双向电泳-质谱技术筛选心绞痛血瘀证相关蛋白的研究

目的对心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后的血浆进行双向电泳图谱检测，寻找心绞痛血瘀证相关蛋白，探索心绞痛血瘀证的蛋白质组学特点。方法采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析／电离-飞行时间质谱对8例心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后的血浆进行比较蛋白质组学研究，寻找心绞痛血瘀证相关蛋白。结果初步发现了Clusterin、ApoA-I在血瘀证程度变轻后表达增加，而Fibrinogen β chain、Vitamin D-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Albumin isoform在血瘀证程度变轻后表达降低。结论初步发现Clusterin、ApoA-I、Fibrinogen β chain、Vitamin D-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Albumin isoform可能与心绞痛血瘀证相关，但结果有待运用其他生物学的方法进行具体的验证并探索其机制。     

双向电泳-质谱技术筛选心绞痛血瘀证相关蛋白的研究

目的 对心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后的血浆进行双向电泳图谱检测,寻找心绞痛血瘀证相关蛋白,探索心绞痛血瘀证的蛋白质组学特点.方法 采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱对8例心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后的血浆进行比较蛋白质组学研究,寻找心绞痛血瘀证相关蛋白.结果 初步发现了Clustenin、ApoA-I在血瘀证程度变轻后表达增加,而Fibrinogen β chain、Vitamin D-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Albumin isofom在血瘀证程度变轻后表达降低.结论 初步发现Clusterin、ApoA-I、Fibrinogen β chain、Vitamin D-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Albumin isoform可能与心绞痛血瘀证相关,但结果有待运用其他生物学的方法进行具体的验证并探索其机制.     

差异凝胶电泳技术寻找冠心病心绞痛血瘀证的相关蛋白

目的:寻找冠心病不稳定性心绞痛血瘀证相关蛋白,探索其蛋白质组学特点.方法:采用DIGE差异凝胶电泳和串联质谱对8例冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后及健康人的血浆进行蛋白质组学的比较研究,寻找冠心病不稳定性心绞痛血瘀证的相关蛋白.结果:初步发现Clusterin、ApoA-I在冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者的血浆中,表达低于健康人,血瘀证程度变轻后表达增加.而Fibrinogen B chain、VitaminD-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Haptoglobin α 2 chain在冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者的血浆中,表达高于健康人,血瘀证程度变轻后表达降低.结论:Clusterin、ApoA-I、Fibrinogen B chain、Vitamin D-Binding Protein、Haptoglobin β chain、Haptoglobin α 2 chain可能与冠心病不稳定性心绞痛血瘀证相关.     

基于差异凝胶双向电泳技术的冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者血浆差异蛋白特征研究

目的通过对冠心病心绞痛血瘀证患者和健康人血浆的差异凝胶电泳图谱检测,寻找其血浆差异蛋白,探索其蛋白质组学特点。方法采用差异凝胶双向电泳和串联质谱对12例冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证患者、12例痰瘀互阻证患者和12名健康人去高丰度蛋白血浆进行比较蛋白质组学研究,寻找心绞痛血瘀证血浆差异蛋白。结果初步发现在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证和痰瘀互阻证两组患者表达均变化的蛋白有Haptoglobin β chain、DBP、HBB、HBA、Transthyretin、ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅳ。仅在冠心病不稳定性心绞痛痰瘀互阻证表达变化的蛋白有Haptoglobin α1 chain、α-1-acid glycoprotein、ApoC-Ⅲ、ApoA-Ⅱ、ApoC-Ⅱ、ApoJ、Haptoglobin α 2 chain。仅在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证表达变化的蛋白α1-antitryp-sin、Fibrinogen γ chain、Fibrin β。结论冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证与痰瘀互阻证在蛋白质层面的部分共性特征表现为炎症反应、代谢紊乱(包括血脂、血氧等)。     

冠心病气虚血瘀证的蛋白质组学特征研究

目的 应用高解析离子淌度质谱与纳升级超高效液相色谱联用新技术（LC-MSE),寻找冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证的血浆特征分子,探索冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证在蛋白质组学层面的特征。     

冠心病心绞痛痰浊证、血瘀证的血浆代谢组学研究

目的:研究冠心病心绞痛痰浊痹阻证(痰浊证)、心血瘀阻证(血瘀证)患者的血浆代谢组学特征,探讨代谢组学方法在研究冠心病心绞痛中医证型中的应用。方法:对10例痰浊证患者和10例血瘀证患者的血浆样本进行氢核磁共振(1HNMR)检测。用主成分分析(PCA)与偏最小二乘判别分析(PLS-DA)处理图谱数据,研究2组血浆代谢物图谱的差异。结果:1HNMR图谱模式识别分析显示,2组血浆样本代谢物差异显著。痰浊证组乳酸含量较高,血瘀证组丙氨酸含量较高,说明2组都存在能量代谢紊乱;痰浊证组低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、脂类化合物、酮体含量均高于血瘀证组,高密度脂蛋白、不饱和脂肪酸含量均低于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的脂代谢紊乱;痰浊证组葡萄糖、半乳糖、N-乙酰糖蛋白含量均高于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的糖代谢紊乱;痰浊证组天门冬氨酸、异亮氨酸、谷氨酞胺、白蛋白赖氨酰含量均高于血瘀证组,丙氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸含量均低于血瘀证组,说明2组氨基酸代谢紊乱程度相当。结论:2组血浆样本的1HNMR代谢物图谱存在差异,能从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢物。血浆代谢物变化能在一定程度上区分冠心病心绞痛的不同中医证型。     

小型猪心肌缺血血瘀证的血浆蛋白质组学研究

目的：寻找血瘀证（心肌缺血）相关的血浆蛋白质组学特征。方法：采用前期建立的方法,以小型猪前降支主干放置Ameroid缩窄环结合动态观察的方法制备小型猪血瘀证模型。在证候时间窗内前腔静脉采血,枸橼酸钠抗凝,离心收集上清备用。血浆总蛋白上样量1.3mg,同组样品等量混合后,采用双向凝胶电泳分析差异蛋白点。等电聚焦用IPG胶条24cm、PH范围3-11NL,SDS-PAGE浓度13%,考马斯亮蓝R350染色,凝胶扫描后,采用Imagemaster 2D Platinum 6.0软件进行凝胶的蛋白点检测、匹配。对匹配蛋白点的体积百分比进行比较,确定差异蛋白点。差异蛋白点胰蛋白酶酶切后,MALDI-TOF检测,数据库搜索,确定其相关信息。结果：模型组有10个明显的上调蛋白点。质谱鉴定结果提示,部分上调的差异蛋白为α1-酸性糖蛋白、α1-抗胰蛋白酶、胎球蛋白A、载脂蛋白A-I、载脂蛋白A-IV。结论：已鉴定的差异蛋白质主要为急性期反应蛋白及载脂蛋白等,炎症/抗炎是其互相联系的核心环节,提示在该心肌缺血血瘀证同时存在着炎症反应这一病理进程,炎症反应可能是血瘀证的病理机制之一,但仍有待进一步研究。     

基于双向凝胶电泳-质谱技术的小型猪心肌缺血气虚血瘀证血浆特征蛋白质研究

目的 采用双向凝胶电泳-质谱技术,探讨小型猪心肌缺血气虚血瘀证的特征性血浆蛋白质表达谱,筛选证候特征性生物学标志物、证候主要表征的相关蛋白质.方法 心肌缺血气虚血瘀证小型猪和假手术对照组各6只.数码相机拍照并分析舌象r、g、b值,心脏超声检测左室射血分数.动物血浆采用24cm、PH3-11NL的胶条和13%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,考马斯亮蓝染色、扫描后,采用Imagemaster 2D Platinum 6.0软件进行凝胶蛋白点检测及匹配,以实验组与对照组的vol%比值＞2或＜0.5作为可能的差异蛋白点.采用基质辅助激光解吸附的时间飞行质谱对差异蛋白点进行鉴定.结果 与对照组相比,心肌缺血气虚血瘀证小型猪血浆中检测到18种下调蛋白,6种上调蛋白.质谱鉴定获得阳性结果的下调蛋白为动力蛋白重链6和视黄醇结合蛋白4,均与能量代谢有关.左室射血分数与差异蛋白Spot 22线性相关,值分别与Spot20、Spot 6、Spot 20呈线性相关.结论 能量代谢异常可能是心肌缺血气虚血瘀证的特征性病生理进程之一.蛋白质组学研究提示的差异血浆蛋白有可能成为证候诊断的标志物,也可能作为宏观表征的有效替代指征.     

冠心病心绞痛血瘀气滞证的临床回顾性研究

目的:通过临床回顾研究,探索冠心病心绞痛血瘀气滞证的证候分布特点,为建立证候宏观诊断标准提供依据。方法:以山东省2家三级甲等医院近5年收治的1 033例冠心病心绞痛病历资料为研究对象,筛选出71例冠心病心绞痛血瘀气滞证病历,以中医证型和四诊信息为切入点,运用频数统计和因子分析方法探讨其临床证候分布和证候特点。结果:冠心病心绞痛血瘀气滞证71例占总调查病例数的6.87%,血瘀气滞证典型证20例占71例的28.2%,血瘀气滞证复合证型51例占71.8%。探索性因子分析共提取了4个公因子,分别为痰湿、气虚+气滞、血瘀、血虚+气虚。结论:临床冠心病心绞痛血瘀气滞证的典型证较少,在住院患者中大多以复合证候的形式出现,而最常见的兼夹证为痰湿和气虚。本研究提出了冠心病心绞痛血瘀气滞证的证候特点,这对临床鉴别诊断,提高临床疗效具有重要意义。     

稳定性冠心病血瘀证的血浆定量蛋白质组学探析＊

目的 基于数据非依赖性采集的定量蛋白质组学技术（data independent acquisition，DIA）对稳定性冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质进行研究分析，初步探索冠心病血瘀证的关键生物学过程与核心靶点。方法 选择中国中医科学院广安门医院心血管科收治的5例稳定性冠心病患者作为疾病观察组，同时选取健康成人5人作为对照组，采用DIA蛋白质组学技术对受试者的血浆进行检测，确定蛋白质表达量后进行差异蛋白质表达分析、GO富集分析、KEGG信号通路图查询和蛋白质互作网络分析。结果 在差异倍数为1.5倍时，疾病观察组相比于健康对照组，共鉴定到22个蛋白质下调，9个蛋白质上调。进一步的生物信息学分析表明，冠心病血瘀证的生物学过程与补体参与的慢性炎症反应有关，关键信号通路是补体与凝血级联反应的信号通路，核心蛋白质为C反应蛋白、转甲状腺素蛋白、补体因子H、维生素D结合蛋白等。结论 冠心病血瘀证的生物学过程与补体参与的慢性炎症反应有关。     

基质辅助激光解吸电离成像质谱法可视化分析制川乌炮制过程生物碱空间分布的研究

目的 采用质谱成像显微镜可视化分析制川乌炮制过程中6个生物碱的变化情况。方法 准备不同炮制时间(9个时间点)的制川乌样品,用明胶溶液包埋后冷冻,制备30 μm厚度的切片样品进行实验。根据乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱共6种标准品的质谱信号,选取α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质,采用升华法涂覆基质后再进行喷雾。质谱数据采集质量范围为m/z 200~800,使用DHB溶液在m/z 100~900进行质量校正,以1 000 Hz频率的正离子模式进行基质辅助激光解吸-质谱成像(MALDI-MSI)。通过超高效液相色谱(UHPLC)测定不同炮制时间样品中6个生物碱的含量,用含量测定结果验证质谱成像结果的准确性。结果 质谱成像技术可以区分制川乌不同炮制程度的样品,并且可以实现生物碱空间分布的可视化分析。结论 质谱成像技术可运用于制川乌炮制过程质量研究,为中药炮制研究提供一种新思路。     

大豆皂苷的高效液相色谱-电喷雾串联质谱研究

利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术分析经大孔树脂柱层析分离得到大豆皂苷SSⅡ-。在线的高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术能够准确快速的提供糖苷类化合物的分子量和糖链部分的有益信息,通过分析确定SSⅡ-中含有A2、Ba和Bb等六种大豆皂苷,并探讨了其电喷雾串联质谱可能的裂解规律。     

新西兰牡荆苷等4种碳苷黄酮的电喷雾质谱裂解规律研究

目的:利用电喷雾质谱技术对新西兰牡荆苷、木犀草素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷、槲皮素-6-C-葡萄糖苷和二氢槲皮素-6-C-葡萄糖苷4种碳苷黄酮的质谱裂解规律进行研究.方法:用电喷雾多级质谱(ESI-MSn)对该类化合物进行研究,并分别在正离子和负离子扫描模式下对其主要特征碎片离子进行解析.结果:负离子扫描模式下,主要发生糖环裂解,六碳糖碳苷主要产生脱去m/z 120,90的碎片峰,五碳糖碳苷主要产生脱去m/z 90,60的碎片峰,双糖碳苷主要产生连续脱去m/z120,90,60的碎片峰;正离子扫描模式下,主要发生糖羟基连续脱水,六碳糖碳苷产生脱去m/z 120的碎片峰,五碳糖碳苷产生脱去m/z 60的碎片峰.碳苷黄酮的负离子扫描模式比正离子扫描模式的质谱特征更明显.结论:分析了这4种碳苷黄酮的电喷雾多级质谱裂解规律,探讨了碳苷黄酮,特别是双糖碳苷黄酮质谱裂解规律,为碳苷黄酮的快速鉴别提供了参考.     

甘遂甘草配伍的电喷雾质谱研究

目的:研究甘遂甘草相反的物质基础。方法:应用电喷雾质谱技术,研究不同比例的甘遂甘草配伍后水煎液中巨大戟二萜醇型化合物在质谱中的离子强度的变化。结果:随着甘草比例的增加,水煎液中巨大戟二萜醇型化合物的量逐渐减少。结论:甘遂甘草合用有毒与甘草对甘遂中有毒成分的煎出的影响无直接关系。     

稳定型心绞痛与不稳定型心绞痛的证候特点及差异性研究

目的:探讨稳定型心绞痛与不稳定型心绞痛证候特点及差异性。方法:首先对2029例冠心病心绞痛患者进行临床信息采集表的填写,然后分别从症状指标描述、证候特点及相关性分析3个方面探讨稳定型心绞痛与不稳定型心绞痛证候规律及差异性。结果:(1)血瘀、气虚是心绞痛证候最主要的证素,但不稳定型心绞痛组血瘀更为突出,气虚相对较少,经X2检验,P0.01,具有非常显著性差异;(2)不稳定型心绞痛证候相关强度依次为阳虚寒凝痰浊偏热血瘀阴虚,而气虚与稳定型心绞痛的发病相关强度较高。结论:稳定型心绞痛多气虚等本虚表现,不稳定型心绞痛多血瘀、痰浊、气滞、寒凝、阳虚,多为实邪为患。     

气血冲剂治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛的临床研究

气血冲剂治疗冠心病心绞痛气虚血瘀型患者55例,结果表明:气血冲剂有缓解心绞痛、改善心电图缺血性改变的作用;并可提高患者运动耐量和血浆6-Keto-PGF_(1α)水平,降低血浆TXB_2水平以及TXB_2/6-Keto-PGF_(1α)的比值。提示其治疗作用与提高左心功能及调节TXB_2/6-Keto-PGF_(1α)平衡有关。     

杨积武教授益气活血方治疗冠心病不稳定心绞痛气虚血瘀型临床观察

目的：探讨杨积武教授在治疗气虚血瘀型冠心病的经验方，验证其临床疗效。方法：按诊断标准选取42例患者并分为2组。2组患者除每天静点硝酸酯类药物外，治疗组每天服用益气活血方汤荆；对照组每天服用脂必妥片。观察期间禁止使用除硝酸甘油外其他治疗冠心病心绞痛的中西药物，共18天。结果：治疗组的心绞痛症状和硝酸甘油停减率总有效率均明显高于对照组。心电图疗效指标中，两组的总有效率无统计学意义。各例患者治疗后检查肝肾功能，均无明显变化。结论：本经验方与脂必妥之间除心电图疗效无明显差异外，其它指标均优于对照药。临床中可以随时根据患者的各种兼症加减应用，灵活多变，对肝功肾功也无明显的损害。     

颈动脉内膜-中层厚度及高敏C反应蛋白与不稳定型心绞痛中医证型的关系

目的探讨不稳定型心绞痛（UAP）中医证型及临床危险度分层与颈动脉内膜-中层厚度（IMT）及高敏C反应蛋白（hs-CRP）的关系。方法将患者按Braunwald UAP分类法进行临床危险度分层,并按冠心病中医辨证标准进行辨证分型;入选的107例UAP患者及30例对照组均检查IMT及hs-CRP。结果 UAP患者IMT及hs-CRP水平明显高于对照组,随着临床危险度的增高而有明显差别;UAP患者血清hs-CRP水平与颈动脉IMT呈正相关;UAP患者血瘀证、痰浊证、痰瘀互结证到气虚血瘀证,IMT及hs-CRP均呈现不断增高的趋势。结论 hs-CRP及IMT与UAP的诊断及危险分层存在相关性,对于UAP的预测及危险度判断具有重要意义;UAP的中医辨证分型与IMT及hs-CRP存在相关性,IMT及hs-CRP作为中医辨证分型的客观化、量化指标有一定的临床价值。     

温阳活血方治疗急性冠状动脉综合征不稳定型心绞痛42例临床研究

目的 观察温阳活血方治疗急性冠状动脉综合征(ACS)不稳定型心绞痛的疗效并探讨其作用机制。方法 将86例ACS不稳定型心绞痛阳虚血瘀证患者随机分为治疗组42例及对照组44例。对照组给予西药常规治疗,治疗组在西药常规治疗的同时加用温阳活血方。观察并记录两组患者治疗前和治疗后1周、2周、3周、4周临床症状、体征、中医证候积分及实验室指标,随访1个月。结果 治疗后两组临床症状水平和症状积分与治疗前比较均明显改善(P<0.05或P<0.01);且治疗组临床疗效优于对照组;治疗后治疗组肌红蛋白水平较治疗前降低(P<0.05);血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平与治疗前比较改善明显(P<0.05),且治疗组在降低TXB2水平及升高6-keto-PGF1α方面优于对照组(P<0.05)。治疗过程及随访中,两组患者均未发现心率、心律、血压等的药物性异常变化及血常规、尿常规、肝功能、肾功能的改变(P>0.05)。结论 温阳活血方治疗ACS不稳定型心绞痛安全有效,可明显改善患者的临床症状,其治疗机制可能是通过调节血管内皮功能发挥作用。