蛋白免疫印迹法试验结果与HIV感染关系的探讨

目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察，确定个体是否感染HIV以及HIV感染状况。方法对50份抗-HIV初筛阳性血清使用WB法进行确认实验。结果在被检测样品中，HIV-1型确认试验阳性45例，占90％；HIV-1型确认试验阳性，且提示HIV-2阳性感染1例，占2％；HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)2例，占4％；HIV-1型确认试验阴性2例，占4％。结论WB法试验为确定个体有无HIV感染以及HIV感染状况提供依据。     

HIV-2检测方法学进展

实验室检测是HIV感染的诊断、监测和血液筛查的常规方法，是艾滋病早期诊断的主要依据。HIV分为HIV-1和HIV-2，HIV-1广泛分布全球各地，是造成全球艾滋病流行的主要原因，HIV-2主要分布于非洲西部，流行较为局限。我国从1998年陆续有HIV-2感染的报道，多为散发病例，绝大部分都是HIV-1/HIV-2混合感染。目前我国针对HIV-2检测的关注较少，国产可区分HIV-2的检测试剂也没有注册上市。目前HIV-2的检测方法主要是抗体检测和核酸检测，通过快速检测等方法进行初筛检测，免疫印迹试验（WB）和条带免疫试验（LIA）进行确认，依据HIV抗体检测结果确定是否感染HIV-2。随着分子生物学技术的飞速发展，核酸检测实验室诊断方法取得了很大进展。     

免疫印迹试验确证后出现HIV-2指示带的样品分析

目的分析HIV(1+2型)抗体免疫印迹试验(Western Blot,WB) HIV-2指示带出现的原因,了解本市HIV-2的感染状况。方法用可区分HIV-1HIV-2感染的recomLine HIV-1HIV-2 IgG确证试剂(条带免疫法,SIA),对WB法确证后出现HIV-2指示带的37份样品进行鉴别诊断,并结合流行病学资料对检测结果进行分析。结果 37份样品用WB法全部判HIV-1抗体阳性且提示HIV-2阳性,用SIA法分型均为HIV-1型,37人均未出入过HIV-2流行地区,也无HIV-2接触史。结论 37份出现HIV-2指示带的样品均为非特异性的交叉反应,泉州市目前未出现HIV-2感染病例。     

HIV抗体初筛阳性样本三种初筛试剂复检与确认试验结果的对比分析

目的评价三种不同原理初筛试剂检测艾滋病病毒(HIV)抗体的可靠性,探讨HIV抗体初筛试验阳性结果与确认试验结果之间的关系及一般规律.方法67份初筛为HIV抗体阳性的样本,用三种不同原理的初筛试剂复检,并进一步用蛋白印迹试验(WB)确认.结果67份样本中,有44份三种初筛检测均为阳性,WB确认为HIV抗体阳性;有1份三种初筛检测为阳性,(WB)确认试验为不确定;有2份三种初筛检测为阳性,WB确认试验为阴性;有2份二种初筛试验为阳性,WB试验为阴性;有3份一种初筛试验为阳性,WB试验为不确定.其余15份均为一种初筛试验阳性,WB试验阴性.结论三种不同原理的初筛试剂联合检测HIV抗体与WB确认检测具有一定的相关性,在对个体进行诊断时,为慎重起见,必须经WB法确认.     

163 份 HIV-1 抗体蛋白印迹试验带型分析

用NOVAPATHTMHIV-1 IMMUNOBLOT试剂盒(美国伯乐公司产品)对163分HIV-1抗体初筛阳性标本做确认试验,WB确认试验结果:阳性131份,占80.37%;可疑4份,占2.45%;阴性28份,占17.18%,可见HIV～1抗体初筛阳性标本仍有不少是假阳性.135份WB确认试验阳性标本中(包括4份可疑阳性标本),大多数标本呈现的带型与阳性对照带型相同,但亦有缺env或pol带,美国Bio-Red试剂盒完整的WB带型共有10条,我们所确认的135份阳性标本中,多数呈现8-10条带,占91.11%,5-7条带的较少,只占5.93%,在4份可疑阳性标中,呈现的带型明显减少.其中有1份只出现两条带型.同时,我们对WB确认试验出现的带型情况及诊断标准进行了初步的分析.     

血清HIV抗体筛查阳性与免疫蛋白印迹试验结果对比分析

目的对比分析血清HIV抗体筛查试验阳性与免疫印迹试验(WB)结果之间的关系,为艾滋病诊断和提高检测技术水平提供依据。方法按照《全国艾滋病检测技术规范》(2009年版)[1]要求,对HIV抗体初筛阳性血清进行复检,复检阳性的血清采用免疫印迹试验进行确证。结果对2010-2011年共270份初筛阳性血清进行复检,复检后249份HIV抗体阳性血清经WB法确证,217份为HIV-1型抗体阳性(87.15%),15份为不确定(6.02%),17份阴性(6.83%)。复检结果 1≤S/CO<6、6≤S/CO<10和S/CO≥10与WB确证试验阳性符合率分别为51.28%、86.25%和98.46%。确证为HIV-1型抗体阳性的血清,gp 160、gp 120、gp 41、p 66、p 51、p 24出现频率都在93%以上。结论筛查试验存在假阳性结果,HIV抗体结果的报告必需以确证结果为准。随着S/CO值的增高,与确证试验的阳性符合率也升高,但WB确证试验存在不确定结果,也有一定的缺陷。     

垂直流免疫印迹法检测尿液HIV-1抗体的技术研究

目的 利用垂直流技术的快速性与免疫印迹法(WB)检测的精确性,建立垂直流免疫印迹检测技术(VWB),探讨其在检测尿液HIV-1抗体的临床意义.方法 通过SDS-PAGE电泳和电转,将HIV-1抗原包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上,然后将膜黏合于自制反应槽的底部,并与真空抽滤系统结合构成垂直流免疫印迹法检测装置.利用该装置对临床样本(12例HIV-1抗体阳性尿液样本,10例HIV-1抗体阴性尿液样本)进行检测,并与传统WB法的检测结果相比较.结果 VWB法检测尿液样本阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,主要抗原蛋白带符合率高于WB法检测尿液样本.结论 VWB法检测尿液样本的结果与WB法检测血清样本的结果基本一致,是HIV-1感染确认检测方法的又一补充技术.     

艾滋病筛检人群HIV-1抗体确证阳性率分析

【目的】对人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查有反应样本与HIV-1抗体确证阳性结果进行对比分析,探讨筛查检测与确证检测结果的符合性。【方法】根据中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》(2015版),对2017年12月—2018年12月上海市宝山区289份酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫渗透/层析试验HIV筛查有反应标本(其中ELISA试验286份,免疫渗透/层析试验276份)和70份化学发光法筛查有反应,但ELISA、免疫渗透/层析试验均为阴性标本,采用免疫蛋白印迹试验(WB)进行确证,并对筛查和确证结果进行对比分析。【结果】经WB确证试验显示,289份ELISA、免疫渗透/层析试验初筛有反应样品中,HIV-1抗体阳性245份(84.78%),不确定34份(11.76%),阴性10份(3.46%)。ELISA、免疫渗透/层析试验与WB确证试验结果的符合率分别为85.66%(245/286)和88.77%(245/276),二者差异无统计学意义(χ~2=1.211,P=0.271)。WB确证试验HIV-1抗体阳性、不确定及阴性的平均S/c.o值分别为(24.66±1.37)、(20.15±8.06)和(7.96±8.40),三组间差异有统计学意义(F=137.96,P=0.000)。289份筛查有反应样本中,9份样本的S/c.o值在1～6之间,确证阳性1份,阳性符合率为11.11%;3份样本的S/c.o值7～10之间,确证阳性2份,阳性符合率为66.67%;277份样本的S/c.o值均大于10,确证阳性242份,阳性符合率为87.36%。HIV-1抗体确证阳性的样本中,gp160、gp120、gp41、p66、p24条带同时出现的概率为95%。70份化学发光法HIV筛查有反应,ELISA、免疫渗透/层析试验阴性标本中,WB确证结果阴性无条带36份,占51.43%(36/70),出现1条带27份,占38.57%(27/70),出现2条带7份,占10%(7/70)。【结论】HIV筛查采用敏感性、特异性高的试剂,即抗原抗体同时检测,即可减少感染早期漏检,也可提高与确证结果的符合性。筛查试验因样本或某些疾病的影响,存在假阳性可能,必须以抗体确证或核酸补充试验结果为准。HIV抗体确证试验,因其检测的抗体出现较晚,对早期感染者存在漏检风险,建议对初筛有反应S/c.o值较低(1～6之间),抗体确证试验阴性或不确定者,以及化学发光法HIV筛查有反应,ELISA、免疫渗透/层析试验阴性者,采用核酸补充试验检测或结合流行病学资料进行进一步随访。     

HIV抗体筛查与免疫印迹确证结果一致性分析

目的通过对HIV抗体筛查(ELISA)阳性标本进行免疫印迹确证试验(WB),分析两者之间的关系。方法对初筛阳性血清用胶体硒和ELISA试验复检,任一复检试验阳性的血清再用WB试验确认。结果 236份初筛阳性血清经复检后,有228份为阳性。复检阳性样本经WB确认后,有163份为HIV-l抗体阳性,有24份不确定,41份为阴性。以WB结果为标准,ELISA、胶体硒法的阳性符合率分别为71.71%和86.70%。ELISA的敏感性为100%,特异性为43.36%;胶体硒法的敏感性为94.76%,特异性为66.22%。结论胶体硒和ELISA复检可排除大部分初筛假阳性,但两种复检试验均存在一定的假阳性;三种试验的不符情况仅出现在HIV抗体阴性和不确定组;确定HIV感染依赖于WB确认试验。     

2620份HIV-1抗体阳性标本蛋白印迹条带分析

目的 分析HIV-1抗体阳性蛋白印迹带型,了解红河州艾滋病感染者的带型分布特征.方法 对某实验室2008、2009年经蛋白印迹试验检测为HIV-1抗体阳性标本的带型进行统计分析.结果 2620份HIV-1抗体阳性蛋白印迹带型中全带的有40.61％ (1064/2 620)、次全带有35.46％ (929/2620)、13.86％ (363/2620),各WB条带的阳性检出率为:抗env(外膜蛋白)最高gp160为100％ (2 620/2 620)、gp120为100％ (2620/2620)、gp41为98.32％ (2576/2620),其次是抗pol(逆转录酶蛋白)p66为98.21％ (2573/2620)、p51为96.87％ (2538/2620)、p31为94.96％ (2410/2620),抗gag(核心蛋白)除p24为99.65％ (2611/2620)外,其他条带检出率都较低p55为48.02％ (1258/2620)、p39为44.77％ (1173/2620)、p17为77.44％ (2029/2620).不同感染途径和不同年龄组比较p31、p55、p39、p17检出率的差异有统计学意义;不同性别比较p55、p39检出率的差异有统计学意义.结论 红河州HIV-1抗体阳性标本抗体蛋白印迹条带检出率与其他地区的报道有差异,其原因有待进一步研究和探讨.     

我国人类免疫缺陷病毒2型感染的初步回顾性血清学调查

[目的]初步了解我国人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）的感染状况。[方法]用多种HIV抗体确认方法检测来自全国各地的HIV-2可疑血浆/血清样品,用Genelabs HIV Blot2.2WB检测5份已知HIV-2血浆样品。[结果]用Genelabs HIV Blot2.2WB检测54份HIV-2可疑样品,全部呈HIV-1抗体阳性反应且有HIV-2指示带;用HIV-2WB试剂检测,44.4%（24/54）呈HIV-2抗体阳性反应、55.6%（30/54）呈不确定反应;用2种线性免疫试验检测,分别只有3.7%（2/54）和1.9%（1/54）判定为HIV-1/2混合感染,绝大部分仅为HIV-1抗体阳性。对于5份已知HIV-2样品,使用Genelabs HIV Blot2.2WB检测时与HIV-1抗原发生不同程度的交叉反应,但带型明显不同于HIV-1样品。[结论]结果提示我国的HIV-2感染很少见,现有的HIV-2WB不宜用于检测HIV-1抗体呈阳性反应的样品。     

Evaluation of four rapid tests for diagnosis and differentiation of HIV-1 and HIV-2 infections in Guinea-Conakry, West Africa

With both HIV-1 and HV-2 prevalent in Guinea-Conakry, accurate diagnosis and differentiation is crucial for treatment purposes. Thus, four rapid HIV tests were evaluated for their HIV-1 and HIV-2 diagnostic and discriminative capacity for use in Guinea-Conakry. These included SD Bioline HIV 1/2 3.0 (Standard Diagnostics Inc.), Genie II HIV1/HIV2 (Bio-Rad), First Response HIV Card Test 1-2.0 (PMC Medical) and Immunoflow HIV1-HIV2 (Core Diagnostics). Results were compared with gold standard tests (INNO-LIA HIV-I/II Score) and NEW LAV BLOT II (Bio-Rad). Four hundred and forty three sequential stored HIV-positive serum samples, of known HIV-type, were evaluated. Genie II HIV1/HIV2, Immunoflow HIV1-HIV2 and SD Bioline HIV 1/2 3.0 had 100% sensitivity (95% CI, 98.9-100%) while for First Response HIV Card Test 1-2.0 this was 99.5% (95% CI, 98.2%-99.9%). In terms of discriminatory capacity, Genie II HIV1/HIV2 identified 382/ 384(99.5%) HIV-1 samples, 49/ 52(95%) HIV-2 and 7/7(100%) HIV-positive untypable samples. Immunoflow HIV1-HIV2 identified 99% HIV-1, 67% HIV-2 and all HIV-positive untypable samples. First Response HIV Card Test 1-2.0 identified 94% HIV-1, 64% HIV-2 and 57% HIV-positive untypable samples. SD-Bioline HIV 1/2 3.0 was the worst overall performer identifying 65% HIV-1, 69% HIV-2 and all HIV-positive untypable samples.The use of SD Bioline HIV 1/2 3.0 (the current standard in Guinea-Conakry) as a discriminatory HIV test is poor and may be best replaced by Immunoflow HIV1-HIV2.     

2012 - 2017年武汉市HIV抗体确证检测结果分析

目的 对2012 - 2017年武汉市HIV初筛阳性样本的检测结果进行分析,了解武汉市HIV抗体确证情况。方法 依据《全国艾滋病检测技术规范（2009年版、2015年修订版）》对各筛查机构HIV筛查阳性反应的样本进行酶联免疫复核和免疫印迹确证试验。结果 2012 - 2017年武汉市艾滋病确证实验室共收到11 749份初筛阳性样本,经复核和确证试验,7 433份（63.26%）诊断为HIV - 1抗体阳性,3 780份（32.17%）为HIV - 1抗体阴性,536份（4.56%）为HIV - 1抗体不确定。阳性病例最多的年龄段为16 ～30岁。536例不确定样本中有156例（30.41%）进行了随访,120例（76.92%）确证为阳性,13例（8.33%）确证为阴性,23例（14.74%）仍为不确定。结论 2012 - 2017年武汉市HIV - 1抗体阳性数增长趋势明显,应进一步加强急性期和不确定结果病人的管理,做到早发现、早治疗。     

广东省1991～1995年HIV－1抗体确认试验结果分析

１９９１年到１９９５年，广东省艾滋病监测检验中心共确认ＨＩＶ－１抗体初筛阳性及可疑样本１０３份，蛋白印迹（ＷＢ）试验结果１０３份样本中，阳性７０份（６７．９６％），可疑８份（７．７７％），阴性２５份（２４．２７％）。７０份阳性样本呈现的带型与阳性对照带型相同的有２９份，只缺Ｐ１５带的有１２份，只缺Ｐ１８、Ｐ１５带的有９份，其余的２０份缺失的带各不相同．但１００％的阳性样本都呈现ｇｐ１６０带，９７．１４％呈现Ｐ２４带，９８．５７％ＨＩＶ－１阳性样本ＷＢ带型中至少都有ｅｎｖ、ｇａｇ、ｐｏｌ带各一种，按我国诊断标准，结果容易判断．     

2013-2017年厦门市HIV抗体蛋白印迹实验检测结果分析

目的 了解2013-2017年厦门市HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证结果,为艾滋病防治工作提供数据支持。方法 对初筛阳性的标本,用北京万泰抗原抗体酶联免疫吸附试剂盒以及雅培公司HIV抗体快速诊断试剂盒（胶体硒法）,进行复检,其中任何一种试剂检测结果呈阳性反应即使用MP生物亚太公司的HIV-1/2 blot确证试剂盒（WB法）进行确证检测。结果 2873例WB实验,确证HIV-1抗体阳性2344例（81.6%）,HIV抗体不确定202例（7.1%）,HIV抗体阴性为327例（11.4%）。在HIV-1抗体阳性样本中,WB检测反应条带gp160、gp120和gp41的出现率最高,均为100%（2344/2344）,条带p55以及p17出现的概率较低,分别为38.7%（907/2344）和46.4%（1088/2344）。完成随访的202例样本中,env类和gag类带型的阳转率分别为95%（96/101）和18.5%（5/27）。结论 在检测过程中不可避免的会假阳性结果,必须通过WB实验确认是否为HIV抗体阳性;要加强对不确定样本的随访。     

湖南省首次诊断2例非输入性HIV-2感染病例与流行病学个案调查

目的 对湖南省首次发现的2例本地HIV-2感染病例进行诊断与流行病学个案调查。方法 2017年3-11月在湖南省长沙市对2例免疫印迹法检测为"HIV抗体不确定"并有HIV-2特异性条带的疑似感染病例,采集血样开展HIV血清学检测、核酸检测和基因测序,并进行流行病学个案调查。结果 2例病例的HIV-1和HIV-2（HIV 1+2）抗体确证试剂盒结果均为"HIV-2抗体阳性"。对HIV-2 gag区扩增测序并用基本局部匹配查询工具（basic local alignment search tool,BLAST）比对,发现与已报道的HIV-2毒株相似度达到98%,表明其体内存在HIV-2特异性片段。2例均为HIV-2感染。流行病学调查结果显示2例病例彼此有密切性接触,无国外性接触史,感染源头不明。结论 国内未见HIV-2非输入性感染病例报告,该疫情的首次出现将会对我国艾滋病的预防、诊断和治疗提出严峻的挑战。     

龙岩市119例HIV抗体筛查阳性标本的确证结果分析

[目的]了解HIV抗体艾滋病筛查阳性结果与确证结果之间的关系。[方法]采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、硒标免疫层析法(Determine)进行HIV抗体筛查,免疫印迹法(WB)对筛查阳性标本进行确证,对筛查结果与确证结果进行比较分析。[结果]119例HIV抗体筛查阳性标本,确证HIV-1抗体81份(占68.07%);确证HIV抗体阴性24份(占20.17%);HIV抗体不确定14份(占11.76%)。ELISA和硒标或金标的结果均阳性者,81份HIV抗体确证阳性标本为100%,24份确证HIV抗体阴性者为4.17%,14份HIV抗体不确定者为35.71%。ELISA方法S/CO值>6者,HIV抗体确证阳性标本占98.76%;反应条带gp160、gp120、gp41出现率最高,为100%。[结论]两种筛查方法结果均阳性且S/CO值高时,预示HIV-1抗体阳性的可能性大,而筛查结果一阴一阳且S/CO值较低时,HIV抗体阴性及不确定的可能性较大,筛查试验有假阳性反应。     

162例HIV-1抗体阳性血清WB带型分析

通过对本实验室１９９６－１９９８年间以ＷＢ法确认的１６２例ＨＩＶ－１抗体阳性血清ＷＢ带型分析，表明ＨＩＶ早期感染带型占确认阳性数的比例呈增长趋势，提示相关的传播途径并未得到完全有效控制；随着ＡＩＤＳ期带型所占比例的增加，预示着我省ＨＩＶ感染者逐步进入临床发病期，必须引起重视。     

WB条带重复使用检测HIV抗体的探索

[目的]在确保检测质量的前提下,探索蛋白印迹（WB）确认实验阴性对照和阴性样本条带重复使用的可能性,以降低使用HW抗体确认试剂的成本。[方法]严格按照《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）的要求和Genelabs公司生产的HW1＋2型（HIV BLOT2．2）抗体免疫印迹试剂盒提供的使用说明进行试验。用新试剂和已使用过的阴性对照和阴性样本的WB条带分别对8份阴性样本、12份卫生部艾滋病参比实验室提供的HIV抗体阳性样本和20份HW抗体阳性样本进行HIV抗体确认试验,用该试剂盒提供的弱阳性质控样品对试验样本进行5次重复比对实验。[结果]使用过的WB条带与未使用过的WB条带进行HIV抗体确认试验,结果是一致的。[结论]该方法一旦在全国近200家HW抗体确认实验室推广使用,假设每个实验室每周进行1次确认实验,每年将可以为国家节约HIV抗体确认试剂费近200万元人民币。