硒对糖尿病大鼠肝脏磷脂酶D基因表达的影响

目的:研究硒对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法:对前期研究分离到的与补硒50μg/kgbwd有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,选择目的基因进行RT-PCR验证,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果:差异显示基因片段Se-4的碱基序列与磷脂酶D(PLD)基因片段的同源性为100%。RT-PCR验证结果显示:PLDmRNA在糖尿病对照组、糖尿病补硒组大鼠肝脏中的表达水平较正常对照组明显增高,但糖尿病补硒组PLDmRNA的表达较糖尿病对照组有所降低(P<0.05)。结论:硒可抑制糖尿病大鼠肝脏中PLDmRMA的表达,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

糖尿病大鼠补锌后新基因片段表达与鉴定

目的对糖尿病大鼠补锌后出现的新基因片段进行组织表达与鉴定。方法对前期研究中分离到的补锌糖尿病大鼠与糖尿病对照组比较有异差的基因片段进行克隆、测序、同源性分析后,对发现的6条新基因（Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20）进行RT-PCR鉴定,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平。结果20条cDNA片段经克隆、测序、同源性分析,发现了6个基因片段（Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20）,在Gen Bank中未找到高同源性的序列,为新的表达序列标签（EST）。其中4个基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组（P〈0.05）。4个新基因片段被Gen Bank收录,接收号分别为AY952968,AY952970,DQ351838,DQ351839。结论分离并克隆了4条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,在GenBank上成功登录。     

补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达

目的 克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平.方法 将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化.结果 发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%.RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.572 9±0.024 1)相比,糖尿病对照组(DM)(0.160 6±0.007 5)和糖尿病补硒组(DM Se)(0.385 7±0.019 4)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5 mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一.     

补锌糖尿病大鼠差异显示新基因片段的克隆鉴定及组织表达

目的克隆补锌糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达分布。方法对前期研究中分离到的与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,同源性分析,对发现的2条新基因(2#差异显示片段及6#差异显示片段)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以观察新基因在各组大鼠肝脏中的表达变化,并检测新基因在不同组织中的表达情况。结果经克隆、测序、同源性分析,在GenBank中未找到与2#差异显示片段及6#差异显示片段高同源性的序列,确定2#及6#差异显示片段为新的基因片段;2#及6#新基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);2#新基因片段在大脑及胰腺中表达量较高,在肾脏中表达量较低,在心肌、骨骼肌、胸腺中无表达。6#新基因片段在心肌、骨骼肌、大脑、肾脏、胰腺中均有表达,但在胸腺中无表达;2#及6#新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、AY952970。结论分离并克隆了2条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,经RT-PCR检测其在各组大鼠肝脏及其它各组织中表达分布后,在GenBank上成功登录。     

硒对糖尿病大鼠肝脏蛋白磷酸酶基因表达影响

目的研究补硒对糖尿病大鼠肝脏代谢相关基因表达的影响。方法通过对前期研究分离到的与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列设计引物,进行RT-PCR检测,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果经过克隆、测序、同源性比较,差异显示片段Se-8的碱基序列与蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的同源性为99%。糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)、糖尿病补硒组(0.698 2±0.039 6)PP2A表达量低于正常对照组(1.330 3±0.185 5)(P<0.05);糖尿病补硒组PP2A的表达量(0.698 2±0.039 6)高于糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)(P<0.05)。结论补硒对糖尿病大鼠肝脏PP2AmRNA表达有上调作用,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

铬对糖尿病大鼠骨骼肌组织基因表达的调控作用

目的　研究铬对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法　雄性Wistar大鼠随机分成 3组 :正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病补铬组。糖尿病补铬组每日以 2 0 0 μg kgbw的铬连续灌胃 6 0天。采用mRNA差异显示技术、基因片段的克隆、测序、同源性分析等观察各组大鼠之间骨骼肌中基因表达的变化。结果　分离到糖尿病补铬组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 4 0 0bp以上的cDNA片段 11条 ,其中在糖尿病补铬组中高表达的cDNA片段 4条 ;在糖尿病对照组中高表达的cDNA片段 7条。同源性比较结果显示Cr 3与GLUT4 (葡萄糖转运体 4 )的同源性为 98% ;Cr 5与IRS 1(胰岛素受体底物 1)的同源性为 10 0 % ,RT PCR验证结果显示GLUT4表达量在糖尿病补铬组高于糖尿病对照组。结论　铬可诱导糖尿病大鼠骨骼肌中GLUT4mRMA的表达 ,这可能是铬改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

铬对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响

目的:探讨补铬对糖尿病大鼠糖代谢相关基因表达的影响。方法:对前期研究分离到的与补铬200μg/(kgbw?d)有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RT-PCR检测。以激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果:差显片段Cr-3的碱基序列与GLUT4同源性为98%。各组大鼠骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达:糖尿病补铬组GLUT4表达量低于正常对照组(P<0.05),高于糖尿病对照组(P<0.05)。结论:给糖尿病大鼠补充微量元素铬可以上调骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达,进而使骨骼肌组织中GLUT4含量增加,这可能是铬改善糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1基因表达的影响

目的研究补铬对糖尿病大鼠骨骼肌代谢相关基因表达的影响。方法对前期研究分离到的与补铬有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RTPCR检测。用激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果经过克隆、测序、同源性比较,差显片段Cr5的碱基序列与IRS1同源性为100%。糖尿病对照组IRS1mRNA表达量(0791±0038)低于正常对照组(0892±0053,P<005),糖尿病补铬组IRS1mRNA的表达量(0822±0066)与糖尿病对照组相比有所恢复,但尚未恢复到正常水平(P>005)。结论补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS1mRNA表达有上调趋势,Cr5将作为候选基因有待于进一步研究。     

锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱的调节及其分子机制的研究

目的　为研究锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢的影响及其分子机制。方法　于补充锌、硒前后检测各组大鼠空腹血糖、血清胰岛素及血脂 ;运用mRNA差异显示技术观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果　糖尿病补锌组 (DM +Zn)、糖尿病补硒组 (DM +Se)大鼠血糖水平较实验前明显降低 ;血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、动脉硬化指数明显低于糖尿病对照组 (DM) ,高密度脂蛋白胆固醇高于糖尿病对照组 ;血清胰岛素水平明显改善。分离到糖尿病补锌组、补硒组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 4 0 0bp以上的cDNA片段 31条 ,其中在补锌组、补硒组中高表达的cDNA片段 19条 ;在糖尿病对照组中高表达的cDNA片段 12条。结论　锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱具有一定的改善作用 ;对其某些基因的表达产生了诱导或抑制作用。锌、硒对糖尿病大鼠代谢紊乱的调节作用可能与这些基因表达水平的变化有关。     

补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达

目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

硒和维生素E对糖尿病大鼠红细胞[Ca~(2+)]i水平的影响

目的：　观察链脲佐菌素（ＳＴＺ）糖尿病大鼠补充硒（Ｓｅ）和／或维生素Ｅ（ＶＥ）后红细胞内游离钙浓度［Ｃａ２＋ ］ｉ的变化。方法：　用ＳＴＺ制成糖尿病（ＤＭ）大鼠,分为四组：（１）ＤＭ 对照组;（２）Ｓｅ 治疗组;（３）ＶＥ治疗组;（４）Ｓｅ 和ＶＥ治疗组;另有正常对照组,每天以同体积的生理盐水灌胃。实验期为３０ 天,分析血Ｓｅ、ＶＥ及红细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ。　结果：　补充Ｓｅ 和／或ＶＥ后,红细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ显著下降,与ＤＭ 对照组比较,差异有显著意义（Ｐ＜ ０．０５,Ｐ＜ ０．０１）,以联合用药组降幅较大。血硒水平联合用药组高于其他各组（Ｐ＜ ０．０１）,补Ｓｅ组高于补ＶＥ组和ＤＭ 对照组（Ｐ＜ ０．０１）;血清ＶＥ浓度联合用药组高于ＤＭ 对照组和补Ｓｅ 组（Ｐ＜ ０．０１,Ｐ＜ ０．０５）,而补ＶＥ组血清ＶＥ浓度已恢复至正常水平。　结论：　Ｓｅ和ＶＥ对ＤＭ 大鼠红细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ异常升高有明显的抑制作用。     

硒对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺Fas/FasL表达的影响

目的 研究适碘条件下不同硒摄入水平对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺细胞凋亡蛋白Fas/FasL表达的影响.方法 将32只雌性Lewis大鼠按数字表法随机分成4组,分别设为对照组(C组),模型组(M组),补硒+模型组(Se++M组),低硒+模型组(Se-+M组),在适碘条件下(含10.90 mg/kg)对各组先施加不同水平的硒(Se++M组2 mg/kg,C与M组0.20 mg/kg,Se-+M组0.02 mg/kg)干预2周后,再采用猪甲状腺球蛋白免疫大鼠建立EAT模型,取甲状腺组织制成石蜡切片,采用免疫组织化学检测、比较Fas/FasL表达情况的差异.结果 EAT大鼠甲状腺Fas及FasL较对照均出现表达增加,其中Fas的表达有随补硒水平的升高而下降的趋势,Se++M组吸光度值(0.036±0.004)与M组(0.059±0.006)相比,Fas表达明显受到抑制(q=11.591,P=0.000),与Se-+M组(0.050±0.005)相比,Se++M组Fas呈较低表达水平(q=7.055,P=0.000);但补硒对FasL的表达无明显影响.结论 补硒能减少Fas在甲状腺细胞中的表达,对自身免疫性甲状腺疫病的发展具有抑制作用.     

铬对糖尿病大鼠糖、脂代谢及骨骼肌组织基因表达的影响

目的 :　研究铬对糖尿病大鼠糖、脂代谢及骨骼肌组织中相关基因表达的影响。方法 :　Wistar大鼠 3 2只 ,随机分成 3组 :正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病补铬组。补铬组每日以2 0 0 μg/kg bw的铬灌胃 ,连续 6 0 d。补铬前后检测空腹血糖、血清胰岛素及血脂 ;采用 m RNA差异显示技术观察各组大鼠之间骨骼肌中基因表达的变化。结果 :　补铬组大鼠血糖水平较实验前明显降低 ;血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、动脉硬化指数明显低于糖尿病对照组 ,高密度脂蛋白胆固醇高于糖尿病对照组 ;血清胰岛素水平未见明显改善。分离到补铬组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 40 0 bp以上的 c DNA片段 1 1条 ,其中在补铬组中高表达 ,糖尿病对照组中低表达或无表达的 c DNA片段 4条 ;在补铬组中低表达或无表达 ,糖尿病对照组中高表达的 c DNA片段 7条。结论 :　铬对糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱具有一定的改善作用 ;铬对骨骼肌组织中某些基因的表达产生了诱导或抑制作用。推测铬对糖尿病大鼠代谢紊乱的调节作用可能与这些基因表达水平的变化有关。