PGE1对成人心脏手术中心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨成人心脏手术后白介素—6(IL—6)、白介素—8(IL—8)的变化及前列腺素E1(PGE1)对其的影响。方法:2002年1月～2002年12月,16例成人心脏手术中,男10例,女6例。随机分成两组,PGE1组8人和对照组8人,PGE1从手术开始应用到研究结束,剂量每分钟0.02～0.05μg/kg。分别在术前、体外循环(CPB)开始前、阻升主后60min、开升主后60min、开升主后120min、开升主后180min取颈静脉血,检测IL—6、IL—8的变化。结果:两组中IL—6、IL—8的水平在术前、CPB前、阻升主后60min三者之间无明显差异。但在开放循环后60min,120min,180min,IL—6、IL—8的水平明显高于术前(P<0.01)。然而接受PGE1组病人在开放循环后60min、120min、180min,IL—6、IL—8增高的程度明显低于对照组病人(P<0.01)。结论:IL—6和IL—8参与心肌缺血再灌注损伤。PGE1能减少IL—6和IL—8的产生,因此,PGE1对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,在临床上具有实际意义。     

脊髓缺血再灌注损伤时间窗及其行为学的实验研究

目的 :探讨发生脊髓缺血再灌注损伤的时间窗 ,为临床预防和治疗提供最佳时机。方法 :通过兔腹主动脉夹闭法造成脊髓缺血。 5 6只新西兰大白兔随机分为对照组、2 0min、 2 5 min、2 7min、30 min、40 min和 60 min组 ,采用 Jacobs法对白兔后肢功能评级 ,Reuter法对脊髓感觉运动反射功能评分。结果 :再灌注 7d后 ,2 0 min家兔家兔无 1例发生瘫痪 ;缺血 2 5 min部分瘫痪 ( 1 /8) ;缺血 2 7min白兔出现迟发性瘫痪 ( 8/8) ;缺血 30 min、缺血40 min、60 min家兔全部 ( 2 4 /2 4 )发生瘫痪。结论 :缺血时间越长 ,脊髓损伤症状越重 ;脊髓缺血 2 7min再灌注后会出现迟发性损伤。     

脂多糖对大鼠中性粒细胞基质金属蛋白酶-8 mRNA表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对体外培养大鼠中性粒细胞表达MMP-8 mRNA的影响.方法:抽取大鼠外周血,分离培养中性粒细胞,随机分为5组,前4组(实验组)加入1 mg/L LPS分别孵育30 min、60 min、90 min和120 min,第5组加入等体积1 mg/L PBS作为对照组,采用RT-PCR法检测MMP-8 mRNA的表达.结果:对照组中MMP-8 mRNA的表达水平较低,LPS刺激后各组表达均升高(P<0.05或0.01),90 min组MMP-8 mRNA的表达水平最高.结论:LPS可以刺激大鼠中性粒细胞表达MMP-8 mRNA.     

不同时长的静态进展性牵伸对大鼠创伤性膝关节挛缩的治疗效果及其机制研究

  目的  探讨不同时长的静态进展性牵伸治疗大鼠创伤性膝关节挛缩的效果及机制。  方法  选取雄性Wistar大鼠70只,随机分为手术造模组50只,空白对照组（不造模,不治疗）10只和单纯创伤未制动组（造成创伤不加克氏针固定,不治疗）10只。手术造模组50只建立膝关节挛缩模型,再随机分为静态进展性牵伸治疗20 min组（S20 min）,治疗30 min组（S30 min）,治疗40 min组（S40 min）,非牵伸组（造模后只麻醉,不牵伸）以及模型对照组（造模后即刻处死,只用于病理染色和蛋白检测）共5组,每组各10只。牵伸治疗周期为隔天一次,牵伸治疗8次,共16 d。于治疗0 d、8 d、16 d测量各组关节活动度（ROM）、步态分析,于治疗16 d后处死大鼠,取膝关节后囊组织进行HE及Masson染色,比较组织病理变化,Western blot检测转化生长因子（TGF）-β1与白介素（IL）-6的表达。  结果  ① ROM:S30 min组治疗8 d时,ROM恢复与S20 min、S40 min组相当（P>0.05）,治疗16 d时则恢复最佳（P<0.05）;治疗8 d、16 d时,S20 min、S30 min、S40 min组ROM均较0 d改善（P<0.01）。② 步态分析:S30 min组治疗8 d和16 d时支撑相改善最佳（P<0.05）,且均较0 d改善（P<0.05）。S30 min组治疗8 d时和S40 min组步幅改善相似（P>0.05）,治疗16 d时和S20 min、S40 min步幅改善相似（P>0.05）;S30 min组治疗8 d时步幅较0 d有明显改善（P<0.05）,16 d时改善不明显。治疗8 d和16 d时,S30 min组摆动相恢复最佳（P<0.05）,治疗8 d较0 d改善不明显,治疗16 d时摆动相较0 d有改善（P<0.05）。S30 min组治疗8 d时摆动速度与S20 min组、S40 min组、非牵伸组差异无统计学意义（P>0.05）,治疗16 d摆动速度改善优于其他3个治疗组（P<0.05）;治疗8 d、16 d时S30 min组摆动速度较0 d有改善（P<0.05）。③ HE染色及Masson染色:治疗16 d后,S30 min组关节囊纤维组织增生及炎症改善最明显。④ Western blot检测:治疗16 d后,S30 min组TGF-β1和IL-6的蛋白表达低于S20 min组、S40 min组、非牵伸组,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  静态进展性牵伸治疗30 min对大鼠创伤性膝关节挛缩改善最明显,其机制为降低TGF-β1与IL-6的表达,减轻关节粘连和炎症反应,重塑关节囊结构,抑制关节囊纤维化,缓解疼痛,提高关节活动功能。     

提高吸氧浓度对减轻腹腔镜肾癌根治术后颈肩痛的影响

目的比较不同吸氧浓度对改善二氧化碳气腹腹腔镜肾癌根治术后颈肩部疼痛的影响。方法 60例肾癌根治术患者,随机分为2L/min组(A组),4L/min组(B组),6L/min组(C组),8L/min组(D组)。在腹腔镜肾癌根治术后持续吸氧32h,检测4组间腹腔镜肾癌根治术后2h、4h、8h、16h和32h颈肩部疼痛发生率和疼痛程度。结果在时间为2h、4h、8h、16h时,4L/min组较2L/min组疼痛程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);6L/min组和8L/min组较2L/min组疼痛程度下降,差异有统计学意义(P<0.05),与4L/min组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在32h时,四组间颈肩部疼痛程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论中流量吸氧能降低腹腔镜肾癌根治术后颈肩部疼痛的发生率,改善腹腔镜肾癌根治术后颈肩部疼痛程度。     

面神经夹闭建立大鼠面瘫模型

目的 建立操作简便、发病率高、死亡率低的大鼠面瘫模型制作方法.方法 SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分别用蚊式钳闭合三齿夹闭大鼠右侧耳后面神经主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min,记录各组大鼠面神经复合动作电位(CMAP)波幅变化情况,观察大鼠的一般行为学指标.结果 造模6 min、8 min与造模之前比较,面神经CMAP波幅无差异,造模10 min、12 min、14 min与造模之前相比较,大鼠面神经CMAP波幅明显减小并趋于0;行为学评分结果表明,造模6 min、8 min大鼠为不完全面瘫,造模10 min、12 min、14 min大鼠完全面瘫,造模12 min、14 min大鼠与造模10 min相比无显著差异.结论 用蚊式钳闭合三齿夹闭面神经主干10 min,面神经CMAP下降波幅和行为学评分均表明大鼠完全面瘫,故该方法可作为大鼠面瘫模型建立的优选方法.     

从曲霉EF8培养物制取免疫增强剂

一种免疫增强剂含有产生分裂素的曲霉EF8的培养物。方法是将曲霉EF8培养于含牛奶培养基(脱脂牛奶8％,酵母提取物为0.3％和葡萄糖1.0％),培养72h,6000r/min离心20min,收集上清液,除去蛋白质,进行吸附层析或凝胶过滤层析。     

离心速度及时间对培养细胞透射电镜样品制备的影响

目的:探讨消化离心法中不同的离心条件对培养细胞超微结构的影响,寻找最佳的离心速度及时间.方法:将培养细胞消化后分成不同的离心速度和时间组,电镜下比较各组细胞超微形态的变化.结果:当离心速度低于800 r/min,8min时,无法收集到足够的细胞量.离心速度2 000 r/min,15 min时细胞挤压变形,胞浆出现撕裂等人工假象.离心速度在800～1 500r/rain,8～15min时制样较容易,细胞超微结构保存良好.结论:消化离心法制备培养细胞透射电镜样品,其最佳的离心速度和时间是800～1 500r/min,8～15min.     

输注氨基酸治疗术后低体温寒战的随机双盲对照临床研究

 目的  探讨静脉输注18-氨基酸治疗术后低体温寒战的最佳剂量。方法  选择麻醉恢复室中发生寒战2级或2级以上持续3 min且鼓膜温度<36 ℃、在硬膜外复合全麻下行胃肠道肿瘤手术的患者80例,ASAⅠ~Ⅱ级,年龄18~65岁,随机分为4组(n=20):D2~8组分别以2、4、6、8 mL·kg-1·h-1的速率输注18-氨基酸注射液,记录寒战发生时及输注氨基酸后每5 min间隔的寒战等级、鼓膜温度和热舒适度评分;记录寒战持续时间和鼓膜温度升高值;记录氨基酸输注开始时和输注60 min后的血糖和血乳酸浓度以及输注过程中恶心、呕吐和再次寒战的发生情况。结果  D2~8组寒战(3/2级)人数分别为14/6、15/5、16/4和15/5,D2~8组输注氨基酸60 min后,鼓膜温度分别升高1.51、1.57、1.91和2.13 ℃,热舒适度评分分别达50.8、53.3、58.4和61.5,4组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。D2~8组寒战持续时间分别为28、27、24.5和23 min,与D2组相比,D8组寒战持续时间显著缩短(P<0.05),其余各组比较差异无统计学意义。与0 min相比,D2~8组在10 min后寒战等级降低,鼓膜温度显著升高(P<0.05),热舒适度评分显著升高(P<0.05);25 min后寒战人数显著减少(P<0.05);60 min血糖浓度显著升高(P<0.05)。D6和D8组输注60 min后血乳酸浓度显著降低(P<0.05)。4组间恶心、呕吐和再次寒战的发生率无差异。 结论  静脉输注18-氨基酸2~8 mL·kg-1·h-1能剂量依赖性改善低体温,提高热舒适度,但治疗3级寒战患者的效果并不理想。     

大黄对多发性创伤兔血中细胞因子变化的影响

目的观察多发性创伤兔血中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6、8（IL-6、8）变化及探讨大黄的治疗和保护作用。方法清洁级大白兔18只,复制多发性创伤兔的模型,随机分为三组：治疗组（常规治疗＋大黄治疗6只）,对照组（常规治疗＋安慰剂治疗6只）,正常组（6只）。大黄治疗组和对照组分别在创伤前0min及创伤后30min、60min、120min、240min、480min时间点采血测定血浆TNF-α、IL-6、8的水平,正常组记录相应时间点测TNF-α、IL-6、8的水平。结果治疗组和对照组多发性创伤后TNF-α、IL-6、IL-8的水平逐渐升高比正常组的相同时间点有差异（P〈0.05）,治疗组与对照组创伤后4h水平有差异（P〈0.05）,创伤后8h有显著差异（P〈0.01）;而治疗组其升高程度显著低于对照组（P〈0.01）。结论THF-α、IL-6及IL-8参与了多发性创伤后的病理生理过程,应用大黄可降低血浆中TNF-α、IL-6及IL-8的水平,明显减轻机体的全身炎症反应程度。     

高热导致胚胎骨骼系统畸形的动物实验研究

本实验通过将孕第八天的小白鼠置于 43～43.5℃水浴中2次,分别为 9 min和 8min,间隔6 h,于争第18天处死孕鼠,发现高热除导致胚胎外观畸形外,还可导致胚胎骨骼系统的生长骨化不全及畸形。     

建立离体胰岛灌流系统用于评估胰岛素第一时相分泌功能

目的 建立一套稳定可靠的离体胰岛灌流系统,用于对从动物模型中分离出胰岛的胰岛素第一时相分泌功能的评估.方法 建立离体胰岛灌流系统硬件设备,包括灌流架、输入管道系统、胰岛舱、输出管道系统、恒温水浴系统、微量泵输注系统,共同构成完整的灌流系统.分离胰岛后置于Hank's平衡液,二氧化碳孵箱38℃孵育1 h,将胰岛按每组50个分组.将离体胰岛灌流系统置于37℃水浴,并将微最泵输注系统与其连接.将预先配置好的含2.8 mmol/L葡萄糖的Kerbs-Ringer 碳酸氢盐(ICRB)溶液充填至整个管道系统,在层析柱中加入100μl预先配置好的葡聚糖凝胶,然后将每组50个胰岛转移至层析柱,再加入100μl葡聚糖凝胶.将整个管道系统全部浸入水浴.开始2.8 mmol/L KRB 0.5 ml/h速度灌流1 h,后换为16.7 mmol/L KRB 1 ml/h,以开始16.7 mmol/L KRB灌流为0时间点,在灌流前30、20、10 min、灌流后0、20、40、60、80、100 8和2、3、4、5、7、8、9、10、15、20、25、30 min收集灌流出的液体,-80℃保存后测定胰岛素,根据胰岛素浓度绘制胰岛素第一时相分泌曲线.使用此灌流系统分别对8周龄的db/m和db/db小鼠的胰岛素第一时相分泌进行评估.结果 成功建立离体胰岛灌流系统,并绘制胰岛素第一时相分泌曲线.db/m小鼠离体胰岛在高糖刺激1～2 min时出现最高峰值,达基础水平的7倍左右;而糖尿病db/db小鼠的第一时相分泌显著受损,在整个30 min期间胰岛素浓度仅有轻微上升,是基础值的2.6倍.结论 成功建立的离体胰岛灌流系统,可广泛用于评价离体胰岛的胰岛素第一时相分泌.     

L-赖氨酸锌和牛磺酸对高热致畸拮抗作用的实验研究

目的　探讨L 赖氨酸锌、牛磺酸对小鼠胚胎高热损伤的保护作用。方法　选择 8日孕龄Swiss小鼠 87只 ,置于 4 2 5～ 4 3 0℃水浴中 9min ,6h后再水浴 8min。 30只孕鼠于孕 9日灌服L 赖氨酸锌 ,剂量为 2 0 0mg/kg ,2 7只孕鼠灌服牛磺酸剂量为 30 0mg/kg。于孕 18日处死。计算畸胎、死胎、吸收胎率 ,并分别测量体重、身长及尾长。结果　L 赖氨酸锌组与牛磺酸组畸胎率分别为 1 1%和1 2 % ,高热组为 5 4 % ,与前两组比较P <0 0 1。前两组死胎率分别为 1 0 %和 1 5 % ,高热组为3 5 % ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的吸收胎率均为 5 6 % ,高热组为 14 3% ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的平均体重分别为 1370mg± 180mg和 1380mg± 190mg ,明显重于高热组 12 80± 2 4 0mg(P <0 0 1)。前 2组鼠的身长分别为 2 8 1mm± 1 9mm和 2 8 0mm± 2 1mm ,高热组为 2 6 7mm±2 2mm ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的尾长分别为 12 2mm± 1 3mm和 12 2mm± 1 9mm ,高热组为 11 6mm± 1 5mm ,与前两组比较P <0 0 1。结论　L 赖氨酸锌、牛磺酸可明显增强胚胎对高热致畸的拮抗作用 ,促进胚胎的正常发育。     

单次热应激诱导小鼠睾丸间质细胞乙醛脱氢酶蛋白表达的变化

目的 探讨ALDH2在单次热应激致小鼠睾丸功能可逆性变化中的作用。方法 C57雄性小鼠18只,随机分成对照组和热处理组,热处理组按处理后1、7、14 d分成3个亚组(n=3),每组设立对照组(n=3),热应激组和对照组小鼠下腹部分别置于43 ℃和25 ℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d 取睾丸组织。免疫组化染色检测ALDH2蛋白定位及表达,Western 印迹检测ALDH2蛋白表达水平。结果 免疫组化显示,ALDH2蛋白在睾丸间质细胞中表达。Western 印迹检测显示,与对照组相比,热应激后第1天,ALDH2蛋白表达无明显改变;热应激后第7天、14天较对照组及热应激第1天比较,ALDH2蛋白表达明显增多(P＜0.01);热应激第7天与热应激第14天,ALDH2蛋白表达无明显改变。结论 小鼠在热应激处理后的第7、14天,ALDH2蛋白表达量在睾丸组织中显著增加。     

Temporal effect of local hyperthermia on murine contact hypersensitivity

Background The sensitization and elicitation phases are involved in the immunopathogenesis of contact hypersensitivity (CHS).Langerhans cells (LCs) are believed to play pivotal roles in the sensitization stage of CHS.Local hyperthermia on skin induces the migration as well as maturation of epidermal LCs.Although fever-range whole body hyperthermia and local hyperthermia at 43℃ prior to sensitization were reported to suppress CHS,the effects of different temperatures and the timing sequence of local hyperthermia on CHS have not been tackled.Methods Local hyperthermia was applied to murine dorsal skin 3 days prior to,concurrent with,or 2 days post sensitization with fluorescein isothiocyanate (FITC) in BALB/c mice.Local hyperthermia temperatures at 37℃,39℃,41℃ and 43℃ were applied to mouse dorsal skin and the severity of CHS was calculated by measuring the swelling response of the challenged ears.Results Local hyperthermia at 39℃,41℃ and 43℃ prior to sensitization reduced the severity of CHS,as compared with that at 37℃.The suppression of CHS was temperature dependant in that higher temperature had a stronger effect.On the contrary,the hyperthermia treatments,either concurrent with or post-sensitization,resulted in an enhanced temperature-dependant ear swelling response.Conclusions The severity of murine CHS could be influenced by local hyperthermia at the sensitization stage in a temperature dependant manner.The temporal effect of local hyperthermia suggested a novel factor in interpreting the severity of allergic contact dermatitis.     

高血糖致畸小鼠胚胎Pax3与Cx43基因的表达及定量研究

目的　探讨高血糖是否是糖尿病致畸的原因及其致畸机理。方法　采用皮下注射高渗糖的途径制成高血糖小鼠模型 ,并设立敌枯双实验组和空白、5 %葡萄糖及敌枯双对照组 ,通过逆转录聚合酶链反应及免疫组化的方法检测各组小鼠胚胎体中Pax3及Cx4 3基因的mRNA及蛋白的表达。结果　皮下注射高渗糖可致孕小鼠高血糖 (13 4mmol/L± 0 8mmol/L) ,其明显高于空白和 5 %葡萄糖对照组 (两者分别为 4 9mmol/L± 0 4mmol/L及 4 8mmol/L± 0 4mmol/L) ;高糖组吸收胎、死胎及畸胎发生率均显著高于两对照组 (P <0 0 1) ,胎重明显低于两对照组 ;高糖组Pax3的表达明显低于两对照组 (P <0 0 1) ,而Cx4 3的表达则明显高于两对照组 (P <0 0 1)。敌枯双组Pax3的表达无明显改变 ,Cx4 3的表达则明显高于两对照组 (P <0 0 1)。结论　高血糖是糖尿病致畸的主要原因 ;高血糖可通过诱导Pax3基因突变 ,使其蛋白表达下降 ,进而使Cx4 3基因及其蛋白过表达而致畸。     

粪肠球菌根管感染模型的扫描电镜观察

目的:建立粪肠球菌根管感染模型,观察粪肠球菌感染根管的情况和生存形式。方法:选择因牙周病拔除的上颌中切牙16颗,于釉牙骨质界处截除牙冠,根管预备后高温高压灭菌。接种McFarland为2的粪肠球菌菌液于无菌根管内,37℃恒温水浴培养箱中培养,隔日根管内更换新鲜菌液。在感染后1、3、5d及1、2、3周随机抽取2个标本行扫描电镜检查。结果:粪肠球菌形成生物膜定植于根管牙本质壁上并侵入牙本质小管,随着感染时间的增加,生物膜的形态发生变化,细菌侵入牙本质小管的深度加深。21d后可观察到成熟、稳定的生物膜形成。结论:单一的粪肠球菌菌种在离体牙根管内可形成生物膜,并侵入牙本质小管造成深层的感染。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物及其46—58KD蛋白的保护性免疫作用的比较研究

目的：观察旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１－ＥＳ）及其４６－５８ＫＤ蛋白的保护性免疫作用。并作比较研究。方法：通过无血甭的ＲＰＭＩ１６４０培养基培养旋毛虫肌肉期幼虫,获得ＴｓＬ１－ＥＳ;再以常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电洗脱技术相结合纯化ＴｓＬ１－ＥＳ中４６－５８ＫＤ蛋白,用ＴｓＬ１－ＥＳ及其４６－５８ＫＤ蛋白加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次,每鼠再以旋毛虫３００条感染攻击,观察感染后第７天鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数及血清抗体滴度。结果：４６－５８ＫＤ免疫组鼠的肠道成虫减虫接近（４８．３％、５０．２％及３４５８．６）;明显高于佐剂对照组（４．８％、８．２％及７４８．５）。结论：ＴｓＬ１－ＥＳ及其４６－５８ＫＤ蛋白均可产生明显的保护性免疫,且保护性免疫水平相近。     

除毒河豚肝油对于抗淋巴细胞血清所致小鼠模型的免疫增强作用

小鼠经注射自制抗T细胞血清后次日的T细胞数和百分率显著下降(P<0.001),以此建立T细胞减少动物模型。小鼠连续使用除毒河豚肝油(0.05ml/鼠/天,S.C.共5天)能使T细胞百分率与药前比下降不明显(P>0.05),而对照组显著(P<0.001);用药8天停药4天的血清血凝素抗体滴度和脾细胞溶血空斑数较对比组高(P<0.001,P<0.02)。表明该药对此模型具有一定免疫增强作用。