基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的 基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子A（VEGFA）信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的影响。方法 建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组（0.2 mg·kg^-1）,柴胡桂枝汤低、中、高剂量组（10.62、21.23、42.46 g·kg^-1）,每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中HIF-1α mRNA表达情况;免疫组化法（IHC）检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度（MVD）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低（P<0.05,P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低（P<0.01）。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低（P<0.01）,CD34表达及MVD显著降低（P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论 柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/ VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

乌头汤通过下调HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路抑制AIA风寒湿痹证大鼠血管翳形成

目的 探讨乌头汤对佐剂型关节炎（AIA）风寒湿痹证大鼠血管翳形成的抑制作用及其潜在作用机制。方法 将无特定病原体（SPF）雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为空白组、AIA风寒湿痹证组［完全弗氏佐剂（CFA）,200 μg］、乌头汤组（15 g·kg^-1·d^-1）、吲哚美辛组（10 mg·kg^-1）,除空白组外,其余各组注射CFA前给予风寒湿刺激。连续给药30 d,期间观察AIA风寒湿痹证大鼠的基本情况、发病时间、关节炎评分、足容积。最终取外周动脉血、踝关节和滑膜组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）蛋白含量和风湿3项,包括抗O（ASO）、C反应蛋白（CRP）和类风湿因子（RF）;苏木素-伊红（HE）染色观察关节组织形态学改变;免疫组化检测踝关节通路关键蛋白HIF-1α和VEGFA;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中HIF-1α、VEGFA、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）mRNA表达。结果 与空白组比较,AIA风寒湿痹证大鼠足肿容积和关节炎评分显著升高（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO阳性表达显著（P<0.01）;HE染色可见踝关节滑膜炎性增生,血管新生、血管翳形成,骨破坏程度加重,提示模型构建成功。乌头汤干预后,发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO含量显著下降（P<0.01）;滑膜组织炎性增生明显缓解,血管新生及血管翳减少,骨破坏减轻;滑膜HIF-1α、VEGFA、Ang-1、Ang-2 mRNA明显降低（P<0.05,P<0.01）;血清与踝关节HIF-1α和VEGFA蛋白表达显著下降（P<0.01）。在吲哚美辛组中,大鼠发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、和ASO含量显著下降（P<0.01）;HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路激活,病理组织损伤改善。结论 乌头汤可延缓AIA风寒湿痹证大鼠发病时间,降低足容积、关节炎评分、风湿活动度,改善关节组织病理情况,对血管翳形成具有抑制作用,其作用机制可能与下调HIF-1α/VEGFA/Ang通路表达有关。     

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的 探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法 运用血清药理学方法，体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过氯化钴（CoCl₂）刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型，将细胞随机分为空白组、CoCl₂模型组（200 mmol·L^-1）、鳖甲煎丸低（0.55 g·kg^-1）、中（1.1 g·kg^-1）、高（2.2 g·kg^-1）和扶正祛瘀胶囊组（0.56 g·kg^-1扶正祛瘀胶囊）。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平；细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果 与空白组比较，CoCl₂刺激24 h后，RAW264.7细胞增殖受抑制明显（P<0.05）；与模型组比较，用相应含药血清处理24 h后，各用药组能促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显升高（P<0.05），M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低（P<0.05），CD163、IL-10蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组比较，模型组NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低（P<0.05）。与空白组比较，模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达；与模型组比较，鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论 鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化，减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤，从而延缓肝纤维化进展，其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。     

芍药汤通过抑制HIF-1α调节Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在溃疡性结肠炎辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡中的作用及芍药汤的干预机制。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（0.42 g·kg^-1），芍药汤组（11.1 g·kg^-1），抑制剂组（2-甲氧基雌二醇，0.015 g·kg^-1），芍药汤+抑制剂组，采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎模型，各组分别对应给予生理盐水，美沙拉嗪，芍药汤，抑制剂及芍药汤+抑制剂治疗7 d，观察各组大鼠一般情况和疾病活动指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-23水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织叉头状/翼状螺旋转录因子P3（FoxP3），维甲酸相关孤儿受体（RORγt），HIF-1α蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠疾病活动指数（DAI）评分，肠黏膜病理学评分显著升高（P<0.01），血清中的IL-10水平显著降低（P<0.01），IL-17和IL-23显著升高（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01），FoxP3蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芍药汤组DAI评分，肠黏膜病理学评分降低（P<0.05，P<0.01），血清中IL-10水平升高（P<0.01），IL-17，IL-23降低（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平降低（P<0.01），FoxP3蛋白表达升高（P<0.01）；与抑制剂组比较，芍药汤组及芍药汤+抑制剂组RORγt，FoxP3及HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 芍药汤可以有效治疗溃疡性结肠炎，其作用机制可能与抑制HIF-1α来调节Treg/Th17的重新平衡相关。     

温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的 从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症（EMT）的作用机制。方法 采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞（ESCs），实验设正常（Control）组、5%空白血清（5% KBXQ）组、10%空白血清（10% KBXQ）组、5%温经汤血清（5% WJTXQ）组、10%温经汤血清（10% WJTXQ）组。噻唑蓝（MTT）比色法检测不同组ESCs增殖情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA及蛋白表达，透射电镜观察ESCs线粒体超微结构，高内涵分析（HCS）法多参数同时检测细胞线粒体功能［线粒体膜电位，线粒体膜电位（MMP）和细胞色素C（Cyt C）表达］及细胞凋亡情况（细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量），流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与Control组比较，5% KBXQ和10% KBXQ组细胞活力显著增加（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平无明显变化；透射电镜观察可见线粒体嵴明显，线粒体内外膜清晰；HCS多通道荧光染色显示，MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化，细胞核呈现均匀淡染；细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较，5% WJTXQ及10% WJTXQ组细胞活力显著下降（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；线粒体超微结构破坏，部分线粒体肿胀，嵴模糊；MMP显著降低，Cyt C释放量明显增加（P<0.05，P<0.01）；细胞膜通透性显著增加（P<0.01），并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征（P<0.05，P<0.01）；流式细胞术结果显示，细胞凋亡率显著升高（P<0.01），与HCS分析结果一致；且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激，抑制细胞增殖，降低线粒体生物活性，诱导细胞凋亡，这可能是其防治EMT的作用机制。     

加味升降散调控HIF-1α/NOX4信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激和凋亡的影响

目的 探讨加味升降散对膜性肾病（MN）大鼠血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法 采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）尾静脉注射方法复制MN模型,将成功造模的大鼠随机分为模型组,加味升降散组和贝那普利组。各组根据相应的药物剂量灌胃（ig）,每日1次。在给药的第4周末检测相关指标,检测24 h尿蛋白（UTP）,尿素氮（BUN）,肌酐（SCr）的变化情况,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,活性氧（ROS）水平,原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠肾组织细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾脏中HIF-1α,NOX4的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾脏HIF-1α,NOX4蛋白表达水平,免疫组化（IHC）检测大鼠肾脏相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,Bcl-2细胞死亡调节子抗体（Bim）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP明显上升（P<0.05）,SOD水平明显减少,MDA,ROS明显增多（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平明显增高,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著增多;与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平均有不同程度下降（P<0.05）,SOD水平明显上调,MDA,ROS含量显著下降（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达量明显下降（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平下降,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著减少。结论 加味升降散的保肾作用可能与其通过抑制HIF-1α/NOX4通路,缓解MN大鼠肾组织氧化应激状态,减少肾组织细胞凋亡有关。     

黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基）,黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20,40,60 mg·L^-1）,顺铂低、中、高质量浓度组（5,10,20 mg·L^-1）,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0,20,40,60 mg·L^-1）和顺铂（0,5,10,20 mg·L^-1）干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1）,顺铂（10 mg·L^-1）,联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05）,表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05）,表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05）,且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）;与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01）,以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05,P<0.01）,且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。     

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1）,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）;p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）;IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）;肝脏质量显著升高（P<0.01）;小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01）,气盛衰度显著下降（P<0.01）。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05, P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）;四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01）,直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01）,小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05）,小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05,P<0.01）,气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。     

基于HIF-1α/NLRP3途径介导细胞焦亡探讨《古今录验》续命汤治疗缺血性卒中的机制

目的 研究《古今录验》续命汤通过缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）途径调控缺血性卒中（IS）细胞焦亡的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、续命汤低剂量组、续命汤高剂量组和二甲双胍组,每组20只,连续灌胃3 d取材。采用高通量测序筛选差异信使RNA（mRNA）,对关键差异基因行基因本体（GO）功能及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析;改良神经功能评分（mNSS）法、2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色评价脑梗死损伤效应;苏木素-伊红（HE）染色进行脑组织病理形态学观察;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测缺血侧脑皮质区白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平比较;荧光双标染色检测HIF-1α、NLRP3共定位情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、HIF-1α、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）mRNA的表达情况;蛋白免疫印迹法检测HIF-1α、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达情况。结果 mRNA测序共得到5 705个（下调2 733个,上调2 972个）差异基因,经同源基因转化后,与焦亡基因集取交集,获得95个关键差异焦亡基因。与假手术组比较,模型组的mNSS评分、脑梗死面积显著增大（P<0.01）,神经元形态多样、排列错乱、细胞间隙增宽,缺血侧皮质区IL-1β、IL-18的含量显著增高（P<0.01）,共定位荧光强度明显增强,HIF-1α、NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白的表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,续命汤高剂量组改善大鼠神经功能评分、脑梗死面积最显著（P<0.01）;各药物组神经元较完整、排列较整齐、细胞间隙变窄,共定位荧光强度明显降低;续命汤能够降低IL-1β、IL-18的含量及HIF-1α、NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）,尤以高剂量组最明显（P<0.01）。结论 《古今录验》续命汤能够抑制IS后细胞焦亡,促进神经功能恢复,可能与抑制HIF-1α/NLRP3途径有关。     

温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的作用机制

目的 揭示温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的改善作用及其对沉默信息调节因子1（SIRT1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）/雌激素受体相关受体α（ERRα）能量信号通路的作用。方法 SPF级Wistar雄性大鼠90只，随机分为假手术组、模型组、温心方低、中、高剂量组；温心方低、中、高剂量组分别给予0.99、1.98、3.96 g·kg^-1的颗粒剂灌胃，假手术组和模型组均予以等体积生理盐水灌胃；预给药21 d后，模型组及温心方组采用冠状动脉左前降支结扎30 min，再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，假手术组只穿线，不结扎；TTC染色观察心肌梗死面积，苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理形态，试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性、心肌组织ATP含量及线粒体复合体Ⅳ（CCO）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组心肌纤维断裂，排列紊乱，细胞胞质水肿，细胞核出现固缩、偏移；CK-MB、LDH活性明显升高（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），心肌组织心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、mtTFA mRNA及蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温心方预处理各组心肌梗死面积显著缩小，且以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织病理形态有所改善，CK-MB、LDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性均有提高，以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达均有不同程度提高（P<0.05，P<0.01）。结论 温心方可通过调控SIRT1/PGC-1α/ERRα信号通路，改善心肌线粒体能量代谢，保护心肌缺血再灌注损伤。