不同生长基质对神经干细胞分化为类毛细胞影响的实验研究

目的 探讨新生豚鼠海马神经干细胞在人工外淋巴液中分化为类毛细胞的最佳生长条件.方法 将原代培养的新生豚鼠海马来源的神经干细胞进行体外培养(15%人工外淋巴液 DMEM/F12),分别接种于包被多聚赖氨酸和鼠尾胶原的盖玻片上使其分化,3周后对分化的细胞进行免疫荧光检测,分别计数产生表达毛细胞标记蛋白MvsionⅦa阳性细胞的比例.结果 神经干细胞在接种鼠尾胶原的盖玻片上生长,分化为MysionⅦa阳性细胞的比例为13.6%.但在接种多聚赖氨酸的盖玻片上生长,MvsionⅦa阳性细胞的比例仅为1.9%.结论 鼠尾胶原是适合新生豚鼠海马神经干细胞在人工外淋巴液中分化为表达毛细胞特异抗体细胞的生长基质.     

不同基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响

目的比较几种不同培养基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响,探讨兔气管纤毛上皮细胞体外培养最佳生长基质。方法用组织块法比较兔气管纤毛上皮细胞分别在新鲜配制鼠尾胶原、市售鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶4种基质上的贴壁和生长状况。结果兔气管黏膜上皮组织在4种基质上的贴壁率分别为:新鲜配制胶原89.1%,市售胶原43.5%,多聚赖氨酸36.9%,明胶21.7%;贴壁组织的单细胞层最大生长半径分别为:新鲜配制胶原(1 432.2±383.2)μm,市售胶原(928.9±390.3)μm,多聚赖氨酸(889±229.2)μm,明胶(651±221.2)μm;纤毛摆动最大频率及持续时间分别为:新鲜配制胶原(10.0±1.5)Hz 11 d,市售胶原(8.5±0.6)Hz 5 d,多聚赖氨酸(8.9±0.5)Hz 3 d,明胶(5.9±0.3)Hz 2 d。扫描电镜下新鲜配制鼠尾胶原纤维成条索状,相互交织成网,利于组织贴壁和细胞生长。结论在常用的4种培养基质中,新鲜配制的鼠尾胶原是兔气管纤毛上皮细胞体外培养的最佳生长基质,是纤毛功能研究的可靠保证。     

地塞米松对体外培养成骨细胞生长的影响

目的探讨地塞米松对体外培养成骨细胞生长的影响。方法采用新西兰大白鼠股骨骨髓单个核细胞行体外培养成骨细胞，根据加入成骨细胞培养液中相同浓度（1×10^-1mol／L）地塞米松的不同剂量将其分为20μl、30μl、40μl组，并设对照组（培养液中无地塞米松），分别采用倒置显微镜和瑞氏一姬姆萨染色、碱性磷酸酶染色、苏丹Ⅳ染色观察活细胞形态、数量及细胞内成分。结果地塞米松各组抑制细胞增生的作用显著优于对照组（P〈0．01）；对照组骨髓单个核细胞均可转变为成骨细胞，而地塞米松各组均可抑制骨髓单个核细胞向成骨细胞分化，并促使其脂肪变性，尤以30μl和40μl组最强。结论地塞米松可抑制体外培养的骨髓单个核细胞向成骨细胞转化，且作用与其剂量呈正相关。     

不同差速贴壁时间对心肌细胞培养的影响实验性研究

目的:探讨心肌细胞分离、纯化和培养方法.方法:采用不同差速贴壁时间分离、纯化、培养新生乳鼠心肌细胞.结果:心肌细胞培养,采用差速贴壁60min组与90min组之间无统计学意义,差速贴壁60min组、90min组与差速贴壁120min组两两之间均有统计学差别.结论:心肌细胞培养过程中,采用差速贴壁60min、90min较差速贴壁120min获得的心肌细胞数量高.     

新型生物陶瓷对体外培养成骨细胞影响的试验研究

目的 :研究新型复合生物陶瓷 (ZrO2 -CBC)对体外培养的胎鼠成骨细胞增殖分化的影响 ,探讨ZrO2 -CBC的细胞相容性 .方法 :将ZrO2 -CBC与胎鼠成骨细胞体外共同培养 15d ,通过细胞计数、ALP活性检测和流式细胞仪法评价ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化的影响 .结果 :与空白对照组相比 ,实验早期ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,后期轻度抑制成骨细胞的增殖 ,并抑制成骨细胞ALP的分泌 (P <0 0 5 ) .结论 :ZrO2 -CBC是一种有前途的牙科种植体材料     

乳鼠成骨细胞体外培养及其生物学特性的研究

目的 探讨建立乳鼠成骨细胞体外培养方法 的可行性及成骨细胞的生物学特性.方法 取出生后24h内乳鼠颅盖骨,采用多次复合胶原酶消化法进行消化及体外培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,进行成骨细胞HE染色,碱性磷酸酶染色,基质钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色,对大鼠成骨细胞进行鉴定.结果 所培养细胞为成骨细胞,并生长良好,HE、碱性磷酸酶染色,钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白染色均阳性.结论 采用复合胶原酶消化法分离培养的成骨细胞具有典型成骨细胞生物学特性,且成分较单一.     

淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的影响

目的：观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的作用。方法：取新生1－3d SD大鼠头盖骨用酶消化法分离成骨细胞。第3代细胞经MTT法、茜素红染色法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞增殖、矿化结节形成的影响。结果：淫羊藿总黄酮1－10μg/ml浓度具有显著的促进成骨细胞增殖及提高矿化结节形成数量的作用。结论：淫羊藿总黄酮具有促进体外成骨细胞增殖及分化成熟的作用。     

烟草浸提液对大鼠体外培养成骨细胞的影响

目的 探索烟草浸提液对体外培养成骨细胞的附着和生长的影响.方法 将周龄SD大鼠颅盖骨,剪成1.5 mm×1.5 mm大小组织块,先用0.25%胰蛋白酶消化20 min、0.1%Ⅱ型胶原酶消化30 min后,再对其进行培养.倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定.实验分对照组和实验组,实验组按所加烟草浸提液浓度的不同分为0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25和50 g/L 7个浓度组,分别测定各实验组细胞的生长曲线.采用SPSS13.0软件包对数据进行双因素方差分析.结果 烟草浸体液对成骨细胞的附着和生长起抑制作用,并随其浓度的升高而增强.各处理组间存在显著差异(P＜0.01);各组内的前3 d存在显著性差异(P＜0.01),但3.2～50 g/L组第4～7天间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吸烟不利于口腔种植的临床愈合.     

大鼠颅骨成骨细胞的胶原水凝胶三维立体培养

目的 建立大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(ROBs)的胶原水凝胶三维立体培养模型。方法 取新生SD 大鼠颅骨,通过酶消化法获得成骨细胞。将传代培养的第一代(标记为P1代) ROBs与不同浓度Ⅰ型鼠尾胶原（胶原浓度为1、2、3 mg/mL）、DMEM 培养液、NaOH等混合,调节混合液pH并将其置于37 ℃使胶原凝固成形,建立细胞的三维立体培养。ROBs立体培养3 d后,普通显微镜观察细胞形态及密度,培养6 d后二乙酸荧光素/碘化丙啶（FDA/PI）染色法鉴定细胞存活率;培养3 d、6 d、9 d后CCK-8检测法测定细胞活性,筛选出三维立体培养最佳胶原浓度及最佳培养体系。扫描电镜和HE染色观察最佳培养体系中ROBs细胞形态以及细胞与胶原复合物的黏附和分布情况。结果 胶原浓度为2 mg/mL培养体系,胶原成形最好、硬度最高。ROBs三维立体培养3 d后,胶原浓度为1 mg/mL、2 mg/mL培养体系中细胞饱满、多呈长梭形。胶原浓度为3 mg/mL的培养体系细胞多呈圆形并固缩。胶原浓度为2 mg/mL培养体系中,细胞存活率最高（ P<0.05),细胞活性强于1 mg/mL组和3 mg/mL组（ P<0.05)。2 mg/mL培养体系组扫描电镜结果显示细胞与胶原复合物黏附较好且细胞形态正常,HE染色结果显示细胞在胶原中分布均匀且细胞形态正常。结论 胶原浓度为2 mg/mL时,能够成功建立ROBs胶原水凝胶三维立体培养模型,该模型中胶原成形较好,硬度较高,细胞生存良好,分布均匀,能够维持正常形态及活性,适用于后期科学研究。     

高压氧对体外培养成骨细胞分化的影响

目的探讨高压氧治疗对成骨细胞分化的影响。方法将体外培养的成骨细胞接种于96孔培养皿中，每孔10000个细胞，正常培养3d后，改用成骨化培养基，24h后，成骨细胞接受2．4个大气压90min和1．5个大气压90min的高压氧和高压空气的治疗，每天1次，共19次。结果高压氧治疗组第3d可以检测出钙沉积的出现，而对照组直到第7d才能检测出钙沉积的出现。钙沉积分析表明，从第3d开始到第19d，高压氧治疗组的钙沉积都显著高于对照组。在成骨化培养条件下，高压空气治疗后，钙沉积没有明显增加。在高压氧治疗后的第5、9、13d进行的碱性磷酸酶的活性分析显示，高压氧治疗组的碱性磷酸酶活性也显著高于对照组。Von-Kossa染色和显微镜下观察显示，高压氧治疗增加了骨结节的形成。结论高压氧治疗能够明显刺激成骨细胞的成骨分化。     

大豆异黄酮对体外培养成骨细胞作用的实验研究

目的研究大豆异黄酮对体外培养成骨细胞增值及分化等.方法大豆异黄酮加入新生SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中.用噻唑蓝( MTT )比色法检测细胞增殖情况;用对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、用放免法测定OB骨钙素( BGP)含量,以反映OB的分化状况.结果用大豆异黄酮体外培养大鼠成骨细胞MTT吸光值明显增加,成骨细胞ALP活性显著升高,成骨细胞BGP分泌显著增加(p<0.05).结论大豆异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化的作用,其作用程度低于雌激素.大豆异黄酮的弱雌激素作用可能是其防治绝经后骨质疏松的重要机制.     

等离子喷涂硅灰石涂层对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究硅灰石涂层的细胞相容性和成骨诱导能力。方法 将硅灰石等离子喷涂于Ti-6Al-4V表面，成骨细胞于其表面培养，测定培养液的碱性磷酸酶活性、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽和骨钙素的含量，并观察硅灰石涂层表面成骨细胞的形态和数量。结果 培养7～12d，Ⅰ型前胶原羧基末端前肽含量和碱性磷酸酶活性最高；13～21d，骨钙素内含量最高，涂层表面细胞增殖明显。结论 硅灰石涂层具有良好的细胞相容性和成骨诱导能力。     

体外培养的兔骨髓基质细胞在牛松质骨载体上的生长与分化

目的体外培养兔骨髓基质细胞（Marrow Stromal Cells,MSCs）,研究其生物学特性,为骨组织工程应用提供基础。方法抽取新西兰白兔骨髓,进行体外培养并传代,观察细胞生长情况,然后将细胞与牛松质骨（bovine cance Uousbone,BCB）载体复合。通过用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞粘附和生长情况,同时测定碱性磷酸酶活性和细胞增殖分化情况。结果骨髓基质细胞在体外培养生长良好,细胞与支架复合后可以在支架表面粘附伸展。结论骨髓基质细胞在体外生长良好,可以作为种子细胞在组织工程中应用。     

大鼠成骨细胞的体外培养和生物学特性的研究

目的：建立一种成骨细胞的体外培养方法,并研究不同培养时期成骨细胞的生物学特性。方法：用成年雌性大鼠松质骨为培养细胞来源,组织块培养法和胰酶消化法相结合进行成骨细胞培养,并测定成骨细胞不同培养阶段的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性和骨钙素（ＯＣ）分泌水平。     

不同浓度表儿茶素没食子酸酯对体外培养成骨细胞的影响

目的研究不同浓度表儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对体外培养成骨细胞的影响,确定最大作用浓度(最大抑制浓度或促进浓度)。方法取新生SD大鼠的颅骨进行成骨细胞诱导培养,第3代细胞中分别加入浓度为0、1、10、20、30和40μmol/L的EGCG+含10%胎牛血清DMEM培养基培养。应用CCK-8法、茜素红染色和硝酸银染色法、ELISA法观察并测定EGCG对体外培养成骨细胞的增殖、矿化结节形成及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果与0μmol/L浓度组比较,EGCG(10~20)μmol/L浓度组具有明显促进增殖的作用;30μmol/L及以上浓度组表现出对大鼠成骨细胞的抑制作用;在不同浓度EGCG中培养7 d或14 d,可以清晰观察到矿化组织形成,(10~20)μmol/L EGCG培养的细胞矿化结节形成数量显著多于对照组;血管内皮生长因子(VEGF)检测显示EGCG(10~20)μmol/L浓度组促进成骨细胞分泌VEGF的作用最强,30μmol/L及以上浓度对VEGF的分泌具有抑制作用。结论 EGCG(10~20)μmol/L浓度组对体外培养的成骨细胞有明显的促进增殖作用,30μmol/L及以上浓度组表现出对成骨细胞的抑制作用。     

甲状旁腺素对鼠成骨细胞胶原合成的影响

成骨细胞作为骨组织中唯一具有甲状旁腺素受体（Illyl？H）的细胞，研究hP’FH不同作用方式下其胶原合成量的变化，可帮助阐明间歇性给予hPFH刺激骨形成的机制。一、材料与方法1.甲状旁腺激素受体、胶原酶11（美国Sign公司），达尔伯克必需基本培养基（DMEM）（美国GibeO公司），’H一脯氨酸（北京4OI原子能研究所），天狼猩红（英国MohayChend。al公司），其余试剂均为国产分析纯试剂。2.Wistar新生鼠成骨细胞原代培养及苦味酸天狼猩红染色：参照文献卜，2］进行。3.’H一脯氨酸掺人：消化1代末细胞，至24TL板使其为4X103／cd。…