TGFβ1对人血管内皮细胞整合素β3及粘着斑激酶表达的影响

OBJECTIVE: To observe the effects of transforming growth factors beta 1 (TGF beta 1) on the expression of integrin beta 3 and the activity of focal adhesion kinase (FAK). METHODS: This study was performed on cultured human endothelial cells (EC) by using cell-ELISA and immunoprecipitation-tyrosine kinase assay respectively. RESULTS: Under the stimulus of TGF beta 1, there a dose-dependent increase in the expression of integrin beta 3 chain in the surface of EC. And after the cultured EC were treated with 5 ng/ml or 10 ng/ml TGF beta 1 for 6 or 24 hours, the FAK activity in EC increased significantly as compared with the control group (P < 0.05). CONCLUSION: The expression of integrin beta 3 and the activity of FAK on EC were regulated by TGF beta 1, and this regulation may be important in cell adherence, angiogenesis, and in the pathophysiology of atherosclerosis.     

TGFβ1对人血管内皮细胞整合素β3及粘着斑激酶表达的影响

目的　观察转化生长因子β     

TGFβ1对人肾小管上皮细胞表达糖原合成酶激酶-3β的影响

目的 研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line, HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响.方法 将体外培养的的HKCs随机分为4组:正常对照组(C组):无血清培养基(free serum medium, FSM)培养; Ta组、Tb组和Tc组:用含不同浓度TGFβ1(Ta组:ng/ml,Tb组:0ng/ml,Tc组:0ng/ml)的FSM培养.12h后,分别用RT-PCR、Western blot检测HKCs GSK-3β的mRNA、总蛋白表达量以及蛋白磷酸化水平.结果 (1)GSK-3β mRNA和总蛋白在各组间表达量差异无统计学意义(P＞0.05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P＜0.01);(2)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平更高(P＜0.01);(3)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGFβ1虽不影响HKCs的GSK-3β mRNA和总蛋白表达量,但能提高GSK-3β蛋白磷酸化水平,后者可能参与TGFβ1诱导的 HKCs转分化过程.     

整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用

目的探讨整合素和粘着斑激酶是否在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）迁移调控中起作用。方法前期实验将JWA核酶基因构建到逆转录病毒载体pLXSN上，转染人体外培养的人PASMCs内，并证实转染的JWA特异性核酶基因能抑制PASMCs内JWA基因的表达。该研究应用改良Boyden小室法测定细胞迁移情况．半定量RT-PCR（sqRT-PCR）法测定细胞内整合素αv、整合素β3。粘着斑激酶的mRNA表达量．Western blot法检测细胞内整合素αv、整合素β3、粘着斑激酶的蛋白表达量。结果与空载体转染细胞（P-pLXSN组）及未转染细胞（PASMCs组）比较．转染JWA核酶基因的细胞（P-JWARZ组）迁移率显著增加，细胞内整合素αv、整合素β3、粘着斑激酶的mRNA及蛋白表达量均显著增加。结论整合素、粘着斑激酶信号通路可能在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移中起调控作用。     

消癥散结法对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶的影响

目的研究消癥散结法对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶(ILK)的影响,探讨其在肾间质纤维化中的干预作用。方法将消癥散结法复方总方拆为补方、散方,运用血清药理学方法分别制备总方、补方、散方、盐酸贝那普利含药血清。体外培养人肾小管上皮细胞,分为6组:空白组、TGF-β1组、贝纳普利组、总方组、补方组、散方组。将5%各含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,除空白组外均加入TGF-β110μg/L,48 h后,提取细胞总蛋白及总RNA,分别采用免疫印迹法及逆转录-聚合酶链反应方法检测各组ILK蛋白及其mR-NA的表达。结果空白组肾小管上皮细胞胞浆内ILK及其mRNA有少量表达,TGF-β1刺激后能够诱导肾小管上皮细胞ILK及其mRNA表达显著增加(与空白组相比P<0.01);与TGF-β1组相比,贝纳普利组和总方组、散方组肾小管上皮细胞ILK及其mRNA含量明显降低(P<0.01);补方组与TGF-β1组相比差异不明显(P>0.05)。结论消癥散结法复方总方含药血清能抑制细胞ILK及其mRNA的表达,干预TGF-β1/ILK信号通路可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。     

整合素连接激酶在创面中的表达及其调控研究

目的 探讨大鼠烫伤创面愈合过程中整合素连接激酶（ILK）的表达和转化生长因子β1(TGF-β1)对人皮肤成纤维细胞中ILK表达的调控作用。方法 健康SD大鼠18只,随即选取15只建立深Ⅱ°烫伤模型,分别于烫伤后第1、5、10、15、20天分别随机选取3只大鼠,运用免疫组织化学的方法,动态观察烫伤创面中ILK的表达。另外3只取正常皮肤作为对照。7例人正常皮肤标本采用组织块法分离培养人皮肤成纤维细胞,选取第4-6代状态良好的细胞,TGF-β1组给与TGF-β1(5ng/ml)刺激,同一成纤维细胞作为对照,运用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化,荧光标记的免疫细胞化学方法检测第24、48、72小时各组细胞中ILK的表达。结果 烫伤后第5、10、15天大鼠烫伤创面中ILK的平均光密度值显著高于正常皮肤和愈合后（第20天）(P＜0.05)。随着刺激时间的延长,TGF-β1组细胞中ILK的表达逐渐增加,第48、72小时TGF-β1组ILK阳性表达的平均光密度值显著高于对照组(P＜0.05)。结论 ILK在大鼠创面愈合过程中表达明显增加,它们可能对创面的愈合起着重要作用。TGF-β1能时间依赖的诱导ILK的表达增加,TGF-β1对皮肤呈纤维细胞中ILK的表达具有一定的调控作用。     

肝细胞癌中粘着斑激酶表达增加及意义

0　引　　言我国为肝细胞癌 (ＨＣＣ)高发区 ,目前大肝癌切除术后 5年复发率为 6 0 %～ 80 % ,小肝癌亦达到 4 0 %～ 5 0 %。如何降低复发率、提高无瘤生存率就显得甚为重要和迫切[1] 。如果能在早期发现ＨＣＣ的转移复发倾向 ,并以此指导临床治疗 ,那么必将促使ＨＣＣ疗效实现一次飞跃。欧美发达国家为ＨＣＣ低发区 ,故关于ＨＣＣ侵袭转移的研究较少。然而在一些恶性肿瘤中已发现一种调节细胞形态和运动的细胞质内蛋白质酪氨酸激酶———粘着斑激酶 (ｆｏｃａｌａｄｈｅｓｉｏｎｋｉｎａｓｅ,ＦＡＫ)表达的改变 ,并与肿瘤细胞的侵袭和转移…     

ILK在TGFβ1诱导HKCs转分化过程中的表达和意义

目的 观察TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化过程中,整合素连接激酶(integrin-linked kinase, ILK)的表达及其在TEMT中所起的作用.方法 以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系为对象,分别用TGFβ1(40ng/ml)及TGFβ1(40ng/ml)加HGF(100ng/ml)刺激,免疫组化方法检测ILK、E钙黏蛋白(E-cadherin)及纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达,并用计算机真彩色图像分析系统对其进行半定量,并用Western Blot进一步检测ILK蛋白的表达.结果 TGFβ1能以时间依赖的方式诱导ILK在肾小管上皮细胞中的表达;增加的ILK能介导肾小管上皮细胞发生表型变化,即使小管上皮细胞E钙黏蛋白的表达减少,而纤维连接蛋白的表达增多,用HGF能抑制上述作用.结论 ILK参与TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞向间叶细胞的转分化.     

粘着斑激酶在胰腺癌中的表达及其意义

目的 探讨粘着斑激酶(FAK)在胰腺癌中的表达及临床意义.方法 收集遵义医学院第五附属(珠海)医院和中山大学附属第五医院病理科 2004～2011年有完整临床资料和病理资料的胰腺癌存档蜡块40例和15例癌旁正常组织,采用免疫组织化学SP法检测两组组织中FAK的表达水平.结果 FAK在胰腺癌中阳性表达率为72.50%,在癌旁组织中表达率为13.3%,胰腺癌组织与癌旁正常组织相比,差异有显著性 (P<0.05).FAK的表达与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移相关(P<0.05).结论 FAK在胰腺癌的发生、发展、侵袭与转移中起重要作用,FAK的表达异常可以作为预测胰腺癌预后的指标.     

血管内皮生长因子C促进HeLa宫颈癌细胞粘着斑激酶活性的研究

目的探讨粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）介导血管内皮细胞生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF—C）促宫颈癌恶性进展的作用。方法提取不同病理分期的宫颈癌组织标本蛋白．采用Western-blot检测VEGF．C及FAK蛋白的表达情况。在体外培养宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用Western—blot测定VEGF—C对FAK蛋白的表达和磷酸化的调控作用。结果随着宫颈癌恶性程度的增高,VEGF-C、FAK蛋白及磷酸化FAK蛋白表达水平均随之增加。与正常宫颈组织比较,宫颈原位癌（CIN）组织中VEGF．C、FAK、磷酸化FAK蛋白表达分别增加了（48&#177;10）％、（78&#177;14）％、（83&#177;15）％,P〈0．05;宫颈鳞癌Ⅰ期各蛋白增高幅度分别为（104&#177;22）％、（121&#177;28）％、（143&#177;30）％（P〈0．01）;宫颈鳞癌Ⅱ期（未放疗、化疗）各蛋白表达增高更为显著,其幅度分别为（195&#177;28）％、（186&#177;22）％、（204&#177;31）％,P〈0．001。在培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞上,VEGF—C（100μg／L）处理24h后,可显著增高FAK蛋白、磷酸化FAK蛋白的表达,该作用可被VEGF—C单克隆抗体明显抑制。结论VEGF—C、FAK蛋白表达与宫颈癌恶性程度密切相关,VEGF—C可能通过上调FAK表扶殛苴磷酪化水平而但讲宫颈癌的熏忡讲犀     

口腔鳞癌中粘着斑激酶的表达及意义

目的探讨粘着斑激酶（FAK）在人口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达水平及与各临床病理因素和预后的关系。方法免疫组化SP法检测80例人OSCC石蜡切片中的FAK的表达情况。采用X^2检验、生存曲线和Cox比例风险回归等方法分析FAK过表达的意义。结果免疫组化证实FAK为非均质性表达,主要强表达在癌细胞质和（或）细胞膜中．在对应癌旁正常组织中则呈弱阳性或阴性表达。采用前沿区染色计分的结果判断方法,FAK过表达与癌的分期、分化、淋巴结转移相关性显著;多因素分析显示,FAK过表达可作为判断口腔鳞癌预后的危险因紊,为影响预后的独立因素。结论口腔鳞癌前沿区的FAK过表达为有价值的判断其生物学行为和预后的病理学指标。     

不同深度烫伤大鼠创面组织中β1整合素、整合素连接激酶的表达

[目的]通过观察不同烫伤程度大鼠在烫伤24 h后β1整合素和整合素连接激酶(ILK)的表达,探讨β1整合素和ILK在创面愈合中的作用.[方法]将32只sD大鼠分别造成Ⅰ、浅Ⅱ、深Ⅱ度和Ⅲ度烫伤,伤后24 h取创面组织标本,制作切片,分别进行HE染色以及整合素β1、ILK免疫组化染色,观察不同烫伤程度创面整合素β1和ILK的表达与定位.[结果]Ⅰ度烫伤大鼠表皮基底层和皮肤附属器可见明显整合素β1和ILK表达,其中ILK在皮肤附属器的表达较整合素β1更为显著;浅Ⅱ度组织创面,残留的基底层和健全的皮肤附属器周围有整合素β1和ILK表达,其中ILK在皮肤附属器的表达较整合素β1更为显著,而整合素β1主要在毛囊表达;深Ⅱ烫伤创面仅真皮深层健存的皮肤附属器中有整合素和ILK阳性细胞表达;Ⅲ度烫伤创面未见整合素β1和ILK阳性.[结论]整合素β1和ILK具有相似的局限表达模式并与大鼠烫伤程度密切相关,提示ILK可能介导整合素的胞内的信号通路,与整合素β1共同参与创面愈合过程.     

粘着斑激酶在人良性前列腺增生组织中的表达及其意义

目的:研究粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在人良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学方法,分别测定48例BPH和10例正常前列腺组织基质和上皮中FAK的表达水平.结果:①FAK在BPH组织基质和上皮中的表达水平均显著高于正常前列腺组(P＜0.05).②FAK在不同年龄组和不同体积组BPH组织基质和上皮中的表达水平差异均无显著性(P＞0.05).结论:FAK在BPH发生过程中发挥一定作用,FAK不但在基质增生中发挥作用,同时也参与了上皮增生过程.FAK的高表达可能在BPH早期就已发生,并在BPH发展过程中持续高表达.     

整合素α_5β_1及黏着斑激酶在肝纤维化中的作用

目的探讨整合素α5β1及黏着斑激酶(FAK)在慢性乙型肝炎肝纤维化形成中的作用。方法纳入慢性乙肝患者100例,其中S0期20例,S1期21例,S2期22例,S3期19例,S4期18例。均行肝组织穿刺,采用S-P免疫组化染色观察肝组织整合素α5β1、FAK的表达分布,并采用HPIAS-1000型多媒体真彩色病理图文分析系统进行半定量测定。其含量以表达阳性区域占全视野面积的百分比(面密度)平均数表示。结果肝组织整合素α5β1、FAK染色阳性物质呈棕黄色,其含量随着纤维化程度(S0～S4)的加重而逐渐增加(F值分别为58.87、59.14,P<0.05);整合素α5β1与FAK表达呈明显正相关(r=0.711,P<0.01)。结论整合素α5β1及FAK在慢性乙型肝炎肝纤维化形成中起着重要作用。     

转化生长因子β1对软骨样细胞整合素和吞噬细胞糖蛋白-1表达的影响

目的 :检测软骨样细胞 (HEMCSS)α1β1,α2 β1,α5 β13种整合素 (integrins)和吞噬细胞糖蛋白 - 1(CD4 4 )的表达 ,及转化生长因子 β1(TGF - β1)对它们表达水平的影响。方法 :HEMCSS是永生性软骨肉瘤细胞 ,培养于含10 %胎牛血清 ,不含或含 1,5 ,10ng·ml-1的TGF - β1的培养液 ,培养时间 2 4h。共聚焦显微镜观察α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上的表达和分布 ,流式细胞仪检测α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上表达的水平。结果 :共聚焦显微镜结果显示 ,HEMCSS细胞膜表面均有α1β1,α2 β1,α5 β1及CD4 4表达。流式细胞仪检测表明 ,加入TGF - β1,培养HEMCSS细胞 2 4h后可诱导α1β1,α2 β1,α5 β1的表达增加 ,并呈剂量依赖趋势。而 3种不同浓度的TGF - β1培养 2 4h后均减少了HEMCSS细胞CD4 4表达。结论 :TGF - β1可以调节HEMCSS细胞膜上细胞外基质受体的表达 ,从而调节软骨细胞与细胞外基质成分的结合 ,对调节软骨细胞的功能起着重要的作用。     

转化生长因子β1／整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

目的：研究转化生长因子β1整合素连接激酶（transforming growth factor-betal／integrin-linked kinase,TGF-β1／ILK）信号通路在白细胞介素β1（interleukin-1β,IL-1β）诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT）中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。 方法：以雄外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK52E）为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂（SB431542）阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）和E-钙黏连素（E-cadherin）的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白（fibronectin,FN）含量。结果：与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加（P〈0．05）,大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化（P〈0．05）。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论：1L-1β通过激活TGF-β1／ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1／ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。     

大肠息肉及大肠癌TGFβ1、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达

目的:探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、转化生长因子β受体Ⅰ(TGFβRⅠ)、Ⅱ在大肠癌发生中的可能作用。方法:免疫组织化学法检测110例大肠息肉(息肉组,其中高危型大肠腺瘤50例)、各期大肠癌(大肠癌组)40例及正常大肠组织(正常组)20例TGFβ1,TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达。结果:息肉组、大肠癌组和正常组间TGFβ1、TGFβRⅡ表达差异有统计学意义(P0.01),而3组间TGFβRⅠ表达差异无统计学意义(P0.05);高危型大肠腺瘤与Duke's A期大肠癌TGFβ1表达差异有统计学意义(P0.05),而2组间TGFβRⅠ、TGFβRⅡ表达均无统计学意义(P0.05)。结论:TGFβ1、TGFβRⅡ在正常组、息肉组、大肠癌组间有不同,提示该指标可能参与大肠癌发生,TGFβ1可能在大肠腺瘤癌变早期起作用。     

粘着斑激酶在乳腺癌的表达及其与血管生成的关系

目的 研究乳腺癌组织中粘着斑激酶(FAK)的表达及其与微血管密度(MVD)的关系,探讨FAK介导的细胞信号转导系统对乳腺癌血管生成的作用和意义.方法 应用SP法对88例乳腺癌组织和30例乳腺良性病变组织进行FAK和CD34免疫组化染色,分析FAK蛋白表达和CD34标记的MVD值之间,及其与乳腺癌临床病理参数之间的关系.结果 在88例乳腺癌中FAK的阳性表达率为68.2%(60/88),MVD为(34.52±13.11)/HPE,与良性对照组比较均有显著差异(P＜01);FAK表达和MVD与乳腺癌肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、临床分期呈正相关(P＜0.05),与患者年龄、组织病理学分级未见显著相关(P＞0.05);乳腺癌FAK表达与MVD呈正相关(P＜0.01).结论 FAK蛋白表达和微血管形成与乳腺癌的侵袭转移密切相关,FAK表达对乳腺癌血管生成具有促进作用.     

整合素β1基因剔降血管内皮细胞株的建立及其增殖活力研究

目的 构建人整合素(integrin)β1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pGenesil-integrinβ1),建立integrin β1剔降血管内皮细胞株,观察integrin β1对EA.hy926细胞株增殖的影响.方法 合成integrin β1 siRNA模板,经退火后插入到pGenesil-1荧光载体.阳性重组质粒经DoTAP转染至EA.hy926细胞中.蛋白印迹观察pGenesil-integrinβ1表达载体对目的蛋白integrin β1 表达的抑制效率,绘制转染基因前后细胞生长曲线.结果 经酶切、测序验证,pGenesil-integrinβ1重组质粒构建成功.转染细胞后,可明显抑制integrin β1的表达.整合素β1基因剔降血管内皮细胞株细胞增殖减慢,与EA.hy926细胞株相比,生长曲线右移.结论 成功构建了pGenesil-integrin β1 重组质粒,建立了integrin β1下调细胞株,下调integrin β1表达对血管内皮细胞增殖产生负调控作用.     

粘着斑激酶基因表达与结肠癌的相关性研究

目的　研究粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK)的mRNA在结肠癌组织和对应癌旁正常组织中的表达水平 ,探讨FAK参与结肠癌发病的可能机制。方法　采用半定量RT -PCR法检测 30例新鲜结肠癌及相对应的癌旁正常组织FAK的表达水平。结果　 30例结肠癌组织FAK阳性表达率为 86 7% ,其表达平均值为 0 794±0 2 5 0 ,对应癌旁组织FAK阳性表达率为 33 3% ,其表达平均值为 0 12 1± 0 115 ,FAK在结肠癌组织的表达水平明显高于正常癌旁组 (P =0 0 0 0 )。结论　FAK在结肠癌组织中的表达水平较正常组织明显增高 ,提示FAK在结肠癌的发病中起重要作用。