深Ⅱ度烫伤大鼠创面血管内皮细胞增殖与凋亡的变化在创伤修复中的作用

目的 观察大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中创基微小血管内皮细胞增殖与凋亡的特征，探讨血管的形成与退缩在创伤修复中的作用。方法 利用大鼠5％深Ⅱ度烫伤模型，将72只Wistar大鼠随机分为正常对照和单纯烫伤两组。于伤后0．5，1，3，7，14d和21d采集创面皮肤标本，行HE染色，并用免疫组织化学技术检测创面组织真皮中血管内皮细胞PCNA和TUNEL的表达变化规律。结果：深Ⅱ度烫伤的大鼠伤后3d，伤区出现少量的肉芽组织，7d时肉芽组织已充满伤区，再上皮化速率为30％，14d的再上皮化率达70％，至21d，伤口完全闭合，真皮内小血管的数量减少。大鼠烫伤后3d，伤区基底的真皮组织内出现PCNA阳性的血管内皮细胞，随后阳性表达逐渐增多，14d时达到高峰。至伤后21d，PCNA的阳性表达略有下降。而创伤愈合初期罕见TUNEL阳性的细胞，21d时，TUNEL标记阳性的细胞显著增多。结论 烫伤大鼠创面中血管内皮细胞的增殖与凋亡活动与创面的愈合进程有密切的关系。血管形成与 退缩在时序上的协调变化是组织正常修复的重要步骤。     

高糖条件下血管内皮细胞的增殖与凋亡

目的：研究高糖对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响.方法：用高糖（10、20、30、40、50mmol/L）作用培养的人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）,第2、4、6、8、10、12、14天,用氚-标记的脱氧胸腺嘧啶核苷（tritium-labelled thymidine deoxyribose,3H-TdR）掺入法测定每分钟计数（counts per minute,cpm）,流式细胞仪检测技术测定内皮细胞的增殖指数、凋亡指数和细胞周期的变化.结果：在高糖作用下,HUVEC cpm值显著低于对照组（P＜0.001）增殖指数低于对照组（P＜0.05）,凋亡指数高于对照组（P＜0.05）呈明显的剂量依赖关系,随作用浓度增大时间延长更为明显.各高糖组G1期百分率均升高（P＜0.01）,S期百分率均降低（P＜0.05）.结论：高糖使培养的人脐静脉血管内皮细胞凋亡加速,同时抑制了内皮细胞的增殖.根据G1期细胞百分率升高,S期细胞百分率下降的结果,高糖导致部分内皮细胞可能被阻滞在G1/S转变期.     

ANGⅡ诱导大鼠动脉内皮细胞凋亡作用分子机制研究

目的 探讨ANGⅡ诱导大鼠动脉内皮细胞凋亡的分子机制.方法 体外培养大鼠动脉内皮细胞株（RAOEC）,通过ANGⅡ诱导RAOEC凋亡,采用流式细胞仪检测ANGⅡ诱导凋亡改变,RT-PCR荧光相对定量检测相关凋亡蛋白mRNA水平变化,组间差异统计性分析采用Students T-test.结果 ANG Ⅱ诱导大鼠动脉内皮凋亡作用具有时间和剂量依赖性,高浓度和低浓度或者延长作用时间都不能增加凋亡率,血管紧张素特异性的受体拮抗剂缬沙坦和PD123319联合应用能够完全抑制ANGⅡ诱导RAOEC细胞凋亡作用,单独应用均不能完全抑制凋亡.与空白对照组比较,ANGⅡ组AT1R和AT2R mRNA水平显著上调,胞外死亡受体途径相关促凋亡分子Fas、FasL caspase 8 mRNA表达水平上调,胞内线粒体途径促凋亡分子BAX、caspase 9 mRNA显著上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 ANGⅡ诱导RAOEC细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,其机制可能是由AT1R和AT2R受体介导通过胞外死亡受体途径和胞内线粒体途径共同参与的信号转导机制.     

大鼠深Ⅱ度烫伤后创面自噬及凋亡的表达规律

目的 观察大鼠深Ⅱ度烫伤后72 h内创面自噬及凋亡的表达规律,探讨其与深Ⅱ度创面早期加深之间的关系.方法 Wistar大鼠背部10％ TBSA深Ⅱ度烫伤,观察烫伤后1h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h创面组织自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的表达及变化规律;TUNEL法检测创面凋亡水平的变化规律;HE染色及Masson染色显示创面组织形态和创面深度的变化.结果 烫伤后创面组织LC3、Beclin-1蛋白水平持续下降,至伤后24h达到最低,此后稍有升高,但仍远低于正常水平;伤后创面组织TUNEL阳性细胞持续增多,至伤后48 h达到最高,此后稍有下降,但仍远高于正常水平;创面组织真皮深层自噬被激活;烫伤后创面深度随着时间的推移进行性加深.结论 大鼠深Ⅱ度烫伤后早期创面组织自噬减少,凋亡增加,可能是参与创面加深的因素;真皮深层自噬的激活,可能是一种保护机制.     

烫伤消疤软膏对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合影响的实验研究

目的观察烫伤消疤软膏对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合影响。方法采用猪深Ⅱ度烧伤模型,创面外用烫伤消疤软膏,通过伤后不同时相点创面取材,检测烧伤创面羟脯氨酸（OHP）含量、创面细胞DNA含量和细胞周期变化、创面含水量、创面愈合率及组织病理形态学变化。结果创面外用烫伤消疤软膏后创面羟脯氨酸含量、创面细胞S期细胞百分比、创面愈合率均高于烧伤对照组,而创面含水量、创面细胞G     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的影响。方法　采用体外培养的第 3代HUVEC ,分为 6组 ,即对照组、AngⅡ组及AngⅡ +不同强度 (1× 10 -4T、5× 10 -4T、10× 10 -4T和 2 0× 10 -4T)恒磁场组。各组细胞于无磁场条件下培养或不同强度磁场作用 48h后收集标本 ,用MTT比色法和3 H TdR掺入法测定细胞增殖情况 ,末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL法 )和流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞凋亡情况。结果　 1μmol/LAngⅡ可抑制HUVEC增殖 ,诱导HUVEC凋亡。AngⅡ +不同强度恒磁场组细胞增殖均显著高于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,细胞凋亡显著低于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,并呈现强度依赖效应。结论　 1μmol/L AngⅡ可抑制HUVEC增殖并诱导HUVEC凋亡 ;(1～ 2 0 )× 10 -4T的恒磁场可强度依赖性拮抗AngⅡ对HUVEC的作用 ,促进HUVEC增殖并抑制HUVEC凋亡。     

透明质酸寡糖片段促进血管内皮细胞增殖的研究

目的：研究分离纯化的透明质酸寡糖片段（o-HA）对血管内皮细胞增殖的作用。方法：选用猪髂总动脉内皮细胞（PIEC）做为靶细胞，人胚肾293细胞做为对照细胞，应用本实验室分离纯化的o-HA（4-12-mer）配成一系列浓度（0、1、3、5、10及20μg／ml），加入靶细胞及对照细胞继续培养不同时间（0、6、12、24、48、72及96h），从细胞计数、细胞周期分布和单层血管内皮细胞损伤修复来观察血管内皮细胞的增殖情况。结果：10μg／mlo-HA作用于PIEC时能显著促进增殖，继续增加o-HA的浓度，增殖作用未随之增强；o-HA刺激培养12hPIEC即明显增生，至72h达高峰（P〈0．05）；oHA对PIEC损伤模型也有显著的促愈合作用。结论：o-HA能显著促进血管内皮细胞的增殖。     

细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及其机制的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及基因调控机制 ,为进一步阐明烫伤鼠肺组织损伤机制和在细胞凋亡水平防治烧伤后脏器损伤提供理论依据。方法 :采用原位末端标记 (TUNEL)法及免疫组织化学技术观察烫伤鼠肺组织细胞凋亡及肺组织 Fas/Fas L、核因子κB(NFκB) /IκB和 Bcl 2基因表达、鼠烫伤后肺组织通透性及 VE 钙黏附分子表达 ;电镜扫描肺组织血管内皮细胞连接的变化。结果 :1烫伤鼠肺组织细胞发生凋亡 ,尤其是肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡增加明显 ;2烫伤鼠肺组织对 99锝标记的亚锡喷替白蛋白通透性明显增加 ,同时肺组织血管内皮细胞 VE 钙黏附分子表达下降 ,与肺组织细胞凋亡呈平行关系 ;3烫伤鼠肺组织 Fas/Fas L 表达明显上调 ,Bcl 2表达明显下调 ,Fas/Fas L 表达的增加与肺组织细胞凋亡增加呈平行关系 ;4NFκB/IκB的表达与 Fas/Fas L表达相一致 ;5电镜扫描见肺组织血管内皮细胞连接增宽。结论 :鼠烫伤后肺泡上皮和肺血管内皮细胞发生凋亡 ,细胞凋亡参与了烫伤鼠肺组织损伤、通透性增加及内皮细胞连接损伤的发生过程 ;鼠烫伤后肺组织 Fas/Fas L、NFκB/IκB和 Bcl 2系统活化 ,可能参与了烫伤后肺脏损伤的机制及肺组织细胞凋亡的信号转导     

大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应中血管内皮细胞的凋亡变化

本研究旨在观察大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应中血管内皮细胞的凋亡的情况，探讨血管内皮细胞凋亡机制在急性排斥反应中的作用，现将结果报道如下。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡与血管内皮细胞的关系

目的：观察大鼠急性脊髓损伤后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在邻近节段血管内皮细胞中的表达。探究脊髓继发性损伤中神经细胞凋亡的原因。方法：成年Wistar大鼠40只，随机分为正常对照组，假手术组及脊髓压迫组。于手术后6，24，72h，7，14，28d取以损伤部位为起点头侧端脊髓1．5cm，采用电镜观察超微结构变化；以免疫组织化学技术检测Bax及Bcl-2的表达；以TUNEL法检测细胞的凋亡。结果：正常组及假手术组：Bax和Bcl-2在血管内皮细胞中只有少量表达，压迫组于伤后6h出现Bax在血管内皮细胞中的强阳性表达，伤后3d达到高峰，一两周下降，4周时只有少数阳性细胞。电镜观察，内皮细胞有不同程度的细胞膜起泡，染色体边集，细胞凋亡。结论：在急性脊髓损伤后的继发损伤过程中，神经细胞的凋亡可能是血管内皮细胞损伤的结果。     

成纤维细胞生长因子对烫伤大鼠原癌基因和抑癌基因蛋白的影响

目的 :观察外用碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对大鼠深 度烫伤创面愈合过程中增殖细胞核抗原 (PCNA)、p5 3、原癌基因 c m yc和 caspase 3的影响 ,初步认识增殖与凋亡活动对创面愈合的作用。方法 :74只 Wistar大鼠随机分为正常对照、单纯烫伤和 b FGF治疗 3组。利用大鼠 30 %总体表面积深 度烫伤模型 ,于伤后 3、6小时及 1、3、7和 14日采取创面皮肤标本 ,采用免疫组织化学染色技术检测创伤组织真皮内成纤维细胞 PCNA、p5 3、c m yc和 caspase 3蛋白的表达变化情况。结果 :烫伤大鼠创面中成纤维细胞的增殖与凋亡活动与 p5 3、c myc蛋白表达有一定的关系 ;局部外用 b FGF对成纤维细胞的增殖等活动产生影响。结论 :成纤维细胞的增殖与凋亡变化是组织修复的重要步骤     

VEGF对SCI细胞凋亡的影响

目的探讨血管内皮生长因子对脊髓损伤细胞凋亡的影响及保护机制。方法采用Allen的Weight drop-ping(WD)法挫伤大鼠T10节段脊髓,于术后2 h4、h8、h、1 d3、d、7 d经蛛网膜下隙导管各注入VEGF溶液(5μl/100 g),并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用原位末端标记法(TUNEL法)标记脱氧核糖核酸(DNA)片段,检测脊髓损伤前后发生凋亡的脊髓细胞。结果正常组大鼠脊髓中未见凋亡细胞。生理盐水组于伤后4h开始出现凋亡细胞。VEGF组与生理盐水组相比较,凋亡细胞明显减少(P<0.01)。结论VEGF可抑制脊髓损伤后细胞的凋亡,从而保护损伤的脊髓组织。     

康肤霜治疗Ⅱ度烧伤创面临床观察

目的:观察康肤霜(Kangfushuang,KFS)治疗Ⅱ度烧伤创面疗效及安全性。方法:将病人分成KFS和重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)、紫花烧伤膏(ZHSSG)、0.5%碘伏(0.5%ComplexIodine,COI)治疗组。比较四种药物体外抑菌环、创面愈合时间,观察康肤霜可能出现的不良反应(肝肾功能、白细胞记数、皮肤过敏反应及创面疼痛)。结果:KFS与COI相比各细菌抑菌环均无差异(P>0.05);KFS与ZHSSG、rhEGF相比,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌环均有差异(P<0.01);而四种药物对绿脓杆菌的抑菌环均无差异(P>0.05)。浅Ⅱ度创面愈合时间:KFS与rhEGF、ZHSSG差异无显著性(P>0.05),而短于COI(P<0.01);深Ⅱ度创面愈合时间:KFS与rhEGF差异无显著性(P>0.05),但短于ZHSSG(P<0.05)及COI(P<0.01)。治疗中未发现KFS不良反应。结论:KFS明显加速创面愈合且无不良反应。     

Highly accumulated platelet vascular endothelial growth factor in coagulant thrombotic region

Summary.  Background : Vascular endothelial growth factor (VEGF) is an endothelial cell-specific potent mitogen that induces angiogenesis and microvascular hyperpermeability. Recently, it has been reported that megakaryocytes and platelets contain VEGF in their cytoplasm. Objectives : To elucidate and confirm the bioactivity and role of VEGF in platelets (platelet VEGF), which may be closely related to vascular thrombosis and atherosclerosis. Methods : The VEGF localization in megakaryocytes on bone marrow smears was analyzed by immunofluorescence and confocal laser scanning microscopic analysis. The intracellular VEGF expressed in platelets was determined by flow cytometric analysis. Platelet-rich plasma and washed platelets were used to analyze the secretion of VEGF during platelet aggregation by thrombin or gelatinase A (matrix metalloproteinase-2) stimulation. Immunohistochemical studies for VEGF in the thrombotic region were performed. Results and conclusions : Megakaryocytes and platelets are a very rich source of circulating VEGF. Gelatinase A, which is closely associated with vascular remodeling, enhances the VEGF levels released from platelets. VEGF was clearly detected in the fibrin nets of a thrombus. Taken together, platelet VEGF is bioactive as a direct angiogenic growth factor, and may play a very important role in wound healing and atherosclerosis in conjunction with other platelet cytokines such as platelet-derived growth factor, platelet-derived endothelial cell growth factor, transforming growth factor (TGF)-α, and TGF-β.     

尼古丁对大鼠骨折愈合和骨痂血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨尼古丁对大鼠骨折愈合和骨痂血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将120只SD大鼠随机分为3组,低尼古丁组（n=40）、高尼古丁组（n=40）和对照组（n=40）。建立骨折愈合模型,于建模后第3、7、14、21天分别处死10只大鼠,采集桡骨骨折部位骨痂组织,采用苏木素-伊红（HE）染色进行显微镜下观察、测量骨痂厚度和成熟度,采用免疫组织化学染色检测骨痂中VEGF表达水平。结果建模后第3天,低尼古丁组、高尼古丁组大鼠骨痂厚度、成熟度及VEGF表达水平与对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。建模后第7、14、21天,低尼古丁组、高尼古丁组大鼠的VEGF表达水平高于对照组,但骨痂厚度和成熟度低于对照组（P〈0.05）;低尼古丁组大鼠VEGF表达水平高于高尼古丁组（P〈0.05）。结论尼古丁减少骨痂形成,延缓骨折愈合过程,促进VEGF表达,且不同尼古丁剂量对VEGF表达的影响不同。     

miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探究miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖、凋亡的作用及相关机制。方法取SDP级健康雄性SD大鼠作为实验对象,取血管平滑肌细胞(VSMC)消化离心后,转染50nmol/L miRNA-146a反义寡核苷酸、错义链和同等剂量磷酸盐缓冲液(PBS),进行对照比较。结果实验组细胞在转染后48h内VSMC的数目和吸光度值均低于其他两组,细胞凋亡率明显高于其他两组,核因子κBp65、PCNA的表达水平低于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论miRNA-146a可促进VSMC的增殖,抑制细胞凋亡的进行,这一作用机制与核因子κBp65、PCNA表达水平增高有关。     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

长链非编码RNA-linc00152可能通过miR-4767影响血管内皮细胞凋亡和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)-linc00152在静脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs)凋亡和迁移中的作用及其机制。方法:用溶于磷酸盐缓冲液(PBS)的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)。通过载体转染、蛋白质印迹、荧光素酶构建、生物素化等检测HUVEC中linc00152与miR-4767的相互作用,以及两者对HUVEC凋亡、迁移的影响及相关机制。结果:linc00152负向调节HUVEC中miR-4767的表达(P0.05)。miR-4767促进HUVEC的凋亡,抑制HUVEC的迁移;linc00152抑制HUVEC的凋亡,促进HUVEC的迁移(P0.05)。阻断miR-4767后,linc00152敲减引起的HUVEC凋亡增加与迁移减少的作用被减弱;同时,linc00152敲减引起的Bcl2L12和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)蛋白表达的减少被改善。结论:linc00152可能成为改善血管内皮功能和治疗部分心血管疾病的潜在靶点。     

H2-B1基因转染对小鼠内皮细胞凋亡与增殖的影响

目的转染pEGFP-N1-H281质粒载体至小鼠血管内皮细胞（VEC）,观察H2-B1基因对小鼠VEC凋亡与增殖的影响,探讨借鉴母胎免疫耐受模型预防心脏移植术后免疫排斥反应的机制。方法0.5μg/ml空质粒、0．5μg／ml H2-B1质粒、1.0μg/ml H2-B1质粒转染小鼠VEC后,采用实时荧光定量PCR、流式细胞仪、酶标仪检测不同时间质粒的转染效率、H2．B1基因mRNA的相对表达量、转染VEC的凋亡与增殖情况。结果荧光定量PCR结果显示,0．5μg/ml、1．0μg／ml H2-B1质粒组的H2-B1基因mRNA表达量均高于对照组（P〈0．05,P〈0．001）。H2-B1基因促进VEC凋亡,转染48h、72h后1．0斗g／mlH2一B1质粒组与空白对照、0．5μg／ml空质粒比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。H2-B1基因抑制VEC增殖,转染24h、48h、72h后0．5μg／ml H2-B1质粒组、1．0μg／ml H2-B1质粒组分别与空白对照组、0．5μg／ml空质粒组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论pEGFP—N1-H281质粒载体转染小鼠VEC后,能够有效促进其凋亡,抑制其增殖,减弱小鼠VEC活性,诱导免疫耐受。