内毒素休克大鼠线粒体质子跨膜转运的改变

内毒素休克大鼠线粒体质子跨膜转运的改变重庆第三军医大学野战外科研究所第二研究室（重庆４０００４２）杨鹤鸣陆松敏刘建仓李萍朱正坤郭素清跨线粒体内膜质子电化学梯度（△ｕＨ＋）是ＡＴＰ合成的动力，质子跨膜转运是△ｕＨ＋形成的基础。本实验用荧光探针（ＡＣＭＡ...     

LPS、PLA_2及OFR对线粒体跨膜质子转运和H~ -ATPase的影响

ＬＰＳ、ＰＬＡ２及ＯＦＲ对线粒体跨膜质子转运和Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的影响重庆市大坪第三军医大学野战外科研究所第二研究室（重庆４０００４２）陆松敏杨鹤鸣刘建仓李萍万志红贾后军线粒体功能的改变是影响内毒素休克的发生发展的重要因素，而质子跨膜转运是驱动ＦＯ－...     

氧自由基产生体系及丹参素对大鼠心肌线粒体质子ATP酶水解…

本实验采用ＦｅＳＯ４／抗坏血酸体系观察了氧自由基对大鼠心肌线粒体质子ＡＴＰ酶（Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ）水解与合成活性的损伤作用及丹参素（ＤＳ－１８２）的保护作用效应。结果表明：ＦｅＳＯ４／抗坏血酸体系产生的氧自由基可使线粒体Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性明显升高、合成活性明显下降，丹参素可以防止Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性升高，合成活性下降，显示出良好的保护作用。     

氧自由基产生体系及丹参素对大鼠心肌线粒体质子ATP酶水解与合成活性的影响

本实验采用ＦｅＳＯ＿４／抗坏血酸体系观察了氧自由基对大鼠心肌线粒体质子ＡＴＰ酶（Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ）水解与合成活性的损伤作用及丹参素（ＤＳ－１８２）的保护作用效应。结果表明：ＦｅＳＯ＿４／抗坏血酸体系产生的氧自由基可使线粒体Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性明显升高、合成活性明显下降，丹参素可以防止Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性升高，合成活性下降、显示出良好的保护作用。     

外源O对心肌线粒体跨膜电位和质子转位的作用

本实验利用铁氰化钾脉冲法和Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２（Ｒｈ＿(１２３)）荧光染料流动透析法检测外源性黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统产生对心肌线粒体跨膜电位及质子转位的作用，发现随－产生浓度的增加、能化后跨膜电位差逐渐减小，质子泵出速度降低及Ｈ￣＋／２ｅ￣－比值下降；随产生系统与线粒体共孵育时间的延长，能化后跨膜电位差逐渐减小，质子泵出速度降低，电子传递速度减小．Ｈ￣＋／２ｅ￣－比降低，即产生系统对Ｈ￣＋泵出及Ｈ￣＋／２ｅ￣－比的影响具有浓度依赖性和时间依赖性。丹参素对能化后膜电位差的下降有一定程度的恢复作用，推断对心肌线粒体膜的作用结果是使膜对质子的通透性增强，质子发生回漏，呼吸链电子传递酶系功能部分受损。     

预缺氧对急性缺氧大鼠心肌线粒体功能及ATP含量的影响

目的：观察预缺氧对急性缺氧大鼠心肌线粒体功能及ＡＴＰ含量的影响。方法：实验大鼠分三组。１常氧对照组;２急性缺氧组;３预缺氧组。测定了心肌ＡＴＰ含量及线粒体呼吸功能,以荧光偏振法测定线粒体膜流动性。结果：经预缺氧处理的大鼠遭受急性缺氧后ＡＴＰ含量从（３１８±２４２）ｍｇ１·ｇ－１增加到（６０５５±３．５２）ｍｇ－１·ｇ－１（Ｐ＜００１）;线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）从１８４±０５８上升到４５５±０３２（Ｐ＜００１）;线粒体膜流动性（ＭＭＦ）明显增加（Ｐ＜００５）,Ｆ０Ｆ１－ＡＴＰ酶及Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性分别提高６６％和２５％。结论：预缺氧可有效改善缺氧大鼠心肌能量代谢,其作用环节可能和提高线粒体膜流动性,改善线粒体呼吸功能有关。     

肺泡上皮细胞内pH的研究进展

近年来的研究表明，肺泡细胞膜上存在着Ｎａ＋－Ｈ＋交换、Ｈ＋－ＡＴＰ酶、Ｃｌ－－ＨＣＯ－３交换和Ｎａ＋－ＨＣＯ－３联合转运等多种ｐＨｉ调节机制。最常用的ｐＨｉ测定方法为ｐＨ敏感的荧光探针技术。肺泡ｐＨｉ与肺泡上皮细胞的屏障功能之间的关系，肺泡ｐＨｉ的信号转导作用，肺泡膜转运蛋白的极性分布与其功能的关系等问题，仍需进一步研究。     

大鼠全身辐射损伤后小肠吸收功能变化的研究

目的：研究大鼠全身辐射损伤后小肠吸收Ｌ－酪氨酸（Ｔｙｒ）的变化。方法：用在体门静脉取血法研究了６Ｇｙ６０Ｃｏγ线全身一次照射后不同时间以及不同剂量照射后第３ｄ大鼠小肠吸收Ｔｙｒ的变化，并测定相应的小肠上皮细胞计数、小肠粘膜钠－钾－ＡＴＰ酶（Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ）活性以及Ｎａ＋的跨膜转运。结果：６Ｇｙγ线全身照射后第３ｄ出现小肠对Ｔｙｒ的吸收障碍，以后很快恢复，并持续在正常水平。随着照射剂量的加大，吸收障碍加重，但３Ｇｙ以下剂量照射，则不出现Ｔｙｒ的吸收障碍。小肠上皮细胞计数、Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性和Ｎａ＋的跨膜转运的变化与小肠吸收Ｔｙｒ的变化基本一致。结论：辐射损伤后小肠对Ｔｙｒ的吸收障碍与小肠上皮细胞数量减少导致的吸收面积的下降以及Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性下降导致的Ｎａ＋跨膜转运能力的减弱有关。     

大鼠心肌缺血再灌注线粒体内膜体电子质子偶联和氧化磷酸…

非循环式Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ模型灌注大鼠心脏，测定线粒体内膜体的呼吸功能，质子电子传递速度及膜流动性变化，并观察丹参素的保护作用，结果表明：缺血时态Ⅳ呼吸不变，态Ⅲ呼吸，ＡＤＰ／Ｏ，ＲＣＲ均降低，Ｈ＾＋传递速率，ｅ＾－传递速度，Ｈ＾＋／ｅ＾－亦降低，但膜流动性不变。     

败血症休克大鼠心肌Na^＋—K^＋—ATP酶的变化与心功能的关系

在大鼠盲肠结扎加穿孔造成的腹膜炎败血症休克模型上发现，心肌肌膜Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性呈双时相变化。早期休克时，Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性比对照组高４８％，晚期休克时比对照组低４２％。心肌肌膜哇巴因结合位点数目和磷酸化位点数目也呈早期增加，晚期降低双时相变化。离体心脏灌流发现，败血症休克大鼠心脏的功能也呈早期增强，晚期减弱的双时相变化，而心脏对灌流硅厶因的反应性料早期增加，晚期降低。     

外源O^—2对心肌线粒体跨膜电位和质子转位的作用

本实验利用铁氰化钾脉冲法和Ｒｈｏｄａｍｉｎｅｌ１２３荧光染料流动透析法检测外源性黄嘌呤黄嘌呤氧化酶系统产生Ｏ＾－２对心肌线粒体跨膜电位及质子转位的作用，发现随Ｏ＾－２产生浓度的增加，能化后跨膜电侠差逐渐减小，了泵出速度降低及Ｈ＾＋／２ｅ＾－比值下降；随Ｏ＾－２产生系统与线粒体共育时间的延长，能化后跨膜电位差逐渐减小，质子泵出速度降低，电子传递速度减小，Ｈ＾＋／２ｅ＾－比降低，即Ｏ＾－２产生系统对Ｋ     

牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca^2＋—Mg^2＋—ATP酶活性与MDA …

目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ,５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７．８３％、Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７．５６％和５０．２０     

Captopril对缺血再灌心肌线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化的影响

为研究ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对缺血／再灌注心肌的保护机制，本实验用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ无作功非循环式离体心脏灌流模型，琥珀酸为底物，分别用氧电极法和铁氢化钾脉冲法检测缺血再灌注中ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对心肌线粒体呼吸链复合体Ⅱ＋Ⅲ＋Ⅳ段氧化磷酸化和复合体Ⅱ＋Ⅲ段质子电子偶联的影响ｑ结果发现：缺血及再灌注时呼吸控制率（ＲＣＲ）、ＡＴＰ合成速度升高的现象在保护组不出现，说明ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对心肌线粒体呼吸功能有保护作用，ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对缺血时线粒体复合体Ⅱ＋Ⅲ质子泵出速度和电子传递速度升高有进一步的调节作用，使质子电子偶联更紧密，Ｈ＋／２ｅ－恢复至对照水平。再灌时质子泵出速度的降低可被ｃａｐｔｏｐｒｉｌ逆转。提示ｃａｐｔｏｐｒｉｌ可能具有清除自由基及膜保护作用     

心肌肥大时细胞核被膜核苷三磷酸酶活性及mRNA出核转运的 …

目的：探讨心肌肥大时心肌细胞ｍＲＮＡ出核转运率及被膜核苷三磷酸酶活性的变化。方法：采用腹主动脉缩窄法复制大鼠心肌肥大模型,密度梯度离心肌细胞核被膜,观察心肌肥大时对心肌ＮＴＰａｓｅ活性和成熟ｍＲＮＡ出核转运速率的影响。结果：早,晚期肥大心肌细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ最大反应速率以ＡＴＰ为底物时较对照组增加２５％－６２％,以ＧＴＰ为底物时增加８％－４４％,其中晚期肥大组ＮＴＰａｓｅ最大反应速率增加幅度低     

大鼠内毒素休克肝线粒体Ca^2＋,Mg^2＋含量变化与线粒体损伤

本文在大鼠内毒素休克模型上，观察了肝线粒体结构和功能与Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋含量变化的关系。结果发现：休克动物肝组织和线粒体的Ｃａ＾２＋浓度升高，Ｍｇ＾２＋浓度下降与正常对照组相比有非常显著性差异；用图像分析仪定量分析显示线粒体结构明显受损，线粒体标志酶之一－琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性明显下降，本文认为组织和线粒体内Ｍｇ＾２＋／Ｃａ＾２＋比值下降是休克细胞不可逆损伤重要因素之一。     

大鼠心肌缺血再灌注线粒体内膜体电子质子偶联和氧化磷酸化变化及丹参素的作用

非循环式Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ模型灌注大鼠心脏，测定线粒体内膜体的呼吸功能、质子电子传递速度及膜流动性变化，并观察了丹参素的保护作用。结果表明：缺血时态Ⅳ呼吸不变，态Ⅲ呼吸、ＡＤＰ／Ｏ、ＲＣＲ（呼吸控制率）均降低，Ｈ￣＋传递速度、ｅ￣－传递速度、Ｈ￣＋／ｅ￣－亦降低，但膜流动性不变。再灌注时除ＡＤＰ／ｏ进一步降低外，其余各参数均部分恢复，但未达到对照组水平，且膜流动性降低。用丹参素保护的缺血组和再灌组Ｈ￣＋／ｅ￣－显著高于对照组，其它各参数与对照组间无显著差异。结果提示：缺血早期线粒体内膜体呼吸链功能处于抑制状态，氧化磷酸化部分解偶联，但无膜脂结构损伤。再灌解除了这种抑制，呼吸链功能有部分恢复，但达不到对照水平。丹参素对线粒体呼吸链功能有明显保护作用。     

牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca2+-Mg2+-ATP酶活性与MDA含量影响

目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ,５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７８３％、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７５６％和５０２０％（Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０．８７,Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０７９,Ｐ＜０．０１）。在注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ）前３０ｍｉｎ腹腔注射Ｔａｕ（２００ｍｇ／ｋｇ）则Ｍｉｔ中ＭＤＡ含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性均未见显著异常改变。结论：Ｔａｕ可能通过抑制ＭＤＡ的生成实现其保护Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的作用。     

海水浸泡失血性休克大鼠肝、心肌线粒体功能的改变

目的研究海水浸泡对失血性休克大鼠心、肝线粒体功能的影响.方法雄性Wistar大鼠30只,分为3组正常对照组(n=10);平原失血性休克组(n=10);海水浸泡失血性休克组(n=10).测定血流动力学及心肌和肝细胞线粒体H+-ATPase、琥珀酸脱氢酶、Ca2+-Mg2+-ATPase、质子转运及线粒体总钙的变化.取心室肌和肝脏各6g,制备线粒体和亚线粒体,线粒体及亚线粒体制备按差速离心法;H+-ATPase采用定磷法;SDH采用氯化三苯四唑法;MDA采用国产试剂盒;Ca2+-Mg2+-ATPase活性测定采用蒋纬莹法加以改进;亚线粒体质子跨膜转运的测定采用荧光探剂ACMA(9-氨基-6-氯-甲氧基吖啶)标记法;若测定ATP引起的跨膜[H+]转运,则先加入呼吸链阻断剂氰化钾(1mmol/L)以阻断细胞色素C到氧的电子传递,测定时先进行ACMA激发波长[EX]和发射波长[EM]的扫描,记录荧光强度和荧光淬灭时间;线粒体钙含量采用原子吸收法测定.结果海水浸泡失血性休克动物血液动力学,心肌和肝细胞线粒体H+-ATPase、琥珀酸脱氢酶、Ca2+-Mg2+-ATPase活性均显著低于正常对照组和平原休克组.海水浸泡失血性休克组心、肝线粒体H+-ATPase活性分别降为对照值的78%和76%;海水浸泡SDH值降为对照值的42%;Ca2+-Mg2+-ATPase活性分别为对照组的63%和70%;肝、心肌组织钙含量分别为对照组的2.97、1.70倍;肝细胞亚线粒体测定质子跨膜线粒体内膜转运能力,ACMA最大荧光淬灭幅度△Amax稍有减少,ATP激活的荧光淬灭时间显著延长(P＜0.01),以NADH诱导的荧光淬灭时间也显著延长.亚线粒体质子转运能力与平原休克组无显著差别.结论线粒体是机体能量代谢、ATP合成和水解的重要部位.海水浸泡失血性休克心肌、肝线粒体酶活性下降,线粒体总钙升高,伤情比平原显著加重.     

心肌肥大时细胞核被膜核苷三磷酸酶活性及mRNA出核转运的变化

目的：探讨心肌肥大时心肌细胞ｍ ＲＮＡ 出核转运率及核被膜核苷三磷酸酶（ ＮＴＰａｓｅ） 活性的变化。方法：采用腹主动脉缩窄法复制大鼠心肌肥大模型,密度梯度离心法制备心肌细胞核被膜,观察心肌肥大时对心肌ＮＴＰａｓｅ 活性和成熟ｍ ＲＮＡ 出核转运速率的影响。结果：早、晚期肥大组心肌细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率以ＡＴＰ 为底物时较对照组增加２５ ％ ～６２ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,以ＧＴＰ 为底物时增加８ ％ ～４４ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,其中晚期肥大组ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率增加幅度低于早期组。早期肥大组细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值不变,晚期组ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值下降,以ＡＴＰ 和ＧＴＰ 为底物时晚期肥大组Ｋｍ 值分别下降２２ ％ 和８６ ％ 。早期肥大组１０ ｍｉｎ 心肌细胞核ｍ ＲＮＡ 出核转运率以ＡＴＰ 或ＧＴＰ 启动反应时分别较对照组增加６８ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 或７８ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,晚期肥大组增加幅度不如早期组大,仅增加２７ ％ 和２１－７ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：大鼠心肌肥大组细胞核被膜ｍ ＲＮＡ 出核转运率的增加可能是心肌肥大时蛋白质合成增加的一个重要原因,而这种ｍＲＮＡ 出核转运率的增加可能与     

热应激大鼠心肌线粒体功能的变化

目的：观察不同强度热应激大鼠心肌线粒体氧化磷酸化功能和钙储存功能的变化。方法：用Ｋｌａｒｋ氧电极极谱方法测定线粒体氧化代谢功能,用生物发光法测定心室肌ＡＴＰ含量及线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性,用电感藕合等离子体－原子放射光谱仪测定心肌线粒体内钙含量。结果：热应激大鼠心肌线粒体呼吸控制率（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｃｏｎｔｒｏｌｒａｔｉｏ,ＲＣＲ）及氧化磷酸化效率（Ｐ／Ｏ）均随动物直肠温度的升高逐步显著降低,当大鼠直肠温度超过４２℃时,ＲＣＲ与Ｐ／Ｏ分别较对照下降３１４％,１１０５％。直肠温度４２℃以上,大鼠的心室肌ＡＴＰ含量仅为对照的３７５％。热应激大鼠心肌线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性和钙含量亦明显降低,直肠温度４２℃以上大鼠的该两项指标可较对照值降低达３２６％和３１３％,显示了线粒体钙代谢的异常变化。结论：热应激机体心肌线粒体的氧化代谢和钙功能受损是热应激时心功能紊乱的重要原因。