基于TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨独活寄生汤对类风湿性关节炎大鼠的抗炎作用及机制

目的 探讨独活寄生汤对胶原诱导性关节炎（CIA）模型大鼠的抗炎作用及其对Toll样受体2（TLR2）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 将48只雄性SD大鼠,随机分为以下6组（n=8）,正常组、模型组、甲氨蝶呤组、独活寄生汤低、中、高剂量组。采用胶原抗体诱导法于大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型,模型建立成功后进行灌胃给药。甲氨蝶呤组每次给予2.0 mg·kg^-1甲氨蝶呤,每周3次;独活寄生汤低、中、高剂量组每次给予3.8、7.6、15.2 g·kg^-1·d^-1,连续灌胃治疗28 d;正常组和模型组给予等体积生理盐水。通过记录大鼠体质量,观察大鼠足肿胀度,测定关节炎指数、免疫器官指数,微循环检测仪检测大鼠微循环指标变化,苏木素-伊红（HE）染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变及流式细胞术检测滑膜细胞凋亡率以明确独活寄生汤对类风湿性关节炎的治疗作用,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-17A、γ干扰素（IFN-γ）水平变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低（P<0.01）,足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数显著升高（P<0.01）,微血管综合评分及血管阻力显著提高（P<0.01）,病理切片可观察到滑膜组织增生明显、炎性细胞大量浸润,血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ表达及滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK的表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,独活寄生汤低、中、高剂量组大鼠体质量显著升高（P<0.01）,足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数明显下降（P<0.05,P<0.01）,微血管综合评分及血管阻力明显下降（P<0.05,P<0.01）,滑膜组织病理学损伤情况明显好转,滑膜细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ水平明显下降（P<0.05,P<0.01）,滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK的表达水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 独活寄生汤可能通过调节TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路缓解CIA大鼠体内炎症反应,从而发挥其抗类风湿性关节炎作用。     

补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠卵巢内质网应激的调节

目的 探讨补肾助孕方对米非司酮诱导的黄体功能不全（LPD）模型大鼠卵巢内质网应激（ERS）的调控机制。方法 使用随机数表法将50只SD大鼠分为空白组，模型组，地屈孕酮（0.02 g·kg^-1）组，补肾助孕方低（0.08 g·kg^-1）、高剂量（0.24 g·kg^-1）组。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠卵巢免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK），肌醇必需酶-1（IRE-1），活性转录因子6（ATF6），C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白和mRNA表达水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E₂）水平。结果 与空白组比较，模型组BIP，PERK，CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01），PERK及CHOP mRNA表达明显下降（P<0.05）；而IRE-1，ATF6蛋白表达，IRE-1，BIP，ATF6 mRNA表达，血清E₂，P水平差异无统计学意义。与模型组比较，地屈孕酮组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白表达，PERK，IRE-1，BIP，ATF6，CHOP mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方低剂量组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平明显升高（P<0.05），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白和mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方高剂量组PERK，BIP，CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平显著升高（P<0.01），而IRE-1和ATF6蛋白表达，PERK，IRE1，BIP，ATF6 mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义。结论 补肾助孕方可以改善黄体功能不全，其机制可能与缓解内质网应激作用有关。     

补肾活血方调控Wnt/β-catenin信号通路改善复发性流产小鼠子宫螺旋动脉重铸的机制

目的 观察补肾活血方对复发性流产模型小鼠子宫蜕膜组织Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路及子宫螺旋动脉重铸的影响，探讨其作用机制。方法 以CBA/J×BALB/c小鼠合笼构建正常妊娠小鼠模型，以CBA/J×DBA/2小鼠合笼构建复发性流产小鼠模型，将复发性流产模型小鼠随机分为模型组、地屈孕酮组、中药低剂量组及中药高剂量组，以正常妊娠小鼠作为空白组，每组10只，各组分别给予药物治疗14 d。疗程结束后观察各组小鼠胚胎吸收率，苏木素-伊红（HE）染色观察蜕膜组织病理形态、螺旋动脉生理性转变率，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、血管内皮生长因子（VEGF）及Wnt/β-catenin信号通路的mRNA与蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组胚胎吸收率明显升高（P<0.05）；子宫螺旋动脉生理性转变率明显降低（P<0.05）；子宫蜕膜组织的细胞水肿变性，排列紊乱；螺旋动脉重铸关键因子MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt2、β-catenin、细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）、c-Myc的mRNA与蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，中药低剂量组、中药高剂量组可以明显降低胚胎吸收率（P<0.05）；明显提高螺旋动脉生理性转变率（P<0.05）；改善子宫蜕膜组织的细胞形态、增加蜕膜血管数量；明显上调MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的mRNA与蛋白表达（P<0.05）。结论 复发性流产存在子宫螺旋动脉重铸障碍，补肾活血方可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路，增加VEGF、MMP-2及MMP-9的表达，促进子宫螺旋动脉重铸，从而治疗复发性流产。     

金刚丸对骨质疏松症模型大鼠p38 MAPK、JNK、IL-1表达的影响

目的 探讨不同浓度金刚丸对骨质疏松症模型大鼠破骨细胞、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）及白细胞介素-1（IL-1）表达的影响，根据实验结果分析金刚丸治疗骨质疏松症作用机制，同时筛选出金刚丸最佳用药浓度。方法 将56只SPF级大鼠随机分为空白组（n=8）、假手术组（n=8）、模型组（n=8）、金刚丸低剂量组（n=8）、金刚丸中剂量组（n=8）、金刚丸高剂量组（n=8）、戊酸雌二醇组（n=8）。金刚丸高、中、低剂量组分别以0.72、0.36、0.18 g·kg^-1·d^-1给予金刚丸蒸馏水溶液灌服；戊酸雌二醇组以0.009 g·kg^-1·d^-1灌服。模型组大鼠、空白组、假手术组给予3 mL生理盐水。给药12周后取样。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法观察破骨细胞数量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清JNK、p38 MAPK及IL-1含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测 p38 MAPK、JNK mRNA表达水平。结果 TRAP染色结果显示，与模型组比较，雌二醇组及不同浓度的金刚丸溶液均可不同程度抑制破骨细胞的形成。ELISA检测结果显示，与空白组及假手术组比较，模型组大鼠血清中的p38 MAPK、JNK及炎性因子IL-1水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，金刚丸低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组p38 MAPK、JNK及IL-1水平显著降低（P<0.01）。金刚丸高剂量组血清中JNK及IL-1含量低于雌二醇组（P<0.05）。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，模型组股骨中p38 MAPK、JNK mRNA相对表达量显著增加（P<0.01），与模型组比较，戊酸雌二醇组、金刚丸高、中、低剂量组股骨中p38 MAPK、JNK mRNA相对表达量均显著降低（P<0.01）。结论 金刚丸可以抑制破骨细胞的形成，同时降低骨髓腔的直径，提高骨质量，降低炎性因子的产生，并影响MAPK信号通路代谢，降低p38 MAPK、JNK活性从而抑制破骨细胞的分化及增殖，调节骨代谢预防骨质疏松症。因此，金刚丸可能在维持骨骼健康，治疗骨质疏松方面具有应用的价值。     

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的 研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38 MAPK/NF-κB）信号通路抑制广泛性焦虑（GAD）大鼠下丘脑区炎症反应，改善GAD大鼠的焦虑样行为，缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法 74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组，剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠，造模14 d后进行旷场实验（OFT）和高架十字迷宫实验（PMT）检测各组大鼠焦虑样行为，筛选造模成功的大鼠60只，随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组（6、12、24 g·kg^-1）和地西泮组（1 mg·kg^-1），每组12只，连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮，给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素IL-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α（IκBα）、钙结合蛋白（Iba-1）mRNA的水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化（p）-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平；免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏，OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加（P<0.01），PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少（P<0.01），下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高（P<0.01），血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多（P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达显著减低（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常，OFT边缘运动距离和时间明显减少（P<0.05，P<0.01），PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加（P<0.05，P<0.01），下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低（P<0.05，P<0.01），血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低（P<0.05，P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路，降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平，发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。     

补肾活血方对不明原因复发性流产患者蜕膜与外周血中IL-21、IL-27的影响＊

目的 探究补肾活血方治疗不明原因复发性流产（Unexplained recurrent spontaneous abortion， URSA）可能的作用机制。方法 ①试验1收集15例正常流产患者蜕膜和15例URSA患者妊娠失败蜕膜，比较两组IL-21R和IL-27R的相对mRNA含量。②试验2将61例URSA患者分为实验组（补肾活血方+地屈孕酮）和对照组（地屈孕酮），比较两组患者用药前后外周血中IL-21和IL-27表达水平。结果 ①试验1URSA患者蜕膜中IL-21R的表达显著高于正常妊娠组（P<0.05），相反IL-27R在URSA患者蜕膜中的表达显著低于正常妊娠组（P<0.01）。②试验2两组患者外周血中IL-21的表达治疗后均低于治疗前（P<0.01），且治疗后实验组低于对照组（P<0.05）；两组患者外周血IL-27的表达治疗后均高于治疗前（P<0.01），且治疗后实验组高于对照组（P<0.01）。结论 IL-21和IL-27水平与URSA的发生有关，补肾活血方可能通过使URSA患者外周血中IL-21水平下降、IL-27水平上升，从而令其免疫微环境及蜕膜组织内稳态得到改善，为URSA的治疗提供新思路。     

附子理中丸通过调节MAPK信号通路改善顺铂诱导CIPN模型小鼠损伤的作用机制

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，探讨附子理中丸改善顺铂诱导化疗所致周围神经病变（CIPN）模型小鼠损伤的作用机制。方法 KM雌性小鼠40只，随机分为正常组，模型组，附子理中丸组（3.5 g·kg^-1），阿司匹林组（0.026 g·kg^-1）。每日腹腔注射顺铂（3 mg·kg^-1），连续5 d，制备CIPN模型；造模同时灌胃给予相应药物，连续12 d。观察其一般情况和行为学表现；末次给药后取材，苏木素-伊红（HE）染色观察足掌部皮肤组织病理变化。采用生化学检测血清中超氧化物歧化酶（SOD），过氧化氢（H₂O₂），丙二醛（MDA），一氧化氮（NO）的水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肾脏组织中白细胞介素-6（IL-6），白细胞介素-1β（IL-1β），肿瘤坏死因子-α（TNF-α），谷胱甘肽过氧化物酶-3（GPX-3）的含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织中细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）及其磷酸化（p-ERK1/2），p38 MAPK及其磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）的表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠足掌部皮肤病理损伤明显，表皮角化过度呈网篮状结构，棘层萎缩，细胞数量减少，细胞内水肿；与模型组比较，附子理中丸组足掌部皮肤组织的病理损伤明显降低。与正常组比较，模型组小鼠体质量、机械痛阈值、热痛阈值显著下降（P<0.01），SOD活性明显降低（P<0.05），H₂O₂，MDA，NO含量显著升高（P<0.01），IL-6，IL-1β，TNF-α表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，附子理中丸组小鼠体质量、机械痛阈值、热痛阈值显著升高（P<0.01），SOD活性明显升高，H₂O₂，MDA和NO含量明显降低（P<0.05），IL-6，IL-1β，TNF-α表达显著降低（P<0.01）；与正常组比较，模型组ERK1/2，p-ERK1/2，p38 MAPK，p-p38 MAPK蛋白表达显著上升（P<0.01）；与模型组比较，附子理中丸组ERK1/2，p-ERK1/2，p38 MAPK，p-p38 MAPK蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 附子理中丸能够改善顺铂诱导CIPN模型小鼠的神经功能损伤，提高小鼠的疼痛阈值，其作用机制可能与调节MAPK信号通路，抑制炎性反应及机体氧化应激水平相关。     

基于Akt/JNK/p38 MAPK信号通路探讨健脾活骨方对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察健脾活骨方（JPHGP）对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用,并基于蛋白激酶B/c-Jun氨基末端激酶/p38 MAPK（Akt/JNK/p38 MAPK）信号通路探索相关作用机制。方法 通过鸡胚尿囊膜实验、胸主动脉环实验和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的迁移、侵袭、黏附和管腔形成实验,在有或无酒精诱导条件下,观察JPHGP不同质量浓度8、16、32 μg·L^-1对血管新生的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HUVEC中Akt、JNK、p38 MAPK等磷酸化表达水平。结果 与正常组比较,模型组动脉环周围微血管数目及长度均减少,HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力降低（P<0.05,P<0.01）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组作用后能明显升高鸡胚尿囊膜新生血管长度（P<0.05,P<0.01）,与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组能浓度依赖地增加胸主动脉环周围微血管数量（P<0.05,P<0.01）,JPHGP 32 μg·L^-1组能升高胸主动脉环周围微血管长度（P<0.05）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组均能增强HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力。Western blot检测结果表明,与正常组比较,模型组中的p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组的p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）,JPHGP 16、32 μg·L^-1组的p-JNK/JNK的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 JPHGP对酒精致血管内皮细胞功能损伤具有保护作用,其机制可能与激活Akt/JNK/p38 MAPK信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP“健脾活血”功效阐明提供一定的科学依据。     

芍药汤通过抑制HIF-1α调节Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在溃疡性结肠炎辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡中的作用及芍药汤的干预机制。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（0.42 g·kg^-1），芍药汤组（11.1 g·kg^-1），抑制剂组（2-甲氧基雌二醇，0.015 g·kg^-1），芍药汤+抑制剂组，采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎模型，各组分别对应给予生理盐水，美沙拉嗪，芍药汤，抑制剂及芍药汤+抑制剂治疗7 d，观察各组大鼠一般情况和疾病活动指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-23水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织叉头状/翼状螺旋转录因子P3（FoxP3），维甲酸相关孤儿受体（RORγt），HIF-1α蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠疾病活动指数（DAI）评分，肠黏膜病理学评分显著升高（P<0.01），血清中的IL-10水平显著降低（P<0.01），IL-17和IL-23显著升高（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01），FoxP3蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芍药汤组DAI评分，肠黏膜病理学评分降低（P<0.05，P<0.01），血清中IL-10水平升高（P<0.01），IL-17，IL-23降低（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平降低（P<0.01），FoxP3蛋白表达升高（P<0.01）；与抑制剂组比较，芍药汤组及芍药汤+抑制剂组RORγt，FoxP3及HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 芍药汤可以有效治疗溃疡性结肠炎，其作用机制可能与抑制HIF-1α来调节Treg/Th17的重新平衡相关。     

黄皮叶提取物对哮喘大鼠血清及肺组织Th1/Th2平衡的调节作用

目的:探讨黄皮叶提取物对哮喘大鼠炎症反应中Th1/Th2细胞因子平衡的调节作用。方法:将健康雄性SD大鼠48只,随机分为6组,分别为正常组、哮喘模型组、地塞米松组(1.5 mg·kg^-1·d^-1)、黄皮叶提取物低、中、高剂量组(520,1 040,2 080 mg·kg^-1·d^-1)。除正常组外,其余各组分别在第1,7天采用卵清蛋白致敏法ih致敏液,并于第15天开始,各给药组大鼠每天在灌胃给药后1 h进行雾化激发,连续1周;正常组及模型组以生理盐水灌胃代替。分别采用ELISA法测定大鼠血清中一氧化氮(NO),白三烯D₄(LTD₄),白细胞介素-4(IL-4),γ-干扰素(IFN-γ)的含量、硝酸还原法测肺组织NO含量;RT-PCT法测定肺组织中IL-4,IFN-γ mRNA表达及观察肺组织病理学改变。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中NO,IL-4,LTD₄的含量明显升高,IFN-γ的含量降低,肺组织NO含量明显升高,大鼠肺组织中IL-4 mRNA表达明显升高,IFN-γ mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,黄皮叶提取物低、中、高剂量组均能明显减少血清中NO,IL-4的含量,升高IFN-γ的含量(P<0.05,P<0.01),黄皮叶提取物高、中剂量组能减少哮喘大鼠肺组织中NO的含量,黄皮叶提取物高剂量组能明显减少哮喘大鼠血清中LTD₄的含量(P<0.05,P<0.01),黄皮叶提取物低、中、高剂量组能明显降低哮喘大鼠肺组织中IL-4 mRNA表达,增加IFN-γ mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:黄皮叶提取物能有效的减少哮喘大鼠的炎症反应,其机制可能是通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡,从而减轻炎症细胞浸润有关。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

中药对Th1/Th2细胞因子平衡调节作用的研究进展

概述中药对Thl/Th2平衡的调节作用,主要包括中药对自身免疫疾病Th1/Th2平衡的影响、对肿瘤Th1/Th2平衡的影响、对变态反应性疾病Th1/Th2平衡的影响以及对不同中医证型Th1/Th2平衡的影响等。     

千佛菌对老龄小鼠Th_1/Th_2漂移的影响

目的:通过研究千佛菌对D-半乳糖致衰老模型小鼠外周血Th1、Th2型细胞因子(IFN-γI、L-4)水平及I FN-γ/I L-4比值的影响,探讨千佛菌对衰老机体的免疫调节作用。方法:将小鼠随机分为正常对照组、衰老模型组、千佛菌大、小剂量组。除正常组外,其余均腹腔注射D-半乳糖制备衰老模型。千佛菌大、小剂量组分别以100%和50%药液每只每日0.4 mL灌胃,其余等量生理盐水灌胃。测定血清中IFN-γI、L-4含量并计算IFN-γ/IL-4比值,测定脾脏及胸腺指数。结果:模型组小鼠血清IFN-γI、L-4水平I、FN-γ/IL-4比值、脾脏及胸腺指数均明显降低,与正常组比较P0.001;与模型组比较,千佛菌大、小剂量组IFN-γI、L-4水平、脾脏及胸腺指数均明显升高P0.001I,FNγ/IL-4比值恢复;千佛菌大、小剂量组间IFN-γI、L-4比较P0.001。结论:千佛菌对D-半乳糖致衰老模型小鼠Th1、Th2型细胞因子水平及IFN-γ/IL-4比值具有升高作用,并能够显著增加小鼠的脾脏及胸腺指数,对D-半乳糖导致衰老的Th1/Th2免疫失衡具有一定的调节作用,能使之趋向恢复正常。     

Anti-asthma effects of synthetic salidroside through regulation of Th1/Th2 balance

AIM： The aim of the study was to investigate the effect and mechanism of action of synthetic salidroside in an ovalbumin （OVA）-induced asthma model in mice. METHOD： BALB/c mice were sensitized with an intraperitoneal injection of ovalbumin （OVA） to induce a mouse model of asthma in paracmasis. The mice were treated with dexamethasone as the positive control. At the end of the study, respiratory reactivity was detected, the numbers of various kinds of white blood cells in the bronchoalveolar lavage fluid （BALF） were counted, and the levels of IL-4 and INF-γ in BALF were determined. Quantitative PCR was used to detect the mRNA contents of IL-4 and INF-γ in lung tissue. Histologic examination was performed to observe inflammatory cellular infiltration. RESULTS： Salidroside treatment virtually eliminated airway hyper-reactivity, markedly reduced the eosinophil percent, obviously reduced the levels of IL-4 and raised INF-γ in the bronchoalveolar lavage fluid （BALF） compared with the sham-treated group. Quantitative PCR on the mRNA content of IL-4 and INF-γ provided confirmation. Lung histologic observations showed that salidroside reduced inflammation and edema. These effects were equivalent to the effects of dexamethasone. CONCLUSION： Synthetic salidroside exhibits an anti-asthma effect which is related to the regulation of Th1/Th2 balance. This provides a new possibility for treatment of allergic asthma.     

围术期异体输血对肺癌患者Th1/Th2、Th17/Treg细胞因子失衡的影响

目的观察围术期异体输血后肺癌患者外周血CD4+T细胞各亚群Th1、Th2、Th17及Treg细胞相关因子的比例变化。方法将行手术治疗的64例肺癌患者随机分为2组:未辐照组34例术中输入普通悬浮红细胞,辐照组30例术中输入辐照悬浮红细胞,分别于术前及术后14 d应用流式细胞术(FCM)测定2组患者外周血Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4)、Th17(IL-17)及Treg(Foxp3)细胞比例。结果术后14 d,2组外周血中Th1、Treg细胞比例和Th1/Th2均明显高于术前(P均<0.05),Th2细胞比例、Th17/Treg均明显低于术前(P均<0.05),且辐照组Th1细胞比例及Th1/Th2、Th17/Treg比值均显著高于未辐照组(P均<0.05),Treg细胞比例低于未辐照组(P<0.05)。结论肺癌患者围术期异体输血后Th1/Th2、Th17/Treg细胞因子失衡可能与输入异体血中的活性淋巴细胞有关。     

维药神香草对COPD小鼠Th1/Th2 和Th17/Treg 平衡的影响

目的：研究维药神香草对COPD 小鼠Th1/Th2 和Th17/Treg 平衡的影响,探讨神香草治疗COPD 的免疫作用机制。方法：复制前期熏烟法建立COPD 小鼠模型,将小鼠随机分为正常组、生理盐水组、神香草高、中、低剂量组。采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中IFN-酌、IL-4、IL-17 及IL-10 的水平。结果：与正常组比较,COPD 模型组小鼠血清IL-4、IL-17 水平明显升高（P<0.05）,IFN-γ、IL-10 的水平明显降低（P<0.05）;神香草治疗后,与模型组比较,小鼠血清IL-4、IL-17 水平明显降低,IFN-γ和IL-10 水平明显升高。相关性分析表明IFN-γ与IL-4,IL-17 与IL-10 都呈负相关。结论：神香草在纠正Th1/Th2 和Th17/Treg 失衡方面发挥了一定的作用。     

免疫性肝损伤小鼠Th1/Th2细胞的变化

目的:探讨Th1/Th2细胞在免疫性肝损伤小鼠中的作用.方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6小时后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th2/Th2比例;另外经刀豆蛋白A(ConA)刺激培养72h后,收集培养上清,ELISA法检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平,同时观察地塞米松对Th1/Th2细胞的影响.结果:在模型组,随着时间的延长,小鼠外周血PBMC中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平逐渐升高,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平逐渐降低,Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值逐渐增大,与肝组织损害程度呈现正相关.地塞米松能够抑制Th1型细胞因子的分泌,降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P＜0.05).结论:Th1/Th2细胞失衡是造成小鼠免疫性肝损伤的原因之一,Th1应答占主导地位.     

外感湿热证患者Th1／Th2细胞因子水平变化的研究

目的：通过观察外感湿热证患者外周血T细胞免疫水平的变化,探讨外感湿热证的部分发病机制。方法：30例均为外感发热患者,辨证属外感湿热证者。正常对照组15例,为同时期健康志愿者。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者与健康者血清白介素4（IL-4）、干扰素γ（IFN-γ）水平,运用蒿芩清胆汤治疗患者3天,复测上述指标,观察蒿芩清胆汤的干预作用。结果：经蒿芩清胆汤治疗后,外感湿热组血清IFN-γ水平显著降低（P〈0．01）,INF-γ,／IL-4比值明显降低（P〈0．01）。结论：提示Th1／Th2比值失衡可能是外感湿热证发病机制之一,调整Th1／Th2失衡是蒿芩清胆汤治疗外感湿热证的机制之一。     

Th1/Th2 cytokines’ expression and production by propolis-treated mice

Aim of the study

Propolis is a natural product extensively used in food and beverages to improve health and to prevent diseases, showing immunomodulatory properties. The goal of this work was to evaluate the effect of propolis administration over a short-term to mice on Th1 (IL-2 and IFN-γ) and Th2 (IL-4 and IL-10) cytokines’ expression and production.

Materials and methods

Propolis was administered for 3 days to mice by gavage, spleens were removed and RNA was extracted to assess cytokines’ expression by real-time PCR. Supernatants of spleen cell cultures were used for cytokines determination by ELISA.

Results

Propolis administration to mice did not affect IL-2, IL-4 and IL-10 expression and production, while IFN-γ production was inhibited in the splenocyte cultures stimulated or not by Con A.

Conclusions

Since IFN-γ is a pro-inflammatory cytokine, our data suggest that propolis administration over a short-term to mice may be associated with anti-inflammatory effects in vivo, and further assays could check propolis efficiency in inflammatory diseases.     

止咳平喘合剂对哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子影响的实验研究

目的：观察中药复方止咳平喘合剂对哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子的影响,从而进一步深化探讨名老中医经验方的作用机制。方法：随机将60只SD大鼠分为空白对照组、模型组、阳性对照组、止咳平喘合剂大、中、剂小剂量组,每组均为10只,以卵白蛋白（oval albumin,OVA）复制哮喘大鼠模型,采用ELISA方法检测血清中IL-4、IFN-γ含量,取右肺组织行HE染色进行形态学观察。结果：模型组血清中IL-4明显高于空白对照组（P〈0.01）,而IFN-γ明显低于空白对照组（P〈0.01）,存在IL-4/IFN-γ失衡;与模型组相比,阳性对照组、中药大剂量与中剂量组IL-4含量降低（P〈0.05）,而IFN-γ含量均有升高（P〈0.01～0.05）;并且血清IL-4与IFN-γ呈明显负相关（r为-0.974,P〈0.01）。结论：IFN-γ/IL-4的失衡参与哮喘发病过程,止咳平喘合剂可能通过下调IL-4的水平和提高IFN-γ的含量,纠正Th1/Th2细胞因子的失衡,进而减轻气道炎症。