西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含量测定

用高效液相色谱法测定了西洋参DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷(daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷(genistin)、染料木素(genistein)的含量,采用Unisil Q C18柱,4.6 mm×250 mm,流动相乙腈-0.003 mol/L磷酸氢二钠(17∶83),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,结果表明,4种成分分离效果好,成分含量发生了广泛变异,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料.     

应用洗脱-推挤逆流色谱法高效分离制备人参皂苷Rg1、Rf及Rd

目的 运用洗脱-推挤逆流色谱技术(EECCC)分离制备人参皂苷Rg1、Rf及Rd.方法以乙酸乙酯-正丁醇-0.1％甲酸水(2∶1∶3,v/v)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为1 250r/min,操作体积流量为40 mL/min,切换体积为2 400 mL.结果 在此条件下,经一步纯化从300 mg样品中分离纯化得到71 mg人参皂苷Rg1、21 mg人参皂苷Rf及53 mg人参皂苷Rd,经高效液相色谱分析,纯度分别达到96.2％、94.3％和95.1％.结论 EECCC制备方法快速,简单.对于分离分配系数高的物质十分有效.     

淡豆豉中豆豉多糖、大豆异黄酮的超声提取及含量检测

目的:提取中药淡豆豉中大豆异黄酮和豆豉多糖,并分别检测两种活性成分的含量。方法:采用超声提取大豆异黄酮和豆豉多糖;聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测大豆异黄酮;硫酸-苯酚法显色,在紫外分光光度计下对豆豉多糖的含量进行检测。结果:实验结果表明,聚酰胺薄膜层析法最佳展开剂系统为甲醇∶醋酸∶水(18∶1∶1)。HPLC最佳流动相:甲醇∶乙酸∶水(12∶1∶10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20 min内分离良好。中药淡豆豉含有染料木苷1076.8μg/g、大豆苷元310.48μg/g、染料木素141.93μg/g、豆豉多糖0.91%。结论:精密度实验和加样回收实验均RSD<3%,证明检测方法及结果准确、可靠。     

西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含量测定

用高效液相色谱法测定了西洋参 DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷 (daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷 (genistin)、染料木素 (genistein)的含量 ,采用 U nisil Q C1 8柱 ,4.6 mm× 2 5 0 m m,流动相乙腈 - 0 .0 0 3mol/L 磷酸氢二钠 (17∶ 83) ,流速 1.0 m L/min,检测波长 2 5 4nm,结果表明 ,4种成分分离效果好 ,成分含量发生了广泛变异 ,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料     

RP-HPLC测定大鼠口服葛根后血浆中大豆苷元的含量

目的:建立准确快速测定大鼠口服葛根后血浆中大豆苷元含量的方法,探讨大豆苷元的体内代谢情况.方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠口服药物后不同时间血浆中大豆苷元的含量,待测血浆样品采用沉淀蛋白法处理,Phenomenex Luna C18高效液相色谱柱(4.60 mm×250 mm,5μm)进行分析,流动相为甲醇-0.1%甲酸水(60∶40v/v).结果:测定方法稳定,给药后5 min血浆中即可检测出大豆苷元,20min内达到峰值,高、中、中低、低4种浓度的日内精密度均≤5.7%,日19精密度均≤9.3%,回收率分别为89.5%、93.2%、93.9%、84.8%,在0.1～64μg/mL范围内线性关系良好.结论:此方法快捷、灵敏、简便,用于血浆中大豆苷元的含量测定,取得满意结果.     

黄豆、黑豆混合后发酵与发酵后混合大豆异黄酮含量的对比研究

目的:探讨黄豆、黑豆混合后发酵与发酵后混合大豆异黄酮含量的差异及最佳配比。方法:以枯草芽孢杆菌菌种,黑豆与黄豆按3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3比例混合后发酵及发酵后混合制备样本,以色谱柱Symmetry-C18 (4. 6 mm×150 mm,5μm)、流动相为甲醇-0. 5%乙酸梯度洗脱、检测波长254 nm、流速1. 0 m L/min、柱温40℃、进样量10μL为条件测定样品大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量。结果:大豆苷、染料木苷、大豆苷染料木苷总量含量在1∶3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;大豆苷元含量在3∶1、2∶1、1∶1、1∶3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;染料木素含量在3∶1、2∶1、1∶3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;大豆苷元染料木素总量含量在3∶1、2∶1、1∶1、1∶3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品。结论:黄豆、黑豆混合后发酵优于发酵后混合,并以1∶3配比时为最优。     

红花中红花黄素A的分离工艺研究

目的:优选红花水提取物中有效成分红花素A的分离工艺.方法:以红花水提取物中进一步分离精制得到的红花黄素A的含量为指标,用HPLC法,并采用L9(34)正交试验优选红花黄素A的最优分离工艺条件.结果:红花水提取液,选用大孔吸附树脂H103,以上柱样品量与树脂量用量之比为1∶ 10(W∶ V),用去离子水洗脱,洗脱速度1.0 ml/min/cm2为最佳分离工艺.结论:本分离工艺条件稳定可行,可为红花水提取物进一步分离红花黄素A的生产工艺提供参考.     

高速逆流色谱法分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的研究

目的以川续断的干燥根为原料,建立高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化川续断中续断皂苷Ⅵ的方法。方法川续断醇提物先经过AB-8大孔树脂富集目标物质。然后,以乙酸乙酯-正丁醇-水(3∶1∶4,v/v)为溶剂体系,轻相为固定相,重相为流动相,主机转速800 r/min,流速3.0 ml/min,ELSD检测,利用半制备型HSCCC分离纯化续断皂苷Ⅵ。结果经过大孔吸附树脂富集-高速逆流色谱法分离后,从200 mg川续断提取物中一次性得到续断皂苷Ⅵ75 mg,经HPLC检测其纯度为98.5%。结论本方法快捷简便,重复性好,为大批量制备生产川续断中续断皂苷Ⅵ提供了参考。     

凉血活血胶囊中茜草素和芍药苷的含量测定

目的建立RP-HPLC法测定凉血活血胶囊中茜草素、芍药苷的含量。方法采用反相高效液相法。色谱条件:茜草素:Kromasil 100-5C18色谱柱;流动相:甲醇-乙腈-0.2%磷酸水溶液(25∶50∶25),检测波长为250nm,流速1.0mL/min。芍药苷:Kromasil 100-5C18色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86),检测波长为230nm,流速:1.0mL/min。结果茜草素、芍药苷在上述色谱条件下,分离效果理想。茜草素在0.084～1.05μg范围内、芍药苷在0.28～7.0μg范围内线性关系良好。结论方法简便、准确,重现性好,可作为凉血活血胶囊的含量测定方法。     

通关丸提取物大孔树脂洗脱部位有效成分含量比较

目的:比较通关丸在大孔树脂洗脱部位中知母皂苷BⅡ和盐酸小檗碱的含量,为通关丸质量标准的建立提供依据。方法:DiamonsilR C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-水-甲酸(35∶65∶0.1,v/v)为流动相;流速:1mL/min,并用ELSD检测器测定知母皂苷BⅡ;以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(32∶68∶0.5∶0.3,v/v)为流动相;检测波长:345nm;流速:1mL/min,测定盐酸小檗碱。结果:知母皂苷BⅡ、盐酸小檗碱均在70%乙醇洗脱部位可达到基本洗脱,知母皂苷BⅡ含量为6.62%,盐酸小檗碱含量为17.46%。结论:该方法简便、快捷,为通关丸质量标准的建立提供了依据。     

淡豆豉药材中大豆异黄酮质量评价法的研究

目的:建立淡豆豉药材中大豆异黄酮的质量评价法。方法:采用薄层色谱法,以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(20∶4∶2∶1)为展开剂对淡豆豉中大豆素进行定性鉴别;采用碱水解法,对淡豆豉提取液以浓氨水-甲醇-水(20∶75∶5)为碱解溶剂加热回流2 h,并采用高效液相色谱法,以Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,测定淡豆豉中葡萄糖苷类、丙二酰基葡萄糖苷类和苷元类成分共9种化合物的含量,流动相为水(0.5%冰醋酸)-甲醇(0.5%冰醋酸),梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长260 nm,柱温40℃。结果:在淡豆豉薄层色谱中,可清晰检出大豆素斑点;在上述水解条件下,丙二酰基葡萄糖苷类完全转化为相应的葡萄糖苷类,苷元类成分无变化;在淡豆豉高效液相色谱中,9种大豆异黄酮色谱峰完全分离。结论:本方法准确可靠,重现性好,可作为淡豆豉药材中大豆异黄酮的质量评价法。     

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??OBJECTIVE To study the chemical constituents and their proliferation activity on rat osteoblasts of Semen Sojae Praeparatum. METHODS The compounds were isolated by chromatography on silica gel column,MCI and sephadex LH-20 column. Their structures were elucidated by spectral analysis. The proliferation test was performed by using rat osteoblasts with MTT assays in vitro. RESULTS Twelve compounds were obtained and identified as daidzin(1), daidzein(2),genistein(3), genistin(4), glycitein(5), glycitin(6),apigenin(7), ??-sitosterol(8), stigmasterol(9), campesterol(10), syringaldehyde(11), syringic acid(12), respectively. CONCLUSION Compounds 5-11 are isolated from Semen Sojae Praeparatum for the first time. The five isoflavones show proliferation activity on rat osteoblasts, and aglycones proved to show better activity than glycosides.
     

淡豆豉抗菌活性及化学成分分析

目的:研究传统发酵中药淡豆豉的抗菌活性及化学成分。方法:淡豆豉80%乙醇提取物用适量蒸馏水混悬,依次用石油醚、乙酸乙酯及水饱和正丁醇萃取,得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分及水层,利用体外抗菌法筛选和追踪抗菌活性部分,采用硅胶柱色谱等方法及制备HPLC对抗菌活性最强部分进行分离纯化,得单体化合物,并根据化合物的理化性质和1H-NMR,13C-NMR,MS等波谱数据鉴定其结构。结果:淡豆豉80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分显示最强的抗菌活性,该有效部分对呼吸道致病菌及其他常见致病菌均显示较强的抗菌活性,正丁醇萃取部分和石油醚萃取部分次之。从乙酸乙酯萃取部分分离得到18个化合物,鉴定了其中11个化合物的化学结构,分别为大豆素(1),大豆苷(2),染料木素(3),染料木苷(4),黄豆黄素(5),黄豆黄苷(6),胡萝卜苷(7),胸腺嘧啶(8),腺嘌呤(9),尿嘧啶(10),尿苷(11)。结论:淡豆豉80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分抗菌效果明显。化合物1～6为异黄酮类;化合物7～11为首次从该药材中分离得到。     

大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定

目的建立一种测定大豆发酵制品——淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在271nm波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为9．884mg／g，加样回收率为99．3％，相对标准偏差为2．1％。结论方法简便、准确、重现性好，可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。     

淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

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??OBJECTIVE To establish the fingerprint of the extract from Semen Sojae Praeparatrm fermented by different preparation, to investigate the effects on the proliferation in rat osteoblasts, and to analyze the spectrum-effect relasionship. METHODS The fingerprint of alcohol extract from Semen Sojae Praeparatrm fermented by one functional bacteria for 6, 12, 18 h and 1-7 d(H6, H12, H18 and D1~D7) were established by HPLC, and the proliferation of each extract on rat osteoblasts was measured by MTT. The spectrum-effect relasionship was analyzed by grey relation analysis. Qualitative analysis was performed by HPLC-DAD-MS for analysis of major active components in alcoholic extract. RESULTS Alcoholic extract of Semen Sojae Praeparatrm fermented by different preparation was demonstrated to show similar proliferative activity at the concentration of 100 ??g??L^-1. Semen Sojae Praeparatrm fermented for 4 d led to the osteoblasts proliferation rate of 43.6%. On the basis of UV and mass spectral analysis,sixteen flavonoids were tentatively characterized.The glycitein had the highest correlation with pharmacodynamics, genistin, glycitin and daidzin also show higher correlation than the other chromatography peaks. The proliferation were promoted significantly after the treatment with glycitein, genistin, and daidzin (10^-9-10^-6 mol??L^-1) by the verification experiment. CONCLUSION Fermentation time of 4 d is more appropriate. The results of grey relational analysis and the activity in vitro of glycitein, genistin and daidzin mutually support each other, which confirms the scientificness of the spectral-effect relationship analysis in this study. The substance basis of anti-osteoporosis effect in the pure bacterial fermented soybean and natural fermented soybean are basically the same.     

发酵中药淡豆豉概述及新型食用豆豉应用研究

淡豆豉由豆豉演变而来,是我国发酵中药和药食同源中药的代表,具有养生保健的优势,被广泛应用于医药及食品领域。随着现代生物医药领域的发展及肠道相关研究的不断深入,肠道菌群与慢病的相关性被逐渐探明,淡豆豉因具有优质益生元的健康属性而备受关注,同时也为豆豉等大豆发酵食品带来了良好的发展契机。综述了淡豆豉的研究概况,并梳理了以淡豆豉药理药效和传统发酵工艺思路为参考的新型食用豆豉研究进展,以期为开发出兼具安全与美味的新型食用豆豉等大众接受度高的大豆健康产品及相关应用研究提供参考。     

《伤寒论》栀子豉汤治湿热证议

凡《伤寒论》中用栀子豉汤的情况,均是在医家误治之后所作的弥补措施。误治的形式有下法,兼有汗法、吐法。误治后的症状多表现在心中、心下、胸中、胃中,常表现为热、(虚)烦。烦是热的表现,属气,栀子启下焦阴气于上,淡豆豉使气分邪热向上向外透达,两药合用,轻清宣透,“解陈腐郁热”“宣陈腐郁结”,使胸膈郁热从上而解。现代药理学研究证实,栀子豉汤的作用对象以消化器官为主,主要作用为护肝、保胃、抗炎、调整肠道菌群,其治疗机制与中医理论扶正祛邪相似,病位也契合《伤寒论》栀子豉汤的主治,为阳明胃。故栀子豉汤方义重在疏利气机,清透湿热,所治病位在脾胃,兼有心、肺、肝。其疏利清透的方义,符合湿热证中湿浊之邪蒙蔽上焦的治法,故栀子豉汤为治湿热之方。     

优化HPLC法测定淡豆豉中大豆异黄酮的含量

目的:优化淡豆豉中大豆异黄酮的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用色谱柱为Agilent Hyper-sil C18(4.0 mm×250 mm 5,μm),流动相为甲醇-0.09%醋酸(48:52),流速1.0 mL.min-1,测定波长为254nm,检测温度为25℃的色谱条件测定。结果:线性范围:大豆苷40.6～203μg(r=0.9998),染料木苷11.15～55.75μg(r=0.9926),大豆苷元12.05～60.25μg(r=0.9933),染料木素5.5～27.5μg(r=0.9946)。测定精密度:大豆苷RSD=1.59%,染料木苷RSD=1.7%,大豆苷元RSD=0.8%,染料木素RSD=1.6%。大豆异黄酮总量24h稳定性RSD=1.49%,重复性RSD=1.06%,加样回收率:大豆苷为(99.24±3.77)%,染料木苷为(99.66±5.82)%,大豆苷元为(99.41±4.33)%,染料木素为(99.06±7.09)%。结论:本法简便、可靠、灵敏,可作为大豆异黄酮的质量控制方法。     

大豆异黄酮苷元对糖尿病大鼠血小板聚集的抑制作用

目的:研究大豆异黄酮苷元对血小板聚集性的影响。方法:普通饲料中添加20g/kg大豆异黄酮苷元混合物,饲喂糖尿病大鼠20周,测定其血小板聚集率。利用ODS柱层析和高效液相色谱技术分离大豆异黄酮苷元,体外观察大豆异黄酮苷元单体对人血小板聚集率的影响。结果:长期食用大豆异黄酮苷元的糖尿病大鼠血小板聚集率显著降低。在人体外血小板聚集实验中,大豆异黄酮苷元均抑制ADP、胶原蛋白和肾上腺素诱导的血小板聚集,其中金雀异黄素为最强,其半抑制浓度(IC50)值分别为0.38,0.30,0.23mmol/L。结论:大豆异黄酮苷元具有血小板聚集抑制效应,在大豆抗血小板聚集中起着重要作用。