脑胶质瘤化疗药物敏感性的临床研究

背景与目的 :脑胶质瘤是一个需要多学科综合治疗的恶性脑部疾病,国内外学者都在积极探索更加有效的综合治疗方法。本文探讨脑胶质瘤细胞在体外对化疗药物的敏感性,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据。方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)对胶质瘤化疗的7种常用药物体外敏感性进行检测。结果:总体化疗药物敏感性BCNU﹥VM-26、TMZ﹥DDP﹥CBP﹥VP-16﹥VCR;低级别胶质瘤(WHO分级Ⅰ、Ⅱ级)化疗药物敏感性BCNU﹥TMZ﹥VM-26、DDP﹥CBP、VCR﹥VP-16;高级别胶质瘤(WHO分级Ⅲ、Ⅳ级)化疗药物敏感性BCNU、VM-26﹥TMZ、DDP﹥VP-16﹥CBP﹥VCR。结论:体外药敏试验对排除无效药物、筛选敏感药物对脑胶质瘤进行个体化的化疗,提高临床化疗效果,具有重要意义。     

胶质瘤细胞株中ERCC1、ERCC2基因启动子区CpG岛的甲基化分析

背景与目的：NER是DNA修复系统中一个由多种蛋白组成的复杂网状系统，其中作为主要组成成分的ERCC1的表达同DDP化疗耐受相关，ERCC2的高表达同烷基药物化疗耐受相关。研究已经发现某些基因启动子区CpG岛的甲基化会导致基因的表达沉默，对化疗反应有指示作用，本文探讨ERCCI和ERCC2启动子区的甲基化状态和耐药的关系。方法：应用亚硫酸氢钠处理基因组DNA后PCR和不测序，我们分析了5个具有不同药敏特征的胶质瘤细胞株ERCC1和ERCC2的甲基化状态，人脑胶质瘤细胞株UW28，MGR1、MGR2、SF767和T98G和DDP和MeCCNU的敏感性采用MTT法检测。结果：在DDP敏感的细胞株中发现ERCC1基因启动子区上游4.9kb处存在甲基化的CpG岛，而在5个对BCNU耐药的细胞株中ERCC2的启动子区的CpG岛均呈去甲基化状态。结论：ERCC1和ERCC2畸变的甲基化状态与胶质瘤细胞株对化疗药的敏感性有关。     

人脑胶质瘤原代细胞培养及体外药物敏感度的实验

目的 探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,研究不同胶质瘤患者对抗肿瘤药物的敏感度。　方法 采用组织块培养法对39例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,用MTT法检测胶质瘤细胞对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR) 、威猛(teniposide,VM 26)和5 氟尿嘧啶(5 Fu) 5种化疗药物的敏感度,并对其结果进行分析。结果 脑胶质瘤细胞原代培养37例成功,2例失败,成功率94.9%;37例培养成功者药敏检测显示不同个体对不同抗肿瘤药物的抑制率存在明显差异,各药物的平均抑制率依次为VM 26>DDP>5 Fu>ADM>VCR,其敏感率分别为56.8%、51.4%、37.8%、24.3%和13.5%。 结论 体外胶质瘤细胞原代培养和MTT法检测化疗药物的敏感度是可行的,检测化疗药物敏感度对胶质瘤患者个体化的化疗具有一定价值。     

外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏相关性研究

目的:研究外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏的相关性。方法:采用MTT法体外药敏试验检测30例骨肉瘤患者外周血淋巴细胞和其肿瘤细胞对14种化疗药物的敏感性。结果:经统计学处理,骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞的体外药敏试验对14种化疗药物的敏感性差异无显著性(P>0.05)。两种细胞药敏试验对CBP、DDP、EADM、MTX、THP、VM26中度敏感;对ADM、BLM、MMC、VCR低度敏感;对HCPT、DTIC、Vp-16不敏感。结论:骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性,外周血淋巴细胞化疗药敏检测对临床选择化疗药物具有重要的参考价值。     

RNA干扰ERCC1基因表达对肺腺癌细胞A549/DDP顺铂耐药的影响

背景与目的核苷酸切除修复机制可修复顺铂(DDP)造成的DNA损伤,作为其中的关键酶之一,切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)的表达可能与DDP耐药有关.本研究旨在探讨小干扰RNA沉默ERCC1基因表达对肺腺癌耐药细胞A549/DDP药物敏感性的影响.方法将体外设计合成针对ERCC1的小分子RNA(siRNA)转染A549/DDP细胞,RT-PCR检测ERCC1 mRNA水平;Western blot检测ERCC1蛋白表达的变化;MTT检测RNA干扰后细胞药物敏感性改变.结果 ERCC1 RNAi干扰后ERCC1 mRNA表达指数降低,明显低于对照组,干扰后ERCC1 mRNA表达抑制率为90.4%.转染ERCC1 siRNA降低TERCC1蛋白的表达水平.MTT显示分别用2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL顺铂处理细胞48 h,转染ERCC1 siRNA细胞组较对照组敏感性明显增高,干扰前A549/DDP细胞IC50为12.49μg/mL,干扰后A549/DDP细胞IC50下降为9.27 μg/mL.结论 ERCC1siRNA干扰可以降低ERCC1的表达水平,并可提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性.     

胶质瘤DNA依赖性蛋白激酶活性与化疗药物敏感性的关系

目的 研究DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）活性和脑胶质瘤化疗敏感性的关系。方法原代培养胶质瘤细胞,用MTT法检测其对6种不同抗癌药物的敏感性,以血药峰浓度（PPC）下的抑制率（IR）表示。提取同一胶质瘤组织标本中核蛋白质,用p53蛋白为特异底物的磷酸化反应检测其中的DNA-PK活性。结果不同胶质瘤组织标本中DNA-PK活性差别较大,36例组织标本中,16例的DNA-PK活性较高（相对活性≥0．40）,20例的DNA-PK活性较低（相对活性〈0．40）。对DDP、VCR敏感（IR≥50％）的肿瘤组织,DNA-PK活性低;对DDP、VCR不敏感（IR〈50％）的肿瘤组织,DNA-PK活性高（t=-3．445,P〈0．01）。同时,DNA-PK活性高的肿瘤组织,DDP、VCR体外抑制肿瘤细胞的IR值低;而DNA-PK活性低的肿瘤组织,相应的IR值高（t=-2．145,P〈0．05）。结论胶质瘤标本的DNA-PK活性与其对DDP、VCR敏感性显著相关,DNA-PK活性的高低可能是胶质瘤化疗敏感性的一个新的标记物。     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1表达的相关性研究

背景与目的核苷酸切除修复机制可修复顺铂(DDP)造成的DNA损伤,作为其中的关键酶之一,切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达可能与DDP耐药有关。本研究的目的是证实ERCC1表达与DDP作用的关系,推测ERCC1在DDP耐药中的作用。方法选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP为研究对象,RT-PCR及免疫细胞化学方法检测不同浓度、不同作用时间DDP干预后细胞中ERCC1的表达,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数。结果10μmol/LDDP作用12h,A549细胞中ERCC1 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1 mRNA的表达逐渐增高,在72h组ERCC1 mRNA表达最强,为66.69%±5.30%。浓度为5μmol/L的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1基因水平上升,而随着DDP浓度的增加,ERCC1 mRNA水平逐渐上升,20μmol/L组达高峰(79.50%±5.46%),为对照组的3.9倍。蛋白表达的增高趋势与mRNA基本平行,但二者幅度不完全一致。与亲本细胞比较,经长期小剂量DDP诱导的耐药株A549/DDP中ERCC1表达明显增高。结论随着小剂量DDP作用时间的延长,A549细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1可能参与了继发耐药的形成。     

RNA干扰抑制ERCC1/ERCC2表达对非小细胞肺癌化疗敏感性影响观察

目的探讨利用RNA干扰技术沉默非小细胞肺癌A549和A549/顺铂(DDP)细胞株ERCC1和ERCC2的表达对DDP化疗敏感性的影响。方法设计并合成靶向基因siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2,并构建载体,通过前期转染A549/DDP细胞,筛选出沉默ERCC1和ERCC2基因表达最优的小分子RNA片段及最佳的作用时间,再将筛选出来的最优片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染入A549细胞,观察其转染效率,使用RT-PCR及细胞免疫组化分别检测转染后基因及蛋白的表达变化;利用MTT法检测转染后细胞IC50,观察其对DDP耐药性的变化;再根据实验结果,从A549和A549/DDP细胞株中选定一株能够被逆转耐药的细胞接种于12只裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤时间,并加用DDP局部化疗4次,记录肿瘤体积变化情况。结果通过siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染A549细胞株后,其ERCC1mRNA相对表达量为104.097 8±8.551 3,未转染组为128.465 6±12.360 4;ERCC2 mRNA相对表达量为90.415 7±7.882 1,未转染siRNA-ERCC2组为123.310 0±10.999 2。转染组的mRNA相对表达量均小于未转染组,P<0.05。转染A549细胞后,转染组ERCC1和ERCC2蛋白表达量分别为1.982 1±0.518 7和2.087 1±0.655 2,明显低于未转染组ERCC1(4.576 4±1.271 1)和ERCC2(5.680 0±1.416 7),P<0.01;MTT结果提示,siRNA-ERCC1和siRNA-ERCC2转染细胞A549后的IC50分别为(20.322 7±0.452 1)和(20.394 7±0.479 4)μg/mL,与未转染组(21.062 4±0.766 4)μg/mL差异无统计学意义,P>0.05;转染A549细胞后未发现逆转DDP耐药的效果,故筛选出A549/DDP细胞株。siRNA-ERCC1转染组的肿瘤体积为(144.63±7.67)mm3,siRNA-ERCC2转染组为(130.65±8.45)mm3,均明显小于未转染组的(252.35±12.36)mm3,P<0.01。结论高效的特异性siRNA能抑制非小细胞肺癌细胞中ERCC1和ERCC2基因和蛋白的表达,并能使A549/DDP细胞株对DDP的耐药性降低,但不能改变A549细胞株对DDP的耐药性。     

核苷酸切除修复交叉互补基因1与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)与卵巢癌顺铂(DDP)耐药的关系.方法 分别应用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测58例卵巢癌组织和ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP 4株卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,分析该基因与DDP化疗耐药的关系,并观察应用RNA干扰技术干扰了ERCC1基因后卵巢癌细胞对DDP敏感性的变化.结果 58例卵巢癌组织中,ERCC1表达阳性者22例,阳性率为37.9%.ERCC1的表达与DDP化疗敏感性有关(P＜0.05),DDP耐药者ERCC1表达的阳性率(57.89%)显著高于敏感者(28.21%,P=0.029).ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP 4株卵巢癌细胞ERCC1基因的表达与DDP IC50正相关(r=0.932,P＜0.05).RNA干扰ERCC1基因后,ES-2、SKOV3、COC1/DDP细胞对DDP的敏感性分别增加了53.88、5.07、3.75倍.结论 ERCC1基因与卵巢癌DDP耐药有关,RNA干扰ERCC1基因可增强卵巢癌细胞对DDP的敏感性.     

50例神经胶质瘤体外化疗药物敏感性研究

目的 :探讨MTT法体外药敏试验在神经胶质瘤患者中应用的可能性。方法 :采用MTT法对50例人神经胶质瘤新鲜标本 ,进行了临床12种常用化疗药物的体外敏感性测定。结果 :采用简单机械法分离单细胞悬液 ,以每孔5×104胞量接种、1×PPC(血浆峰浓度)作用72小时为适宜的实验条件 ,试验的可评价率为98 % ;以抑制率>50%为敏感的判断标准 ,神经胶质瘤对VM26、DDP、MMC、ACLA、和VP 16较为敏感 ,敏感率在71.43%～26.53%之间 ;不同个体对同一药物及同一药物对不同个体的敏感性具有明显的差异。结论 :MTT法具有简便、快速、客观、成功率高等特点 ,在神经胶质瘤临床个体化疗上具有使用价值。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.