斑点杂交法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的临床研究

目的 探讨斑点杂交技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的应用价值.方法 设计mecA基因特异性引物,用地高辛标记;制备mecA基因探针,运用斑点杂交方法、聚合酶链反应（PCR）法检测mecA基因.结果 100例临床分离的金黄色葡萄球菌中共检出mecA基因阳性32例,阳性率为32％; PCR方法检出阳性36例,阳性率为36％.结论 通过斑点杂交技术可以方便、特异地检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因.     

应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

流感嗜血杆菌16S rRNA和p6基因PCR检测结果比较

目的 比较流感嗜血杆菌(Hi) 16S rRNA和p6基因的PCR检测结果的差异.方法 以Hi的16S rRNA基因及外膜蛋白p6基因作为靶基因,设计特异性引物分别对临床标本分离的43株Hi进行PCR快速检测. 结果 34株16S rRNA基因扩增出538bp大小DNA片段,检出率为79%;43株p6基因均扩增出296bp大小DNA片段,检出率为100%.同时,其他细菌对照株16S rRNA和p6基因扩增均未出现假阳性结果.结论 相比于16S rRNA基因,p6基因对Hi检测和鉴定更具特异性,可用于临床对Hi感染疾病的快速诊断和流行病学研究.     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

痰标本mecA和Sa442基因的定量PCR检测结果与MRSA培养结果的关联

目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义.方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量检测mecA和Sa44...     

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

多重PCR法检测金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因

目的：了解金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）耐药基因及所携带致病毒素基因PVL与TSST-1的特点。方法：应用多重PCR法检测mecA基因、TSST-1基因及Py￡基因。结果：84株金 葡球经多重PCR法对其mecA基因进行检测．检出率为58．3％（49／84）。PVL基因阳性菌株的分离率为23．8％（20／84）,州￡阳性的MRSA为13株（13／49,26．5％）,PyL阳性的MSSA为7株（7／35,20．O％）,差异无统计学意义（P〉0．05）;未检出TSST-1基因。结论：金葡菌的耐药性呈上升趋势,且金葡菌可产生多种毒素,在分离金葡菌的同时,应加强其耐药基因及毒素基因的检测。     

儿科住院患者标本中分离葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性

目的了解儿科住院患者标本中分离出的葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,检测红霉素诱导克林霉素耐药的发生情况。方法使用纸片扩散法测定葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,使用D-试验方法检测红霉素诱导克林霉素耐药表型。结果585株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)406株,其中甲氧西林敏感的SA(MSSA)387株,甲氧西林耐药的SA(MRSA)19株;凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)179株,其中甲氧西林敏感的CNS(MSCNS)20株,甲氧西林耐药的CNS(MRCNS)159株。红霉素、克林霉素均敏感的葡萄球菌117株(20.0%),红霉素和克林霉素均耐药的葡萄球菌282株(48.2%);红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌186株(31.8%),其中D-试验阳性占82.3%(153/186)。MSSA,MRSA,MSCNS和MRCNS中表现为诱导克林霉素耐药分别为92.2%(94/102),50.0%(1/2),77.8%(7/9)和69.9%(51/73)。结论在儿科住院患者标本分离的对红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌中,对克林霉素诱导耐药率高,对该类菌株应采用D-试验检测,以指导临床合理使用抗生素。     

血培养病原菌耐药性分析及葡萄球菌mecA基因检测

目的:分析中日友好医院血培养中病原菌的构成与耐药情况,明确血液感染的病原菌分布和耐药模式,为合理使用抗菌药物提供参考。方法:应用WHONET 5.3进行耐药率统计;采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度;PCR检测葡萄球菌mecA基因。结果:革兰阳性球菌比革兰阴性杆菌分离率高。mecA基因阳性率在金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中分别为32.3%和95.8%;革兰阴性杆菌中分离率较高的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌。超广谱-β内酰胺酶(ESBLs)菌株分别占大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的10.4%和11.2%。结论:血培养苯唑西林耐药葡萄球菌菌株分离比例较高,ESBLs菌株在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中占一定比例。     

几种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的对三种检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法以PCR检测金黄色葡萄球茵甲氧西林决定因子A（mecA）为金标准,按临床实验室标准化委员会（CLSI）操作规程用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法对临床分离的155株金黄色葡萄球菌进行检测。结果155株金黄色葡萄球菌经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为61．9％（96／155）;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100％;苯唑西林纸片扩散法的敏感性为95．8％,特异性为91．5％;苯唑西林琼脂稀释法的敏感性为100％,特异性为98．3％;头孢西丁纸片扩散法优于苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林琼脂稀释法。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便、敏感性高、特异性好、结果可靠,可作为医院微生物实验室日常工作中检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

目的 分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）检测方法及其耐药性。方法 采用头孢西丁、苯唑西林纸片法和PCR3种方法检测2005年安徽地区12家医院临床分离133株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株;琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果头孢西丁、苯唑西林纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为52．63％、54、13％、51．87％,3种方法对MRSA检出率差异无显著性。以PCR法检出mec—A基因为判断MRSA的金标准,头孢西丁纸片法灵敏度为100％、特异度为98．44％、符合率为99、24％,r（正确诊断指数）=0．9844。苯唑西林纸片法的灵敏度为98．55％、特异度为93、75％、符合率为96．24％,r=0．923。除了青霉素-G、氨苄西林、替考拉宁、万古霉素以外,其余抗生素的耐药率,MRSA组均明显高于MSSA组（P〈0．01）。结论 头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法;MRSA为多重耐药菌株,临床应加强检测。     

肺结核感染金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药研究

目的通过对肺结核患者分离出的金黄色葡萄球菌进行基因谱型和药敏检测研究,了解肺结核并发金黄色葡萄球菌的院内流行状况。方法对,晦床分离出的30株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和SCCmec基因盒的多重PCR检测。结果药敏结果显示30株金黄色葡萄球菌对青霉素和甲氧西林的耐药率最高。甲氧西林的耐药率达到62．8％。MecA阳性菌株SCCmec的分型显示均为Ⅱ型或Ⅲ型,且所占比例相近,未见Ⅰ型和Ⅳ型。结论肺结核患者并发金黄色葡萄球菌耐药性普遍,MecA基因介导的MRSA在分离菌株分型以Ⅱ型或Ⅲ型为主。