凝血酶刺激单核/巨噬细胞产生IL-8增强卵巢癌细胞侵袭力的实验研究

目的:研究凝血酶刺激正常人外周血来源单核/巨噬细胞(MO/MA)后对卵巢癌细胞侵袭力的影响。方法:分离正常女性外周血单核细胞后,用印度墨汁吞噬试验检测凝血酶刺激MO/MA后吞噬功能的变化;以凝血酶刺激MO/MA后的上清为趋化物,检测对卵巢癌细胞系(ES-2,SKOV-3,HO-8910)体外侵袭力的影响;阻断侵袭实验中加入IL-8单克隆中和抗体。转录因子试剂盒AP1、STAT、Inflammation 1、Oncogene 3家族筛选凝血酶通过何种细胞信号转导途径激活MO/MA。结果:(1)凝血酶未显著提高MO/MA的吞噬能力;(2)基质胶体侵袭实验表明,上皮性卵巢癌细胞系ES-2在MO/MA+凝血酶刺激组上清作用下,侵袭力增强(161.9±11.18,n=6),其侵袭细胞数目与卵巢癌腹水刺激组(157.5±14.86,n=4)类似,但显著高于阴性对照组普通培养基(47.25±12.45,P<0.05),添加水蛭素(凝血酶抑制剂)后能显著降低其侵袭力(73.5±17.3,P<0.01);抗IL-8单克隆抗体对ES-2细胞侵袭的阻断作用呈浓度依赖性,相同体外侵袭实验在SKOV-3细胞系(n=2)及HO-8910细胞系(n=2)中得到类似结果;(3)转录因子检测表明,In-flammation 1及Oncogene 3家族中几乎所有涉及炎症的转录因子包括c-Fos,c-Rel,NF-κbp50,NF-κb p65,c/EBPa,Egr-1,HIF-1,OctⅠ,OctⅡ在凝血酶刺激巨噬细胞后活性增加(n=4)。结论:凝血酶刺激MO/MA通过上调IL-8产生,显著增强卵巢癌细胞的侵袭力,表明卵巢癌腹膜内凝血酶可能通过教育和诱导MO/MA向TAM样细胞分化后,加速肿瘤细胞腹膜内转移。     

凝血因子Ⅻ诱导外周血单核细胞分化为卵巢癌腹膜内肿瘤相关巨噬细胞的实验研究

目的:探讨凝血因子Ⅻ能否诱导外周血单核细胞(MO)分化为卵巢癌(EOC)腹膜微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。方法:分离正常女性外周血MO,在体外经Ⅻ因子刺激,流式荧光激活细胞分选技术(FACS)检测刺激后CD14、CD68和CD163表达的比例;ELISA检测TNF-α、IL-4、IL-8、TGF-β、IL-10、MMP2等因子的表达;Real-timePCR检测IL-10、IL-8、CCL18、CCR2、TGF-β、CXCR1及CXCR2等细胞因子及相关受体mRNA的表达,添加Ⅻ因子抑制物-C1酯酶抑制剂(C1-INH)后检测相应mRNA转录变化。结果:经Ⅻ因子刺激后,MO表面CD14,CD163表达比例上调[CD14:(57.025±11.135)%,CD163:(1.09±0.21)%],与阴性对照组[CD14:(45.2±5.24)%,CD163:(0.7±0.08)%]相比有统计学差异(P0.05);经Ⅻ因子刺激后MO分泌IL-8,IL-10及TGF-β分泌表现出时间依赖性,IL-8及TGF-β于刺激后12h分泌达到高峰,IL-10分泌高峰为刺激后3h;刺激后IL-8,IL-10,CXCR2,CCR2以及CCL18mRNA的表达上调,添加C1-INH后,相应mRNA的转录水平下调。结论:凝血因子Ⅻ能诱导外周血MO分化成表型为CD14highCD163highIL-10highCCL18highIL-8high的单核巨噬细胞,类似TAM特征的巨噬细胞亚型,Ⅻ因子可能参与EOC腹膜微环境中浸润的MO分化,从而调控EOC的腹膜转移。     

凝血因子Ⅱ可诱导单核细胞和巨噬细胞分化为卵巢癌腹膜内肿瘤相关巨噬细胞

目的 探讨激活的凝血因子Ⅱ(Ⅱ因子)能否诱导外周血单核细胞分化为卵巢上皮性癌(EOC)腹膜微环境肿瘤相关巨噬细胞.方法 分离正常女性外周血单核细胞和巨噬细胞(MO/MA)以及EOC腹水内肿瘤相关巨噬细胞(TAM);凝血因子Ⅱ刺激后,检测MO/MA和TAM表面Ⅱ因子受体PAR1、3、4表达,分析MO/MA在Ⅱ因子或(Ⅱ因子+水蛭素)刺激后CD14、CD68和CD163表达比例,ELISA检测Ⅱ因子刺激后巨噬细胞表达的细胞因子,Real-time PCR检测细胞因子、趋化因子mRNA表达.结果 MO/MA及TAM细胞表面上均有Ⅱ因子受体PARI、3、4表达;Ⅱ因子刺激后,MO/MA高表达CD14[(50.23±4.34)%]及CD163[(3.82±1.93)%],与Ⅱ因子+水蛭素刺激组[CD14(32.37±6.24)%,CD163(0.56±0.28)%]及培养液对照组[CD14(40.06±8.06)%,CD163(1.02±0.38)%]相比差异有统计学意义(P<0.05);ELISA结果示Ⅱ因子刺激后IL-8、IL-10及TGF-β分泌表现出时间依耐性特征,刺激后3h表达量达高峰;Real-time PCR显示IL-8、IL-10、IL-12、CXCR2、CCR2、CCL18mRNA表达上调,CXCR1和TGF-β表达下降.结论 激活的凝血因子Ⅱ能诱导外周血MO/MA分化为CD163highIL-10highIL-12highCCL18highIL-8high,具有类似肿瘤相关巨噬细胞特征的M2型巨噬细胞亚型;Ⅱ因子可能参与了EOC腹膜微环境浸润的TAM的分化和极化作用.     

树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫的实验研究

目的 观察人外周血树突状细胞(Dendritic cells,DC),体外能否诱导抗卵巢癌免疫应答。方法 用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)从健康女性外周血分化诱导DC,以源于人卵巢癌细胞系HO-8910的肿瘤抗原粗提物冲击致敏DC,将致敏DC、同源淋巴细胞和卵巢癌细胞共育,观察负载抗原DC体外诱导淋巴细胞对HO-8910细胞的杀伤作用,同时设不同类型肿瘤细胞(Eca-109和PC-12)作为对照。MTT法测定细胞杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞HO-8910肿瘤抗原脉冲致敏的DC能诱导淋巴细胞特异性地杀伤卵巢癌细胞。结论 用GM-CSF、IL-4和TNF-α从人外周血诱生的DC能从卵巢癌细胞HO-8910冻融物有效递呈抗原并诱导出高效而特异的抗卵巢癌免疫反应。     

卵巢上皮性癌细胞中E钙黏素基因的甲基化状态及去甲基化的意义

目的 研究卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中E钙黏素(E-cad)基因启动子区5'二核苷酸胞嘧啶(5'CpG)岛的甲基化状态,观察DNA甲基转移酶抑制剂--5-杂氮脱氧胞苷(5-Aza-CdR)去甲基化后对卵巢癌细胞的生长、侵袭以及E-cad蛋白表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测卵巢癌细胞系ES-2、3AO及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛的甲基化状态.以不同浓度(分别为0.1、110、10.0μmoL/L)的5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞后,电镜下观察细胞形态的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况,蛋白印迹法检测细胞中E-cad蛋白表达的变化,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MSP技术检测显示,ES-2及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛呈高度甲基化状态和非甲基化状态,3AO细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛仪呈非甲基化状态.经不同浓度(分别为0.1、1.0、10.0 μmol/L)的5-Aza-CdR处理后,ES-2及SKOV3细胞的体积变小,皱缩,核/质比例缩小,核分裂象减少,随着药物浓度的增高,此种趋势逐渐明显;ES-2和SKOV3细胞中E-cad蛋白相对表达水平分别为0.274、0.320、0.398和0.415、0.507、0.638,均明显高于对照细胞(分别为0.131和0.342,P＜0.01);ES-2和SKOV3细胞穿膜细胞数分别为(88.8±2.5)、(60.7±2.4)、(36.1±3.0)个和(88.2±2.1)、(60.5±2.2)、(36.2±3.0)个,均明显低于对照细胞[分别为(121.9±2.3)、(97.6±2.7)个,P＜0.01].结论 启动子区5'CpG岛的高度甲基化是卵巢癌细胞中E-cad基因异常表达的重要机制之一,5-Aza-CdR能通过降低E-cad基因启动子区5'cpG岛的甲基化而恢复其在卵巢癌细胞中的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.     

树突状细胞与卵巢癌细胞的融合及体外抗肿瘤作用的研究

目的 :比较脐血及以卵巢癌患者外周血来源的树突状细胞 (DC)的特点 ,研究DC 卵巢癌融合瘤苗的体外免疫应答效果。方法 :从脐血及卵巢癌患者外周血中诱导扩增DC ,从数量、形态、细胞表面标志及刺激增殖活性方面进行比较。体外培养卵巢癌患者癌细胞 ,将其与脐血DC在聚乙二醇 (PEG)介导下融合 ,活化自体T细胞 ,MTT法检测杀伤效果。结果 :体外诱导卵巢癌患者外周血DC ,每 2 0ml血能够获得 (0 .6～ 1.6 )× 10 6 个细胞 ;体外诱导脐血DC ,每 2 0ml血能够获得 (1.8～ 3.5 )× 10 6 个细胞 ,二者有明显差异 (P<0 .0 5 )。卵巢癌患者外周血DC在混和淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)中显示了更为显著的刺激增殖活性。两者表达高水平的MHCII类分子和共刺激分子。经脐血DC 自体卵巢癌融合细胞活化的T细胞 ,对卵巢癌细胞株细胞的杀伤没有增加 ,而增强了对自体卵巢癌细胞的杀伤力。结论 :由脐血诱导可以获得更多数量的DC。脐血DC与自体卵巢癌细胞融合 ,能使肿瘤相关抗原有效提呈 ,激活T细胞 ,使它成为抗原特异性CTL ,有效杀伤自体癌细胞     

M2型巨噬细胞调控卵巢癌腹膜内肿瘤血管生成的实验研究

目的:探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)腹水中M2型巨噬细胞(M2 macrophage)调控腹膜内肿瘤血管生成的机制。方法:分离卵巢癌患者腹水中M2型巨噬细胞,体外无血清刺激后,收集上清M2作为条件培养基(M2 macrophage conditional medium,M2 CM),分别采用结晶紫染色实验、Transwell小室迁移实验和小管样结构形成实验,检测共培养刺激后其对人脐静脉血管内皮细胞系EA.hy926增殖、迁移以及小管样结构形成的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测刺激后EA.hy926细胞分泌促血管蛋白因子——白细胞介素8(IL-8)以及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果:①经M2 CM刺激后,EA.hy926细胞的增殖能力提高,结晶紫染色后检测OD值为0.192 6±0.002(P<0.05)。②细胞迁移能力提高,迁移细胞数为84.81±2.04(P<0.001)。③M2 CM可显著促进内皮细胞小管样结构形成,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。④ELISA显示经M2 CM刺激后,EA.hy926分泌IL-8为(1 570.45±118.64)ng/L,VEGF分泌量也显著升高,为(502.21±133.61)ng/L,与对照组差异有统计学意义(P<0.001)。结论:EOC腹水中M2型巨噬细胞可能通过上调内皮细胞分泌VEGF及IL-8等促血管生成因子,增加血管内皮细胞增殖、迁移能力及小管样结构形成,从而促进卵巢癌腹膜内血管生成。     

自体或同种异体树突状细胞融合人卵巢癌细胞体外诱导抗肿瘤免疫反应

为研究树突状细胞(DC)融合人卵巢癌细胞体外诱导抗已知与未知肿瘤抗原的能力,从正常人和卵巢癌患者的外周血中分离单核细胞(MC),制备T细胞和DC;将酶分解后的原发灶与腹水的卵巢癌细胞(OVCA)与自体或同种异体DC融合制备抗原(OVCA/FC)后进行①流式细胞仪分析细胞表型;②T细胞扩增情况分析;③~(51)Cr释放法测定OVCA/FC刺激的T细胞细胞毒活性;④检测OVCA/FC刺激的细胞毒性T淋巴细胞的特异性。     

卵巢癌微环境中巨噬细胞和LPA的研究进展

卵巢癌是妇科肿瘤中最致命的一种癌症,其特点是独特的肿瘤微环境(TME),使其具备特异和高效的转移机制,能削弱免疫监测、导致抗药性。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境的重要组成部分,参与了肿瘤发生、发展的各个方面。TAM合成的溶血磷脂酸(LPA)是卵巢癌中LPA的主要来源,并且TAM细胞表面表达LPA的受体蛋白(LPAR)。LPA在卵巢癌血液、腹水和组织中显著升高,使其成为有用的生物标记物和潜在的治疗靶点。LPA可调节巨噬细胞的分化,诱导单核细胞转化为巨噬细胞。本文综述了近年来巨噬细胞和LPA在卵巢癌中的研究进展,巨噬细胞和LPA的相互关系,重点介绍了TAM和LPA在卵巢癌中的作用。     

TWEAK通过外泌体途径介导巨噬细胞抑制上皮性卵巢癌细胞转移的研究

目的:探讨TWEAK能否通过外泌体途径介导巨噬细胞对上皮性卵巢癌细胞转移的调控。方法:佛波酯诱导人单核细胞系THP-1为贴壁的巨噬细胞,TWEAK刺激巨噬细胞24h后抽提外泌体,透射电镜观察其形态;分别将PBS、巨噬细胞分泌的外泌体、TWEAK刺激后巨噬细胞分泌的外泌体与上皮性卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910pm共培养,48h后通过Transwell实验检测其迁移、侵袭能力。结果:透射电镜可见巨噬细胞分泌的外泌体呈圆形,直径30~100nm。Transwell实验显示,与空白对照组相比,巨噬细胞分泌的外泌体可使上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力增高;而TWEAK刺激巨噬细胞后,其分泌的外泌体则可降低其迁移和侵袭能力。结论:TWEAK可通过外泌体途径逆转巨噬细胞对上皮性卵巢癌细胞的促转移作用。     

卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞相互作用对卵巢癌细胞运动及侵袭的影响

目的:探讨卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞(HPMC)相互作用对卵巢癌细胞运动及侵袭的影响。方法:检测卵巢癌细胞SKOV3条件培养液(CM)及转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体培育HPMC后,HPMC-CM对SKOV3趋化性、趋触性及侵袭性的影响。Checkerboard实验检测HPMC-CM诱导SKOV3运动的方向性。用ELISA检测不同HPMC-CM中纤维粘连蛋白(Fn)及透明质酸(HA)的水平。结果:未刺激组的HPMC-CM1诱导SKOV3趋化、趋触及侵袭(P<0.01)。抗Fn抗体或透明质酸酶(HAase)均可部分抑制HPMC-CM1的作用(P<0.05),二者合用抑制作用增强(P<0.01)。Checkerboard实验证实HPMC-CM1诱导的细胞运动是方向性的。HPMC-CM2Fn及HA蛋白水平高于HPMC-CM1(P<0.01),HPMC-CM3Fn及HA水平较HPMC-CM2降低(P<0.05)。HPMC-CM2诱导趋化、趋触及侵袭的细胞数较HPMC-CM1增多(P<0.01),HPMC-CM3诱导运动及侵袭的细胞数均低于HPMC-CM2(P<0.05)。结论:HPMC合成Fn及HA诱导卵巢癌细胞运动及侵袭,卵巢癌细胞分泌TGF-β1可能通过诱导HPMC合成Fn及HA而促进自身的运动及侵袭。二者相互作用促进卵巢癌的腹膜转移。     

缺氧微环境下HIF-1α对卵巢癌A2780细胞侵袭转移的影响及分子机制

目的:探讨缺氧微环境下HIF-1α在卵巢癌细胞系A2780侵袭转移中的作用。方法:常氧及缺氧微环境培养卵巢癌A2780细胞;RT-PCR及Western blot法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和基质金属蛋白酶13(MMP13)mRNA及蛋白的表达;siRNA干扰HIF-1α表达,检测干扰效率及MMP13表达的变化;Transwell小室侵袭实验检测siRNA干扰前后卵巢癌细胞侵袭转移能力。结果:缺氧诱导卵巢癌A2780细胞HIF-1α及MMP13表达上调,细胞侵袭数明显增多;siRNA能有效抑制HIF-1α表达及缺氧引起的MMP13增多,降低细胞侵袭能力。结论:HIF-1α通过调控MMP13表达增强缺氧环境下卵巢癌细胞的侵袭能力。     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

4.1N蛋白抑制人卵巢透明细胞癌细胞迁移侵袭及其机制初探

目的:探讨4.1N蛋白对卵巢透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的调控并初步探讨相关分子机制。方法:应用免疫组化法检测4.1N蛋白在卵巢透明细胞癌组织中的表达缺失状况。建立4.1N稳定转染卵巢透明细胞癌ES-2细胞系,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力的改变。利用qRT-PCR和Western blot法检测紧密连接相关分子(Claudin-4和ZO-1)、上皮-间质转化(EMT)标记物(E-cadherin、Ncadherin和Vimentin)和相关转录因子(Twist、Slug和ZEB-2)及基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-3)表达水平的变化。结果:与卵巢异位的子宫内膜组织相比,卵巢透明细胞癌中4.1N蛋白表达水平显著降低甚至缺失(P0.0001)。过表达4.1N后,ES-2细胞的迁移和侵袭能力显著降低,Claudin-4和ZO-1表达上调,Twist、Slug、ZEB-2、MMP-2和MMP-3表达水平下降。结论:4.1N在卵巢透明细胞癌细胞中可能通过调控紧密连接蛋白、部分上皮-间质转化转录因子和基质金属蛋白酶的表达水平,抑制癌细胞的迁移和侵袭能力,进而参与负性调控卵巢透明细胞癌的演进。     

卵巢上皮癌细胞SKOV3通过分泌外泌体促进单核巨噬细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞的研究

目的:研究上皮性卵巢癌细胞SKOV3分泌的外泌体(exosomes)能否调控单核巨噬细胞分化为M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs),并进一步参与肿瘤的转移。方法:分离SKOV3细胞外泌体,透射电镜观察形态。卵巢癌细胞外泌体、M-CSF+IL-4和空培养基分别与人外周血CD14+单核细胞共培养3天,观察细胞形态。结晶紫计数单核细胞贴壁率;流式细胞仪检测共培养后单核细胞CD206、HLA-DR的表达情况;ELISA法检测共培养后上清中IL-10和IL-12的含量;体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移能力的变化。结果:透射电镜显示,外泌体近似圆形,直径30~80nm。结晶紫计数显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的OD值(分别为0.13±0.06,0.16±0.04)较空培养基组(0.04±0.01)增加,差异有统计学意义(P0.05)。倒置显微镜发现,细胞贴壁,形态类似巨噬细胞。流式结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的单核细胞CD206(分别为71.86±5.62、99.27±0.32)表达水平升高,HLA-DR(分别为12.71±7.22、3.55±0.27)表达水平降低,与空培养基组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。ELISA检测结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的上清IL-10含量(分别为71.72±0.81、82.13±2.11)增加,IL-12含量(分别为34.88±4.75、19.71±4.28)减少,与空培养基组比较,差异有统计学意义(P0.05)。体外迁移实验显示,外泌体刺激单核细胞上清组的肿瘤细胞迁移数(121.58±2.25)明显增加,分别与空培养基对照组、单核细胞上清组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:卵巢上皮癌细胞SKOV3的外泌体可诱导单核巨噬细胞分化极化为卵巢癌腹膜内TAMs表型,从而促进卵巢癌细胞的迁移能力。     

卵巢癌患者腹水来源树突状细胞强化CIK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用

目的:建立诱导卵巢癌患者腹水来源的树突状细胞(DC)的方法,并观察腹水DC对CIK细胞在体外杀伤卵巢癌细胞系SKOV3的作用。方法:分离腹水单核细胞后诱导DC,分离患者外周血单个核细胞诱生CIK细胞,通过流式细胞仪分析免疫表型,并以LDH释放法检测DC对CIK细胞在体外杀伤卵巢癌细胞株的作用。结果:除外周血单核细胞来源DC表达CD86较高外,其他表面分子及异基因刺激能力在不同来源的DC间没有差异。负载SKOV3抗原的DC能诱导出CIK细胞对SKOV3细胞系最强的细胞毒杀伤力,负载HO8910的DC与单纯DC次之,且两者无差异。CIK组细胞毒性最低。结论:卵巢癌患者腹水中含有大量的免疫活性细胞,其中更有丰富的DC前体细胞,可诱导出成熟有功能的DC。冻融肿瘤细胞获取全细胞抗原法可以在不明确肿瘤特异抗原的情况下使用,负载于DC后可以诱导出CIK细胞的特异性杀伤。     

Fn14在上皮性卵巢癌细胞转移中的作用

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)在上皮性卵巢癌转移中的作用。方法:选取人上皮性卵巢癌细胞株HO8910及其配对高转移能力细胞株HO8910-PM。Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14表达,以及Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞株后Fn14、Slug、MMP-9蛋白的表达情况。Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力。结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭细胞数均多于HO8910细胞(P0.05)。HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P0.05)。Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(5.4±0.314)倍(P0.05),细胞的迁移和侵袭能力明显降低,同时细胞中侵袭转移相关蛋白Slug和MMP-9表达明显下降(P0.05)。结论:Fn14可能通过下调Slug和MMP-9表达进而抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移,Fn14可能为临床治疗上皮性卵巢癌提供新靶标。     

卵巢癌抗独特型抗体融合蛋白细胞免疫功能的体外实验

目的 探讨卵巢癌抗独特型单链抗体与人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子形成的融合蛋白作为肿瘤疫苗的可能性。方法 从卵巢癌病人外周血中分离得到单个核细胞、Ｔ淋巴细胞和作为抗原呈递细胞的单核细胞,同时从病人腹水中分离得到癌细胞,分别以卵巢癌抗独特型抗体的全抗体、６Ｂ１１ＧＭ、６Ｂ１１＋ｈＧＭ－ＣＳＦ、ｈＧＭ－ＣＳＦ进行体外Ｔ淋巴细胞增殖实验和自身肿瘤细胞杀伤实验。并对６Ｂ１１和６Ｂ１１ＧＭ的作用进行比较。结     

上皮性卵巢癌患者肿瘤局部微环境中Treg/Th17比例平衡的研究

目的:探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者外周血、卵巢癌组织和癌旁腹膜中Treg/Th17是否存在失衡。方法:选取2011年9月至2013年12月同济大学第一妇婴保健院收治的16例EOC(EOC组)、11例良性上皮性肿瘤(良性肿瘤组)及14例健康成年女性(对照组),收集患者外周血并分离淋巴细胞;收集4例EOC患者腹水并分离淋巴细胞。流式细胞术检测外周血及腹水中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例。选取同一时间段在本院手术患者术中留取的卵巢肿瘤组织、腹膜组织及转移灶组织,包括13例EOC、16例EOC种植灶癌旁腹膜、5例良性卵巢肿瘤组织及腹膜,用免疫荧光染色分析Th17及Treg细胞在良性卵巢肿瘤、EOC原发灶和癌旁腹膜中的浸润情况。结果:(1)EOC患者外周血中Treg比例为(5.16±3.85)%,显著高于对照组[(2.41±1.76)%])和良性肿瘤组[(2.3873±2.336)%](P=0.025,P=0.043),后两组比较无统计学差异。EOC患者外周血中Th17细胞比例为(3.15±3.045)%,显著高于对照组[(1.22±1.13)%](P=0.044);良性肿瘤患者[(1.93±1.745)%]与EOC患者和对照组比较,差异均无统计学意义;Treg/Th17细胞比值在3组间均无统计学差异。EOC患者腹水与外周血中的Th17、Treg细胞比例及Treg/Th17比值比较,差异均无统计学意义(P0.05)。(2)EOC组肿瘤组织中Treg和Th17细胞比例及Treg/Th17比值分别为(0.1062±0.077)%、(0.143±0.056)%和0.80±0.56,与良性肿瘤组织[0%、(0.0789±0.11)%、0]比较,均显著增高(P均0.05)。(3)卵巢良性肿瘤腹膜中未见Treg及Th17细胞浸润,EOC腹膜种植灶癌旁腹膜中Treg、Th17细胞比例及Treg/Th17比值分别为(0.1024±0.1)%、(0.2254±0.23)%和0.8113±1.097,较良性肿瘤组均显著提高(P0.05)。(4)早期和晚期EOC组织中Th17、Treg比例以及Treg/Th17比值比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:卵巢癌患者外周血Treg和Th17比例升高,但并未发现失衡。卵巢癌组织及癌旁腹膜微环境中存在失衡,这一失衡可能促进肿瘤增殖与迁移。     

腹水来源的外泌体对卵巢上皮性癌干细胞样细胞的干性特征及侵袭能力的影响

目的:探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者腹水来源的外泌体对卵巢癌干细胞样细胞（OCS-LC）干性特征及侵袭能力的影响。方法:（1）采用无血清悬浮培养法诱导卵巢癌细胞系A2780细胞生成OCS-LC,并采用成球实验、分化功能实验以及流式细胞仪检测等方法鉴定OCS-LC的成球克隆生长、定向分化潜能、干性标志物CD ...