自噬与2型糖尿病的关系及中药的干预作用

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和胰岛β细胞分泌功能缺陷是诱导2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)发生的主要机制,而线粒体受损是参与IR和胰岛β细胞损伤的重要环节,研究显示自噬作为一种细胞的自我保护机制,在维持胰岛β细胞结构和功能、改善IR等方面发挥着重要作用。近期研究表明中药可通过调节细胞自噬,进而改善胰岛β细胞和胰岛素抵抗,对2型糖尿病及其并发症起到防治作用。该文将就自噬与2型糖尿病的关系及中药的干预作用的研究进展做综述。     

芪玉三龙汤调节mTOR/Beclin1/LC3信号轴相关分子的表达诱导肺癌A549细胞自噬

目的 从细胞水平探讨芪玉三龙汤干预肺癌A549细胞对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）/微管相关蛋白1轻链3（LC3）信号轴关键分子表达的影响。方法 选择肺癌人A549细胞作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）法检测芪玉三龙汤含药血清对A549细胞活性的影响;原位末端标记法（TUNEL）,透射电镜（TEM）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（WB）分别检测芪玉三龙汤对A549细胞凋亡、自噬体形成及自噬标记分子表达的影响。结果 芪玉三龙汤血清能以浓度依赖性的方式抑制细胞活性;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的凋亡数量显著增多（P<0.01）,自噬体形成增加;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的mTOR mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Beclin1,自噬相关基因5（Atg5）,自噬相关基因13（Atg13） mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）。结论 芪玉三龙汤能够诱导肺癌A549细胞发生自噬,其具体作用机制可能与其下调mTOR的表达,上调Beclin1,Atg5,Atg13,LC3的表达,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ有关。     

复方加味桃仁承气汤对小鼠胰岛β细胞作用的研究

目的：研究复方加味桃仁承气汤对小鼠胰岛β细胞(NIT-1)的作用，探讨其抗糖尿病机制。方法：利用³H-TdR掺入、细胞计数、胰岛素测定等研究复方加味桃仁承气汤水提液及含药血清对小鼠胰岛β细胞的增殖及胰岛素分泌量的影响。其中含药血清的制备方法为给随机分组的5只大鼠灌胃复方加味桃仁承气汤水提液，每天2次，连续3 d，末次给药2 h后腹主静脉取血，离心，分离血清。结果：复方加味桃仁承气汤水提液及其含药血清均能明显促进小鼠胰岛β细胞增殖(P<0.05)，同时能明显促进胰岛素分泌(P<0.05)。结论：复方加味桃仁承气汤抗糖尿病的作用机制可能与其促进胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌有关。     

TGF-β相关信号通路在糖尿病病理机制中的作用及中医药干预研究进展

现代社会生活方式的改变,特别是高脂饮食和运动量减少使糖尿病发病率日益升高,已成为全球性的公共卫生问题,寻找有效的糖尿病治疗方法日益迫切。转化生长因子-β（TGF-β）信号通路与糖尿病并发症、肿瘤关系的研究较多,但其在糖尿病发生的作用尚未阐明。TGF-β信号通路可被多种因素激活,直接或间接导致胰岛β细胞凋亡和胰岛素抵抗（IR）,有望成为糖尿病治疗的重要新靶点。TGF-β相关信号通路包括腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、糖基化终产物受体、c-Myc、SnoN、Smurf1、miR-335-5P等信号分子,参与IR、胰岛β细胞凋亡、胰岛素分泌障碍、脂肪细胞纤维化表型及脂肪细胞代谢障碍的发生发展,并抑制白色脂肪棕色化,在人类糖尿病病理过程中发挥重要作用。中医认为糖尿病的病机为气阴两虚,后期除气虚外兼有阳虚血瘀,治以益气养阴,后期兼有温阳活血。研究发现部分中药和复方治疗糖尿病的作用与其对TGF-β信号通路的抑制高度相关。现综述TGF-β信号分子相关多条信号通路,阐明其在糖尿病形成过程中的病理机制,并就治疗糖尿病的中药复方与TGF-β信号通路相关性进行展望性分析。为治疗糖尿病的研究提供一定的理论依据。     

参芪地黄汤联合沙格列汀治疗降糖不佳2型糖尿病患者的临床研究＊

目的 在沙格列汀治疗基础上，应用参芪地黄汤辅助治疗降糖不佳2型糖尿病（T2DM），探究其临床疗效及对患者胰岛细胞功能及氧化应激指标的影响。方法 选取2017年1月至2020年1月我院收治且口服2种或3种降糖药物疗效不佳的T2DM患者170例，依据随机数字表简单随机分为对照组与观察组，各85例。在原有治疗方案基础上，对照组给予沙格列汀5 mg，口服，1次/天；观察组则在对照组基础上，另给予参芪地黄汤，1剂/天。2周为1疗程，两组均持续治疗6疗程。比较两组临床疗效、中医证候积分变化、血糖水平、胰岛细胞功能指标[胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）]、氧化应激指标水平变化。结果 相较于对照组，观察组总有效率（92.94% vs 78.82%）明显更高（P < 0.05）。治疗后，相较于对照组，观察组口干多饮、易饥多食、气短乏力证候积分均明显更低（P < 0.05）；FPG、2hPG、HbA1c均明显更低（P < 0.05）。治疗2疗程、4疗程、6疗程，相较于对照组，观察组HOMA-β变化量、HOMA-IR变化量均明显更高（P < 0.05）。治疗6疗程，相较于对照组，观察组超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）均明显更高，丙二醛（MDA）、活性氧类物质（ROS）均明显更低（P < 0.05）。结论 相较于沙格列汀治单独用药治疗，应用参芪地黄汤辅助沙格列汀治疗口服多种降糖药物效果不佳T2DM疗效更为显著，可有效改善体征并缓解症状，降低血糖水平、改善胰岛细胞功能、降低胰岛素抵抗，有效减轻氧化应激损伤。     

参苓白术散通过IκBα/NF-κB通路调控Lewis肺癌小鼠肿瘤自噬的研究

目的 观察培土生金法代表方参苓白术散对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织IκBα/NF-κB信号通路以及肿瘤自噬的干预作用，探讨参苓白术散联合顺铂对肺癌的部分治疗机制。方法 选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只，采用腋窝皮下接种肺癌Lewis细胞悬液法建立Lewis肺癌小鼠模型，建模成功后随机分为4组：模型组、顺铂组、中药组和中药+顺铂组，每组10只。模型组给予等量蒸馏水灌胃；顺铂组每周给与腹腔注射顺铂（5 mg·kg^-1）一次，共2次；中药组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天；中药+顺铂组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天，同时每周给与腹腔注射顺铂（5mg·kg^-1）一次，共2次。给药14天后，测定各组小鼠肿瘤体积，并计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率；采用ELISA法测定肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和白细胞介素-1（interleukin-1β， IL-1β）的含量；采用透射电镜观察肿瘤细胞超微形态的变化；采用免疫组化法测定核因子κB抑制蛋白α（NF-kappa-B inhibitor alpha， IκBα）和核因子-κB（nuclear factor-κ-gene binding， NF-κB）P65的蛋白表达水平；采用Western blot法测定自噬相关基因3（autophagy related gene 3， Atg3）、自噬相关基因5（autophagy related gene 5， Atg5）、自噬特异性基因（Beclin-1）和微管相关蛋白1轻链3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3， LC3）的蛋白表达水平。结果 与模型组比较，顺铂组、中药组、中药+顺铂组小鼠肿瘤体积和相对肿瘤体积显著减小（P<0.01），肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）、NF-κB P65蛋白入核率显著降低（P<0.01），Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01），和顺铂组比较，中药组和中药+顺铂组肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），中药+顺铂组肿瘤组织LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 参苓白术散能够上调IκBα蛋白表达，抑制NF-κB的激活，降低肿瘤组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量，调控肿瘤组织炎症反应，改变肿瘤微环境，并上调肺癌组织Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平，激活肿瘤发生自噬，抑制肿瘤的生长。     

人参麦冬散加减治疗气阴两虚证妊娠期糖尿病的临床观察

目的 观察人参麦冬散加减对气阴两虚证妊娠期糖尿病（GDM）糖、脂代谢和妊娠结局的影响。方法 将108例GDM患者按随机数字表法分为观察组和对照组各54例。对照组口服玉泉丸,6 g/次,4次/d,观察组内服人参麦冬散加减,1剂/d。两组疗程均为4周。治疗前后进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,测量空腹血糖（FBG）,1 h血糖（1 h PG）,2 h血糖（2 h PG）,糖化血红蛋白（HbA1c）等指标,记录妊娠结局情况;检测治疗前后总胆固醇（TC）,甘油三脂（TG）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,脂联素、血清淀粉样蛋白A（SAA）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,抵抗素、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平;进行安全性评价。结果 观察组患者胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,FBG,1 h PG,2 h PG和HbA1c均低于对照组（P<0.01）,胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）,胰岛素敏感指数（InISI）均高于对照组（P<0.01）;观察组患者TC,LDL-C,TG均低于对照组（P<0.01）;观察组IL-6,IL-1β,TNF-α,SAA,瘦素和抵抗素均低于对照组（P<0.01）,脂联素高于对照组（P<0.01）;观察组患者医学剖宫产、妊娠期高血压、羊水过多、胎膜早破和早产及不良妊娠结局发生率均低于对照组（P<0.01）。结论 人参麦冬散加减内服治疗GDM气阴两虚证患者,能提高胰岛素敏感和胰岛β细胞功能,调节炎症因子和脂肪因子,改善了IR,有效调控了糖、脂代谢,改善了母婴不良妊娠结局,且使用安全。     

覆盆子酮对糖尿病模型小鼠的降血糖作用及其机制研究

 目的 研究覆盆子酮对糖尿病小鼠的降血糖作用及其机制。方法 以四氧嘧啶尾静脉注射诱导糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照组(二甲双胍,90 mg·kg^-1)、 覆盆子酮低、中、高剂量组（200,400,800 mg·kg^-1）,同时设正常对照组,灌胃给药,连续给药20 d。在实验第0、7、14天各测空腹血糖;实验末期进行：糖耐量实验;测定血清胰岛素水平、计算胰岛素敏感指数(ISI);测定血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛水平;通过胰腺HE染色和胰岛素免疫组化分析观察胰腺组织病变程度和胰岛β细胞胰岛素表达。结果 覆盆子酮具有明显控制糖尿病小鼠空腹血糖值(P＜0.05)升高,降低血糖曲线下面积的作用,其中覆盆子酮高剂量组降糖作用与阳性对照组相当;覆盆子酮高剂量组显著提高血清胰岛素水平(P＜0.05);显著增加血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽的含量(P＜0.05),并能显著降低血清中丙二醛的含量(P＜0.05);HE及免疫组化分析表明,覆盆子酮有效修复胰岛病理改变,增加胰岛β细胞中胰岛素的表达。结论 覆盆子酮具有剂量依赖性地降血糖效果,增加胰岛素分泌,各剂量对四氧嘧啶造成的胰腺损伤都有一定修复作用。机制可能与提高糖尿病小鼠抗氧化能力,促进胰岛β细胞修复有关。     

葶苈大枣泻肺汤通过Caspase-1诱导A549细胞焦亡与凋亡的机制

目的 探讨葶苈大枣泻肺汤诱导A549细胞焦亡和凋亡的机制。方法 将A549细胞随机分为空白组、葶苈大枣泻肺汤低、中、高质量浓度组（中药低、中、高质量浓度组），中药低、中、高质量浓度组分别以葶苈大枣泻肺汤20、40、60 mg·L^-1处理，空白组以等体积培养液处理。药物作用48 h后，划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞仪检测细胞凋亡，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）、细胞凋亡抑制因子（Survivin）蛋白及核转录因子-κB（NF-κB）通路蛋白相对表达量，DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液肿瘤坏死因子-β（TNF-β）和白细胞介素-1β（IL-1β）含量。结果 与空白组比较，中药低、中、高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-κB磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-β和IL-1β含量明显增加（P<0.05）；与中药低质量浓度组比较，中药中、高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-κB磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-β和IL-1β含量明显增加（P<0.05）；与中药中质量浓度组比较，中药高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-κB磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-β和IL-1β含量明显增加（P<0.05）。结论 葶苈大枣泻肺汤可提高NLRP3蛋白表达，抑制Survivin蛋白表达，促进A549细胞凋亡；同时，可激活NF-κB通路和ROS系统，上调细胞焦亡因子Caspase-1，GSDMD的表达，介导A549细胞焦亡。     

丹酚酸B干预PI3K/AKT通路对STZ诱导大鼠胰岛细胞凋亡的影响

[目的] 研究丹酚酸B是否对受损的大鼠胰岛团有保护作用。[方法] 纯化的大鼠胰岛团分为5组：空白对照组（Control），链脲佐菌素（STZ）处理组，丹酚酸B（SalB）低、中、高剂量组（STZ+SalB 15 μmol/L、STZ+SalB 30 μmol/L、STZ+SalB 60 μmol/L）。空白对照组的胰岛团以柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液处理；STZ处理组的胰岛团以8 μmol/L的STZ处理4 h后换成普通完全培养基；STZ+SalB各剂量组先以STZ处理4 h，换掉STZ溶液，以不同浓度的SalB处理72 h。TUNEL染色法检测各组胰岛团凋亡情况。ELISA法检测各组胰岛团上清液中的胰岛素水平。SalB低、中、高剂量直接处理胰岛团72 h，荧光二乙脂/碘丙啶（FDA/PI）双染法检测胰岛团活细胞和晚期凋亡细胞比例。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组胰岛团中PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。[结果] 与空白对照组比较，STZ处理组的TUNEL阳性率显著升高（P<0.01）；与STZ处理组比较，中、高剂量SalB组TUNEL阳性率显著下降（P<0.01），表明中、高剂量SalB有效抑制STZ诱导的大鼠胰岛细胞凋亡。与空白对照组比较，低、中、高剂量SalB组的FDA阳性（活细胞）的百分比无统计学差异（P>0.05），表明低、中、高剂量SalB对正常的胰岛细胞没有损伤作用。与空白对照组比较，STZ处理组胰岛团的胰岛素分泌水平显著下降（P<0.01）；与STZ处理组比较，中、高剂量SalB促进胰岛团胰岛素释放（P<0.05）。与STZ处理组比较，中、高剂量SalB升高PI3K蛋白水平，对Akt蛋白表达无影响，显著升高p-Akt的水平。[结论] SalB抑制STZ诱导的胰岛细胞凋亡，且SalB本身对胰岛细胞无损伤，其抑制凋亡的机制可能与促进Akt磷酸化激活PI3K/Akt信号通路有关。     

复方苦参注射液诱导自噬促进膀胱癌细胞凋亡机制的研究

目的 探究复方苦参注射液对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探究其可能的分子机制,为复方苦参注射液在临床上治疗膀胱癌提供理论依据。方法 CCK-8法检测复方苦参注射液对T24细胞增殖的影响。流式细胞术检测复方苦参注射液对T24细胞凋亡的影响。MDC染色法检测复方苦参注射液对T24细胞自噬的影响。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验检测复方苦参注射液对T24细胞凋亡关键蛋白和自噬关键蛋白的影响。结果 复方苦参注射液能有效抑制T24细胞增殖。复方苦参注射液能诱导T24细胞发生凋亡和自噬。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验结果表明,随着复方苦参注射液剂量的升高,T24细胞中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、自噬选择性底物（P62）的表达逐渐下降,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白（Bax）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-Caspase 3）、自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）、微管相关蛋白B轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）的表达逐渐升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值逐渐减小（P<0.05）。结论 复方苦参注射液能抑制T24细胞的增殖、调节T24细胞自噬,诱导T24细胞凋亡。     

青蒿琥酯通过PI3K/GSK-3β通路对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用研究

[目的] 观察青蒿琥酯对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响,以及探究其作用机制。[方法] 取Balb/c小鼠腹腔注射200 mg/kg STZ建立1型糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、青蒿琥酯组和胰岛素组。另随机选10只Balb/c小鼠为健康对照组,腹腔注射等量的生理盐水。建模成功后,青蒿琥酯组灌胃100 mg/kg青蒿琥酯,健康对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次,共4周,胰岛素组皮下注射4 U/kg甘精胰岛素注射液,每日1次,连续5 d。检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、肝脏三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、血清游离脂肪酸（FFA）;苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠胰岛病理学;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组兔抗鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖原合成酶激酶-3（GSK3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK3β）和谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白表达水平。[结果] 与健康对照组比较,模型组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著增加（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著降低（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著增加（P＜0.05）。与模型组比较,青蒿琥酯组、胰岛素组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著降低（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著增加（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著降低（P＜0.05）。[结论] 青蒿琥酯可显著降低1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗,降低葡萄糖含量,其作用机制可能抑制PI3K/GSK3β信号通路传导有关。     

桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬

目的 研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性，确定最佳给药时间及给药浓度，用于后续实验；设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组。采用苏木素-伊红（HE）染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色（MDC）观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3），微管相关蛋白Ⅰ轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、自噬关键分子酵母Atg6同系物-1（Beclin-1）、p62、磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果 桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性；与桦木酸给药24 h比较，W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低（P<0.05，P<0.01），给药48 h的半数抑制浓度（IC₅₀）显著降低（P<0.01），其中SW620细胞给药48 h的IC₅₀最小。HE染色、Hoechst33258染色显示，桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡；MDC染色可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较，桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与空白组比较，桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleaved Caspase-3、LC3Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01）；桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及机制研究＊

目的 研究六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及其机制，探讨阿尔茨海默病的病理机制及补肾填精法的作用机制。方法 30只大鼠随机分成对照组和六味地黄丸组两组，分别予以等量的双蒸水和含六味地黄丸粉末水溶液进行灌胃，末次灌胃结束后取血并分离血清备用。将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组和药物组，对照组和模型组给予含空白血清的完全培养液，药物组给予含含药血清的完全培养液，模型组和药物组加入Aβ1-42寡聚体，培养48 h。应用CCK-8法对各组进行细胞增殖率分析；免疫荧光法分析各组细胞内Aβ沉积情况；Western Blot法检测各组细胞BACE1、p62、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达情况。结果 CCK-8结果显示，与对照组相比，模型组细胞增殖率显著降低（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞增殖率显著增高（P<0.01）。与对照组相比，模型组细胞内Aβ的沉积显著增加（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞内的Aβ沉积显著减少（P<0.01）。Western Blot结果显示，与对照组相比，模型组细胞的BACE1、Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高（P<0.01），p62的蛋白表达量显著降低（P<0.01）；与模型组相比，药物组细胞的Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高（P<0.01），BACE1和p62的蛋白表达量显著降低（P<0.01）。结论 六味地黄丸含药血清可以增加Aβ诱导的SH-SY5Y细胞自噬相关基因的表达，上调自噬水平，减轻细胞损伤，对细胞具有明显的保护作用。     

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的 观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键分子蛋白表达的影响，探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法 将126只SD大鼠随机分成2组，即空白组16只和造模组110只，空白组喂养基础饲料，造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型，共8周。造模成功后，视体质量情况，按顺序淘汰体质量过轻者，遴选出48只肥胖大鼠，随机分为模型组、奥利司他组（32.40 mg·kg^-1）、雷帕霉素组（2 mg·kg^-1）、温胆汤低、中、高剂量组（4.45、8.90、17.80 g·kg^-1），每组8只；另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组，各用药组按剂量（以生药量计算）给予灌胃，模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃，每天1次，共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee''s指数、脂体比和肥胖率，采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1（ULK1）、自噬效应蛋白1（Beclin1）、人自噬相关蛋白5（Atg5）、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ表达水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子（TGF）-β的表达；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症（TSC）1、TSC2的表达。结果 与空白组比较，造模组体质量和Lee''s指数显著升高（P<0.01），肥胖率>20%，有形体肥胖、活动度下降，食欲下降，皮毛无光泽、蓬松，便溏，对外界反应能力下降，饮水量减少等痰湿证表现，与正常组比较，模型组体质量、Lee''s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降（P<0.01），但ULK1表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低（P<0.05，P<0.01），且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低（P<0.01），奥利司他组TGF-β的表达显著降低（P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），但ULK1显著降低（P<0.01）。与雷帕霉素组比较，温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组炎性因子（除TNF-α外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤中剂量组炎性因子（除IL-16、MCP-1、IL-10外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。与奥利司他组比较，温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高（P<0.01），所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低（P<0.01），温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高（P<0.01），信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联，且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态，其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。     

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的 探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5（TGR5）/环状磷酸腺苷（cAMP）信号通路靶向NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法 选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组（3.6、7.2 g·kg^-1）、二甲双胍组（0.2 g·kg^-1）,8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,并在末次给药后,进行口服糖耐量实验（OGTT）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）并计算β细胞功能稳态指数（HOMA-β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β水平。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素（Insulin）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降（P<0.01）;OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低（P<0.01）。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高（P<0.01）。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低（P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。     

基于β淀粉样蛋白探讨中医药治疗阿尔茨海默病的研究进展

β淀粉样蛋白（Aβ）在脑中的大量聚集被公认为是阿尔茨海默病（AD）的起始因素,其集聚主要由Aβ过量产生和清除障碍引起。随着现代研究的进展,学者们针对AD进行了广泛而深入的研究,除了临床上常用的改善认知功能症状的药物外,Aβ单克隆抗体（Aduhelm）在美国成功上市,或可延缓AD进程,这表明靶向Aβ可能是治疗AD的有效途径,但其价格昂贵,不良反应和禁忌证较多,不利于临床推广。而中医药具有多成分、多靶点、多通路的特点,安全性良好,可从抑制Aβ产生和聚集、促进其脑内清除等多方面调节脑内Aβ沉积水平,减轻神经毒性,防治AD。小檗碱、没食子酸、蛇床子素、半枝莲黄酮、还脑益聪方、涤痰汤可通过调促进α分泌酶、抑制β、γ分泌酶的活性和表达,减少Aβ产生;黄芩素、芦荟大黄素、没食子酸、姜黄素等可通过与Aβ的疏水结构及介导Aβ聚集的H键、盐桥和β折叠结构相互作用,抑制Aβ的聚集,促进其解聚,减轻Aβ对神经细胞的增殖抑制作用;姜黄素和白藜芦醇可促进小胶质细胞的骨髓细胞触发受体2等表达,促进小胶质细胞的迁移和吞噬Aβ,双叶内酯、开心散和姜黄素可上调脑啡肽、胰岛素降解酶等降解酶表达促进Aβ降解、京平尼苷、二氢丹参酮、双氢青蒿素、姜黄素可通过激活正常自噬或抑制异常自噬,于细胞内降解Aβ;环黄芪醇、当归芍药散、益智防呆方、苓桂术甘汤通过改善血脑屏障（BBB）完整性和通透性促进Aβ流出和抑制Aβ的流入,益智防呆方、血栓通可通过促进水通道蛋白4（AQP4）的极化,使Aβ经淋巴系统清除,减少脑中Aβ聚集,减轻或预防神经细胞损伤,改善认知功能。以上总结旨在为中医药对AD的临床治疗提供更充足的证据和思路。     

番石榴叶总黄酮对胰岛β细胞胰岛素抵抗影响的实验研究

目的：观察番石榴叶总黄酮对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素抵抗影响。方法：制备番石榴叶总黄酮（FSL）有效部位,通过HIT-T15胰岛β细胞生长曲线以及不同浓度葡萄糖（GLU）、FSL对HIT-T15胰岛β细胞增殖的影响确定FSL的加药时间、浓度和高糖浓度。然后测定在高糖环境下,FSL对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌、胰岛素受体mRNA和胰岛素受体底物1蛋白表达的影响。结果：50 mmol·L^-1葡萄糖能够显著抑制HIT-T15胰岛β细胞增殖（P<0.01）,50 μg·mL^-1 FSL能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细增殖（P<0.01）、促进胰岛素分泌（P<0.05）、胰岛素受体mRNA表达（P<0.05）和胰岛素受体底物1蛋白表达（P<0.01）。结论：番石榴叶总黄酮能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌,可能与其增加胰岛素受体mRNA的表达、胰岛素受体底物（IRS-1）蛋白表达有关。     

去氢木香内酯激活凋亡与自噬抑制人肺癌A549细胞生长

目的 研究去氢木香内酯（DL）对人肺癌细胞A549增殖、凋亡、自噬的影响,以期阐明其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）研究0、5、10、15、20、25 μmol·L^-1 DL对人肺癌A549细胞增殖能力的影响。通过细胞克隆形成实验研究DL对A549细胞克隆形成能力的影响。选择10、20 μmol·L^-1作为DL低、高浓度组,采用荧光染料Hoechst 33258染色及蛋白免疫印迹法（Western blot）观察DL对A549细胞凋亡的影响。通过吖啶橙染色检测DL给药后自噬溶酶体的变化,利用免疫荧光实验和Western blot检测DL对微管相关蛋白1轻链3（LC3）表达水平的影响,通过对比DL单独给药及其分别与自噬抑制剂巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合用药对A549细胞自噬的影响。通过Western blot观察DL对A549细胞信号通路调控的作用。结果 与空白组比较,10、15、20、25 μmol·L^-1 DL组A549细胞存活率均显著降低（P<0.01）;5 μmol·L^-1 DL可显著抑制A549克隆细胞形成（P<0.01）,说明DL能够抑制人肺癌A549细胞的增殖能力。与空白组比较,DL组（10、20 μmol·L^-1）凋亡细胞数目增多,DL组（20 μmol·L^-1）中凋亡相关蛋白聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶（PARP）和B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2表达显著下降（P<0.01）。吖啶橙染色结果显示,与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）橙色荧光增强,说明自噬溶酶体的生成数量增多。DL组（20 μmol·L^-1）还能使细胞内LC3橙色荧光颗粒明显增高,LC3 Ⅱ的表达水平显著上升（P<0.01）,且加入自噬抑制剂后,A549细胞对DL作用的敏感性显著下降（P<0.01）,表明自噬参与了DL诱导的A549细胞死亡。与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）能够使自噬相关蛋白3（Atg3）、自噬相关蛋白5（Atg5）的表达增加并使蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、信号传导与转录活化因子3（STAT3）的磷酸化水平下降（P<0.05,P<0.01）。结论 DL能够激活凋亡与自噬从而抑制人肺癌A549细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Akt/mTOR/STAT3信号通路有关。