加味温胆汤调控NF-κB/NLRP3通路干预炎性反应抗大鼠糖尿病动脉粥样硬化的机制

目的 通过观察加味温胆汤对糖尿病动脉粥样硬化模型大鼠核转录因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路及其相关炎性因子表达的影响,探讨该方防治糖尿病动脉粥样硬化的机制。方法 将54只SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、加味温胆汤高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组均采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）+高糖高脂饲料喂养法建立糖尿病动脉粥样硬化大鼠模型,空白组注射等剂量的柠檬酸缓冲液并喂养普通饲料。加味温胆汤高、中、低剂量组给药剂量分别是18.2、9.1、4.55 g·kg^-1·d^-1,阿托伐他汀组给药剂量为0.9 mg·kg^-1·d^-1,连续给药4周,每隔6 d检测1次大鼠尾静脉血糖,经末次给药后,麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-18（IL-18）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腹主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白相对表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测腹主动脉NLRP3、白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平。苏木素-伊红（HE）染色法观察胸主动脉病理变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠血清IL-18、CRP、TNF-α、ICAM-1及血糖含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、IL-1β mRNA表达明显升高（P<0.05）。与模型组比较,加味温胆汤组能明显降低大鼠血清IL-18、CRP、TNF-α、ICAM-1及血糖的水平（P<0.05,P<0.01）,显著降低腹主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白表达水平（P<0.01）,明显降低腹主动脉NLRP3、IL-1β mRNA表达水平（P<0.05,P<0.01）,明显改善大鼠胸主动脉病理损伤。结论 加味温胆汤可能通过调控NF-κB/NLRP3信号通路减少炎性因子释放和黏附,调节血糖,发挥抗糖尿病动脉粥样硬化作用。     

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的 探究益气通脉方（YQTM）通过调控核转录因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）信号通路对载脂蛋白E^-∕-敲除（ApoE^-∕-）小鼠肝脏炎症的影响。方法 将40只ApoE^-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组（阳性药组）、YQTM低、中、高剂量组（0.39、0.78、1.56 g·kg^-1）。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O（oil red O）染色、马松（Masson）染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠肝脏白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的表达水平;免疫组化法（IHC）观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白（IκB）、IκB激酶β（IKKβ）、磷酸化（p）-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1（Caspase-1）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡（P<0.01）,小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高（P<0.01）,肝脏中TG、TC水平升高（P<0.01）;肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解（P<0.05,P<0.01）。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）;肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织L-1β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 YQTM对ApoE^-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB通路探讨蛤蚧提取物对利血平诱导抑郁大鼠神经炎症的影响

目的 观察蛤蚧提取物的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法 腹腔注射利血平（0.5 mg·kg^-1）诱导大鼠抑郁模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）,蛤蚧提取物高、低剂量组（12,6 g·kg^-1）,分别给予相应剂量药物,1次/d,连续给药10 d。给药结束后,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的水平;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织中细胞的变化情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）,核转录因子-κB（NF-κB）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的水平;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中Toll样受体4（TLR4）,NF-κB蛋白水平。结果 与正常组比较,蛤蚧提取物能明显缩短大鼠的悬尾不动时间和游泳不动时间;与模型组比较,蛤蚧提取物能明显减少大鼠眼睑下垂现象和圈内保留时间（P<0.05）;升高血清中5-羟色胺（5-HT）,多巴胺（DA）的水平（P<0.05）,降低血清和前额皮层中MAO,IL-6,TNF-α的水平（P<0.05）;降低大鼠海马组织中炎症因子IL-6,NF-κB,TNF-α mRNA的水平以及TLR4,NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）;改善大鼠海马组织的病理症状。结论 蛤蚧提取物通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低大鼠海马组织中NF-κB,IL-6等炎症因子的表达,减轻抑郁病理损伤,从而减轻抑郁症状。     

基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

目的 观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎（AGA）模型小鼠炎性损伤的影响,探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。方法 40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液建立小鼠AGA模型,给药组分别给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg^-1）和秋水仙碱（0.83 mg·kg^-1）,每天测量小鼠右踝关节肿胀程度,7 d后苏木素-伊红（HE）染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理,造模18 h后,取右踝关节,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量;蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NF-κB）信号通路蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠右踝关节显著肿胀（P<0.01）,HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿,其间有炎症细胞浸润,黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀（P<0.05,P<0.01）,异物肉芽肿减小。与正常组比较,模型组踝关节组织中炎症因子IL-1β含量和IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达显著升高（P<0.01）,NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-κB蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）,显著降低关节组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量（P<0.01）,下调NLRP3、Caspase-1、TLR4、NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

基于NF-κB炎症通路探讨五味消毒饮对IgA肾病大鼠的抗炎机制

目的 观察五味消毒饮对免疫球蛋白（Ig）A肾病（IgAN）大鼠核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,并探讨其治疗IgA肾病的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组,模型组,贝那普利组（10 mg·kg·d^-1）,五味消毒饮组（2.75 g·kg·d^-1）,每组10只。采用牛血清白蛋白（BSA）灌胃,四氯化碳（CCl₄）皮下注射以及脂多糖（LPS）尾静脉注射方法共9周建立IgAN大鼠模型,各组给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药28 d。检测大鼠24 h尿蛋白（UTP）,血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,血清白蛋白（ALB）水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）的含量,苏木素-伊红（HE）染色,免疫荧光及透射电镜观察肾脏病理改变,免疫组化法（IHC）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测肾组织中IL-6,IκB激酶β（IKKβ）,磷酸化IκB激酶β（p-IKKβ）,NF-κB抑制蛋白α（IκBα）,磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）,NF-κB p65,磷酸化NF-κB p65（p-p65）的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高（P<0.01）,肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,系膜增厚,电子致密物沉积增多,大量IgA沉积于肾小球系膜区并呈现不规则颗粒及团块状分布;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高（P<0.01）;肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ、IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平显著降低（P<0.01）,肾组织损伤情况均有所减轻;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低（P<0.01）;肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著降低（P<0.01）。各组间SCr,BUN,血清白蛋白相比无明显差异。结论 五味消毒饮可降低IgAN大鼠的蛋白尿,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及其相关炎症因子的过度表达有关。     

基于肠黏膜屏障及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨燮和饮改善PCOS-IR小鼠炎症反应的影响

目的 探讨燮和饮对改善肥胖型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）,减缓炎症反应的可能作用机制。方法 将60只SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机抽取10只,并设为正常组,其余小鼠均采用粪菌混悬液（2 g·kg^-1）联合来曲唑溶液（0.002 g·kg^-1）灌胃4周建立PCOS-IR模型。将模型复制成功的动物随机分为模型组,二甲双胍组（0.25 g·kg^-1）及燮和饮低、中、高剂量组（10,20,40 g·kg^-1）,给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续治疗4周。除空白组外,其余各组小鼠在治疗期间持续灌胃粪菌混悬液和来曲唑溶液以维持模型。动物每周称1次体质量;治疗结束后测量空腹血糖（FBG）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清睾酮（T）,促卵泡生成素（FSH）,促黄体生成素（LH）,空腹胰岛素（FINS）水平,计算LH/FSH及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）值;摘取子宫和双侧卵巢称质量后固定,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠结肠组织中Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3（TLR4/NF-κB/NLRP3）信号通路及下游炎症相关因子半胱氨酸天冬氨酸水解酶-1（Caspase-1）,白细胞介素-1β（IL-1β）,紧密连接蛋白-1（ZO-1）,闭合蛋白（occludin）表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量显著升高（P<0.01）;血清FBG,FINS和HOMA-IR明显升高（P<0.05）;血清T,LH/FSH显著升高（P<0.01）;子宫脏器比显著降低（P<0.01）,卵巢脏器比显著升高（P<0.01）,镜下可见卵巢中囊性扩张卵泡及闭锁小卵泡数量明显增多,黄体数量显著减少,卵泡颗粒细胞层减少,卵泡膜显著增厚;结肠组织中ZO-1,occludin的相对表达量显著下调（P<0.01）,炎症相关蛋白TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL-1β表达量明显上调（P<0.05）。与模型组比较,燮和饮低、中、高剂量组小鼠体质量显著降低（P<0.01）;燮和饮中、高剂量组血清FBG,FINS,HOMA-IR明显降低（P<0.05）;高剂量组血清T,LH/FSH显著降低（P<0.01）;卵巢脏器比明显降低（P<0.05）,子宫脏器比显著升高（P<0.05）,卵巢中囊状卵泡明显减少,内见黄体,卵巢颗粒细胞正常排列,卵泡膜略增厚;高剂量组结肠组织TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL-1β蛋白表达显著下调（P<0.01）,ZO-1,occludin蛋白表达量显著上调（P<0.01）。结论 燮和饮调控肠道TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,减少下游炎症因子释放,通过重建肠黏膜屏障功能及抑制肠道炎症反应,改善肥胖和IR,从而逆转PCOS-IR。     

基于NF-κB信号通路探讨中医药治疗脓毒症的研究进展

脓毒症（sepsis）是重症医学科常见的急危重症,具有高发病率和高病死率的特点。目前,临床上针对脓毒症的治疗用药多以西药为主,长期使用存在抗生素耐药、激素不良反应和费用高昂等问题。因此,探寻新型、高效、安全、廉价的药物和治疗模式是现阶段研究的重点方向。中医药凭借其“整体观念、辨证论治、一人一方”的独特优势,在脓毒症的预防和治疗中积累了相当丰富的临床经验。近年来,中医药与脓毒症核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的研究较多。该文通过筛选相关临床研究与文献,从脓毒症的病因病机,辨证论治,发病机制,NF-κB信号通路和中医药对脓毒症的干预等方面进行系统归纳整理,研究发现一些单味中药及其提取物、中药复方和中药注射液可以通过调控NF-κB信号通路的激活,调节巨噬细胞的免疫功能,有效抑制NF-κB介导的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1（IL-1）,IL-6等炎症因子及其蛋白的表达,显著减轻全身炎症反应和各脏器损伤,改善预后。但囿于客观条件的限制,部分研究也存在促炎-抗炎平衡机制模糊、药代动力学不明及药物安全性评价较低等问题,有待进一步研究与探索,以期为中医药治疗脓毒症提供新的理论基础和诊疗思路。     

中药单体通过NF-κB信号通路防治动脉粥样硬化研究进展

心血管疾病是当今世界上最主要的死因。动脉粥样硬化（AS）是一种动脉管壁增厚或功能退变的慢性炎症性疾病,病变后期斑块破裂发生血栓,进而引起组织或器官缺血,故也是导致各类心血管疾病发生的病理基础。核转录因子-κB（NF-κB）作为炎症反应中重要的核转录因子,被激活后可介导炎症因子的转录,能诱发AS发病或是加重病情。血管内皮细胞在炎症因子等刺激下相关机制被激活,NF-κB介导内皮细胞内相关调控基因,分泌黏附分子、趋化因子和凝血因子,促进单核细胞等选择性聚集,上调黏附分子的表达,使黏附分子黏附于细胞内皮并向内膜迁移,促进细胞外基质的降解,形成不稳定斑块等。近年来,中医药在防治AS上取得了一定成效,发现了许多中药可以抗AS,可作用于人体的多个靶点,在不同环节上影响AS发生和发展。该文章主要介绍了NF-κB通路及其与AS的关系,黄酮类、萜类和生物碱类等不同类型的75个中药单体成分在基于NF-κB通路抗AS中的研究现状,发现中药单体主要通过调节NF-κB通路起到调控胆固醇平衡、抑制炎症反应、减少细胞增殖、抑制细胞间黏附和抑制泡沫细胞形成等作用,以期为防治AS的研究提供参考。     

抵当汤调控NF-κB通路干预DM大鼠心肌炎症反应的机制

目的:探讨抵当汤及其蕴含的泻热化瘀通络法对因核转录因子-кB(NF-κB)通路激活而导致的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠心肌炎症反应的影响。方法:选取130只体重达到220~270 g清洁级SD健康雄性大鼠,分为正常组(10只)和造模组(120只),后者按55 mg·kg-1剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液建立DM模型。72 h后将造模成功的大鼠随机分为模型组,抵当汤高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg~(-1)·d~(-1)),吡咯啉烷二甲基硫脲组(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC组,0.15 g·kg~(-1)·d~(-1))以及抵当-吡咯啉烷二甲基硫脲组(DP组1.08 g·kg~(-1)·d~(-1)抵当汤+0.15 g·kg~(-1)·d~(-1)PDTC),均采用相应药物1次/d进行灌胃干预。8周后,麻醉状态下腹主动脉取血处死动物,迅速摘取大鼠心脏,置于液氮中储存备用。以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织匀浆中转录NF-κB p65蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织匀浆肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达,免疫荧光检测心肌组织细胞黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1),巨噬细胞趋化性蛋白-1(macrophage chemotaxis protein-1,MCP-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达均明显升高;且模型组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白。与模型组比较,各治疗组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达则明显降低;组间比较发现,DP组NF-κB p65蛋白表达与正常组最接近,抵当汤高剂量组TNF-α表达则较模型组降低更加显著;各治疗组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白不同程度减少,其中DP组被染成绿色的范围最少,与正常组最为接近。结论:泻热化瘀通络之抵当汤可通过抑制NF-κB通路的激活来减轻DM模型大鼠的心肌炎症反应。     

连翘脂素通过调控P2X7R/NF-κB/NLRP3炎性小体信号通路缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症

目的 为研究连翘脂素（Phillygenin,PHI）对脂多糖（LPS）和腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体（P2X7R）,NOD样蛋白结构域受体3（NLRP3）和核转录因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法 本研究采用先给予100 μg·L^-1 LPS处理24 h后,再使用5 mmoL·L^-1 ATP 5 h建立L02细胞炎症模型。给药组在给予LPS处理的同时给予不同浓度PHI（100、50、25 mg·L^-1）培养6 h,随后换液,继续用LPS处理18 h,ATP处理5 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测L02细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）、P2X7R、NLRP3、胱天蛋白酶-1前体（pro-Caspase-1）、裂解胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α（IκBα） mRNA和蛋白表达。通过分子对接实验预测P2X7R与PHI能否结合,以及DCFH-DA活性氧（ROS）荧光探针检测细胞中ROS的累积。采用小干扰核糖核酸（siRNA）沉默P2X7R,并随后通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达情况。结果 Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18的表达均有所升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组明显下调了IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。分子对接结果显示PHI与P2X7R有较好的结合作用。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组P2X7R的表达明显上调（P<0.05）;与模型组比较,给药组下调了P2X7R mRNA和蛋白表达（P<0.05）。ROS荧光探针分析显示,与空白组比较,ROS的含量明显升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组明显降低了ROS的积累（P<0.05）。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组NLRP3炎性小体,NF-κB的表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组明显降低NLRP3、cleaved-Caspase-1和上调NF-κB、IκBα mRNA及蛋白表达（P<0.05）。Real-time PCR分析显示,与模型组比较,siRNA沉默P2X7R后,IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达明显降低（P<0.05）,PHI具有同样的作用,二者合用后,基因表达进一步下降。结论 P2X7R为NF-κB/NLRP3信号通路的上游,PHI可能是通过下调P2X7R从而抑制NF-κB/NLRP3信号通路的表达从而缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症,提示P2X7R可能是PHI发挥抗炎作用的靶标。     

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的作用与保护机制。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、精氨酸酶-1（Arg-1）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化核转录因子抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型（M1）巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数（TRI）显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高（P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）,肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低（P<0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高（P<0.01）,巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论 肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨毛果鱼藤提取物抗痛风作用及机制

目的 通过网络药理学分析结合体内、外实验验证,探究毛果鱼藤对痛风的改善作用及机制。方法 利用数据库获取毛果鱼藤的化学成分及其候选靶标,通过蛋白质互作和网络分析,筛选毛果鱼藤治疗痛风的关键网络靶标和潜在活性成分,并进行生物功能富集及通路分析;小鼠腹腔注射次黄嘌呤复制高尿酸血症模型,观察毛果鱼藤醇提取物对高尿酸血症及正常小鼠尿酸水平的影响;大鼠足跖注射微晶型尿酸钠结晶,复制痛风性炎症模型,观察毛果鱼藤醇提物对痛风性炎症的影响;二甲苯诱导急性炎症模型,观察毛果鱼藤醇提物的抗炎作用;热板法、扭体法观察毛果鱼藤的镇痛作用。脂多糖诱导RAW264.7细胞复制体外炎症模型,观察毛果鱼藤醇提物对相关信号通路的影响。结果 通过构建毛果鱼藤-成分-痛风疾病靶点网络及分子对接分析,获得毛果鱼藤治疗痛风的12个关键网络靶标和15个潜在活性成分,发现其可以通过大黄素、白桦脂酸、美迪紫檀素等成分作用于Toll样受体4（TLR4）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、核转录因子-κB（NF-κB）等靶点发挥抗高尿酸血症、抗炎、镇痛等作用。与正常组比较,模型组小鼠血清尿酸水平显著增高（P<0.01）、大鼠肿胀度显著增高（P<0.05,P<0.01）、小鼠耳廓肿胀度降低（P<0.05）、小鼠扭体次数显著减少（P<0.05,P<0.01）、小鼠热板痛阈显著提高（P<0.05）,细胞中TLR4 mRNA水平、TLR4、NF-κB、NLRP3的蛋白表达及细胞上清中TLR-4、NF-κB水平显著升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,毛果鱼藤醇提物（20、10、5 g·kg^-1）可以显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平（P<0.01）,抑制大鼠足跖肿胀（P<0.05,P<0.01）,降低细胞中TLR4 mRNA水平,降低细胞中TLR4、NF-κB、NLRP3的蛋白表达及降低细胞上清中TLR4、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、NF-κB、白细胞介素-6（IL-6）的水平（P<0.05,P<0.01）。结论 毛果鱼藤醇提物具有明显的抗痛风作用,作用机制可能与其对TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响有关。     

喘可治对小鼠急性肺损伤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:研究喘可治注射液对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的防治效果及作用机制。方法:SPF级雌性C57BL/6J小鼠48只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、喘可治组,每组12只。喘可治组每只小鼠腹腔注射0.2 m L·d-1,1次/d,连续7 d;地塞米松组造模前3 d按1 mg·kg~(-1)腹腔注射,1次/d,连续3 d;模型组注射等剂量的生理盐水,正常组不作处理。除正常组外,第8天腹腔注射LPS 0.1 m L(0.5 g·L~(-1)),乙醚吸入麻醉后,各小鼠滴鼻LPS 25μL(0.5 g·L~(-1)),制作ALI模型。24 h后取材检测。酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β),IL~(-1)8的含量;免疫组织化学染色检测核转录因子-κB(NF-κB)p65的蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织p65,Toll样受体4(TLR4),Nod样受体蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase)-1蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织p65和TLR4的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α,IL~(-1)β,IL~(-1)8含量升高(P0.01),肺组织p65,TLR4,NLRP3,Caspase-1蛋白表达升高,p65和TLR4 mRNA的表达升高(P0.05);与模型组比较,喘可治组小鼠血清TNF-α,IL~(-1)β,IL~(-1)8含量降低(P0.01),肺组织p65,TLR4,NLRP3,Caspase-1蛋白表达降低,p65和TLR4 mRNA的表达降低(P0.05)。结论:喘可治注射液能有效改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺组织的损伤程度,其机制可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路进而对肺组织起到保护作用。     

五味消毒饮对脂多糖诱导大鼠肾系膜细胞NF-κB信号通路的影响

目的 观察五味消毒饮对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法 将大鼠肾系膜细胞随机分为正常组、模型组、贝那普利组（50 μmol·L^-1）、五味消毒饮高、低剂量组（2.75、0.69 g·kg^-1）。正常组、模型组、贝那普利组使用10%正常大鼠血清,五味消毒饮高、低剂量组使用10%含药血清。除正常组外,其余4组给予LPS（100 μg·L^-1）以体外干预。倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光法（IF）检测NF-κB p65的表达;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、层粘连蛋白（LN）和纤连蛋白（FN）的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞中IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶β（p-IKKβ）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）、NF-κB p65蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组细胞增殖显著增多（P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量显著增多（P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA表达显著升高（P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组细胞增殖明显降低（P<0.05,P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量明显减少（P<0.05,P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白的表达显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 五味消毒饮可减轻由LPS诱导的肾系膜细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的启动有关。     

基于TNF/NF-κB信号通路探讨枳实薤白桂枝汤减轻心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制

目的 从肿瘤坏死因子/核转录因子-κB（TNF/NF-κB）信号通路探讨枳实薤白桂枝汤（ZXGT）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌梗死（MI）的影响。方法 将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组（4 mg·kg^-1）、ZXGT组（24.4 g·kg^-1）、ZXGT+抑制剂组（ZXGT,24.4 g·kg^-1;TNF-α受体抑制剂R7050,5 mg·kg^-1）、抑制剂组（R7050,5 mg·kg^-1）,每组8只;各组大鼠预防性灌胃给药7 d,且ZXGT+抑制剂组、抑制剂组在第6、第7天给予腹腔注射抑制剂R7050 5 mg·kg^-1,除空白组外其余各组腹腔注射ISO,连续2 d,诱导大鼠MI模型;于实验第7天注射ISO 30 min后麻醉大鼠,检测心电图（ECG）观察ST段抬高值;采用小动物超声心动图检测大鼠心脏整体轴向应变（GLS）和心脏同步性;腹主动脉取血测定血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）水平及炎症因子TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理变化;免疫组化（IHC）法检测心脏组织TNF-α、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心脏组织肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）、肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）、转化生长因子激酶1（TAK1）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、p-IκBα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠ECG ST段显著抬高（P<0.01）,超声心动图中GLS增大及同步性显著降低（P<0.01）,病理组织学显示心肌大面积坏死,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平显著升高（P<0.01）,心肌组织中的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,培哚普利组、ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组大鼠的ECG ST段抬高值明显降低（P<0.05,P<0.01）,GLS和心脏同步性改善（P<0.05,P<0.01）,心肌坏死面积减小,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平均下调（P<0.01）,且ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组均下调模型大鼠升高的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平和上调IκBα的表达水平（P<0.05,P<0.01）;与ZXGT组比较,ZXGT+抑制剂组和抑制剂组差异无统计学意义。结论 ZXGT能保护ISO诱导的大鼠MI损伤,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TNF/NF-κB信号通路有关。     

糖痹康颗粒调控AMPK/NF-κB通路改善糖尿病大鼠坐骨神经炎症反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调控腺苷活化蛋白激酶/核转录因子-κB（AMPK/NF-κB）通路对糖尿病大鼠坐骨神经炎症的影响。方法 SD大鼠高脂高糖饲料诱导连续8周后按单次35 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造模。成模后按体质量、血糖随机将大鼠分为模型组和各给药组、糖痹康颗粒低、中、高剂量组（0.625、1.25、2.5 g·kg^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1）,并设正常组。成模后持续给药干预12周。期间分别检测治疗前及治疗第4、8、12周大鼠的体质量、血糖水平及热痛阈;于给药第12周时取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）、劳克坚牢蓝（LFB）染色,扫描电镜观察坐骨神经超微结构变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠坐骨神经组织中AMPK、磷酸化（p）-AMPK、NF-κB的蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠造模后各时间点血糖浓度、热痛阈均显著升高（P<0.01）;坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达显著升高（P<0.01）,p-AMPK/AMPK蛋白表达显著降低（P<0.01）。经糖痹康颗粒治疗后,与模型组比较,糖痹康颗粒各组热痛阈明显降低（P<0.05,P<0.01）,坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;糖痹康颗粒高、中剂量组p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。坐骨神经形态学观察显示,糖痹康颗粒治疗后大鼠坐骨神经排列整齐度、致密程度、脱髓鞘变化均优于模型组。结论 糖痹康颗粒可以改善糖尿病大鼠坐骨神经功能、减轻神经炎症损伤,其作用机制可能与上调AMPK/NF-κB通路中AMPK的表达,抑制下游NF-κB表达,从而减轻因NF-κB激活引起IL-1β、TNF-α等炎症因子升高造成的神经炎症反应相关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨通络蠲痹颗粒对骨关节炎炎症损伤和细胞凋亡的影响

目的 观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎（KOA）兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法 30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组（4.1、8.2 g·kg^-1·d^-1）、塞来昔布组（10.9 mg·kg^-1·d^-1）,每组6只。采用内侧半月板失稳法（DMM）建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红（HE）染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法（TUNEL）荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测关节液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高（P<0.01）,关节液IL-1β、TNF-α含量升高（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量增加（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调（P<0.01）,而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调（P<0.01）;与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低（P<0.01）,IL-1β、TNF-α含量降低（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量减少（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调（P<0.01）,Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调（P<0.01）,且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论 通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。     

基于NF-κB信号通路天然产物治疗特应性皮炎的研究进展

特应性皮炎是由内外多因素共同作用的慢性、复发性、炎症性、瘙痒性皮肤病，位居全球皮肤疾病负担首位。由于传统治疗和生物制剂的不良反应及高成本问题，天然产物的开发备受关注。核转录因子-κB（NF-κB）信号通路是抗炎和免疫调节的重要途径，故基于NF-κB信号通路系统，总结了黄酮类、生物碱、酚类、萜类、香豆素类、糖苷类、蒽醌类等天然产物的药理学作用与分子机制，以期为天然产物的开发提供一定指导。目前众多基础研究显示出天然产物具有较高的安全性和有效性，并通过口服或外用的给药方式及与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核转录因子E₂相关因子2（Nrf2）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）/晚期糖基化终产物受体（RAGE）、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3（NLRP3）等信号通路相互串扰的复杂药理学网络途径，发挥抗炎、抗过敏、抗氧化应激等作用，最终逆转特应性皮炎的病理改变。但值得注意的是，天然产物的临床应用转化尚相对不足，仍需更多更为严谨的临床试验加以验证。现有的基础试验及临床证据证明天然产物可能基于NF-κB信号通路发挥改善特应性皮炎的作用，这对评价天然活性物质的潜在机制提供依据，也为药物的开发提供了更多潜在候选者。     

基于NF-κB通路的参芍胶囊保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制分析

目的:观察参芍胶囊及有效组分对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及基于核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路探讨其作用机制。方法:雄性Wistar大鼠,采用左冠状动脉前降支结扎30 min,再灌注120 min制备大鼠MIRI模型。随机分为7组,分别为假手术组(Sham),模型组(I/R),参芍胶囊250 mg·kg~(-1)组(SS250),参芍胶囊500 mg·kg~(-1)组(SS500),人参茎叶总皂苷组(TGSL),白芍浸膏粉组(Pae)及阿托伐他汀组(Ator),预灌胃7 d。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测大鼠心肌梗死面积;生化法测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH);酶联免疫吸附测定(ELISA)法测白细胞介素(IL)-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10含量;蛋白质免疫印迹(Western blot)测NF-κBp65,p-NF-κBp65水平。结果:与I/R组比较,SS250组,SS500组,TGSL组,Pae组及Ator组心肌梗死面积缩小(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组,TGSL组及Ator组血清CKMB及LDH水平明显下降(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组和TGSL组TNF-α含量降低(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组,Pae组和Ator组IL-1β含量明显降低(P0.05);SS250组,SS500组IL-10含量明显升高(P0.05,P0.01);SS250组和SS500组p-NF-κBp65蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:参芍胶囊对MIRI大鼠心脏具有保护作用,抑制NF-κB炎症通路的过度激活是其作用机制之一,在抑制NF-κB表达方面参芍胶囊高剂量组优于其单一有效成分。