解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的 探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5（TGR5）/环状磷酸腺苷（cAMP）信号通路靶向NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法 选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组（3.6、7.2 g·kg^-1）、二甲双胍组（0.2 g·kg^-1）,8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,并在末次给药后,进行口服糖耐量实验（OGTT）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）并计算β细胞功能稳态指数（HOMA-β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β水平。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素（Insulin）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降（P<0.01）;OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低（P<0.01）。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高（P<0.01）。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低（P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。     

矿物药青礞石对戊四氮点燃癫痫大鼠血清中IL-1β和IL-2等细胞因子水平的影响

目的 研究青礞石对戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）点燃癫痫大鼠血清中炎症细胞因子表达水平的影响。方法 利用PTZ腹腔注射制备慢性癫痫大鼠模型,实验分为对照组、模型组、阳性药卡马西平组、青礞石低剂量组和青礞石高剂量组。大鼠腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）、高迁移率族蛋白B-1（HMGB-1）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,并对各细胞因子之间及其与PTZ点燃癫痫大鼠结肠肠道微生物的相关性进行分析,利用SPSS 18.0对结果进行统计学分析。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α及hs-CRP水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,青礞石高、低剂量给药组大鼠血清中各细胞因子水平显著下降（P<0.05,P<0.01）。细胞因子相关性分析结果表明,IL-2与IL-6呈显著正相关（P<0.05）,IL-6与TNF-α、hs-CRP呈显著正相关（P<0.05,P<0.01）,TNF-α与hs-CRP呈显著正相关（P<0.01）,IFN-γ与HMGB-1呈显著正相关（P<0.05）。细胞因子与肠道菌群相关性分析结果表明,疣微菌门、Akkermansia菌属与炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP间呈显著相关性（P<0.05）。青礞石可通过影响细胞因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）、Akkermansia菌属对PTZ点燃癫痫大鼠起到干预作用。结论 青礞石干预PTZ点燃癫痫可能与影响IL-1β、IL-2等细胞因子,从而降低体内炎性反应有关。     

半夏泻心汤及其拆方对菌群紊乱幼鼠结肠黏膜免疫的影响

目的 探讨半夏泻心汤及其拆方对混合抗生素诱导的菌群紊乱幼鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法 将70只雄性BALB/c幼鼠随机分为7组，分别为空白组、模型组、双歧杆菌四联活菌片组（西药组，0.68 g·kg^-1）及半夏泻心汤全方组、辛开组、苦降组、甘补组（9.1、3.19、1.82、4.1 g·kg^-1），每组10只。除空白组外，其余各组予混合抗生素灌胃诱导肠道菌群紊乱，14 d后西药组予双歧杆菌四联活菌片灌胃，全方组、辛开组、苦降组及甘补组分别予半夏泻心汤及不同配伍药组灌胃，空白组、模型组给予等体积生理盐水，1次/d，共14 d。连续给药14 d后无菌采集粪便样本用于16SrDNA测序分析肠道菌群，并经腹腔注射脂多糖（LPS，10 mg·kg^-1）诱导炎性反应，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠黏膜组织形态，甲苯胺蓝染色和免疫组织化学观察结肠黏膜巨噬细胞浸润，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-10（IL-10） mRNA的表达情况。结果 与空白组比较，模型组幼鼠肠道微生物结构显著改变（P<0.01），结肠黏膜损伤明显，巨噬细胞浸润减少，炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及IL-10 mRNA表达水平均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，西药组、半夏泻心汤及其拆方组均能增加菌群相对丰度和物种多样性，提高拟杆菌门、厚壁菌门等有益菌的比例（P<0.01）；同时西药组、半夏泻心汤及其拆方组均能改善结肠黏膜损伤（P<0.05，P<0.01），增加巨噬细胞浸润（P<0.05，P<0.01），升高IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达水平（P<0.01）；西药组、半夏泻心汤及苦降、甘补组升高IL-1β mRNA表达（P<0.01）；西药组、半夏泻心汤及辛开、甘补组IL-10 mRNA表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 半夏泻心汤及拆方组能调整抗生素暴露幼鼠肠道菌群，保护肠道菌群紊乱后结肠黏膜免疫屏障，以半夏泻心汤全方为最佳配伍。     

补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用

目的 基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法 选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^-1、150 mg·kg^-1;实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80 ℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红（HE）染色,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症指标及活性氧（ROS）,蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高（P<0.01）,体质量显著降低（P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低（P<0.05,P<0.01）,体质量上升（P<0.01）;与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降（P<0.05,P<0.01）。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2（Mfn2）显著减少（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1（Drp1）显著减少（P<0.01）。结论 补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。     

桂枝加龙骨牡蛎汤对肺不藏魄型不寐模型大鼠IL-10及TNF-α表达的影响

目的 探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对肺不藏魄型不寐大鼠相关脏器中白细胞介素（IL）-10及肿瘤坏死因子（TNF）-α表达差异的影响,研究桂枝加龙骨牡蛎汤改善不寐的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组10只。造模方法选用长平台浅水环境法剥夺大鼠睡眠,造模共计42 d。空白组和模型组给予0.05 mL·kg^-1生理盐水灌胃,将西药组、中药组大鼠在继续造模的同时给予干预,西药组给予右佐匹克隆片0.105 mg·kg^-1灌胃,中药组给予桂枝加龙骨牡蛎汤7 600 mg·kg^-1灌胃,共干预28 d。造模成功后,第42天开始进行Morris水迷宫实验检测大鼠的运动及空间记忆能力;以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中IL-10及TNF-α的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织和脑组织的IL-10及TNF-α蛋白表达;免疫组化法检测大鼠肺组织和脑组织的IL-10及TNF-α的水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠睡眠分期非快速眼球运动（NREM）期和快速眼球运动（REM）期时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）,觉醒期时间显著增加（P<0.01）,平台探索总时间及总距离显著增加（P<0.01）,目标象限（第三象限）探索时间百分比及穿越平台次数显著降低（P<0.01）,ELISA结果显示血清中IL-10水平显著降低（P<0.01）,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,Western blot结果显示大鼠脑、肺组织IL-10蛋白表达显著降低（P<0.01）,TNF-α蛋白表达显著升高（P<0.01）,免疫组化法检测结果显示大鼠脑、肺组织IL-10表达显著降低（P<0.01）,TNF-α表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,西药组及中药组大鼠睡眠分期NREM期和REM期时间明显增加（P<0.05,P<0.01）,觉醒期时间缩短（P<0.05）,平台探索总时间及总距离显著降低（P<0.01）,目标象限（第三象限）探索时间百分比及穿越平台次数明显增加（P<0.05,P<0.01）,ELISA结果显示血清中IL-10水平显著升高（P<0.01）,血清中TNF-α水平显著降低（P<0.01）,Western blot结果示脑、肺组织IL-10蛋白表达显著升高（P<0.01）,TNF-α蛋白表达显著降低（P<0.01）,免疫组化法检测结果示脑、肺组织IL-10表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,TNF-α表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 桂枝加龙骨牡蛎汤能够通过改善肺不藏魄型不寐大鼠脑、肺组织IL-10及TNF-α的表达,延长睡眠时间,进而达到改善失眠的作用,其机制可能与改善炎症因子表达水平有关。     

母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

目的 观察母婴分离/束缚应激诱发焦虑抑郁小鼠海马小胶质细胞激活和白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达情况,探讨温阳解郁方抗焦虑抑郁的机制。方法 84只雄性C57BL仔鼠于出生后第0天（PD0）随机分为空白组、束缚应激组和造模组,造模组采取母婴分离结合束缚应激制备焦虑抑郁模型,将造模组按随机数字表法分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组。在离乳第21天（PD21）至成年第90天（PD90）,空白组、束缚应激组和模型组饲喂正常饲料,其余饲喂药混饲料（温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组用药剂量分别为5.85,12.03,16.71 g·kg^-1及2.60 mg·kg^-1）。采用旷场实验,O迷宫和社会交互实验评估模型组小鼠焦虑抑郁状态;免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1β,IL-6,TNF-α,Iba-1,糖皮质激素受体（GR）mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著减少（P<0.01）,开臂活动时间与活动总路程明显减少（P<0.05,P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间显著增加（P<0.01）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,GR mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,IHC结果显示小胶质细胞的过度激活。与模型组比较,温阳解郁方及氟西汀组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著上升（P<0.01）,开臂活动时间显著上升（P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间明显降低（P<0.05,P<0.01）;Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,GR mRNA表达水平显著上升（P<0.01）,IHC结果表明小胶质细胞的形态恢复;温阳组和解郁组小鼠开臂活动时间显著上升（P<0.01）,辨别探查时间明显降低（P<0.05）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-6 mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;温阳组小鼠GR mRNA表达水平明显上升（P<0.05）,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;解郁组小鼠5 min运动总路程显著上升（P<0.01）,训练探察时间明显降低（P<0.05）,IL-1β mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,IHC结果表明两组小胶质细胞有所恢复。结论 温阳解郁方的综合疗效和药理作用优于温阳方和解郁方,其作用机制可能通过抑制母婴分离/束缚应激小鼠海马小胶质细胞的激活,降低IL-1β,IL-6,TNF-α等细胞因子的表达,增加海马GR表达,从而改善小鼠的焦虑抑郁样行为。     

霍山石斛多糖调控NLRP3炎症小体对帕金森病模型神经炎性损伤的抑制作用

目的 研究霍山石斛多糖（DHP）对帕金森病（PD）模型神经元炎性损伤的抑制机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为空白组、模型组和DHP组,噻唑蓝（MTT）比色法检测干预后各组SH-SY5Y细胞存活率,比色分析法检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平;将小胶质细胞（BV-2）分为空白组、模型组、DHP组和MCC950组（对照组）,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）、接头蛋白凋亡相关的点状蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）及IL-1β蛋白的表达量。C57BL/6小鼠设置空白组、模型组、DHP低剂量（100 mg·kg^-1）组、DHP高剂量（350 mg·kg^-1）组及MCC950组（对照组）,每组10只。通过平衡木实验、悬挂实验和转棒实验观察小鼠运动平衡和协调能力;免疫荧光染色法检测小鼠中脑黑质小胶质细胞Iba-1和酪氨酸羟化酶（TH）表达水平;FJB染色检测中脑黑质多巴胺神经元损伤情况;ELISA检测小鼠中脑组织IL-1β、IL-18和TNF-α等炎症因子表达水平;Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组细胞存活率降低,LDH、ROS和MDA水平升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）;与模型组比较,DHP组细胞存活率升高,LDH、ROS和MDA水平降低（P<0.01）,SOD水平升高（P<0.01）。与空白组比较,BV-2细胞模型组炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α水平升高（P<0.05）,NLRP3、Caspase-1、IL-1β及ASC蛋白表达增多（P<0.05）;与模型组比较,DHP组及MCC950组炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α水平降低（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-1β及ASC蛋白表达减少（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠通过平衡木时间增多（P<0.05）,转棒实验在棒时间减少（P<0.05）,IL-1β、IL-18和TNF-α水平升高（P<0.05）,Iba-1表达增多（P<0.05）,TH表达水平降低（P<0.05）,中脑黑质神经元阳性细胞数增多（P<0.05）,NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-1β蛋白表达增多（P<0.05）;与模型组比较,DHP组及MCC950组小鼠通过平衡木时间减少（P<0.01）,转棒实验中在棒时间增多（P<0.01）,中脑炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α水平降低（P<0.01）,中脑黑质Iba-1表达减少（P<0.01）,TH表达水平升高（P<0.01）,FJB染色中脑黑质神经元阳性细胞数减少（P<0.01）,MCC950组NLRP3、ASC及IL-1β蛋白降低（P<0.01）,DHP高剂量组NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1β蛋白降低（P<0.01）。结论 DHP具有抗氧化应激作用;DHP可能通过调控NLRP3炎症小体表达,抑制小胶质细胞过度活化,进而降低PD模型神经炎性损伤,发挥神经保护作用。     

基于肠道菌群探讨醋炙对乳香治疗溃疡性结肠炎的增效机制

目的 基于肠道菌群角度探讨乳香醋炙前后对甘氨脱氧胆酸（GDCA）干预溃疡性结肠炎（UC）小鼠的改善作用及其醋炙增效机制。方法 30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组、GDCA组、乳香组（1.5 g·kg^-1）、醋乳香组（1.5 g·kg^-1）,每组6只。正常组自由饮水,其余组按周期自由摄入2%葡聚糖硫酸钠（DSS）建立UC小鼠模型,造模期间GDCA组、乳香组、醋乳香组腹腔注射GDCA（0.05 g·kg^-1）进行干预;于造模后第13天起,乳香组、醋乳香组灌胃给予相应剂量药物,1次/d,连续给药36 d,期间记录小鼠体质量,评估疾病活动指数（DAI）。第48天,收集粪便进行16S rRNA和宏基因组测序分析肠道菌群变化。第49天取小鼠结肠,采用苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠结肠组织病变,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6含量。采用Spearman相关性分析探讨差异菌种和炎症因子水平的相关性。结果 与正常组比较,模型组体质量显著降低（P<0.01）,DAI评分明显升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高（P<0.01）,结肠部分炎性细胞浸润;与模型组比较,GDCA组小鼠体质量显著降低、DAI显著升高,TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高（P<0.01）,结肠隐窝结构严重破坏,大量炎性细胞浸润且杯状细胞明显减少;与GDCA组比较,乳香组、醋乳香组体质量明显升高、DAI评分显著降低、TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,且醋乳香的调节作用明显优于乳香。Alpha多样性显示,GDCA干预后UC小鼠Chao1指数显著升高（P<0.01）,Shannon指数明显降低（P<0.05）;Beta多样性显示,5组菌群结构具有明显变化,乳香、醋乳香可一定程度回调GDCA干预后UC小鼠肠道菌群结构变化。菌群测序结果显示,与正常组比较,模型组厚壁菌门/拟杆菌门值明显升高（P<0.05）,3个菌属和5个菌种相对丰度发生明显变化（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,GDCA组厚壁菌门/拟杆菌门值明显升高（P<0.05）,7个致病菌属和4个菌种相对丰度明显增加（P<0.05,P<0.01）,3个有益菌属和Bacteroides_intestinalis相对丰度明显降低（P<0.05,P<0.01）,乳香组和醋乳香组可回调厚壁菌门/拟杆菌门值、致病菌和有益菌相对丰度,且醋乳香组对厚壁菌门/拟杆菌门值、3个菌属和5个菌种相对丰度的回调作用明显优于乳香（P<0.05,P<0.01）。相关性分析显示,Bacteroides_intestinalis相对丰度与TNF-α、IL-6、IL-1β水平呈负相关;Prevotella_sp_CAG873、Bacteroides_sp_CAG927、Bacteroidales_bacterium_52_46、Bacteroidales_bacterium相对丰度与TNF-α、IL-6、IL-1β水平呈正相关。结论 GDCA可加重UC结肠炎症,乳香与醋乳香对于GDCA介导的UC均具有改善作用,以醋乳香作用更强,其作用机制可能与调节肠道有益菌和致病菌的丰度和结构、降低炎症因子水平有关。     

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠细胞凋亡的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型（MI/RI模型）,造模成功后第1天起,空白组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、模型组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、参红通络方剂低、中、高剂量组（1.031、2.063、4.126 g·kg^-1参红通络方标准浓缩液）和辛伐他汀组（辛伐他汀0.71 mg·kg^-1）,定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红（HE）染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化;原位末端转移酶标记技术（TUNEL）染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果 与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升（P<0.05）;心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降（P<0.05）;与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平（P<0.05）;明显下调心肌细胞凋亡率（P<0.05）;Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加（P<0.05）。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高（P<0.05）。结论 参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。     

扶正透邪方对耐药铜绿假单胞菌肺部感染大鼠免疫稳态的影响及机制

目的 探讨扶正透邪方及其不同功效在不同时点对耐药铜绿假单胞菌肺部感染大鼠免疫稳态的影响及其机制。方法 将168只大鼠随机分为空白组（n=8）,模型组（n=40）,单纯透邪组（n=40）,早期扶正组（n=40）和延迟扶正组（n=40）,空白组予蒸馏水灌胃;模型组在感染后予蒸馏水灌胃;单纯透邪组在感染后予清热透邪药物免煎颗粒（3.5 g·kg^-1）灌胃;早期扶正组在感染后予扶正透邪全方免煎颗粒（10.75 g·kg^-1）灌胃;延迟扶正组在清热透邪药物免煎颗粒灌胃的基础上于感染后第3天加扶正药物免煎颗粒［（3.5+10.75） g·kg^-1］灌胃;3个治疗组灌胃每日2次,每次2 mL。除空白组外将每个组根据3 h,1 d,3 d,5 d,7 d时间点分为5个小组（n=8）。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,高迁移率族蛋白B1（HMGB1）,白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子-2（TIPE2）的水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HMGB1蛋白表达水平。结果 3 h时,与空白组和模型组比较,单纯透邪组、早期扶正组、延迟扶正组TNF-α含量均明显升高（P<0.05）。3 d时,与模型组比较,早期扶正组和延迟扶正组TNF-α含量明显降低（P<0.05）;与透邪组比较,早期扶正组和延迟扶正组TNF-α含量均明显降低（P<0.05）。1 d时,与模型组比较,单纯透邪组、延迟扶正组HMGB1含量均明显升高（P<0.05）。5 d时,与模型组比较,延迟扶正组HMGB1含量明显降低（P<0.05）。7 d时,与空白组比较,模型组HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,早期扶正组HMGB1蛋白表达明显降低（P<0.05）。3 d时,与模型组比较,早期扶正组、延迟扶正组IL-10含量均明显升高（P<0.05）。5 d时,与单纯透邪组比较,早期扶正组IL-10含量明显升高（P<0.05）;7 d时,与单纯透邪组比较,早期扶正组、延迟扶正组IL-10含量均明显降低（P<0.05）。5 d时,与模型组比较,早期扶正组TIPE2含量明显降低（P<0.05）。7 d时,与模型组比较,单纯透邪组、延迟扶正组TIPE2含量均明显降低（P<0.05）。结论 扶正透邪全方或加用扶正药物在早期可促进炎症反应消除病原菌,晚期抑制炎症反应,避免炎症级联效应和肺组织损伤,说明扶正药物在感染后对维持机体免疫稳态具有重要作用。     

不同时间针刺对雌性恒河猴生殖内分泌影响的实验研究

方法：采用２×２析因设计，分别观　察不同时间针刺对实验动物月经周期前半期外周血　ＦＳＨ，ＬＨ，Ｅ２，Ｔ　分泌水平的影响。　结果：（１）早晨组、晚上组、早晚组各激素分泌均出现明显抑制，空白组　及非穴组则呈现大致正常的分泌状态。（２）各时间针刺组的各种激素分泌峰的上升速度及峰　值增值变化与空白组相比，差异均有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；非穴组与空白组　相比则不明显（Ｐ＞０．０５）。（３）不同时间针刺组组间比较，对　ＦＳＨ，Ｔ　分泌峰的上升　速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为早晨组、早晚组、晚上组；对　ＬＨ　分泌峰的上升　速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为早晨组、晚上组、早晚组；对　Ｅ２分泌峰的上　升速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为晚上组、早晚组、早晨组。（４）针刺１天１次与１　天２次比较，其作用差异无显著意义。     

浅析“血浊”理论与老年脑病防治

讨论血浊与老年脑病的关系以及清化血浊法在老年脑病防治中的意义。“血浊”作为一种全新的中医病理学概念，贯穿老年脑病的发生发展，是老年脑病的病理枢纽。清化血浊能够从根本上调节脏腑功能，延缓衰老，对防治老年脑病具有重要的指导意义。     

葛根素对大鼠血脂和血粘度的影响

目的：研究葛根素对大鼠血脂、血粘度的影响。方法：将30只大鼠随机分为正常对照组、高脂饲料组、高脂饲料葛根素组三组进行喂养与给药,30天后测定大鼠的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、全血粘度（低切）和血浆粘度。结果：与空白对照组相比,高脂饲料组大鼠的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、全血粘度（低切）和血浆粘度含量明显增加（P〈0．01）,高密度脂蛋白胆固醇含量降低;与高脂饲料组相比,高脂饲料葛根素组大鼠的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、全血粘度（低切）和血浆粘度明显降低（P〈0．01）。结论：葛根素具有明显的降低血脂、降低血粘度的作用。     

"发为血之余"的理论探讨

Objective: To explore the relationship of hair‘s changes with blood deficiency and testify the clinic significant of the theory of “bair being surplus of blood“. Methods: Observe patients with blood deficiency and their abnormal hair, and statistic data with regress analysis, x2 analysis and T test. Results: The degree of hair‘s abnormity correlate directly with blood deficiency;the occurrence rate of the hair‘s abnormity is higher than the control group obviously;the degree of the hair‘s abnormity also has a significant difference between case and control groups. The results prove that the theory of hair “being surplus of blood“ is right.     

山茱萸降血糖的实验研究

山茱萸醇提取物对大鼠正常血糖无影响。以7g/kg剂量对四氧嘧啶性和肾上腺素性糖尿病模型大鼠灌服7天,可明显降低其高血糖(P值分别小于0.05和0.01);还可明显抑制ADP诱导的糖尿病大鼠血小板聚集的增加和血液粘度的升高。但对血脂无明显影响。     

血瘀与老年病关系初探

从中医学对气血与人体健康长寿关系的认识出发,结合现代对老年生理病理的临床与实验研究,阐明血瘀与老年病关系密切,认为活血化瘀法在老年病防治中有着显著而肯定的地位。     

论血浊与脑病

讨论血浊与脑病的关系以及清化血浊法在脑病防治中的意义。认为血浊作为一种全新的中医病理学概念,是脑病的病理枢纽,与脑病的发生、发展有极为密切的关系;清化血浊有助于宁脑安神、清脑醒神、化瘀通络、益脑填髓、调脏安脑,对脑本脏之病以及脏病及脑诸证的防治有重要意义。     

血瘀型脑血管硬化性痴呆症与内皮素、降钙素基因相关肽及一氧化氮的相关性研究

选取无心、肺、肝、肾及其它脏器系统严重病变的脑血管硬化性痴呆症(VD)患者65例,根据长谷川痴呆量表评分分为轻度痴呆(VD1)组和重度痴呆(VD2)组,与正常对照组进行血瘀评分、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)、一氧化氮(NO)比较。结果:(1)VD患者血瘀评分显著高于正常对照组,VD2组血瘀评分高于VD1组(P<0.01);(2)VD组ET显著高于正常对照组,CGRP、NO显著低于正常对照组(P<0.01);VD2组ET高于VD1组,CGRP、NO低于VD1组(P<0.01);(3)VD患者的ET与CGRP、NO呈负相关性,CGRP与NO呈正相关性(P<0.01);血瘀评分与ET呈正相关,与CGRP、NO呈负相关(P<0.01)。表明VD患者存在血瘀标实的病理改变,ET、CGRP、NO之间平衡制约机制的破坏在VD的发病、发展中有重要作用。     

针刺对冠心病患者血浆单胺类物质调整作用的临床研究

观察４０例冠心病患者针刺治疗前后血浆５－ＨＴ、５－ＨＩＡＡ、ＮＥ和ＤＡ的含量变化，结果表明冠心病患者５－ＨＴ、５－ＨＩＡＡ、ＮＥ显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１～０．０１），针刺组针刺治疗后５－ＨＴ、５－ＨＩＡＡ、ＮＥ显著降低（Ｐ＜０．０１～０．０５），ＤＡ针刺治疗前后无显著性差异。提示针刺治疗具有对冠心病患者单胺类体液因素的调整作用，并能改善冠状动脉痉挛和闭塞。针刺可能具有保持动态平衡的机体自我稳定性的作用。     

心阴虚证患者肾素—血管紧张素—醛固酮系统的观察

对33例不同心血管疾病心阴虚证患者肾素—血管紧张素—醛固酮系统(RAAS)的功能状态进行了观察,结果发现:心阴虚证RAAS活钱增高,表现为三种激素水平均比正常人高(P<0.05或 P<0.01)。提示该证型存有明显的神经—体液调节功能紊乱。心阴虚证与心气虚证的RAAS活性变化规律颇为相似,但影响的病理因素不尽相同。