IL-6对肝细胞癌患者CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8~+T淋巴细胞中的表达,评估IL-6对HCC患者CD8~+T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。方法纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组),同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组),采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,分选CD8~+T淋巴细胞,ELISA法检测血浆IL-6水平,流式细胞术检测PD-1在CD8~+T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8~+T淋巴细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平,实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量,Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高~([(99.67±20.92) pg/m L vs (81.05±16.76) pg/m L,t=3.427,P=0.001 1])。虽然CD3~+CD8~+T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P 0.05),但PD-1~+CD8~+细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36%vs 2.20%±0.47%,t=5.335,P 0.000 1)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8~+T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖,但可降低PD-1表达(2.67%±0.91%vs 3.33%±1.12%,t=2.177,P=0.035),增加IFNγ分泌~([(13.50±3.82) pg/m L vs (10.82±1.37) pg/m L,t=3.170,P=0.002 8]),穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140,P值均0.000 1),同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P 0.000 1)。结论抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8~+T淋巴细胞的功能。