细粒棘球蚴在NIH小鼠体内发育的组织学及组织化学的进一步观察

本文继续观察感染后6～24个月的细粒棘球蚴在NIH小鼠体内发育的组织学及组织化学变化。结果表明,在鼠体内出现育囊的时间为感染后7～8个月,囊液内见到游离原头节及子囊的时间分别为8及10个月,并发现细粒棘蚴体内的糖原、DNA、RNA、碱性蛋白质的含量,AKP、ACP及ATP酶的活力,均以生发层的芽状突起部分及原头节内的较丰富和较强。     

吡喹酮对体外细粒棘球绦虫原头节作用机理的初步探讨

细粒棘球绦虫原虫节受浓度为0.05～1μg/ml的吡喹酮作用后,其皮层即出现肿胀、空泡,严重者还发生破裂,脱落并暴露肌层或实质组织;部分细胞显示核浓缩,溶解及崩裂。该药还能迅速引起原头节体内糖原含量的减少以及AKP和ATP酶活力的减弱,但对虫体核酸及蛋白质的作用则发生较慢或影响较小。初步认为吡喹酮的体外杀虫作用主要是通过药物破坏原头节的皮层并抑制虫体的糖代谢而实现的。     

细粒棘球绦虫原头节在NIH株小鼠体内发育的组织学及宿主细胞反应观察

本文的观察结果表明:接种后1周,原头节的皮层内已有实质细胞长入,虫周有较大空隙,宿主细胞反应轻微。死亡原头节则已被大量炎细胞紧密包围;2～4周,大部分原头节的实质组织消失而形成细粒棘球蚴生发层,宿主细胞反应基本消失。而死虫周围则有夏科-雷登氏结晶体出现;2个月后,生发层外均已出现角质层,死亡崩解虫周的细胞反应开始减轻;4～6个月,细粒棘球蚴囊不断增大,并在生发层内陆续出现不育囊结构,虫周纤维组织较少,而解体的原头节内均已有大量胶原及网状纤维长入。对生发层的组织发生学以及适宜中间宿主对原头节的细胞反应特点进行了简要讨论。     

吡喹酮、甲苯达唑及阿苯达唑对细粒棘球蚴作用的组织化学比较

本文比较了吡喹酮、甲苯达唑及阿苯达唑对NIH鼠体内细粒棘球蚴组织化学的影响。结果表明,三种药物治疗3～14天,均能迅速引起生发层内糖原、AKP、ACP及ATP酶的减少、减弱或消失,以甲苯达唑组的为最明显,阿苯达唑及吡喹酮的较轻,但对生发层内DNA、RNA、蚤白质结合的酪氨酸、色氨酸、组氨酸以及碱性蛋白质的影响仅见于7及14天。亦以甲苯达唑组的较为显著。停药后,上述变化的恢复时间,吡喹酮及阿苯达唑的分别为14～30及30天,而甲苯达唑组的则需90天。     

高强度聚焦超声辐照小鼠体内棘球蚴的形态变化

目的探索高强度聚焦超声波(highintensity focused ultrasound,HIFU)对动物体内细粒棘球绦虫棘球蚴的杀伤作用。方法用采自感染包虫病羊肝内棘球蚴的原头节接种小鼠腹腔,建立小鼠棘球蚴病模型。用HIFU照射小鼠腹腔棘球蚴,以肉眼、光镜及电镜观察HIFU杀伤棘球蚴的破坏作用,对照组予以普通超声照射。结果HIFU对棘球蚴有明显的破坏作用,随着HIFU照射时间延长,肉眼观察见棘球蚴囊塌陷变瘪。光镜观察见囊壁撕裂、生发层细胞脱落、细胞层变薄甚至消失,角皮层变薄,但层状结构未中断。扫描电镜显示生发层细胞脱落明显,角皮层板状结构疏松;透射电镜显示生发层细胞脱落、细胞间隙增宽,角皮层未见明显破坏;对照组棘球蚴囊壁结构完整。结论高强度聚焦超声能破坏小鼠体内棘球蚴,使棘球蚴的生发层损伤,但角皮层仍然完整。     

青海高原不同源原头节感染犬后细粒棘球绦虫成虫的形态学观察

本文对青海高原藏羊、牦牛体内棘球蚴和原头节实验感染犬后获得的细粒棘球绦虫成虫进行了形态学观察和测量。结果表明二者在某些形态学上有显著差异,很可能是不同的虫株。牦牛-犬型细粒棘球绦虫的形态与世界各地报道过的虫株相比,有其独特之处,很可能是存在于我国的独立株系。     

细粒棘球绦虫合胞体结构与功能的探讨

在１９９０￣１９９７年对细粒棘球绦虫成虫，细粒棘球蚴囊壁，生发囊壁和原头节的超微结构进行了一系列观察。发现合胞体结构不仅是细粒棘球绦虫不同发育阶段皮层的主要结构，而且是成虫和原头节内部器官形成的基础。其主要生理功能是保护虫体，吸收和输送营养物质，参与代谢活动、维持渗透压平衡和虫体稳定，有助于虫体的生长发育和繁殖，对转换宿主完成生活史也十分重要。作认为对细粒棘球绦虫合胞体结构的进一步研究和认识，有     

阿苯达唑亚砜对NIH小鼠体内细粒棘球蚴作用的组织学观察

本文观察了阿苯达唑亚砜150mg/kg/d×15天及×28天对NIH小鼠体内细粒棘球蚴的作用。结果表明,连续给药15天,细粒棘球蚴生发层出现变性及坏死的发生率分别为60.0％及32.0％;而囊液内原头节变性及死亡的发生率依次为36.3％及4.3％;治疗28天时,生发层的变性及坏死和原头节的变性及死亡的发生率依次分别为37.9％及58.6％和16.7％及40.0％;而角质层则有破坏及大量多核巨噬细胞聚集。     

细粒棘球蚴生发层细胞系的建立

目的：为获得能在体外稳定繁殖的细粒棘球蚴细胞系。方法：用研磨法将绵羊源细粒棘球蚴生发层处理得分散的生发细胞，将其在含10％—20％小牛血清的RPMI1640培养基在24孔培养板和包被胶原的24孔细胞培养板上交替培养至14代，随后在常规24孔培养板上连续传代培养；用倒置显微镜观察细胞形态及生长繁殖情况；将培养细胞接种BALB／c小鼠以观察其形成继发性包囊的能力；用ELISA法研究细胞系抗原的免疫学特征。结果：生发层细胞已在体外连续培养75代以上，生长良好；细胞系细胞呈圆形，具有形成合胞体乃至类组织块 的趋势，在4℃冰箱中至少可保存半个月，在液氮中至少可保存10个月；将细胞接种BALB／c小鼠后3个月至7个月，解剖未见细粒棘球蚴包囊生长; 细胞系抗原可和抗生发层体抗原、原头节可溶性抗原、囊液抗原的小鼠血清及人工感染原头节的阳性小鼠血清起反应。结论: 细粒棘球蚴生发层细胞系已经建立。     

细粒棘球绦虫原头节发育成囊过程观察

经体外培养和动物接种观察,原头节发育成囊主要由原头节本身以不同方式囊化,逐渐发育形成角皮层和生发层囊壁。角皮层可在生发层形成前出现。邻接不同原头节形成的角皮层可相互融合成多囊型棘球蚴。原头节在培养基或小鼠体内均可产生后囊,但经培养74天接种50天未见后囊形成角度层。后囊壁经HE和AB、PAS染色呈PAS弱阳性,无细胞核。原头节在培养基和小鼠体内发育成囊过程基本一致。     

细粒棘球蚴生发细胞体外培养的实验观察

目的 :为培育人源细粒棘球蚴细胞系 (株 ) ,以供用于免疫预防研究。方法 :用外科方法从临床确诊的细粒棘球蚴患者的肝脏中取出包囊 ,以生发层和原头节为培养材料 ,采用RPMI1640、199和改良 DMEM培养液 ,用鼠尾胶原蛋白包被和不包被的培养瓶 ,对其进行初培养 ,并进行对比观察。结果 :以胶原蛋白作为支撑材料 ,应用改良 DMEM培养液培养的人源细粒棘球蚴生发层和原头节效果优于其他 ,已成功地培育了人源细粒棘球蚴细胞系 ,并传至第 2 0代。原代培养时间需 2 8d- 4 5d,3代以内细胞为多形态性。结论 :建立了适合人源细粒棘球蚴细胞体外培养的方法。     

T-cell activity associated with secondary infections and implanted cysts of Echinococcus granulosus in BALB/c mice

Selected cytokine profiles of lymphocytes were assessed in BALB/c mice infected with protoscoleces of Echinococcus granulosus . Late stages of the infection (three months +) were characterized by more dominant Th2 activity with elevated IL-4 and IL-10 and reduced IFN-γ output by Con-A and antigen stimulated splenocytes. Circumparasitic leucocytes produced mainly IL-10 by five months post infection. A peak in IFN-γ production in the first month of infection may suggest Th1 or Th0 activity at this time and this may be correlated with initial protoscolex death. In addition, cytokine profiles from mice implanted with intact hydatid cysts were also assessed. At two weeks post implantation all cysts were still viable and cytokine production was characterized mainly by elevated IL-10 production. However, at four months post implantation, some of the cysts from two mice had been killed whilst all cysts in the remaining mouse remained viable. In the mice where dead cysts were present, elevated levels of IFN-γ were detected from splenocytes and circumparasitic cells. Elevated IL-4 was also evident with the splenocytes. In the mouse with viable cysts IFN-γ production was reduced. Results indicate that IFN-γ (Th1) activity may be correlated with killing of both protoscoleces and established cysts of E. granulosus.     

微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立

目的 通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法 无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO₂条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果 原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论 采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。     

细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究

目的 研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9 (EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。 方法 根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。 结果 免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256 000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论 本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。     

从小鼠的继发性细粒棘球蚴中分离生发细胞

小鼠的继发性细粒棘球蚴囊组织,经用0.25％胰蛋白酶溶液消化和密度梯度离心,可获得分离的生发细胞。此种细胞在含20％小牛血清的RPMI1640中培养约7d后开始增殖,增殖后的细胞表面光滑,形体增大。免疫学检测显示生发细胞的表面及其可溶性蛋白中有抗原成分。将培养的生发细胞返种至小鼠腹腔中时,少数可发育成囊。     

青海高原不同宿主源细粒棘球蚴的病原生物学考察

本文对我国青海高原牦牛和绵羊体内原发性细粒棘球蚴的病原生物学进行了考察。结果表明牦牛细粒棘球蚴的感染率和钙化率显著高于绵羊源(P<0.01);牦牛肝脏感染和肺脏感染无明显差异(各占34.14％和31.20％),绵羊则绝大多数寄生于肝脏(50.76％),肺脏较少(13.40％),肝、肺均感染者与牦牛相近(34.26％和32.58)。牦牛肝脏棘球蚴的钙化率高(73.00％),育囊率低(69.51％),但肺脏棘球蚴与绵羊肝、肺脏棘球蚴的钙化率相近(分别为20.15％、28.00％和18.04％),育囊率均高(分别为94.58％、91.76％和90.00％)。人体棘球蚴的育囊率达100.00％。对各源棘球蚴内的原头节测量结果表明不论原头节寄生在何种宿主,其肺脏原头节总是大于肝脏原头节(P<0.01);同源肝、肺脏原头节的吻钩大小无显著差异(P>0.05)。牦牛棘球蚴体积较绵羊的大,但原头节却小的多(P<0.01),且二者原头节吻钩的多项测量指标之间存在显著的差异(P<0.01或P<0.05)。上述结果提示对这种差异不应仅以棘球蚴寄生在不同宿主来解释,还应考虑到该地区是否存在不同宿主的细粒棘球绦虫虫株。