脊髓损伤模型大鼠神经胶质细胞增殖与胶质纤维酸性蛋白的表达

背景：星形胶质细胞可以通过细胞裂解释放各种神经营养因子,并可促进损伤脊髓的修复。 目的：观察脊髓损伤模型大鼠神经胶质纤维酸性蛋白的表达及对其后肢功能恢复的影响。 方法：将SD大鼠采用Allen's法撞击T9~10节段致脊髓损伤,造模成功后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7,并设置仅蛛网膜下腔移植His蛋白的正常SD大鼠做对照。用BBB评分法评估两组大鼠后肢的运动功能,用免疫组织化学染色法和Western-blot法观察各组神经胶质纤维酸性蛋白的表达。 结果与结论：BBB评分结果显示,模型组大鼠脊髓损伤后下肢功能自行恢复率达68%。模型组脊髓损伤3和7 d,损伤区域神经胶质纤维酸性蛋白表达逐渐增加(P < 0.05),随后逐渐下降,于脊髓损伤28 d后逐渐恢复到对照组水平(P > 0.05)。脊髓损伤后1~14 d两组胶质纤维酸性蛋白表达逐渐升高(P > 0.05)。结果证实,脊髓损伤后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7可诱导星形胶质细胞增殖,神经胶质纤维酸性蛋白的表达增强,进而促进脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后血管内皮生长因子表达的影响

目的通过观察高压氧对成年大鼠脊髓损伤后不同时期血管内皮生长因子（VEGF）表达变化的影响,探讨高压氧对脊髓损伤的治疗作用机制。方法雌性SD大鼠55只,体质量250-300g。随机分为脊髓损伤组（对照组）、脊髓损伤＋高压氧治疗组各25只（n=5）,假手术组5只。采用改良A llen＇s法制作T8脊髓打击伤动物模型,各组分别于伤后1 d、1 w、2 w、4 w和8 w进行行为学观察,运动功能评分方法（BBB）评分后损伤部位取材,免疫组化染色及图像分析检测组织中VEGF的表达。结果假手术组的评分21分,治疗组和对照组与假手术组比较在各时间点评分明显降低,治疗组在各时间段BBB评分明显高于对照组（P〈0.05）。假手术组显示除脊髓中央管周围可见到极少量VEGF表达外,其它部位几乎不表达;对照组脊髓损伤1 d VEGF在大鼠脊髓损伤区及损伤周边区高表达,主要出现在软脊膜和脊髓灰、白质血管壁上的血管内皮细胞胞浆内,脊髓灰、白质内的神经胶质细胞和巨噬细胞胞浆内也出现表达,一般脊髓白质中更为多见,1 w后下调,而治疗组1 d至2 wVEGF的表达较对照组明显增加,差异有显著性（P〈0.05）,4 w、8 w时各组比较无统计学差异。结论急性脊髓损伤可上调VEGF在脊髓血管内皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞内的表达,高压氧可能通过促进VEGF表达,促进血管内皮细胞生长从而对脊髓损伤起到治疗作用。     

移植人脐带间充质干细胞修复大鼠脊髓损伤

背景：已知人脐带间充质干细胞对脊髓损伤存在着潜在的治疗价值,然而,当前对移植人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤及机制方面研究很少。 目的：观察人脐带间充质干细胞对脊髓损伤大鼠的治疗效果。 方法：40只Wistar大鼠建立脊髓损伤模型,38只造模成功后随机摸球法分为3组：空白对照组：只接受单纯损伤,不做任何移植;DMEM移植组：损伤后1周予以5 μL DMEM局部移植;细胞移植组：损伤后1周予以5 μL准备好的人脐带间充质干细胞局部移植(细胞数1×106)。移植后对实验动物通过BBB评分、体感诱发电位与运动诱发电位观察后肢功能恢复情况。分别于损伤后2,4,6,8,10周随机于细胞移植组抽取大鼠2只,免疫组织化学染色观察人脐带间充质干细胞存活、迁移、分化,通过胶质纤维酸性蛋白阳性细胞染色比较各组损伤局部胶质瘢痕形成面积。 结果与结论：BBB评分损伤后4周细胞移植组高于其他两组(P < 0.05),损伤后12周细胞移植组与其他两组相比SEP、MEP潜伏期缩短、波幅值增高(P < 0.05)。免疫组织化学染色示人脐带间充质干细胞可向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化,分化的少突胶质细胞并包绕轴突形成髓鞘。细胞移植组损伤局部胶质瘢痕面积均小于其他两组(P < 0.05),空白对照组、DMEM移植组间差异无显著性(P > 0.05)。提示未经体外诱导的人脐带间充质干细胞可于损伤大鼠脊髓体内向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,减小胶质瘢痕,并促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

半乳糖凝集素-1对急性脊髓损伤模型大鼠的保护作用及其机制

目的研究半乳糖凝集素-1(Galectin-1)对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其机制。方法 45只SPF级SD大鼠随机平均分为Galectin-1组、甲泼尼龙(MP)组和生理盐水对照组(生理盐水组)。以Allen's法打击脊髓造模,分别在术后1 d、7 d、14 d每组各取5只大鼠,先做BBB评分及斜板试验,然后处死大鼠取损伤处脊髓组织进行苏木精-伊红(HE)染色及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色检测,同时用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-10(IL-10)的含量。结果术后1 d,3组大鼠BBB评分、斜板试验结果及血清IL-10含量的差异无统计学意义(均P0.05);术后7 d、14 d,MP组和Galectin-1组的BBB评分、斜板试验结果及血清IL-10含量均较生理盐水组高(均P0.05),而MP组与Galectin-1组之间的差异均无统计学意义(均P0.05)。HE染色显示术后各时间点,Galectin-1组和MP组脊髓损伤肿胀及出现核固缩或解离神经元的数量少于生理盐水组。术后1 d,3组大鼠脊髓星形胶质细胞(GFAP表达阳性)数量无明显区别;术后7 d、14 d,Galectin-1组及MP组明显多于生理盐水组,而Galectin-1组与MP组则无明显差别。结论Galectin-1对大鼠急性脊髓损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过增强机体IL-10的表达,从而抑制损伤后的炎症反应而发挥脊髓保护作用的。     

降纤酶对脊髓损伤后VEGF的表达及细胞凋亡的作用

目的 观察降纤酶对大鼠脊髓损伤后血管内皮生长因子(VEGF)的表达及细胞凋亡的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组、对照组、干预组,每组各30只.各组分别于伤后各个时间点进行运动功能(BBB)评分,并随机处死5只,损伤部位取材进行HE染色和免疫组化染色,在光镜下观察、计算VEGF阳性细胞数及凋亡细胞数.结果 假手术组的BBB评分为21分,对照组、干预组在各时间点评分明显降低,干预组在5d及之后的各时间点BBB评分明显高于对照组(P＜0.05),尤其7d、14 d、28 d时间点两组有显著性差异(P＜0.01).脊髓损伤后对照组VEGF在脊髓损伤及损伤周边区高表达,5d达高峰,7d、14d表达仍较明显,28 d见少量表达.干预组各时间点VEGF的表达和对照组相比明显增加(P＜0.05),其中3d、5d、7d、14 d时间点差异显著(P＜0.01).凋亡细胞在脊髓损伤后逐渐增多,1d达高峰,此后逐渐减少;干预组各个时间点凋亡细胞数较对照组明显减少(P＜0.05),其中3d、5d、7d时间点差异显著(P＜0.01).相关性分析发现对照组1～5d时间点VEGF阳性细胞数和细胞凋亡数呈负相关(r=-0.90052,P＜0.05).结论 降纤酶可能通过促进VEGF的表达减少细胞凋亡,从而对急性脊髓损伤起治疗作用.     

miRNA-9修饰骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的 通过观察miRNA-9在骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元过程中的作用,探讨基因修饰在脊髓损伤治疗中的作用.方法 分离培养大鼠MSCs并构建miRNA-9-1慢病毒载体.成功建立84只大鼠急性脊髓损伤模型,并按照随机数字表法分为对照组、MSCs组及miRNA组,每组28只.脊髓损伤后1周,对MSCs组大鼠进行MSCs移植,对miRNA组大鼠移植miRNA-9-1慢病毒载体感染的MSCs,对照组大鼠仅在损伤部位注射等量的生理盐水.选择不同时间点对大鼠后肢进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分,并行神经丝蛋白200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色,对各组阳性表达面积百分比进行比较.结果 细胞移植4周后,各组大鼠BBB评分差异有统计学意义,其中miRNA组评分较MSCs组及对照组明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学染色示miRNA组的NF-200阳性面积较MSCs组及对照组明显增大,GFAP阳性面积较MSCs组及对照组明显减小,各组间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 miRNA-9在MSCs横向分化为神经元中起重要调控作用,并通过促进轴突再生,减少脊髓损伤部位反应性胶质细胞的数量等机制促进脊髓损伤后的功能修复.     

拉莫三嗪对小鼠脊髓背侧半横断损伤的保护作用

目的探讨拉莫三嗪在小鼠脊髓损伤修复中的作用。方法雌性C57BL/6小鼠80只采用脊髓背侧半横断损伤模型,随机分为模型组:单纯脊髓损伤;治疗组:脊髓损伤后每天给予腹腔注射拉莫三嗪,按照25 mg/kg的计量,连续7 d;对照组:脊髓损伤后每天给予腹腔注射0.9%生理盐水,按照25 mg/kg的计量,连续7 d。术后分别在1 d、7 d、14 d对各组小鼠行BBB评分,并分别在1 d、7 d、14 d在各组随机抽取6只小鼠,进行免疫荧光染色观察胶质细胞变化,并在术后第7天各组取6只小鼠组织行ELISA检测,观察炎症因子表达情况。结果损伤后7、14 d治疗组小鼠BBB评分明显高于模型组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);脊髓损伤后矢状切面损伤灶下游的GFAp+(星形胶质细胞的标记)细胞的免疫荧光面积百分比,发现术后7 d和14 d治疗组(9.87±0.96,4.79±1.02)的明显低于模型组(12.34±1.72,7.46±1.28)和对照组(11.89±1.70,7.53±1.70),差异均有统计学意义(P0.05)。ELISA检测术后7 d小鼠T9~T11的IL-1、IL-10、TNF-α表达情况,IL-1、IL-10的表达治疗组明显低于模型组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论拉莫三嗪可以改善脊髓损伤小鼠的运动功能,通过前期减少炎症因子的分泌降低胶质细胞的活化来实现的。     

高压氧预处理对大鼠脊髓损伤后PPAR-γ表达的影响

目的探讨高压氧预处理(HBOP)对大鼠脊髓损伤(SCI)后继发性损伤过程中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)表达的影响。方法将108只雄性SD大鼠随机分为对照组、SCI组和HBOP组,每组36只大鼠。SCI后1 d、3 d、1 w、2 w、4 w、8 w,分别采用荧光定量多聚酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测PPAR-γmRNA及蛋白的表达变化。结果与SCI组比较,HBOP组PPAR-γmRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),其表达高峰在2 w,其高水平表达持续4 w。结论 HBOP明显促进大鼠SCI后继发性损伤过程中PPAR-γ的表达。     

大鼠轻型颅脑损伤后神经胶质病理改变与血清GFAP水平

目的研究轻型颅脑损伤的病理变化和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。方法收集32只成年大鼠,随机分为假手术组(n=8)、伤后1 d组(n=8)、伤后3 d组(n=8)和伤后7 d组(n=8)。损伤组采用液压冲击设备建立大鼠轻型闭合性颅脑损伤模型,假手术组仅切开头皮并钻孔。免疫组化方法检测脑组织中星形细胞特异性标志物GFAP的表达,Fluoro-Jade B(FJ-B)免疫荧光检测脑组织中神经元急性损伤程度,ELISA法测定尾静脉的血清GFAP水平,观察损伤后脑组织神经元和星形细胞改变,并分析血清GFAP水平和神经元损伤程度间的关系。结果与假手术组比较,伤后1、3、7 d邻近顶叶皮质GFAP阳性染色的星形细胞数量减少(P0.05);伤后1、3、7 d可见星形细胞肿胀增生。伤后1 d皮质FJ-B阳性染色神经元轻度增加,伤后3、7 d明显增加(P0.05)。伤后1 d血清GFAP水平较假手术组明显增加(P0.05),伤后3、7 d回落至正常水平;伤后1 d血清GFAP水平与伤后7 d皮质区损伤神经元计数呈正相关(r=0.8095,P0.05)。结论轻型颅脑损伤后急性期发生星形细胞破坏伴胶质反应及血清标志物GFAP增加,亚急性期发生神经元变性损伤。急性期血清GFAP水平可以预测中枢神经元损伤程度。     

孕酮对兔脊髓急性缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨孕酮对兔脊髓急性缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法将90只日本大耳白兔随机分为假手术组(n=30)、脊髓损伤组(n=30)与孕酮治疗组(n=30),各组又进一步分为12 h、24 h、36 h、48 h、72 h、14 d等6个亚组,每亚组5只。假手术组只行腹部切开术但不阻断腹主动脉。脊髓损伤组和孕酮治疗组均制作缺血再灌注模型,制模成功后孕酮治疗组每24h注射孕酮1次(将孕酮溶于玉米油,浓度10 mg/ml,注射剂量为8 ml/kg),脊髓损伤组在相同时间点注射等量生理盐水。采用TUNEl染色评估细胞凋亡,采用BBB评分评估运动功能。结果 HE染色结果显示,假手术组脊髓形态正常;脊髓损伤组可见脊髓结构被破坏,正常神经元数目减少;孕酮治疗组较脊髓损伤组正常神经元数目多。TUNEL染色结果显示,脊髓损伤组和孕酮治疗组各时间点凋亡细胞数均明显高于假手术组(P0.05);孕酮治疗组各时间点凋亡细胞的数目均明显少于脊髓损伤组(P0.05)。假手术组术后12 h BBB评分为17.3分,术后14 d时升高到21.0分;脊髓损伤组术后12 h BBB评分为0.6分,随后缓慢升高,术后14 d时评分为9.2分。孕酮治疗组BBB评分变化与脊髓损伤组相似,但术后36 h开始,各时间点评分均明显高于相应脊髓损伤组(P0.05)。结论孕酮治疗可改善脊髓急性缺血再灌注损伤兔运动功能,可能与抑制细胞凋亡有关。     

腺苷预处理对脑缺血再灌注脑内星形胶质细胞的影响

目的 探讨腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤脑内星形胶质细胞的影响.方法 制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型.60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),再按缺血再灌注后不同时间把各组随机分成4个亚组,每组5只大鼠.应用Zeal Longa 5级评分法进行神经功能评分,并通过免疫组织化学法检测脑组织内胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)的表达.结果 (1)神经功能评分AP组各亚组均小于IR组各亚组(P均＜0.05),但大于F组各亚组(P均＜0.05);(2)F组GFAP阳性表达均较弱,IR组和AP组在脑缺血再灌注后2h开始出现GFAP阳性表达的细胞数量增多,AP组在6h、24h AP组GFAP阳性表达比IR组增强(P均＜0.05),在72h时AP组GFAP阳性表达较IR组减少(P＜0.05).结论 腺苷预处理能在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤早期阶段促进GFAP的表达,72h后抑制GFAP的过度表达.     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤

目的:探讨神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能修复的影响。方法:SD大鼠36只,制成T10脊髓全横断损伤模型。于造模成功后1周采用局部微量注射法移植。随机分三组：A损伤对照组（n=12）仅打开椎管暴露脊髓;B移植对照组（n=12）：注射10μl DMEM/F12培养液;C细胞移植组（n=12）：移植1.0?06/ml的神经干细胞悬液10μl。移植后通过不同时间点BBB行为评分、病理组织学、免疫荧光技术评价大鼠大鼠脊髓功能修复情况及移植细胞在体内的存活、迁移、分化。 结果:在体外成功建立SD大鼠海马源性神经干细胞培养体系;B、C两组大鼠随着时间延长BBB评分均不同程度提高,从移植后2W起C组大鼠评分明显高于B组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;神经干细胞移植后能够在体内继续存活、迁移并且分化为NF-200、GFAP表达阳性的神经元及星形胶质细胞。 结论:神经干细胞移植治疗脊髓损伤是一种有效的方法。     

驽药针刺对大鼠脊髓损伤后运动功能及BDNF表达的影响

目的研究驽药针刺在大鼠脊髓损伤后运动功能变化以及BDNF表达的变化。方法采用脊髓半横断损伤模型。100只SD大鼠随机分为对照组、假手术组、脊髓损伤组、单纯针刺组、驽药针刺组,每组分为3天、7天、14天、21天共4个亚组,每组5只。BBB法评定大鼠后肢运动功能变化,免疫组化法检测大鼠脊髓中BDNF的表达变化。结果 BBB评分显示驽药针刺组的各时间点评分均高于脊髓损伤组(P0.05),驽药针刺组7、14、21d的BDNF表达均高于脊髓损伤组(P0.05),且与BBB评分呈正相关(r=0.717,P0.05)。结论驽药针刺可明显改善脊髓损伤大鼠的运动功能,并可明显促进大鼠脊髓损伤后BDNF的表达。     

阻滞弥漫性脑损伤ERK1/2信号通路对星形胶质细胞反应的作用

目的研究阻滞弥漫性脑损伤急性期ERKI／2信号通路过度激活对星形胶质细胞反应的影响。方法制作大鼠外伤性弥漫性脑损伤模型，打击损伤前30min自尾静脉注射U0126。Westemblot法检测损伤脑皮层pERKl／2表达水平，免疫组化染色法检测pERKl／2和GFAP在损伤脑组织中的表达。结果pERKl／2表达在损伤后迅速、显著升高，5min为表达高峰，其后下降，但直到损伤后72h都有高水平表达，至7d下降至基础水平。损伤后各个时间点，U0126组pERKl／2水平较DBI组明显降低（P〈0．05）。U0126组与DBI组比较，12～72h各时间点GFAP阳性细胞平均光密度值降低（P〈0.05）。结论弥漫性脑损伤诱导了强烈的ERKl／2信号通路激活和星形胶质细胞反应。U0126能够剂量依赖性抑制GFAP的表达，抑制急性期星形胶质细胞反应。     

X线照射后体外培养星形胶质细胞VEGF和GFAP表达变化及意义

目的 研究X线照射体外培养的星形胶质细胞后血管内皮生长因子(VEGF)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达随时间及剂量的变化,探讨星形胶质细胞与放射性脑损伤(RBI)的关系. 方法 以5、10、15、20 Gy剂量的X线照射体外原代培养的星形胶质细胞后继续培养48 h,或以20 Gy剂量照射后分别培养4、12、24、48 h,实验均设正常对照组即未照射组.免疫荧光染色检测GFAP观察各组细胞形态学的变化;DAPI染色观察星形胶质细胞的凋亡;Western blotting检测细胞GFAP、VEGF蛋白的表达情况. 结果 与正常对照组比较,不同剂量照射组星形胶质细胞增生、增多,变形,胞体肥大肿胀,分支增多,突起增粗,GFAP染色加深,且这种变化随照射剂量和时间增加而表现更明显;与正常对照组相比,各剂量照射组星形胶质细胞凋亡率差异无统计学差异(P＞0.05); Western blotting检测显示不同剂量组、20Gy剂量照射不同时间组星形胶质细胞GFAP、VEGF蛋白的表达均不同,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组相比,5、10、15、20 Gy照射组和20 Gy剂量照射后各时间组GFAP、VEGF的蛋白表达均增高,且随着照射剂量的增加GFAP、VEGF的蛋白表达亦增高,差异有统计学意义(P＜0.05).20 Gy剂量照射后4～48 h内GFAP的表达呈时间依赖性,20 Gy剂量照射后4～24 h内VEGF的表达呈时间依赖性. 结论 X线能诱导体外培养的星形胶质细胞活化,GFAP及VEGF的表达呈时间及剂量依赖性增高,VEGF异常高表达可能是造成RBI的重要原因.     

星形胶质细胞活化与表皮生长因子受体表达的相关性研究

目的观察活化后星形胶质细胞(astrocyte,AST)的表皮生长因子受体(epithelial growth factor recep-tor,EGFR)表达变化。方法分离培养星形胶质细胞,实验分为对照组、活化组、抑制组,以睫状神经营养因子(cili-ary neurotrophic factor,CNTF)活化星形胶质细胞,并用EGFR抑制剂染料木黄酮(Genistein)干预活化星形胶质细胞,通过免疫荧光化学、RT-PCR分别观察胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及EGFR mRNA表达变化。结果星形胶质细胞活化后,不仅GFAP表达增高,EGFR表达亦明显增高,与对照组比较有显著差异(P0.01);应用EGFR抑制剂Genistein干预后,星形胶质细胞活化被抑制,GFAP表达下降,与活化组比较有显著差异(P0.01)。结论形胶质细胞活化后,EGFR表达明显上调;抑制EGFR表达,可抑制星形胶质细胞活化。     

TREK-1激动剂亚麻酸对星形胶质细胞谷氨酸诱导电流和摄取谷氨酸的影响

目的观察双孔钾通道TREK-1激动剂亚麻酸对星形胶质细胞谷氨酸诱导电流和摄取谷氨酸的影响。方法应用大鼠海马脑片膜片钳技术研究TREK-1激动剂亚麻酸对星形胶质细胞谷氨酸诱导电流的影响;原代培养大鼠皮层星形胶质细胞,采用免疫荧光双标法检测TREK-1在星形胶质细胞的表达,采用谷氨酸浓度检测法观察TREK-1激动剂亚麻酸对星形胶质细胞摄取谷氨酸的影响。结果 TREK-1在星形胶质细胞上表达丰富,谷氨酸可诱导星形胶质细胞产生内向电流,与对照组相比,给予TREK-1激动剂亚麻酸干预后星形胶质细胞谷氨酸诱导电流显著增加(P0.05),并显著增强原代培养的星形胶质细胞摄取谷氨酸能力(P0.05)。结论 TREK-1在星形胶质细胞上表达,TREK-1激动剂亚麻酸显著增加星形胶质细胞谷氨酸诱导电流,增强原代培养的星形胶质细胞摄取谷氨酸能力,提示TREK-1活性改变与星形胶质细胞平衡缓冲功能密切相关。     

伽玛刀照射后胶质细胞CX43和GFAP表达变化及意义

目的研究伽玛刀照射后胶质细胞缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)表达的变化。方法体外培养原代星形胶质细胞(astrocytes,Ast)分为正常对照组和γ刀照射组,后者经γ刀照射(边缘剂量4～36Gy),培养72小时后检测GFAP,Cx43。结果4～12Gy组与正常对照组无显著差异,至16Gy组胶质细胞开始增生GFAP表达阳性细胞数大于正常对照组且呈剂量依赖性增高至32Gy组GFAP表达达最大值。Cx43表达在12Gy组即开始明显下降且Cx43表达呈计量依赖性减低,在24～32Gy降低尤为显著至32Gy组达最低值。结论原代培养Ast经伽玛刀照射后GFAP表达增高,同时Cx43表达减低。Cx43的异常低表达可能是胶质增生及放射损伤的重要原因。     

干细胞贴膜治疗脊髓损伤

背景：目前人们较多采用的成体干细胞移植,移植方式多形成再次损伤,且体内神经元分化的效率不高。 目的：在以往分步诱导分化高效获得神经元前体细胞的基础上,制成干细胞贴膜,观察其贴敷移植治疗脊髓损伤功能恢复的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-05/10在郑州大学医学院实验中心完成。 材料：酶、化学法制作膜样基质;分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,BrdU标记,调整部分细胞浓度为1×1011 L-1成细胞悬液备用。余分步诱导并制成干细胞贴膜。 方法：健康成年雄性SD大鼠88只,体质量220~250 g,以自制打击器制作急性脊髓损伤模型。模型成功后6 h,抽签法随机分为4组,每组22只。干细胞贴膜组：在T11进行椎板切除术,打开硬膜充分显露损伤脊髓,止血,将干细胞贴膜贴敷在损伤脊髓表面,手术显微镜下固定于硬膜,分层缝合肌肉皮肤;细胞移植组：损伤脊髓头尾端移植1×1011 L-1细胞悬液共5 μL,余同上;基质组：贴敷膜样基质在损伤脊髓表面,余同上;对照组：仅行椎板切除术,并打开硬膜。 主要观察指标：术后第1天及其后1周1次共10周,进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测;术后2,4,6周观察移植细胞存活及形态学变化,免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白、突触素及神经元特异性烯醇化酶的表达。 结果：①运动功能检测：各组BBB积分在4周及以后达到稳定,以10周时 BBB评分12及以上为重要的恢复指标,则干细胞贴膜组为100%,细胞移植组为33%,基质组和对照组仅为17%。斜板实验的顺位实验,干细胞贴膜组第10周时的角度与第4周相比有显著改善(P=0.027),而同组同时间点的BBB分值间差异无显著性意义(P=0.286)。②干细胞贴膜组和细胞移植组远端损伤边缘BrdU阳性细胞计数差异无显著性意义(P=0.089)。干细胞贴膜组BrdU阳性细胞多呈神经元形态,细胞移植组BrdU阳性细胞多呈小胶质细胞形态。③各组突触素、胶质纤维酸性蛋白表达均逐渐增强,神经元特异性烯醇化酶表达则呈减少趋势。干细胞贴膜组各时间点的突触素、神经元特异性烯醇化酶表达高于其他各组(P < 0.05);胶质纤维酸性蛋白表达则低于其他各组且保持稳定(P < 0.05)。细胞移植组、基质组和对照组不同时间点的胶质纤维酸性蛋白表达差异有显著性意义且逐渐增高(P < 0.05)。 结论：干细胞贴膜上的神经元前体细胞可以在早期整合到损伤脊髓中,长期存活,并且具有高效的神经元分化特性;干细胞贴膜脊髓表面贴敷移植有助于脊髓损伤区突触素的表达、神经网络重建和神经功能恢复;干细胞贴膜移植较单纯干细胞移植更能有效促进神经功能恢复。     

柚皮苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究柚皮苷(Naringin,NRG)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及星形胶质细胞是否参与其中。方法柚皮苷连续灌胃7 d后进行大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO),缺血2 h后拔出线栓进行再灌注。24 h后TUNEL染色观察凋亡细胞数量,苏木精-伊红(hematoxyli-eosin,HE)染色观察形态学改变,免疫荧光染色分别检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)。结果同模型组相比,柚皮苷预干预后凋亡细胞数量显著减少(P0.05),细胞损伤明显减轻。免疫染色显示柚皮苷可以减轻星形胶质细胞的激活程度,同时Cx43的表达也有所降低(P0.05)。结论柚皮苷预干预可有效减轻脑缺血再灌注损伤,该保护作用同降低星形胶质细胞Cx43表达密切相关。