炭疽杆菌细菌学研究

本文研究了炭疽细菌学的下列问题:(1)准确求出该菌增代时间,有利于研究其早期生长规律;(2)发现炭疽芽胞出芽时先有一个生理学出芽阶段,要比形态学出芽早得多;(3)炭疽荚膜抗原性特异,以此建立试验常有较好结果;(4)炭疽菌体抗原非特异性问题较大,判断由它建立的试验结果要慎重;(5)炭疽杆菌受β-内酰胺类抗生素作用形成的串珠,经改进为平板纸片法和肉汤法后,扩大了它的应用范围;(6)炭疽噬菌体及其快速裂解法已成为鉴定该菌不可缺少的武器;(7)卵黄液腹腔注射确能增强炭疽芽胞的毒力;(8)炭疽杆菌和蜡样杆菌仍然是二个独立的种。应用这些基础研究原理于实际工作,大多取得了较好的结果。随着炭疽杆菌质粒的发现,将进一步推动炭疽理论和应用课题的研究和发展。     

液相中炭疽杆菌形貌的原子力显微镜观测

目的利用原子力显微镜液相模式观测炭疽杆菌形态,获得液相中炭疽杆菌芽胞和繁殖体对于溶菌酶的形态学抗性变化数据。方法应用原子力显微镜液相模式观察炭疽杆菌繁殖体及芽胞的超微结构,并对其主要指标进行测量比较。结果1×PBS溶液中的炭疽杆菌繁殖体,菌体杆状,竹节样排列,菌体间连接致密,长度为2,757.30±1227.086nm,宽度为1,710.90±226.10nm,Rq为15.447±3.418nm,Ra为13.239±2.733nm;炭疽杆菌芽胞椭圆形,多散在分布,表面平滑,长度为2,014.00±227.155nm,宽度为1,264.10±132.180nm,Rq为22.803±5.660nm,Ra为18.010±4.568nm。0.01 mg/mL溶菌酶溶液中的炭疽杆菌繁殖体形态不规则,表面凹凸起伏,边缘粗糙,有囊状突起,长度为2,836.00±1025.137nm,宽度为2,449.00±212.78nm,Rq为17.068±4.427nm,Ra为14.776±3.746nm;0.01 mg/mL溶菌酶溶液中的炭疽杆菌芽胞,形态规则,边缘平滑,未见凹凸起伏和囊状突起,而1 mg/mL溶菌酶溶液环境中的炭疽杆菌芽胞形态不规则,表面起伏,变化较大,其长度为2,155.00±202.663nm,宽度为1,344.00±162.631nm,Rq为24.849±3.427nm,Ra为20.869±2.550nm。结论通过原子力显微镜液相模式下的观察和测量,清楚地显示了溶液中炭疽杆菌的微观形貌及其变化,0.01 mg/mL的溶菌酶就能使炭疽杆菌繁殖体发生形态学变化,而炭疽杆菌芽胞形貌发生变化则需要1 mg/mL的高浓度溶菌酶的作用。     

模拟土壤环境中炭疽杆菌生态学的实验研究

本实验以模拟的方法，采集不同地区、不同类型的土壤，人为用炭疽杆菌污染，在不同条件下观察该菌形成芽孢数量的变化。结果证实土壤的类型与芽孢的形成数量无明显关系，炭疽杆菌在土壤中保存时，随着时间延长，形成芽孢的比率并无明显增加，但数量有所增长，说明土壤环境在一定程度上支持炭疽杆菌繁殖。特别是在土壤中加入新鲜动物血液时，芽孢数量明显增多，土壤的温度和湿度平衡对芽孢形成影响最大，符合炭疽的流行病学规律，提示     

研究者确定炭疽杆菌基因组序列

最近美国一份研究(TD READ et al.ScienceExpress Online:2002.5.9)报道:通过对两种炭疽杆菌株(包括Ames株和佛罗里达炭疽袭击分离株)的基因比对发现:佛罗里达分离株来源于Ames株。此外,该研究还显示了全基因组测序技术和计算法     

2例炭疽芽胞杆菌感染的实验室诊断

炭疽芽胞杆菌实验室检查是确认炭疽感染的主要依据,能否快速、准确的检出炭疽芽胞杆菌,对病人的确诊和治疗极为重要,兹将检验经过报告如下,供基层检验工作者参考。1 病例情况 2002年12月5日,青海省海北州海晏县青海湖乡莫乡滩村2名牧民(男32岁,女33岁),因剥食病死牛而引起炭疽菌     

炭疽杆菌外环境生态学的研究(摘要)

采用现场调查和实验模拟相结合的方式对炭疽杆菌的生态学进行了实验观察,初步证明炭疽芽孢杆能够在土壤中保持稳定的遗传。土壤的类型与营养细胞形成芽孢无明显关系而土壤的和含水量对形成芽孢影响很大,各因素之间存在交互影响,说明气候的变化直接影响到炭疽杆菌在土壤中形成芽孢的数量,这与炭疽的流行病学相一致;     

三种炭疽杆菌选择性培养基的比较实验

炭疽杆菌的分离培养在临床诊断、防疫检验和海关检疫等方面非常重要，常规炭疽杆菌培养基和现有选择性培养基在从污染环境、动物产品等分离炭疽杆菌时，检出率低，且分离时间长。本实验将3种炭疽杆菌选择性培养基，即；Kinsely氏培养基（简称A培养基尸’，梁旭东等以A培养基为基础研制的水杨素琼脂培养基（简称B培养基）”‘和我局以A培养基为基础研制的鲜血琼脂培养基（简称C培养基）’“从各方面进行比较，结果认为C培养基从污染环境、动物产品中分离炭疽杆菌具有检出率高、检出时间短等特』点。1材料与方法1．1培养基A、B、C和普通培…     

炭疽芽胞杆菌中插入序列研究进展

炭疽芽孢杆菌是1877年由著名的微生物学家柯赫(Rob-ertKoch)发现经人类证实的第一个细菌病原菌;它属于B.cereus菌属,此菌属主要包括炭疽芽孢杆菌(B.anthracis),腊样芽孢杆菌(B.cereus),蕈状芽孢杆菌(B.mycoides),假真菌样芽孢杆菌(B.pseudomycoides),苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)和B.weihenstephanensis6个对人类活动有影响的菌种[1]。我们所关注的炭疽芽孢杆菌革兰氏染色阳性,两端平切,无鞭毛,需氧或兼性厌氧;在有氧条件下可形成位于菌体中心的椭圆形芽孢;该菌营养要求不高,易于大量培养.炭疽芽孢杆菌是引起人畜共患急性传染病的病…     

两起炭疽突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离鉴定

目的 2008年青海省牧区发生2起牧民宰杀病死牛引起的疑似炭疽疫情,采集样品做炭疽杆菌分离鉴定。方法以生化、噬菌体裂解、青霉素敏感等实验对采集的患者标本、动物标本、环境标本的纯培养菌株进行鉴定。结果 2起疫情均从动物标本中检出炭疽芽孢杆菌。结论疫情中炭疽杆菌的检出率同实验室检测技术、送检标本的质量和及时性有密切关系。     

Construction of a Eukaryotic Plasmid Encoding Bacillus anthracis Protective Antigen,a Candidate for DNA Vaccine

Background: DNA immunization with plasmid DNA encoding bacterial, viral, parasitic and tumor antigens has been reported to trigger protective immunity. Objective: To evaluate the use of a DNA immunization strategy for protection against anthrax, a plasmid was constructed. Methods: The partialsequence of protective antigen of Bacillus anthracis, amino acids 175-764, as a potent immunogenic target was selected. The DNA encoding this segment was utilized in the construction of pcDNA3.1+PA plasmid. After intramuscular injection of rats with pcDNA3.1+PA plasmid, the expression of PA was assessed by RT-PCR and immunohistochemistry at RNA and protein levels, respectively. We also evaluated the presence of anti-PA antibodies in sera of immunized mice with pcDNA3.1+PA construct using immunoblotting. Results: The integrity of pcDNA3.1+PA construct was confirmed with restriction analysis and sequencing. The expression of PA was detected at RNA and protein levels. The presence of anti-PA antibodies in immunized mice with pcDNA3.1+PA construct was also confirmed. Conclusion: Our results indicate that pcDNA3.1+PA eukaryotic expressing vector could express PA antigen, induce antibody response and may be used as a candidate for DNA vaccine against anthrax.     

一株炭疽杆菌无毒株的建立

目的 建立无毒炭疽菌株，为炭疽疫苗研究和免疫检测打基础。方法 用传统的高温减毒法，将当前用于生产炭疽疫苗的减毒菌株进一步减毒。结果 对筛选的一株炭疽杆菌AAT121株进行全面检定，证实它已失去其亲代株A16R所具有的pXO1质粒，并因此失去了产生毒素的能力，成为炭疽杆菌“无毒株”；同时也几乎完全失去了生成芽胞的能力；其它的生物和生化学性质未发现变化。结论 炭疽减毒株也可用高温减毒法进一步减毒为无毒株，以便有关研究中应用。     

粗提抗原检测炭疽血清抗体ELISA方法的初步评价

目的 对使用粗提抗原检测炭疽血清抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行初步评价.方法 用间接ELISA方法检测人群血清(健康人血清42份、炭疽病人血清42份)特异性抗体,用阳性血清对照绘制标准曲线,按照标准曲线计算出每份血清标本的抗体相对含量,所得结果与重组致死因子(rLF)方法的检测结果进行比较.结果 病人组血清抗体相对含量中位数为1.19,健康人组血清抗体相对含量中位数为0.24,两组比较差异有统计学意义(uc=7.643,P＜0.05).粗提抗原检测与rLF检测结果并不完全对应,但两种方法显示出较高的一致性.结论 粗提抗原检测炭疽血清抗体的方法能区分大部分的病人和健康人,有一定的应用潜力,可用在炭疽疾病监测工作中.     

Phages Preying on Bacillus anthracis,Bacillus cereus,and Bacillus thuringiensis: Past,Present and Future

Many bacteriophages (phages) have been widely studied due to their major role in virulence evolution of bacterial pathogens. However, less attention has been paid to phages preying on bacteria from the Bacillus cereus group and their contribution to the bacterial genetic pool has been disregarded. Therefore, this review brings together the main information for the B. cereus group phages, from their discovery to their modern biotechnological applications. A special focus is given to phages infecting Bacillus anthracis, B. cereus and Bacillus thuringiensis. These phages belong to the Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae and Tectiviridae families. For the sake of clarity, several phage categories have been made according to significant characteristics such as lifestyles and lysogenic states. The main categories comprise the transducing phages, phages with a chromosomal or plasmidial prophage state, γ-like phages and jumbo-phages. The current genomic characterization of some of these phages is also addressed throughout this work and some promising applications are discussed here.     

荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于炭疽芽孢杆菌的快速检测。方法采用SYBR GreenⅠ随机掺入法,利用本实验室建立的实时荧光定量PCR反应体系,根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子设计引物,同时检测两个毒力相关质粒的存在,检测其灵敏度和特异性,并以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定14株炭疽芽孢杆菌,并测试该法检测土壤模拟污染标本的灵敏度,实验中设置内对照以排除假阴性结果的存在。结果炭疽杆菌基因组DNA的检测灵敏度可达每反应体系0.53pg,两个克隆株提取质粒的检测限分别为每反应体系12拷贝、140拷贝;检测14株炭疽芽孢杆菌及29株非炭疽芽孢杆菌的PCR扩增结果表明,炭疽芽孢菌DNA均出现特异的扩增结果,29株对照菌的DNA均为阴性;土壤模拟污染标本检测灵敏度可达每反应体系36个芽孢;20次重复实验结果表明其平均值与标准差为14.602±0.640。结论该方法检测炭疽芽孢杆菌具有简便、快捷、灵敏度高和特异性好的特点,为临床诊断、环境监测、卫生防疫等方面,快速检出炭疽芽孢杆菌提供了有利的手段。     

2019-2020年宁夏炭疽芽胞杆菌毒力鉴定及基因分型研究

目的 了解宁夏2019-2020年分离的炭疽芽胞杆菌菌株致病力及基因分型特征,为宁夏皮肤炭疽疫情判定与分子溯源提供实验室依据。方法 收集2019-2020年宁夏各地区分离的炭疽芽胞杆菌,对其进行毒力鉴定,并运用MLVA-15和canSNP分型技术进行基因分型研究。结果 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌均为强毒株,MLVA-15分型为同一种群,canSNP分型为A.Br.001/002组。结论 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌致病力较强,且菌株呈现相同的基因分型特征,提示菌株间存在流行病学关联。此研究结果填补了宁夏炭疽芽胞杆菌实验室检测中菌株致病力及基因分型的空白。     

贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌检出情况与致病性研究

目的了解贵州省2006—2011年炭疽芽胞杆菌感染和分布情况,为贵州省炭疽疫情的预防控制和炭疽病09分子流行病学研究提供科学依据。方法对来自贵州省2006—2011年不同地区09830份疑似炭疽标本（外环境标本667份、患者标本151份和牲畜标本12份）,采用传统的革兰染色镜检、普通营养琼脂平板和血琼脂平板培养基分离培养炭疽芽胞杆菌,运用青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽芽胞杆菌菌落进行鉴定。采用Real—time PCR技术检测88株经传统细菌学方法鉴定为炭疽芽胞杆菌菌株pX01质粒上的PA基因和pX02质粒上的CAP基因。结果从830份标本中分离出88株炭疽芽胞杆菌,总检出率为10．60％。2007年分离出炭疽杆菌的阳性标本最多,占36．36％;其次为2009年,占29．55％。阳性标本主要分布在黔西南州,其次为毕节地区和黔南州;册亨县、织金县和望谟县为炭疽杆菌检出数较多的监测县。88株炭疽芽胞杆菌CAP基因均为阳性。除2007年2株炭疽菌株PA基因为阴性外,其余86株PA基因均为阳性。结论贵州省炭疽疫源地面积广大,污染严重;检出的88株炭疽芽胞杆菌中97．73％的菌株同时具有两种毒力质粒,具有强致病性;该研究结果对贵州省炭疽疫情的预防控制及分子流行病学研究具有重要意义。     

中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布

目的检测炭疽芽胞杆菌中可变数量串联重复序列(VNTR)的变化,分析我国菌株中VNTR的特征和分布规律。方法 PCR扩增,琼脂糖电泳和毛细管电泳,测序验证,BLAST比对等。结果 11个VNTR位点中有4个在所有菌株中没有差别,另外7个位点只在个别菌株中检测到差别,有差别的菌株多分布在新疆;11个VNTR位点均位于基因编码区内,编码对细菌生存重要的蛋白和一些功能不明蛋白。结论结果提示新疆的菌株类型较复杂;本研究中的VNTR位点比较保守,可能不能用于区别不同的炭疽芽胞杆菌,但对于了解炭疽芽胞杆菌的基因组特征以及鉴定炭疽芽胞杆菌具有一定的作用。