雷帕霉素联合未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受

目的 研究雷帕霉素联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的协同作用.方法 健康雄性C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠分别为供者、受者,建立同种异基因皮肤移植模型.对照组术前术后未给予任何免疫干预措施;雷帕霉素组术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃;未成熟树突状细胞组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7天经尾静脉输注给受者;联合组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7d经尾静脉输注给受者,并在术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃.结果 对照组、雷帕霉素组、未成熟树突状细胞组、联合组的皮肤移植物存活时间分别为(6.9±1.9)、(12.3±3.0)、(17.0±3.4)、(20.8±3.6)d.方差分析提示组间差异有显著性意义(P<0.05);SNK检验提示各组之间的差异均有显著意义.结论 雷帕霉素能延长小鼠皮肤移植物的存活时间;联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞可延长免疫耐受的持续时间.     

雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响

目的：研究雷帕霉素对人树突状细胞（DC）免疫功能的影响。方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM- CSF）、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。用流式细胞仪检测DC表型（CD1a、CD83、CD86、HLA- DR）;混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力;流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数;ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低（均P＜0.01）;对T淋巴细胞刺激的能力下降（P＜0.01）;细胞吞噬能力下降（P＜0.01）;凋亡细胞数增加（P＜0.01）,MLR中细胞因子（TNF-α、IL-10、IL-12）浓度降低（均P＜0.01）。结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。     

雷帕霉素靶蛋白信号通路的组成及对树突状细胞功能的调节

雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一种进化保守的丝氨酸／苏氨酸激酶,在细胞对生长因子,氨基酸及能量变化等外界信息反应的过程中起到重要作用。树突状细胞（DCs）是专职抗原递呈细胞,可以启动特异性免疫应答。近年来,mTOR对DCs分化、功能调节的研究逐渐增多。有些研究认为,mTOR对DCs的作用是激活性或促进性的．但在另外一些研究中,这种作用是抑制性的。所以,本文对近年来关于mTOR通路对DCs的调节作用作一综述。     

核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究

目的 探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法.方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组.结果 核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟Dc表面分子的表达(P<0.05),且经LPs刺激后(LPS RNAi RelB DC)DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P<0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当.结论 核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法.     

肝癌细胞对人未成熟树突状细胞基因表达谱的影响

目的：检测肝癌细胞微环境对人未成熟树突状细胞（immature dendritic cells,imDCs）基因表达谱的影响。方法：采用免疫磁珠阴性选择从人外周血分离CD14+单核细胞,在体外经粒－巨噬细胞采落刺激因子和白介素４诱导培养分化为imDCs,与Bel 7402肝癌细胞在Transwell中共培养48 h后,抽提imDCs的总RNA,利用人树突状细胞基因芯片检测其基因表达谱的变化。结果：与肝癌细胞共培养后,共有1 531个基因的表达发生改变（与对照组相比,变化表达倍数≥2）,其中上调598个,下调933个,这些基因主要涉及信号转导、免疫应答、细胞黏附等功能。结论：肝癌细胞微环境能够影响imDCs多个基因的表达,这些基因的功能与imDCs的分化、成熟和功能有关,为进一步深入研究肝癌细胞对DCs免疫功能影响的分子机制奠定了基础。     

利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研究

目的 构建靶向小鼠RelB基因的小干扰RNA（siRNA）表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞（DC）的RelB基因最有效的siRNA序列。方法 利用PCR方法构建3个不同位点的表达框,R1／siRNA、R2／siRNA和R3／siRNA分别位于1027、302和1121位点。利用阳离子脂质体AdvantGene转染小鼠骨髓DC,转染24h后,脂多糖（LPS）刺激DC,用RT-PCR和免疫荧光方法检测DCReIB基因表达的变化。结果 经LPS刺激后DC成熟,RelB基因表达显著高于未成熟DC;R1／siRNA和R3／siRNA转染DC后,LPS刺激仍然可以增强RelB基因表达,而R2／siRNA转染DC后,LPS刺激不能增加RelB基因表达。结论 R2／siRNA可有效抑制RelB基因表达,有望用于构建新的耐受性DC应用于临床免疫耐受的诱导。     

未成熟树突状细胞与肝脏移植免疫耐受

肝脏移植免疫耐受具有其独特性,诱导免疫耐受是延长肝移植患者的生存期以及提高生存质量的重要手段。目前,人们通过多种方法诱导肝移植免疫耐受,其中未成熟树突状细胞诱导免疫耐受被普遍认为是一种有效的方法。但供体来源的未成熟树突状细胞在受者体内受刺激因子作用,不可避免的会发育成熟,同时会被宿主体内的同种异体反应被清除,使已经产生的免疫耐受作用消失,而使用受体来源的未成熟树突状细胞则可避免以上不利因素。     

未成熟树突状细胞防治移植排斥反应的研究

未成熟树突状细胞在诱导移植免疫耐受,防治移植排斥反应方面中的作用,已成为目前器官移植领域研究的热点,并且得以充分肯定。在实验动物模型中,利用未成熟树突状细胞诱导特异性免疫耐受,防治移植排斥反应,取得了理想的效果。仅就未成熟树突状细胞的生物学特性、培养、诱导免疫耐受的机制、防治移植排斥反应的研究进行综述。     

CCR7基因修饰未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的研究

目的 研究CCR7基因重组腺病毒体外转染未成熟树突状细胞(imDCs)对小鼠同种异体皮肤移植免疫耐受的影响.方法 小鼠骨髓细胞经梯度离心及rmIL-4、rmGM-CSF诱导培养未成熟树突状细胞;CCR7重组腺病毒经增强离心法转染未成熟树突状细胞;体外观察转染细胞混合淋巴细胞反应;取CCR7修饰imDCs于皮肤移植前2d、移植后第5天,经腹部注入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和病理变化.结果 CCR7基因成功转染入imDCs;腺病毒转染后imDCs刺激T细胞增殖的能力较imDCs组增强但弱于mDCs组,IL-10可以明显降低刺激能力;CCR7腺病毒转染组皮肤存活时间长于转染前,IL-10能显著延长皮肤存活时间.结论 CCR7重组腺病毒转染imDCs后,imDCs刺激T细胞增殖的能力部分增强,皮肤移植物存活时间明显延长.     

DC2.4表面分子与RelB基因表达的关系

目的 探讨DC2.4表面分子表达水平与RelB基因表达间的关系.方法 用RPMI 1640完全培养液培养DC2.4细胞系,光学显微镜观察培养细胞的形态特征;透射电镜观察DC2.4的细胞结构;流式细胞术分析DC2.4的表面标记(MHC-Ⅱ、CD86和CD40);RT-PCR检测DC2.4的RelB表达水平.结果 光镜观察DC2.4细胞表面有明显的树突状突起,形态极不规则;透射电镜显示DC2.4细胞内含许多质地均匀的脂滴,可见吞噬小泡样的结构.流式细胞术显示MHC-Ⅱ类分子和CD40呈低水平表达,而CD86分子却呈高水平表达;RT-PCR结果显示RelB呈低水平表达,与骨髓源性DC中的未成熟状态DC的RelB表达水平接近.结论 DC2.4具有强吞噬功能,其表面CD40分子和细胞内RelB基因均呈低水平表达,提示DC2.4是一种未成熟状态的细胞系.     

树突状细胞表面钙网蛋白的组成性和诱导性表达

目的检测树突状细胞（DC）表面钙网蛋白（CRT）的组成性和诱导性表达,并初步分析细胞表面CRT在DC分化及免疫应答中的作用。方法 AriaⅢ流式分选仪分选出C57 BL/6小鼠脾脏来源的DC,以荧光素标记的CRT多抗和CRT单克隆抗体染色,检测静息态DC表面CRT的组成性表达;静息态DC在体外以脂多糖（LPS）刺激培养24 h后,同样以抗体染色法,流式细胞仪检测培养后DC表面CRT表达量的变化;并检测DC诱导活化前后细胞表面CD86表达量的变化,以确定诱导前后DC的分化状态。结果静息态DC表面能检测到CRT的低水平组成性表达;LPS体外刺激能够有效诱导DC成熟,促使其高表达CRT,商品化CRT多抗和CRT单抗流式检测结果趋势一致,LPS能够诱导DC活化,成熟DC表面CD86的表达量较静息态DC显著提高。结论 CRT表达于静息态及活化态DC细胞表面,在LPS诱导下表达量会明显增加,初步提示在某些疾病状态下,DC细胞膜表面CRT表达量明显提高的状态,可能与其免疫学功能及某些病理状态相关,如抗原提呈、诱导T细胞分化等。     

小鼠骨髓源性树突状细胞和DC2.4中RelB基因表达水平的比较研究

目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bonemarrow-deriveddendriticcells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM-DC,未成熟的BM-DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养。用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达;共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM-DC中呈低水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达;而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P<0.01)。结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关。RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系。DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系。抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。     

肺癌细胞裂解物对树突状细胞的免疫抑制作用

目的:研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞(DC)的免疫抑制作用。方法:反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物,骨髓冲洗提取C57/BL6小鼠DC,GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC,ELISA检测肿瘤细胞裂解物(TCL)中透明质酸(HA)含量,ELISA检测DC培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果:经检测,Lewis肺癌细胞TCL中含有HA,其含量为42 mg/ml。将这种TCL作用于C57/BL6小鼠DC,同对照组相比,DC的IL-12分泌水平显著下降(P<0.01),而IL-10的分泌水平显著提高(P<0.01),这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后,DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平(P>0.05)。结论:Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质,肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC,从而抑制DC的免疫活性。     

间歇性低氧致树突状细胞迁徙能力改变及其通路机制探讨

目的：通过模拟人阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）间歇性低氧（IH）环境,观察其对人外周血来源树突状细胞（DCs）迁徙能力的影响,并通过干预RelB、p38的表达探讨IH致DCs迁徙能力改变的可能通路机制。方法培养前将DCs分为RelB、p38干扰及非干扰质粒组。利用间歇低氧舱设置低氧环境,其中,给氧浓度为0．5％、1．5％、5．0％、10．0％,低氧／再氧合时间比为1∶1、1∶3、1∶5、1∶9,常氧对照组予以持续21．0％氧浓度供应。体外培养结束后蛋白质印迹法检测RelB、p38的表达,侵袭小室检测DCs的迁徙能力。结果相对于常氧,体外IH下DCs整体迁徙能力下降,且DCs迁徙能力与IH环境下平均氧分压水平呈正相关（r＝0．867,P＜0．05）,IH可促进DCs胞内RelB、p38表达,而干预二者表达均未逆转IH下迁徙能力的改变。结论体外IH可导致DCs迁徙能力下降,且可能与RelB、p38激活无关。     

糖尿病肾病患者外周血单核细胞向树突状细胞分化能力的研究

目的通过对糖尿病肾病患者外周血单核细胞向树突状细胞（DC）分化的能力的研究。探讨糖尿病肾病外周血DC亚群的状况及其活性，为监测、调节患者机体免疫状态及评估替代治疗的疗效提供新方法。方法男性糖尿病患者76例，其中合并肾病患者39例，女性糖尿病患者38例，其中合并肾病患者17例，采用干化学法将其分成正常蛋白尿组（尿蛋白阴性），微量蛋白尿组（30mg／dL〈尿蛋白≤100mg／dL），大量白蛋白尿组（尿蛋白〉100mg／dL），男、女性正常对照组各30例。取外周静脉血以生化分析法测空服血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、体重指数（BMI）、以流式细胞仪检测单核细胞表面标志表达。混合淋巴细胞反应评价细胞的抗原递呈能力。结果糖尿病正常蛋白尿组外周血单核细胞向DC分化。分化成的DC表达CD1a．CD11c、CD40与正常人差异无显著性（P〉0．05）。糖尿病微量蛋白尿组和大量蛋白尿组外周血单核细胞分化成的DC表达CD1a、CD11c和CD40显著低于正常人（P〈0．01），但表达CD123明显增高；分化成的DC分泌IFN—α明显增多，而分泌IL-12明显减少。结论糖尿病无合并肾病患者外周血单核细胞向DC分化的能力接近正常人；糖尿病肾病患者外周血单核细胞向DC分化的能力显著低于正常人，分化而成的DC能递呈抗原。但亚群比例失调。     

树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用

目的 以多柔比星诱导肾纤维化大鼠为对象,探讨树突状细胞(DC)在慢性肾纤维化启动过程中的作用.方法 52只大鼠随机分为:对照组(n=20)、模型组(n=32).于第1、2周第1天给予多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射建立肾纤维化模型,对照组给予等量生理盐水,首次给药后第4、7、10、13周末收集血、尿标本,测定血甘油...