加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的 观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁,TGF-β₁）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法 用TGF-β₁（10 μg·L^-1）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca²⁺浓度。结果 TGF-β₁能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（P<0.01）,下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（P<0.01）,上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin）,转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（P<0.01）,并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）,活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1）总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca²⁺胞内蓄积（P<0.01）;而加味小陷胸汤（10,20,40 mg·L^-1）均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^-1效果最佳（P<0.05,P<0.01）;Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路特异性抑制剂（R）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^-1均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β₁介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca²⁺在胞内蓄积（P<0.05,P<0.01）,且（R）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^-1抑制作用效果更强（P<0.05,P<0.01）。结论 以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路抑制TGF-β₁介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。     

对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（JNK/p38 MAPK）信号通路的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度（100、150、200、250、300 mg·L^-1）对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝（MTT）比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果 与空白组比较,对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞增殖抑制率显著增高（P<0.01）;对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低（P<0.01）。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2蛋白表达（P<0.01）;对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;明显上调p38 MAPK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;对叶百部总生物碱（200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调JNK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。     

柴胡皂苷A通过Wnt/β-catenin通路改变A549/DDP细胞耐药性

目的 探讨柴胡皂苷A（SSA）逆转人肺癌顺铂（DDP）耐药株A549/DDP的作用及机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测A549和A549/DDP对DDP的耐药性及SSA对A549和A549/DDP细胞活力的影响；流式细胞术检测A549/DDP凋亡率和细胞中活性氧（ROS）的变化；实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测C-myc，B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3） mRNA的表达情况；TopFish双荧光素酶报告基因检测β-连环蛋白（β-catenin）的转录活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的变化。结果 CCK-8检测结果显示，A549/DDP的耐药性是A549的12.82倍，差异具有统计学意义（P<0.05），SSA能够抑制A549的细胞活力，其半数抑制浓度（IC₅₀）为34.9 μmol·L^-1。SSA抑制 A549/DDP细胞的活力并具有浓度依赖性，在20 μmol·L^-1浓度时，对A549/DDP的抑制率<10%，选择20 μmol·L^-1作为逆转浓度；流式结果显示，与空白组比较，DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加；与空白组比较，DDP组A549/DDP细胞中C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05）；与空白组比较，DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05）；与空白组和DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 柴胡皂苷A可以提高A549/DDP细胞对DDP的敏感性，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。     

黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基）,黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20,40,60 mg·L^-1）,顺铂低、中、高质量浓度组（5,10,20 mg·L^-1）,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0,20,40,60 mg·L^-1）和顺铂（0,5,10,20 mg·L^-1）干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1）,顺铂（10 mg·L^-1）,联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05）,表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05）,表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05）,且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）;与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01）,以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05,P<0.01）,且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。     

六味地黄丸含药血清对β-淀粉样蛋白损伤PC12细胞中FoxO3a/p-FoxO3a蛋白表达的影响＊

目的 观察不同浓度β-淀粉样蛋白（amyloid β-protein25-35，Aβ_25-35）和六味地黄丸含药血清（medicated serum of Liuwei Dihuang Pill，MSLDP）对PC12（pheochromocytoma cells）细胞及FoxO3a（Forkhead box protein O 3a）、p-FoxO3a蛋白表达的影响，研究六味地黄丸含药血清预处理对Aβ_25-35损伤AD（Alzheimer’s disease）细胞模型的保护作用。方法 配制Aβ_25-35母液和制备六味地黄丸含药血清，用含有不同浓度的Aβ_25-35（10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1）和六味地黄丸含药血清（2.5%、5%、10%、20%、30%）的培养基培养PC12细胞，噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力，同时观察细胞形态的变化，免疫印迹法检测细胞中FoxO3a及p-FoxO3a蛋白表达量的变化。取合适浓度的六味地黄丸含药血清预处理Aβ_25-35诱导的AD细胞模型，观察细胞形态、活力及FoxO3a、p-FoxO3a表达量的变化。结果 ①Aβ_25-35显著降低PC12细胞存活率（P<0.01），并造成细胞形态的改变，细胞内p-FoxO3a表达量降低，而FoxO3a的表达升高。②六味地黄丸含药血清显著提高PC12细胞存活率（P<0.01），并促使细胞增加分化趋势，细胞内FoxO3a表达降低，而p-FoxO3a的表达随着血清浓度的增加而增加。③六味地黄丸含药血清预处理能够明显降低Aβ_25-35对PC12细胞的损伤，与模型组相比，六味地黄丸含药血清干预组FoxO3a的蛋白表达降低（P<0.01），p-FoxO3a的蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 六味地黄丸含药血清能够提高AD细胞模型的细胞活性，对PC12细胞具有明显的保护作用，磷酸化FoxO3a蛋白表达水平的提高可能是其相关的作用机制。     

肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药

目的 观察肺岩宁方（肺岩宁）对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响，并探究其可能存在的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法观察顺铂（0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mg?L^-1）对A549和A549/DDP（顺铂耐药）细胞细胞增殖能力的影响，肺岩宁（0、100、200、300、400、500、600 mg?L^-1）对A549/DDP细胞增殖能力影响；免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（WB）观察A549和A549/DDP组上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达；将A549/DDP细胞分为空白组、肺岩宁组（200 mg?L^-1）、顺铂组（6.0 mg?L^-1）和联合用药组［肺岩宁（200 mg?L^-1）+顺铂（6.0 mg?L^-1）］，并进行相应处理，侵袭小室（transwell）实验比较各组侵袭能力；WB检测各组EMT相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和免疫荧光染色分别检测各组耐药因子mRNA和蛋白表达。结果 与A549组比较，A549/DDP组对顺铂耐药性显著增高（P<0.01）；E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达降低，波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Snail）蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。经肺岩宁、顺铂处理后，与空白组比较，肺岩宁可浓度依赖性抑制A549/DDP细胞增殖（P<0.01）；肺岩宁组、顺铂组、联合用药组侵袭能力降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组侵袭能力显著降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01），顺铂组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低，Snail蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）；联合用药组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组肺耐药相关蛋白（LRP）、多药耐药因子1（MDR1）蛋白和mRNA表达降低，拓扑异构酶Ⅱα （TOPO Ⅱα）蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；顺铂组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；联合用药组LRP蛋白和mRNA表达无明显改变，MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与顺铂组比较，肺岩宁组、联合用药组LRP、MDR1蛋白和mRNA表达降低，TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与肺岩宁组比较，联合用药组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）。结论 肺岩宁方能够逆转非小细胞肺癌顺铂耐药，其机制可能与调控EMT进程相关。     

甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒（Annexin V-FITC/PI）检测细胞凋亡情况;荧光探针法（DCFA-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平,荧光探针（JC-1）法检测细胞线粒体膜电位（MMP）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）的表达及内质网应激相关蛋白（CHOP）,转录激活因子4（ATF4）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）,磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）,真核翻译起始因子2α（eIF2α）,磷酸化真核翻译起始因子2α（p-eIF2α）表达。结果 与空白组比较,随着甘草查尔酮A浓度增大,从甘草查尔酮A 5 μmol·L^-1开始,细胞存活率明显降低（P<0.05）,其半数抑制浓度（IC₅₀）为19.05 μmol·L^-1;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）组细胞凋亡明显升高（P<0.05）,甘草查尔酮A 40 μmol·L^-1时细胞凋亡率达30.2%（P<0.05）;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax表达明显升高（P<0.05）,且呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）明显升高细胞内ROS水平（P<0.05）,降低线粒体MMP水平（P<0.05）,导致线粒体功能障碍,呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）诱导内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP,ATF4表达明显增多,磷酸化（p）-PERK,p-eIF2α表达明显升高（P<0.05）,呈浓度依赖性。结论 甘草查尔酮A可能通过增加细胞内ROS水平,降低MMP引起线粒体功能障碍和内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 采用分子对接和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测苦参碱衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对热休克蛋白90（Hsp90）的调控作用；采用噻唑蓝（MTT）比色法检测衍生物C4（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μmol·L^-1）对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响；采用克隆形成实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞增殖能力的影响；采用细胞划痕实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞迁移能力的影响；采用Transwell实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞侵袭能力的影响；采用流式细胞术检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞凋亡能力的影响；采用Western blot检测衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、表皮生长因子受体（EGFR）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X基因（Bax）、B细胞淋巴瘤2相关的细胞死亡激动剂（Bad）蛋白表达量的影响。结果 衍生物C4能有效地与Hsp90蛋白通过水介导的氢键网络与天冬氨酸-51（ASN-51）、甘氨酸-135（GLY-135）、苯丙氨酸-138（PHE-138）的残基相互作用，和PHE-138苯环之间的π-π堆积相互作用有助于增强其亲和力，与空白组比较，衍生物C4可以明显的下调A549细胞内Hsp90蛋白表达（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以明显降低细胞活力（P<0.05，P<0.01）；给药24、48、72 h，衍生物C4对A549细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（12.32±0.14）、（7.79±0.16）、（3.26±0.09） μmol·L^-1；与空白组比较，衍生物C4（2、4、8 μmol·L^-1）使A549细胞克隆形成能力明显下降（P<0.05，P<0.01），且呈浓度依赖性；与空白组比较，衍生物C4可以明显抑制A549细胞的迁移、侵袭能力（P<0.05，P<0.01），其中浓度在8 μmol·L^-1时效果最为显著（P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以显著诱导A549细胞发生凋亡反应（P<0.01），在0、2、4、8 μmol·L^-1时细胞凋亡率分别为（2.28±0.35）%、（4.97±0.36）%、（8.86±0.50）%、（20.67±0.99）%；与空白组比较，衍生物C4可以明显增加Caspase-9、Bax、Bad蛋白表达量（P<0.05，P<0.01），使PI3K、p-PI3K、p-Akt、EGFR、Bcl-2蛋白表达量发生不同程度降低（P<0.05，P<0.01），Akt蛋白的表达量没有发生明显的变化。结论 衍生物C4发挥抗肿瘤的作用是通过抑制细胞活力、增殖能力、迁移和侵袭能力，并且促进细胞的凋亡反应，其发挥作用的机制可能是通过抑制Hsp90/PI3K/Akt信号通路来实现的。     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究当归-川芎含药血清（Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS）对过氧化氢（H₂O₂）诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）氧化损伤的保护作用及其分子机制。方法 采用H₂O₂体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15%的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）,丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子E₂相关因子2（Nrf2）,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）,血红素加氧酶-1（HO-1）,SOD1蛋白的表达水平。结果 选择300 μmol·L^-1 H₂O₂刺激24 h作为氧化损伤造模的条件。与正常组比较,H₂O₂模型组细胞形态异常,细胞存活率显著降低（P<0.01）;LDH,MDA含量升高（P<0.01）,SOD活力降低,ROS在细胞内分布增加;Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平均明显下调（P<0.05,P<0.01）,Keap1蛋白表达水平明显上调（P<0.01）。与模型组比较,ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态,提高细胞存活率,抑制细胞凋亡;显著提高SOD酶活力（P<0.01）,抑制LDH的释放（P<0.01）和ROS的生成,降低MDA含量（P<0.01）;明显上调Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）,显著下调Keap1蛋白表达水平（P<0.01）。结论 当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路,增强细胞抗氧化损伤能力,抑制细胞凋亡,从而发挥保护H₂O₂损伤的PC12细胞的作用。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法 以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L^-1。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC₅₀，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L^-1开展实验。用0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（P<0.01），细胞凋亡明显增加（P<0.05，P<0.01），细胞于有丝分裂准备期（G₂）期阻滞明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。     

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的干预作用，探讨其改善免疫球蛋白A肾病（IgAN）大鼠炎症病变的相关机制。方法 采用血清药理学方法，将18只大鼠分为3组，正常组，加味三仁汤高、低剂量（20.70，10.35 g·kg^-1·d^-1）组，每组6只，加味三仁汤高、低剂量组给予加味三仁汤相应溶液灌胃，正常组灌胃等体积蒸馏水。分别灌胃5 d后，采血制取含药血清。采用大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1），分为正常组，模型组，贝那普利组（50 μmol·L^-1），加味三仁汤高、低剂量组。釆用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞增殖情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原（ColⅣ）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达量和mRNA表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖显著（P<0.01），ColⅣ分泌显著增多（P<0.01），磷酸化（p）-Akt，p-p65蛋白表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，加味三仁汤高剂量组显著抑制细胞增殖（P<0.01）和ColⅣ分泌（P<0.01），降低Akt磷酸化水平（P<0.01），降低NF-κB p65阳性表达（P<0.01）。结论 加味三仁汤能够抑制脂多糖诱导的HBZY-1细胞增殖，降低ColⅣ蛋白含量，可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活密切相关。     

去氢木香内酯激活凋亡与自噬抑制人肺癌A549细胞生长

目的 研究去氢木香内酯（DL）对人肺癌细胞A549增殖、凋亡、自噬的影响,以期阐明其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）研究0、5、10、15、20、25 μmol·L^-1 DL对人肺癌A549细胞增殖能力的影响。通过细胞克隆形成实验研究DL对A549细胞克隆形成能力的影响。选择10、20 μmol·L^-1作为DL低、高浓度组,采用荧光染料Hoechst 33258染色及蛋白免疫印迹法（Western blot）观察DL对A549细胞凋亡的影响。通过吖啶橙染色检测DL给药后自噬溶酶体的变化,利用免疫荧光实验和Western blot检测DL对微管相关蛋白1轻链3（LC3）表达水平的影响,通过对比DL单独给药及其分别与自噬抑制剂巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合用药对A549细胞自噬的影响。通过Western blot观察DL对A549细胞信号通路调控的作用。结果 与空白组比较,10、15、20、25 μmol·L^-1 DL组A549细胞存活率均显著降低（P<0.01）;5 μmol·L^-1 DL可显著抑制A549克隆细胞形成（P<0.01）,说明DL能够抑制人肺癌A549细胞的增殖能力。与空白组比较,DL组（10、20 μmol·L^-1）凋亡细胞数目增多,DL组（20 μmol·L^-1）中凋亡相关蛋白聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶（PARP）和B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2表达显著下降（P<0.01）。吖啶橙染色结果显示,与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）橙色荧光增强,说明自噬溶酶体的生成数量增多。DL组（20 μmol·L^-1）还能使细胞内LC3橙色荧光颗粒明显增高,LC3 Ⅱ的表达水平显著上升（P<0.01）,且加入自噬抑制剂后,A549细胞对DL作用的敏感性显著下降（P<0.01）,表明自噬参与了DL诱导的A549细胞死亡。与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）能够使自噬相关蛋白3（Atg3）、自噬相关蛋白5（Atg5）的表达增加并使蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、信号传导与转录活化因子3（STAT3）的磷酸化水平下降（P<0.05,P<0.01）。结论 DL能够激活凋亡与自噬从而抑制人肺癌A549细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Akt/mTOR/STAT3信号通路有关。     

基于MGC-803细胞微环境探讨加味小陷胸汤抑制侵袭迁移作用机制

目的 观察加味小陷胸汤水提取物对MGC-803细胞微环境的影响，探究该方通过调控MGC-803细胞微环境抑制侵袭迁移作用与其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（NFAT）信号通路的可能机制。方法 转化生长因子-β₁（TGF-β₁）造模后，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、加味小陷胸汤组（10、20、40 mg·L^-1）；Wnt5a过表达质粒转染后，分为过表达载体（pEX）-空白（NC）组、pEX-Wnt5a组、pEX-NC+加味小陷胸汤组（40 mg·L^-1）和pEX-Wnt5a+加味小陷胸汤组（40 mg·L^-1）。观察MGC-803细胞侵袭能力、迁移能力、微环境关键因子、上皮间质转化（EMT）基因、Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 与空白组比较，模型组微环境显著上调（P<0.01）；与模型组比较，加味小陷胸汤（10、20、40 mg·L^-1）可明显抑制微环境（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与空白组比较，模型组过表达Wnt5a后侵袭细胞增多，划痕率升高，微环境因子和EMT基因呈活化态势，Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路激活（P<0.01）；与模型组比较，加味小陷胸汤可抑制细胞远处侵袭和减少愈合，抑制微环境、EMT发展，和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号转导，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 加味小陷胸汤可通过改善MGC-803细胞微环境调控Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路，抑制胃癌侵袭转移和EMT进程。     

甘草黄酮A对低氧条件下胃癌细胞增殖和糖酵解的影响

目的 探讨低氧条件下甘草黄酮A对胃癌细胞增殖和糖酵解的影响。方法 筛选人胃癌AGS细胞予以5% O₂低氧环境培养48 h,分为5组：常氧组、低氧组、甘草黄酮A高、中、低浓度组（100、50、25 μmol·L^-1）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法和克隆形成实验检测甘草黄酮A对低氧条件下AGS细胞增殖的影响;划痕实验检测细胞迁移情况,蛋白免疫印迹法 （Western blot） 和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR） 检测AGS细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白1 （GLUT1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）、丙酮酸激酶M2（PKM2）、己糖激酶Ⅱ（HK2）的蛋白及mRNA表达水平。试剂盒检测葡萄糖摄取和HK的活性的表达情况。结果 CCK-8法实验结果表明,与低氧组比较,24 h时,甘草黄酮A高、中浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01）,48 h时,甘草黄酮A高、中、低浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01）。克隆形成实验结果表明,与常氧组比较,低氧组AGS细胞克隆形成数显著升高（P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄铜A高、中、低浓度组AGS细胞的克隆形成数显著降低（P<0.01）。划痕实验表明,与常氧组比较,低氧组的AGS细胞迁移的能力升高（P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高、中、低浓度组的AGS细胞各个时间段迁移细胞的能力显著降低（P<0.01）。Real-time PCR表明,与常氧组比较,低氧组GLUT1、LDHA、PKM2和HK2 mRNA明显升高（P<0.05,P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组GLUT1、LDHA、PKM2、HK2 mRNA,甘草黄酮A中浓度组GLUT1、LDHA、HK2 mRNA、甘草黄酮A低浓度组HK2 mRNA明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot表明,与常氧组比较,低氧组HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组的HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,甘草黄酮A中、低浓度的HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。试剂盒检测葡萄糖摄取及HK活性结果表明,与常氧组比较,低氧组葡萄糖的摄取和HK的含量表达升高（P<0.01）,与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组葡萄糖的摄取和HK的含量表达及甘草黄酮A中浓度组HK的含量表达降低（P<0.01）。结论 甘草黄酮A可以抑制低氧条件下AGS细胞的增殖,其作用机制可能与抑制胃癌的糖酵解有关。     

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察加味真武汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅳ型胶原蛋白（COL-Ⅳ）的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量（7.2 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤中剂量（14.4 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤高剂量（28.8 g·kg^-1·d^-1）组、盐酸贝那普利（10 mg·kg^-1·d^-1）组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-Ⅳ mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高（P<0.01）;血清IL-6含量显著上升（P<0.01）;大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著升高（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.05）;肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低（P<0.01）;血清IL-6含量显著下降（P<0.01）;大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平明显升高（P<0.05）;肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著上升（P<0.01）。结论 加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。     

从氧化应激角度探讨补阳还五汤对糖尿病周围神经病变大鼠的治疗作用

目的 基于氧化应激探讨补阳还五汤对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠的神经保护作用机制和方中黄芪用量。方法 90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、α-硫辛酸干预组、补阳还五汤高黄芪剂量组（中药高剂量组）、补阳还五汤中黄芪剂量组（中药中剂量组）、补阳还五汤低黄芪剂量组（中药低剂量组）。除正常组外，其余各组大鼠均用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病。各药物干预组分别持续给药12周。含量依次为α-硫辛酸60 mg·kg^-1·d^-1、中药高剂量组15 g·kg^-1·d^-1、中药中剂量组8.75 g·kg^-1·d^-1、中药低剂量组5.625 g·kg^-1·d^-1。给药结束后检测机械性痛阈（PWT）和神经传导速度（SNCV）；检测谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）。取L4-5背根神经节（DRG），电镜观察各组神经元线粒体形态结构；检测呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性，和线粒体膜电位，免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/核因子E₂相关因子2（Nrf2）通路中主要蛋白：磷酸化单磷酸腺苷活化蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化核因子E₂相关因子2（p-Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、醌NADH脱氢酶1（NQO1）的表达。结果 与正常组比较，模型组空腹血糖升高（P<0.01），SNCV、PWT、GSH含量均降低（P<0.01），MDA含量升高（P<0.01）；线粒体损伤明显，多数呈空泡样改变；呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性和线粒体膜电位均显著降低（P<0.01）；p-AMPK、p-Nrf2、HO-1、NQO1降低（P<0.01）。与模型组比较，α-硫辛酸组及中药高剂量组SNCV、PWT、GSH上升，MDA降低（P<0.05，P<0.01），线粒体结构损伤减轻；呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性和线粒体膜电位均显著升高（P<0.01），p-AMPK、p-Nrf2、HO-1、NQO1明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤通过AMPK/Nrf2通路调节氧化应激，治疗DPN。其治疗作用与黄芪的用量有一定联系，其中补阳还五汤高黄芪剂量组抑制氧化应激的作用较补阳还五汤中黄芪剂量组和补阳还五汤低黄芪剂量组更明显。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用,并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）及BV（0,0.25×10^-4,0.50×10^-4,1.00×10^-4,2.00×10^-4,4.00×10^-4,8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响;通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响,并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较,OM（2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用,两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较,OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01）,BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05,P<0.01）。与BV比较,联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较,OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）;OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,原癌基因（c-Myc）,CD44,G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）蛋白表达,增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01）,BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05,P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。     

参白解毒方抑制HCT116细胞增殖的药效及机制

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）抑制结直肠癌（CRC）细胞HCT116增殖的药效及机制。方法 利用参白解毒方（0、0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1）处理HCT116细胞48 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞活力的影响，分别设置空白组、参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组，倒置显微镜观察参白解毒方对HCT116细胞形态的影响，克隆形成实验观察参白解毒方对HCT116细胞增殖能力的影响，JC-1探针检测参白解毒方对HCT116细胞线粒体膜电位（Δψm）的影响，流式细胞仪检测HCT116细胞周期分布和细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法（Western blot）分析参白解毒方对细胞周期，抗凋亡以及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的影响。结果 参白解毒方有效抑制HCT116细胞活力，引起细胞形态改变，呈浓度依赖性；与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组克隆形成率均明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组诱导HCT116细胞发生G₀/G₁期阻滞（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组周期蛋白D₁（CyclinD₁）表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组细胞周期蛋白A₂（CyclinA₂），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（4 g·L^-1）组周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）表达显著下降（P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组课诱导HCT116细胞凋亡，并下调抗凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达（P<0.05，P<0.01），降低HCT116细胞线粒体膜电位；与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组可下调NF-κB信号通路相关蛋白IκB激酶α（IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化p65蛋白（p-p65）的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 参白解毒方有效抑制HCT116细胞增殖，其机制可能通过抑制HCT116细胞NF-κB信号通路的激活，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。     

苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

目的 研究苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法 采用血清药理学方法，制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞，分为空白组、H₂O₂组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组，给予相应药物处理12 h，再加入100 μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞增殖活性的影响，荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平，比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平，PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果 与空白组比较，H₂O₂诱导后细胞活力显著降低（P<0.01），线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01），CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01），PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低（P<0.05，P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较，苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力，显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01），并显著提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01），促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），显著减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后，逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05，P<0.01）。结论 苓桂术甘汤含药血清保护H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。     

加味四君子汤通过调控Fibulin-5，p-Akt表达抗脑缺血大鼠神经细胞失巢凋亡机制

目的 探讨加味四君子汤对大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤后缺血侧海马区脑组织纤维蛋白-5（Fibulin-5）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达及对神经细胞失巢凋亡的影响。方法 将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组（3.2 mg·kg^-1）,加味四君子汤高、中、低剂量组（19.08,9.54,4.77 g·kg^-1）。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,7 d后处死大鼠,处死前进行神经功能缺损评分,采用苏木素-伊红（HE）染色进行组织病理学观察,原位末端标记法（TUNEL）染色检测神经细胞凋亡指数,免疫组化法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血侧海马区脑组织Fibulin-5及p-Akt蛋白表达情况。结果 神经功能缺损评分结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显降低（P<0.05,P<0.01）。免疫组化结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达,神经细胞凋亡指数均明显增高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显增加（P<0.05,P<0.01）,神经细胞凋亡指数均明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组Fibulin-5,p-Akt蛋白相对表达显著下调（P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显上升（P<0.05,P<0.01）。结论 加味四君子汤可能通过稳定神经元细胞外基质（ECM）Fibulin-5,从而增加了ECM对细胞的黏附作用,促进p-Akt蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,保护脑缺血损伤。