硝酸甘油对持续缺血和缺血再灌注模型犬心肌细胞凋亡的影响

目的探讨硝酸甘油对持续缺血和缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响。方法 取杂种犬30只,随机分为假手术组,持续缺血组,缺血再灌注组,硝酸甘油组和硝酸甘油+持续缺血组。以活结结扎左冠状动脉的前降支,造成持续阻断冠状动脉血流和再灌注。以原位末端标记法标记凋亡细胞。结果 持续缺血组和缺血再灌注组与假手术组比较,心肌细胞凋亡程度明显增加,差异有显著性意义。硝酸甘油组和硝酸甘油+持续缺血组分别与持续缺血组和缺血再灌注组比较,心肌细胞凋亡程度明显降低,差异有显著性意义。结论 持续缺血和缺血再灌注损伤可导致心肌细胞凋亡,硝酸甘油预处理能明显减轻心肌细胞凋亡程度。     

大鼠心肌缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡与Fas、FasL基因表达的变化

目的：探讨大鼠实验性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体（Fas Ligand,FasL）基因表达的变化及与心肌组织损伤的关系。方法：以穿线结扎或松扎左冠状动脉制备大鼠心肌缺血再灌注模型。64只大鼠随机分成假手术组（假手术24h）、缺血再灌注I组（缺血30min、再灌注24h）、缺血再灌注Ⅱ组（缺备30min、再灌注72h）及缺血再灌注Ⅲ组（缺血3h、再灌注24h）。以缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡的变化,S－P免疫组化法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化,采用逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变,并分析心肌组织病理学损伤程度。结果：心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡指数Fas蛋白阳性染色指数与炎性细胞FasL蛋白阳性染色指数均增加,且均随缺血或再灌注时间延长而进一步增高; Fas基因的mRNA表达也上调,但以再灌注24h时达高峰;心肌缺血再灌注后心肌组织呈大小不一的灶性坏死,坏死周围有爆炸性一细胞浸润。结论：心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡、Fas基因的蛋白与mRNA表达水平及炎性细胞的FasL蛋白表达量均增加,心肌细胞凋亡与Fas/FasL系统参与了心肌缺血再灌注损伤过程。     

抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对-α Fas基因蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨抗肿瘤坏死因子单克隆抗体-α（anti—TNF—mAh-α）对持续缺血和缺血再灌注（I／R）损伤时心肌细胞Fas基因蛋白及mR-NA表达的影响。方法大白鼠随机分为7组。采用冠脉结扎法。建立急性心肌梗死（AMI）动物模型以活结结扎左冠状动脉的前降支，分别造成阻断冠脉血流和再灌注。以S-P免疫组化及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测Fas基因蛋白与mRNA的表达变化。结果anti-TNF-mAb-α预处理组与持续缺血组、缺血再灌注组比较，Fas基困蛋白与mRNA表达明显减弱。结论anti-TNF—mAb-α预处理能下调Fas基因蛋白及mRNA表达。     

硝酸甘油对持续缺血模型犬心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨硝酸甘油对持续缺血心肌细胞凋亡的影响。方法 采用动物犬，随机分为3组。采用冠脉结扎法，建立急性心肌梗死动物模型。以活结结扎左冠状动脉的前降支，造成持续阻断冠脉血流。以缺口末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。结果 凋亡细胞原位标记与半定量分析表明：硝酸甘油处理组与持续缺血组比较心肌细胞凋亡程度明显降低。结论 持续缺血可导致心肌细胞坏死和凋亡；硝酸甘油预处理能明显减轻心肌细胞坏死和凋亡程度。     

硝酸甘油对Bcl-2基因蛋白及mRNA表达的影响

目的 探讨硝酸甘油对持续缺血和缺血再灌注损伤对大鼠心肌细胞Bcl—2基因蛋白及mRNA表达的影响。方法 活结结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉的前降支，造成阻断冠脉血流，然后再灌注。随机分假手术组，持续缺血组，缺血再灌组，复灌前15min给硝酸甘油组，硝酸甘油 持续缺血组。以S—P免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法分别检测Bcl—2基因蛋白与mRNA的表达变化。结果 硝酸甘油处理组较持续缺血组、缺血再灌注组Bcl—2基因蛋白及mRNA表达明显增强。结论 硝酸甘油预处理能上调Bcl-2基因蛋白及mRNA表达。     

人参皂甙Re对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas基因表达的影响

目的 :观察人参皂甙Re(以下简称Re)对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas基因表达的影响 ,探讨Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法 :结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;原位杂交及免疫组化分别检测Fas基因mRNA及蛋白的表达 ,并利用图像分析系统测量阳性表达区域平均光密度值 ,进行定量分析。结果 :①透射电镜发现缺血再灌注组缺血区出现心肌凋亡细胞 ,假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;②缺血再灌注组心肌细胞凋亡数为 (134.4 5± 4 5 .6 1)个 /视野 ,Re治疗组细胞凋亡数 (90 .6 6± 19.2 2 )个 /视野 ,两组间差异有非常显著性意义 (P<0 .0 1) ;③原位杂交及免疫组化检测均发现Fas基因的表达缺血再灌注组较假手术组明显增加 (P <0 .0 1) ,Re治疗组较缺血再灌注组明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,Re治疗则可以显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。Re通过抑制Fas基因的表达而抑制心肌细胞凋亡     

缺血-再灌注诱导家兔房室结细胞凋亡的研究

为探讨缺血 再灌注对在体家兔房室结细胞凋亡的作用 ,以及凋亡相关调控基因蛋白 (Fas、bcl 2、bax)的表达 ,以家兔为实验对象 ,麻醉后开胸暴露心脏 ,结扎右冠状动脉 ,建立房室结缺血 再灌注模型。于预定时间处死动物 ,快速取出房室交界区组织 (3mm× 2mm× 1mm) ,10 %福尔马林磷酸盐缓冲液固定。采用TUNEL法检测房室结细胞凋亡 ;免疫组化法检测Fas、bcl 2、bax基因蛋白表达。结果 :①对照组及单纯缺血 10 ,30min组均未检测到细胞凋亡 ,缺血 6 0min组可见少量散在的凋亡细胞 ,缺血 12 0min房室结可见大量的细胞凋亡 ;②缺血 再灌注组 :不同缺血时间组均出现细胞凋亡 ,凋亡细胞数随缺血时间的延长而增加 (P <0 .0 5 ) ;③随缺血时间的延长 ,Fas、bax的表达明显增加 (P <0 .0 1) ,而bcl 2的表达则无明显增加 (P >0 .0 5 ) ;④缺血 再灌注组较相应时间单纯缺血组细胞凋亡数、Fas、bax表达均明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :单纯缺血及缺血 再灌注均可诱导房室结细胞发生凋亡 ,这可能与该条件下Fas、bax基因蛋白的过量表达有关。     

缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的研究缺血再灌注诱导体外培养大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达.方法采用体外培养新生大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、模拟缺血2h组(Ⅱ组)、缺血2h后再灌注1h组(Ⅲ组)以及持续缺血3h组(Ⅳ组).TUNEL法检测心肌细胞凋亡,荧光显微镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征、免疫组织化学法检测Bcl-2/Bax基因表达.结果心肌细胞I/R后,TUNEL法检测到阳性凋亡细胞,且持续缺血3h组与再灌注组凋亡指数明显高于缺血2h组.荧光显微镜观察到典型的细胞凋亡超微结构;免疫组织化学检测发现Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调.结论缺血和缺血再灌注均能诱导心肌细胞凋亡,且心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达有密切关系.     

肾缺血预处理对未成熟心肌凋亡蛋白表达的影响

目的 :探讨肾缺血预处理 （RIP）对未成熟心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法 :采用兔Langendorff模型 ,幼兔 2 4只随机分为 3组 ,对照组 （C ,n =8） :仅灌注KH液 180min ,然后取标本 ;缺血 /再灌组 （I/R ,n =8） :灌注 2 0min后 ,停灌 4 5min ,再灌 12 0min ;肾缺血预处理组 （RIP ,n =8） ,反复 2次阻断肾血流 5min/放开 5min ,建立Langendorff模型 ,然后重复I/R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记与半定量分析、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及Bcl 2、Bax、Fas基因蛋白的表达作为观察指标。结果 :凋亡细胞原位标记与半定量分析 :RIP组与I/R组比较 ,心肌细胞凋亡率显著减少 ;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯 :RIP组与I/R组比较 ,光密度显著降低 ;RIP组与I/R组比较 ,Bcl 2表达明显增多 ,Bax、Fas表达显著减少。结论 :RIP可能通过调节Bcl 2、Bax、Fas蛋白的不同表达影响心肌细胞的凋亡。     

大鼠急性心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的实验研究

目的:观察心肌缺血再灌注(IR)损伤与心肌细胞凋亡关系及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达情况。方法:选用健康雄性SD大鼠29只,随机分为:假手术组(n=8),缺血组(n=12),缺血再灌注组(n=9),分别取上述大鼠心肌组织。(1)观察心肌组织及线粒体的形态结构,并进行体视学分析。(2)采用缺口末端标记法(TUNEL)原位检测凋亡细胞。(3)用免疫组化SP法检测心肌细胞Bcl-2、Bax表达。结果:(1)假手术组心肌纤维排列整齐,细胞间质血管未见明显异常,细胞核膜完整,缺血组及缺血再灌注组可见心肌嗜酸性变、空泡变性、心肌纤维紊乱及收缩带形成,心肌纤维间出血及灶性心肌坏死。心肌细胞线粒体体视学分析,与假手术组比较,心肌缺血组形状因子显著降低(P<0.05),面密度显著增加(P<0.05),缺血再灌注组形状因子显著降低(P<0.01),面密度及周密度均显著增加(均P<0.05)。(2)与假手术组比较,缺血组细胞凋亡率明显升高(P<0.001),缺血再灌注组细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。(3)与假手术组比较,缺血再灌注组凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(P<0.01,P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(均P<0.01)。结论:心肌缺血及再灌注在导致细胞形态、线粒体超微结构改变的同时,诱导心肌细胞的凋亡,Bcl-2、Bax蛋白表达在心肌细胞凋亡的发生中起重要作用,细胞凋亡加重了缺血再灌注损伤。     

大鼠心肌再灌注时心肌细胞凋亡,Fas基因表达及缺血预处理对？…

目的 探讨大鼠心肌缺血后不同再灌注时相心肌细胞凋亡,Ｆａｓ基因表达变化及血预处理的影响,方法 １０８只大鼠随分成假手术组（假手术２４小时）缺血３０分钟再灌注６,１２,２４,４８小时组及缺血预处理（ＩＰＣ）组（结扎冠脉５分钟,再灌注５分钟,重复３次后再行结扎冠脉３０分钟,再灌注６小时）口号档端标记法（ＴＵＮＥＬ）标记凋亡细胞,以Ｓ－Ｐ免疫组化及逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法分别检测Ｆａｓ基因蛋     

慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL（Fas蛋白配体）的变化

目的　本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体 (FasLigand ,FasL)基因表达的变化 ,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系。方法　以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型。 3 0只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组 (简称肥厚组 )及手术心衰组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况 ,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化 ,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变 ,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果　假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡 ,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生 ,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉缩窄术后 4周 ,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组 ,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异 ;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5)。与假手术组和肥厚组相比     

抑制p38MAPK对大鼠缺血再灌注损伤心肌中TNF—α表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法：将30只SD大鼠按随机数字法随机均分为空白对照组、缺血再灌注组和抑制剂组,各10只。检测各组p38MAPK mRNA表达,TNF—α水平及心肌细胞凋亡率,并进行比较分析。结果：与空白对照组比较,缺血再灌注组TNF-α[（3．68±0．16）μg／L比（5．02±0．09）μg／L3、p38MAPK mRNA的表达[（1．76±0．46）比（2．35±0．02）]和心肌细胞凋亡率[-（3．51±0．40）％比-（1．8±0．23）％]显著升高（P均=0．001）。抑制剂组p38MAPK mRNA的表达[（2．09±0．16）]、TNF-α水平[（4．15±0．11）μg／L]及心肌细胞凋亡[-（2．9±0．50）％]均较缺血再灌注组显著降低（P均=0．001）。结论：通过抑制大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶的表达能减少肿瘤坏死因子-α的生成,减少心肌细胞凋亡,进而减轻心肌细胞缺血再灌注损伤。     

成年大鼠心肌缺血再灌注后X染色体连锁凋亡抑制蛋白的动态表达变化

目的 测定心肌缺血再灌注过程中X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）动态表达变化,探讨其与缺血再灌注损伤所致心肌细胞凋亡的关系.方法 将健康成年雄性SD大鼠随机分为两组,手术组和伪手术组,每组根据再灌注时间再分为6组：缺血30min,再灌注0、1、2、3、12、24 h组.采用半胱天冬酶-3（Caapaae-3）活性检测判定大鼠心肌细胞凋亡发生情况;用Western Blot和实时定量PCR技术分别检测各组心肌组织中XIAP的蛋白和基因表达水平.结果 Caspase-3活性从心肌缺血再灌注1 h开始升高,再灌注12 h活性最大,再灌注24 h趋于正常.心肌缺血再灌注3 h,XIAP蛋白表达开始降低,再灌注12 h表达最低;而XIAP的mRNA水平表达各组差异无统计学意义.结论 成年大鼠心肌缺血再灌注后Caspase-3活性增高可能与XIAP表达降低有关,提示XIAP表达降低可能参与了心肌缺血再灌注诱导的细胞凋亡.     

参附注射液对缺血/再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的:通过观察参附注射液对缺血/再灌注损伤时,心肌细胞超微结构及心肌细胞凋亡参数的影响,探讨参附注射液拮抗心肌缺血/再灌注损伤的作用机制。方法:建立心肌缺血/再灌注损伤模型,结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)30min,再灌注10min。将46只大鼠随机分为5组,(Ⅰ)假手术组;(Ⅱ)对照组心肌缺血30min+生理盐水;(Ⅲ)对照组心肌缺血30min/再灌注10min+生理盐水;(Ⅳ)给药组心肌缺血30min+参附注射液;(Ⅴ)给药组心肌缺血30min/再灌注10min+参附注射液。以上各组分别采集相同部位的心室肌组织;应用透射电镜观察心肌细胞超微结构,通过CIMAS多功能真彩色病理图像分析CIMAS系统对心肌细胞线粒体进行体视学分析。原位标记TUNEL法凋亡的心肌细胞,免疫组化方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达,病理图像分析系统进行凋亡心肌细胞、Bcl-2及Bax蛋白的表达分析。结果:与假手术组比较,给药组(Ⅳ、Ⅴ)心肌细胞的Bcl-2蛋白表达显著增多(P0.05),Bax蛋白表达略增加(P0.05)和显著降低(P0.05),心肌细胞凋亡明显减少(P0.05);心肌细胞组织结构损害明显减轻;对照组与假手术组比较线粒体有显著变化(P0.01),给药组(Ⅳ、Ⅴ)与假手术组比较线粒体变化程度差异无统计学意义(P0.05)。结论:参附注射液能明显抑制心肌缺血/再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达和保护线粒体相关。     

蛋白酶的活化和bcl-2基因的表达对家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活化和bcl-2基因的动态表达对家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法42只家兔建立心肌缺血再灌注模型,随机分为对照组(6只)和实验组(36只)。采用原位杂交、免疫组织化学技术等,观察家免缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA、bcl-2 mRNA动态表达的变化规律对心肌细胞凋亡细胞的数目影响。结果缺血再灌注损伤激发了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活化,促进了凋亡的发生,二者的曲线变化呈正相关(r=0．9286,P<0．001)。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、bcl-2之间形成一种抗衡的网络调控构象,负责凋亡的促进和凋亡的抑制。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA、bcl-2mRNA、细胞凋亡三者的表达,在交界区比梗死区更明显。结论半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA活化诱导的细胞凋亡是家兔缺血再灌注引起心肌细胞损伤的主要原因。交界区以凋亡为主要变化的动态演变,为临床治疗提供了一个时间窗。     

肺缺血再灌注损伤中氧化应激与Fas/FasL系统的关系

目的探讨肺缺血再灌注损伤中氧化应激与Fas/FasL系统的关系。方法采用在体兔单侧肺缺血再灌注损伤模型,日本大耳白兔40只,随机分为对照组,缺血再灌注1h、3h和5h组,每组10只。对比观察各组血浆超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量和一氧化氮水平,以及肺组织细胞凋亡指数及Fas/FasL mRNA定位表达。结果缺血再灌注组肺组织凋亡指数明显高于对照组(P<0.01);再灌注后Fas、FasL mRNA在肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞等呈阳性表达,明显强于对照组(P<0.01);丙二醛含量随再灌注时间延长逐渐增加(P<0.01),而超氧化物歧化酶活性与一氧化氮则随再灌注时间延长有所降低(P<0.01)。结论肺缺血再灌注损伤期间,氧化应激参与Fas/FasL系统的激活。     

缺血预处理对心肌缺血再灌注诱发凋亡的保护机制

目的：通过观察心肌细胞凋亡指数与心肌中Fas、C-fOS表达阳性率的变化,探讨缺血预处理对心肌缺血再灌注诱发细胞凋亡的保护作用及与心肌中Fas、c-fos基因表达的关系. 方法：将入选大鼠随机分为假手术对照组（A组）、缺血组（B组）、缺血再灌注组（C组）、缺血预处理组（D组）,每组15只,测定各组大鼠心肌中细胞凋亡和Fas、c-fos的表达,并分析三者之间的相关性. 结果：与A组比较,B、C及D组大鼠的心肌凋亡指数、心肌中Fas与c-fos的阳性率均升高（P＜0.01）;与C组比较,B组及D组大鼠的心肌凋亡指数、心肌中Fas与C-fOS的阳性率均降低（P＜0.01）.Pearson相关分析显示心肌凋亡指数、Fas、c-fos三者之间存在显著正相关. 结论：缺血预处理可能通过下调凋亡相关基因Fas、c-fos的表达,减少细胞凋亡而发挥心肌保护作用.