从半合成噬菌体抗体库筛选基质金属蛋白酶—2人抗体

目的：从半合成噬菌抗体库中筛选抗金属蛋白酶－2（MMP－2）人源抗体。方法：将重组人MMP－2固相化,通过多轮“吸附－洗脱－扩增”从半合成抗体库筛选特异性抗体,用ELISA方法对所获克隆进行特异性分析及MMP－2中和活性。结果：经过4轮筛选,得到多个可与MMP－2结合的克隆,但这些克隆也可与其它无关抗原结合,选1个克隆AD20进行竞争抑制性ELISA分析,发现其与MMP－2的结合可被游离MMP－2特异性抑制,不被无关抗原抑制,而与无关抗原的结合不能被所测的任何游离抗原所抑制,进一步检测AD20可中和MMP－2的酶解活性,DNA序列测定证明其为人抗体。结论：从半合成抗体库中获得一株具有中和活性的抗MMP－2人抗体,该抗体对无关抗原显示的非特异性结合是由不同模式介导,属于多反应性。     

基质金属蛋白酶抗体芯片在胃癌诊断中的应用价值研究

目的探讨基质金属蛋白酶(MMPs)抗体芯片用于胃癌(GC)诊断的临床应用价值。方法连续收集2016年11月至2017年3月于我院确诊的12例胃癌(GC)患者和10例胃良性病变(NGD)患者的血清标本组成训练集。应用MMP抗体芯片对上述患者血清中10种分泌型MMPs的浓度同时进行检测。比较其在GC和NGD组间浓度的差异及其用于胃癌诊断的效能。筛选出两组间浓度差异最大的MMP亚型进入下一步研究。继续收集2017年4月至2017年7月于我院确诊的40例GC和38例NGD患者的血清标本组成验证集。应用悬液微珠芯片对上述患者血清中组织型金属蛋白酶抑制剂-4(TIMP-4)的浓度进行检测。比较其在GC和NGD组间浓度的差异及其用于胃癌诊断的效能。结果训练集中(1)呈高表达(>10 000 pg/ml)的MMP亚型包括:MMP-1、MMP-3、MMP-9和TIMP-1;中表达(1 000~10 000 pg/ml):MMP-8、TIMP-2和TIMP-4;低表达(<1 000 pg/ml):MMP-2、MMP-10和MMP-13。(2)与NGD组相比,除MMP-2、MMP-3和MMP-13外,其余MMP亚型在GC组中的浓度均呈升高趋势。但是仅有TIMP-4差异显著(P<0.05)。(3)MMP家族各亚型用于GC诊断的曲线下面积在0.500~0.858之间,联合诊断的AUC为0.925(95%CI:0.782~1.000)。其中以TIMP-4最高,为0.858(95%CI:0.692~1.000)。当选取2 438.3 pg/ml为最佳临界值时,TIMP-4用于GC诊断的敏感度、特异性和约登指数分别为83.3%、80.0%和0.633。验证集中TIMP-4在GC组和NGD组中的浓度分别为(1 148.0±691.5)pg/ml和(834.3±397.2)pg/ml,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);TIMP-4用于GC诊断的曲线下面积为0.628(95%CI:0.498~0.758)。结论血清MMP表达谱的检测有望成为胃癌辅助诊断和筛查的新方法,其中TIMP-4对胃癌的诊断有一定的参考价值,其诊断能力有待于进一步验证。     

抗体基因工程——重组抗体

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。为此,人们试着获得人型免疫球蛋白(Ig)的McAb。目前除了人-人杂交瘤外,用抗体基因工程方     

CD147抗体对破骨细胞中基质金属蛋白酶活性影响的体外研究

目的:建立人破骨细胞(Osteoclast,OCs)体外诱导分化模型,研究CD147单克隆抗体对OCs分化过程中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达及活性的影响。方法:通过采集健康成年志愿者外周血所分离的单个核细胞贴壁培养,应用NF-κB配体激活因子(Receptor or Activator ofNF-KB Ligand,RANKL)与巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导单个核细胞向OCs分化。本实验分为抗体组(RANKL+M-CSF+CD147单克隆抗体)与对照组(RANKL+M-CSF)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与骨吸收实验检测鉴定OCs分化及活性情况,Real-Time PCR技术检测CD147、MMP-9和MMP-2 mRNA在破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OPCs)中表达情况,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-9、MMP-2酶蛋白的活性变化情况。结果:①对照组经TRAP染色和骨吸收实验检测到破骨样细胞形成并具有骨吸收功能,而抗体组OCs分化及活性均受到抑制;②在24、48小时时相点上抗体组CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA的相对表达量均低于相应的对照组(P<0.05),且MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量与CD147 mRNA的表达量呈正相关。③明胶酶谱检测细胞培养上清,可见在24、48小时两时相点上抗体组OCs细胞中MMP-2、MMP-9酶原及活性酶的酶解量均较相应对照组明显降低(P<0.05)。结论:CD147单克隆抗体可以抑制OCs分化成熟过程中MMP-9及MMP-2的表达与活性;CD147对MMP-2、MMP-9活性的调节,可能是其对OCs活化调节的机制之一。     

封闭N-cadherin解整合素金属蛋白酶水解位点的单链抗体的制备及鉴定

目的 制备封闭神经型钙黏素(N-cadherin)解整合素金属蛋白酶水解位点(ADAM)的单链抗体(scFv),并进行鉴定.方法 首先利用RT-PCR技术从分泌抗N-cadherin的ADAM水解位点单克隆抗体(mAb)细胞株中扩增出重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,然后通过重叠延伸PCR法(SOE-PCR),构建成scFv基因片段.再将其克隆入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达,通过镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot法等测定重组蛋白的生物学活性.结果 PCR、酶切和测序表明scFv片段长744 bp,编码248个氨基酸.scFv基因表达载体转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达出相对分子质量(Mr)约29 000的目的蛋白,主要为包涵体形式,经变性,纯化和复性后,获得纯度达90％以上的scFv蛋白,ELISA和Western blot法检测表明可溶性scFv可以与N-cadherin的ADAM水解位点序列多抗原短肽和全长N-cadherin结合.结论 成功构建并表达封闭N-cadherin的ADAM加工位点单链抗体.     

抗钙调素抗体对抗体产生细胞分泌抗体功能的影响

以钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）和环抱素Ａ（ＣｓＡ）为对照，观察抗钙调素（抗ＣａＭ）抗体对绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫的小鼠脾细胞及分泌抗巨细胞病毒（抗ＣＭＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞抗体分泌功能的影响。发现ＴＦＰ（０．１～１００μｍｏ／Ｌ）、ｃｓＡ（０．１～１００μ／Ｌ）明显抑制小鼠脾细胞与杂交瘤细胞分泌鼠Ｉｇ的功能，且此抑制作用随ＴＦＰ、ＣｓＡ剂量的增大而增强；与此不同，人和兔抗ＣａＭ对上述细胞分泌Ｉｇ有明显促进作用。     

抗体亲和力

抗体亲和力是抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间的非共价引力与斥力之和。抗原-抗体反应在达到平衡时为:Ab+Ag(?)Ag-Ab。式中Ab 代表游离抗体,Ag 为游离抗原,Ag-Ab 为抗体-抗原复合物,ka、kd 分别为抗原抗体结合与解离常数。由质量作用定律可知:ka〔Ab〕〔Ag〕=kd〔Ab-Ag〕,〔〕内表示相应物质的浓     

新一代治疗用抗体——改型抗体

改型抗体是在嵌合抗体基础上构建的新一代人源化抗体,因其免疫原性进一步降低而适用于临床治疗。本文较为详细地介绍了改型抗体有关研究进展,包括改型抗体的产生与发展、设计和构建、优点及应用等。     

核酸抗体

前言针对各种不同抗原产生的特异抗体已广泛应用于许多研究领域。在临床检验中,血液组织分型一直仰赖于有效的特异抗体。晚近,随着杂交瘤技术的问世,已能够产生可以区别癌细胞和正常组织的单克隆抗体。另一方面,对结合核酸的抗体的重视程度则远为不够。其主要原因是除少数众所周知的双链核酸之外,大多数双链核酸即使确有免疫原性的话,其免疫原性也很弱。例如有人试图通过注射小牛胸腺DNA来免疫家兔就始终没有成功。换言之,动物对DNA表现出耐受性。本文将涉及克服这一自然耐受性的三种情况,并讨论已获得的某些研究结果。第一,核苷和寡核     

基因工程抗体

以单克隆抗体作为载体,连接上毒素或同位素,用于肿瘤的免疫治疗和诊断,一直是一个很吸引人的手段,并且在动物实验和临床上都已证明是一个有效的手段。然而,单克隆抗体存在两个问题使它在应用上受到限制:1、由于人-人杂交瘤技术还存在很难克服的障碍,目前绝大多数单抗都来自     

细胞内抗体

细胞内抗体中国医学科学院基础医学研究所党智勇编译章静波审校最近，美国波士顿Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ癌症研究所的科学家使免疫学领域发生了翻天覆地的变化，通常抗体只有离开细胞才能发挥作用，但免疫生化学家应用抗体重组工程和基因治疗的方法将抗体特异定位于细胞内...     

SLE患者自身抗体单链噬菌体抗体库构建及抗体活性检测

本文用ＳＬＥ病人外周血淋巴细胞抽提ＲＮＡ,采用ＲＴ ＰＣＲ反应以人的特异性ＨｕＶＨＢＡＣＫ、ＨｕＪＨＦＯＲ和ＨｕＶＬＢＡＣＫ、ＨｕＶＬＦＯＲ引物扩增人抗体的ＶＨ和ＶＬ基因片段,并将其与ｌｉｎｋｅｒ拼接成ＳｃＦｖ片段克隆于大肠杆菌,使其与噬菌体基因Ⅲ的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达,从而构建了ＳＬＥ病人的单链噬菌体抗体库,ＥＬＩＳＡ检测证明ＳｃＦｖ基因产物具有抗体活性。ＳＬＥ噬菌体抗体库的构建为ＳＬＥ发病机理、诊断和治疗研究打下了良好的基础。     

巨细胞病毒中和抗体的抗独特型抗体

巨细胞瘤病毒(CMV)作为疱疹病毒科的成员之一,是正常人类或免疫缺损宿主的一个重要病原体.CMV也能通过特异性和非特异性途径作用免疫系统的功能;这显示了抗体在控制CMV感染的重要性。病毒中和抗体可能是这种保护作用的重要组成部分。而CMV中     

基因工程抗体的新种类—双链抗体

双链抗体 (Diabody)是将两种抗体的重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)基因交叉连接 ,形成“杂交”的单链抗体基因 ,表达后 ,两条单链抗体双链抗体自动互相折叠 ,形成双加或双特异性抗体片段。双链抗体在科学研究、免疫诊断和免疫治疗中都有广阔的应用前景。     

糖尿病检测谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体的临床意义

探讨血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)检测对糖尿病(DM)的临床意义。对46例1型糖尿病(DM1)、78例2型糖尿病(DM2)和50名对照组应用增敏化学发光免疫分析法、RIA法检测其血清中GAD-Ab、ICA和IAA的阳性率并进行分组分析。结果表明DM1组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为67.39%、39.13%和23.91%,三者联合检测阳性率为91.30%,均显著高于DM2组(P<0.01)及对照组(P<0.01);DM2组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为8.97%、15.39%和10.26%,三者联合检测的阳性率为29.49%,也显著高于对照组(P<0.01)。结论是血清GAD-Ab、ICA和IAA的检测对DM的分型、指导临床用药以及判断预后具有重要的临床应用价值。     

抗体组学和抗体组药物研究进展与展望

抗体组学是在基因组学和蛋白组学基础上,结合鼠、兔、人杂交瘤技术及基因工程抗体技术,经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库、大规模高通量筛选、优化,最终应用于研究、诊断及治疗的抗体一门新兴学科。抗体组药物以高通量、整体化、信息化和系统化为特点,大大提高了抗体药物的研发速度,缩短了药物的研发周期;由于抗体组药物的筛选利用了基因芯片、蛋白芯片和组织芯片等高通量技术,减少了研发成本和风险,同时既可获得广谱的抗体药物,又可获得个性化的抗体药物。本文通过对抗体组学、抗体组药物研究的进展介绍与展望,回顾了单克隆抗体技术的发展,提出目前抗体组药物靶标筛选、抗体及全人抗体库制备、高效抗体组药物筛选和抗体组药物优化等技术的重要意义,介绍了转基因小鼠技术、噬菌体显示技术和人-人杂交瘤技术制备人及全人抗体的方法,并对当前抗体组药物的研发现状及药物市场进行分析。作为生命科学的主要发展方向,抗体组药物将成为治疗肿瘤、传染性疾病、自身免疫性疾病新的研究热点。     

血型不规则抗体的筛查和抗体特异性分析

目的确证微柱凝胶法血型不规则抗体筛检阳性患者的抗体特异性。方法应用微柱凝胶法对患者血浆(血清)进行血型不规则抗体筛查,对抗体筛查阳性患者的血标本再用凝聚胺法及间接抗人球蛋白试验进行抗体特异性鉴定和效价测定。结果在微柱凝胶法血型不规则抗体筛查阳性210例中,由非特异性抗体引起假阳性35例(16.7%),由血型不规则抗体引起阳性175例(83.3%)。在175例血型不规则抗体阳性患者中,Rh血型系统抗体156例(89.1%),MNSs血型系统抗体10例(5.7%),Lewis血型系统抗体5例(2.9%),Kidd血型系统抗体3例(1.7%),其中Rh血型系统合并Kidd血型系统抗体1例。结论对孕妇产前及受血者进行血型不规则抗体筛查、特异性鉴定及其效价测定,早期进行预防及选择不含相应抗原的血液输注,是防治新生儿溶血病和确保输血安全和有效的重要措施。