓度组AGS细胞DAPK mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组（P均〈0.05）,并呈浓度依赖性。结论 5-Aza-CdR可抑制AGS细胞增殖、促进其凋亡,可能与逆转DAPK基因启动子甲基化状态并使其重新表达有关。     

丙戊酸钠对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及对p21WAF1/CIP1mRNA表达的影响.方法:实验分为空白对照组、PBS组、VPA0.2mmol/L组、VPA1.0mmol/L组和VPA5.0mmol/L组.不同浓度VPA干预人肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期;干预72h后,用Real-timePCR法检测VPA干预72h后p21WAF1/CIP1mRNA的表达情况.结果:与空白对照组及PBS组比较,不同浓度的VPA作用24h,48h及72h时组肝癌SMMC-7721细胞增殖均出现了不同程度抑制(请将具体数据列出来P<0.05),随着VPA药物浓度升高,细胞增殖抑制作用逐渐增强,随作用时间延长,抑制程度逐渐增强(P<0.05).随药物浓度升高,G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减少,细胞发生G0/G1期阻滞.VPA干预肝癌SMMC-7721细胞72h后,VPA组p21WAF/CIP1mRNA表达较空白对照组及PBS组表达明显升高(请将具体数据列出来P<0.01).结论:VPA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性,并诱导出现G0/G1细胞周期阻滞,同时上调p21WAF1/CIP1mRNA的表达.     

shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:研究shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法:将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果:Pla-antiGRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关对照组组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关对照组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P0.05)。结论:shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

牛蒡子苷元对肝癌侵袭转移的影响

目的:研究牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对肿瘤黏附、侵袭、转移的影响.方法:体外实验分别采用MTT法、Transwell 法检测ARG对SMMC-7721细胞黏附、侵袭和转移的影响;体内实验采用裸鼠肺转移瘤模型,检测ARG对SMMC-7721细胞肺转移的影响.结果:与空白对照组相比,ARG作用后SMMC-7...     

血管内皮细胞生长因子反义核糖核酸对肝癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA转染人肝癌细胞后对细胞体内外生物学性状的影响。方法 将含正义、反义VEGFcDNA序列的质粒PCMV—VEGF、PCMV—FGEV及空载体质粒pcDNA3.1,在脂质体介导下导入SMMC—7721肝癌细胞,分别称为正义、反义及对照组,并通过G418筛选获得阳性克隆。细胞原位杂交和免疫组织化学方法检测转染后VEGF在肝癌细胞内的表达情况;MTT法和FCM检测转染后细胞在体外的增殖和凋亡情况;并制备裸鼠动物模型,观察转染后细胞的体内生长情况。结果 转染PCMV—FGEV后肝癌细胞内VEGF的转录及其蛋白的表达水平显著下降,但转染后体外细胞的增殖与凋亡情况均无明显变化。转染PCMV—FGEV后细胞在裸鼠体内的生长缓慢,反义组成瘤时间为(25.0±1.8)d,明显长于正义组(15.7±2.5)d和对照组(18.5±2.1)d,F=19.455,P<0.01;而平均瘤重以反义组最轻,为(0.96±0.28)g,F=21.501,P<0.01;同时反义组裸鼠肿瘤细胞发生明显的凋亡。结论 VEGF反义RNA转染人肝癌细胞可抑制肿瘤细胞VEGF的表达,在体外对细胞增殖和凋亡无影响,而体内可显著诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生长。     

Effect of Nimesulide on proliferation and apoptosis of human hepatoma SMMC—7721 cells

AIM:Cyclooxygenase-2(COX-2)has been suggested to be associated with carcinogenesis.We sought to investigate the effect of the selective COX-2 inhibitor,Nimesulide on proliferation and apoptosis of SMMC-7721 human hepatoma cells.METHODS:This study was carried out on the culture of hepatic carcinoma SMMC-7721 cell line Various concentrations of Nimesulide(0,200μmol/L,300μmol/L,400μmol/L)were added and incubated.Cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell apoptosis by electron microscopy,flow cytometry and TUNEL.RESULTS:Nimesulide could significantly inhibit SMMC-7721 cells proliferation dose-dependent and in a dependent manner compared with that of the controla group.The duration lowerst inhibition rate produced by Nimesulide in SMMC-7721 cells was 19.06%,the highest inhibition rate was 58.49%,After incubation with Nimesulide for 72h,the most highest apotosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells comparing with those of the control were 21.20%&#177;1.62%,vs2.24%&#177;0.26%and 21.23&#177;1.78vs2.01&#177;0.23(P&lt;0.05).CONCLUSION:The selective COX-2 inhibitor,Nimesulide can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells and increase apoptosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells,The apoptosis rate and the apoptosis index are dose-dependent.Under electron microscope SMMC-7721 cells incubated with 300 μmol and 400μmol Nimesulide show apoptotic characteristics With the clarification of the mechanism of selective COX-2 inhibitors,Thtese COX-2 selective inhibitors can become the choice of prevention and treatment of cancers.     

Downregulation of alpha-fetoprotein siRNA inhibits proliferation of SMMC-7721 cells

AIM: To study the function of α-fetoprotein (AFP) in SMMC-7721 hepatoma cells. METHODS: A hairpin siRNA expressing plasmid pSilencer3.0-H1-afp was constructed and transfected into SMMC-7721 cells with Lipofectamine 2000. The expression of AFP was monitored by real-time RT-PCR and immunoassays, its effect on SMMC-7721 cell proliferation and cell death was detected by MTT and fluorescenceactivated cell sorter (FACS). RESULTS: The AFP-siRNA expressing plasmid downregulated the expression of AFP obviously (about 34%), and inhibited SMMC-7721 cell proliferation, but did not induce apoptosis. CONCLUSION: Downregulation of AFP siRNA inhibits proliferation of SMMC-7721 cells, but cannot cause apoptosis.     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。     

RNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 研究shRNA干扰GRP78对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法 将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT 法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关shRNA组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P<0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P<0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关shRNA组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P<0.05)。 结论　shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 观察双萘酰亚胺类化合物(C8)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC 7721细胞的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测Bcl 2蛋白表达量;流式细胞术分析细胞内Bcl 2蛋白量;酶联免疫法检测Caspase9和Caspase 3表达量. 结果 C8抑制SMMC 7721细胞增殖,半数抑制浓度为15 umol/L.C8作用浓度在10,15、20 umol/L时,SMMC 7721细胞的凋亡比例分别为16.8%、29.4%和35.8%,对照组为2.1%,SMMC 7721细胞的凋亡率明显高于对照组,P<0.01.细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降.酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化.结论 C8可诱导人肝癌SMMC 7721细胞的凋亡,为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物.     

Inhibitory effect of antisense vascular endothelial growth factor RNA on the profile of hepatocellular carcinoma cell line in vitro and in vivo

AIM:To evaluate the effect of antisense vascularendothelial growth factor(VEGF)RNA(PCMV-FGEV)transfection on the profile of hepatocellular carcinoma(HCC)SMMC-7721 cells in vitro and in vivo.METHODS:SMMC-7721 cells were transfectedwith PCMV-FGEV antisense,PCMV-VEGF sense andempty vector plasmid encapsulated by lipofectamineas antisense group,sense group and control grouprespectively.The positive cell clones were selectedwith G418.The stable transfection and expressionof VEGF in the cells were determined by RT-PCR andimmunohistochemistry.Cell proliferation was observedby MTT assay.FACS analysis was used to determine theeffect of PCMV-FGEV transfection on cell apoptosis.Thegrowth of transfected cells in Wvo was also observed innude mice.RESULTS:VEGF expression was reduced in SMMC-7721transfected with PCMV-FGEV,which was confirmed byRT-PCR and immunohistochemistry.No effect of PCMV-FGEV transfection was found on cell proliferation andcell apoptosis of SMMC-7721 in vitro.The growth of cellstransfected with PCMV-FGEV was slow in nude miceand accompanied with obvious apoptosis.The latenttime of tumors in the antisense group was 25.0±1.8d,which was longer than that in sense and controlgroups(F=19.455,P<0.01).The average tumor weightin antisense group(0.96 g±0.28 g)was the smallestamong the three groups(F=21.501,P<0.01).CONCLUSION:The expression of VEGF can be inhibitedby antisense PCMV-FGEV.Antisense PCMV-FGEV has no effect on cell proliferation and apoptosis of SMMC-7721in vitro but can inhibit tumor growth and induce cellapoptosis in vivo.     

XPD对SMMC-7721肝癌细胞中DNp73和GADD45β的调控及意义

目的:观察人剪切修复基因人类着色性干皮病D组基因(xeroderma pigmentosum group D,XPD)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721细胞后XPD、DNp73和GADD45β基因的表达变化以及对肝癌细胞生长的影响.方法:实验分4组:重组质粒SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD组)、空载质粒SMMC-7721-pEGFP-N2组(N2组),脂质体组和SMMC-7721细胞空白对照组.应用Lipofectamine2000脂质体瞬时转染,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法检测转XPD基因后,人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中DNp73以及GADD45β的mRNA和蛋白质的表达量变化,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:荧光显微镜下,XPD组和N2组细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明转染成功;RT-PCR检测显示:XPD组中DNp73 mRNA相对表达量较其他3组显著下调,XPD和GADD45βmRNA相对表达量较其他3组明显上调(均P<0.01);Western blot检测显示:XPD、DNp73以及GADD45β蛋白相对表达量在各组间的差异与其mRNA各组间差异一致;MTT检测示:SMMC-7721细胞空白对照组、脂质体组、N2组、XPD组的吸光度(A)值分别为0.633±0.012,0.623±0.009,0.628±0.016,0.384±0.011,XPD组低于其他3组,差异均有统计学意义(均P<0.01),表明转染XPD后SMMC-7721细胞的增殖能力减弱.流式细胞仪检测SMMC-7721肝癌细胞凋亡:转染XPD的SMMC-7721细胞凋亡显著,凋亡率达56.53%,而其他3组均未见明显凋亡.结论:XPD基因在肝癌的发生发展中起抑制作用,癌基因DNp73的表达随XPD表达增加而降低,抑癌基因GADD45β则随XPD表达增加而增加,提示两者可能在XPD抑制肝癌细胞的生长机制中起重要作用.