基于网络药理学探讨黄芪-葛根药对对T2DM模型大鼠PI3K/Akt/FoxO1信号通路的调节作用

目的 基于网络药理学及实验验证探讨黄芪-葛根（芪葛）药对治疗2型糖尿病（T2DM）的作用机制。方法 借助中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）平台筛选黄芪、葛根的有效成分及靶点；于各疾病数据库中检索T2DM的相关靶点，提取药物与疾病的共同靶点，利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析并构建PPI网络图，并利用Cytoscape 3.7.1软件对关键靶点进行网络拓扑学分析。再利用DAVID在线工具对核心靶点进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析以探究其可能的分子机制。以高脂饲料喂养同链脲佐菌素尾静脉注射联合的方式建立糖尿病大鼠模型，分为正常组、模型组、二甲双胍组、芪葛药对高、中、低剂量组，灌胃4周后检测各组大鼠血清空腹血糖，空腹胰岛素（FINS），天冬氨酸氨基转移酶（AST），丙氨酸氨基转移酶（ALT），甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），糖原，白细胞介素（IL）-6，肿瘤坏死因子（TNF）-α水平，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝脏组织中胰岛素受体底物（IRS）-2，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K），蛋白激酶B（Akt），叉头框蛋白O1（FoxO1）蛋白的表达。结果 网络药理学方法筛选出芪葛药对治疗T2DM核心靶点131个，Akt1，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）1，TNF-α，IL-6等较为关键；KEGG富集分析预测该药对主要通过PI3K/Akt信号通路，TNF信号通路，FoxO信号通路等发挥降糖作用。与模型组比较，芪葛药对高、中剂量组空腹血糖及FINS水平均降低，糖原水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高、中、低剂量组AST，ALT，TG，LDL-C显著降低（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高、低剂量组TC水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较，芪葛药对高、中剂量组IL-6，TNF-α水平显著降低（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高剂量组IRS-2，Akt，p-Akt，PI3K，p-PI3K蛋白表达升高，FoxO1蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 芪葛药对在治疗T2DM上具有多成分-多靶点-多途径的特点，可能通过IL-6，TNF-α等靶点调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路影响胰岛素抵抗、糖原合成、糖异生、葡萄糖转运、炎症及免疫反应等过程对糖尿病进行治疗。     

基于网络药理学及大鼠体内实验的方法探讨麻黄细辛附子汤干预偏头痛的作用机制

目的 研究麻黄细辛附子汤（MXFT）干预偏头痛的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、SiwssTargetPrediction等数据库筛选MXFT活性成分及活性成分、偏头痛的相关靶点；运用STRING 11.5平台对药物和疾病的交集靶点建立潜在蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图；采用Metascape数据库对潜在交集靶点进行基因本体（GO）分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；利用Cytoscape 3.7.1做MXFT成分-靶点-通路网络图，筛选度值较高的核心靶点；最后通过分子对接方法验证核心靶点与其映射成分的结合强度，将对接结果较好的核心靶点进行动物体内实验验证。选用SD大鼠48只，除空白组外，其余大鼠皮下注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型，成模大鼠随机分为模型组、西药组、MXFT高、中、低剂量组。西药组给予佐米曲普坦片，治疗组给予MXFT高、中、低剂量干预。成模后隔日1次观测各组大鼠行为学及疼痛阈值变化。酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血浆中降钙素基因相关肽（CGRP）、大鼠细胞外信号调节激酶2（ERK2）、c-fos原癌基因蛋白（FOS）水平。免疫组化技术、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SD大鼠三叉神经细胞外信号调节蛋白激酶1/2（ERK1/2，又称MAPK1/3）、蛋白激酶B1（Akt1）、蛋白激酶Cα（PRKCA）水平。结果 网络药理学分析显示，MXFT治疗偏头痛的核心靶点为MAPK1、MAPK3、Akt1、PRKCA等；主要通路为神经活性配体/受体相互作用信号通路、钙离子信号通路、MAPK信号通路等；分子对接结果表明，MAPK1、MAPK3、Akt1、PRKCA、PRKCB、PRKCG与其映射成分具有较好的结合能力。动物实验结果显示，与空白组比较，模型组大鼠挠头次数显著增加（P<0.01），疼痛阈值显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠挠头次数显著减少（P<0.01），疼痛阈值显著提高（P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠血浆中CGRP、ERK2、FOS蛋白水平明显增高（P<0.05，P<0.01），三叉神经节中Akt1、ERK1/2、PRKCA蛋白水平明显增高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，各给药组血浆中CGRP、ERK2、FOS蛋白水平，三叉神经节中Akt1、ERK1/2、PRKCA蛋白水平明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 MXFT抗偏头痛具有多成分-多靶点-多通路的特点，其作用机制可能与抑制血管扩张、减少炎症因子释放、抑制神经元过度活跃等多途径发挥作用。     

基于网络药理学和实验验证探讨二仙汤及其温肾拆方治疗抑郁症的可行性

目的 基于网络药理学技术预测二仙汤全方和温肾方治疗抑郁症的分子机制，通过母婴分离结合慢性束缚应激抑郁模型进行药效及机制对比，探讨温肾拆方治疗抑郁症的可行性。方法 通过中药系统药理学数据平台（TCMSP）和中药分子机制生物信息学数据库（BATMAN）收集二仙汤全方及温肾方的活性成分及作用靶点；利用人类基因数据库（Genecards）、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、药物银行（Drugbank）等数据库筛选抑郁症相关靶点，与药物靶点取交集获得药物-疾病共同靶点，随后导入Cytoscape 3.8.2软件绘制中药-活性成分-靶点-疾病网络图；利用STRING平台构建蛋白互相作用网络并筛选核心靶点及关联的核心成分；采用Metascape平台对交集靶点进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）功能富集分析。采用母婴分离结合慢性束缚应激制备抑郁小鼠模型，在离乳第21天（PD21）至束缚完成第111天（PD111）给予二仙汤全方和温肾方的药混饲料进行干预。根据糖水偏好实验、悬尾实验、旷场实验、高架O迷宫实验评估小鼠抑郁状态；免疫组织化学法（IHC）观察小胶质细胞离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测蛋白激酶B1（Akt1）、脑源性神经营养因子（BDNF）、突触后致密物95（PSD95）、突触素（Syn）等表达水平。结果 共筛选二仙汤全方和温肾方治疗抑郁症靶点126和118个，全方仅多8个靶点。两方核心靶点相同，主要包括Akt1、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、KEGG通路富集分析预测二仙汤全方和温肾方治疗抑郁症主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及神经活性配体-受体相互作用通路。动物实验表明，与抑郁症模型组比较，二仙汤全方和温肾方均可明显上调小鼠糖水偏好指数、中央区活动时间及穿越次数、开放臂停留时间及穿越次数、p-Akt1、BDNF、PSD95及Syn的表达水平（P<0.05，P<0.01），明显下调悬尾不动时间和海马小胶质细胞Iba-1表达水平（P<0.05，P<0.01），两方疗效差异无统计学意义。结论 以肾阳虚为主的抑郁症病机和证候规律下，二仙汤的温肾拆方治疗具有可行性。其机制可能与两方均可通过影响Akt1、IL-1β、IL-6、TNF-α等核心靶点及调控PI3K/Akt、MAPK及神经活性配体-受体相互作用信号通路，改善海马区神经炎症及突触可塑性有关。     

加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应

目的 研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠结肠组织中γ-氨基丁酸（GABA）能信号通路相关调控因子的影响,进一步揭示加味人参乌梅汤益气生津止泻的作用机制。方法 从48只SD幼龄大鼠中随机抽取12只作为正常组,其余大鼠以番泻叶泻下、劳倦力竭及饮食失宜等复合因素造模14 d。造模成功后,随机分为模型组、西药组及中药组,每组12只。正常组与模型组给予生理盐水灌胃（20 mL·kg^-1）,西药组给予妈咪爱灌胃（0.7 g·kg^-1）,中药组给予加味人参乌梅汤灌胃（35 g·kg^-1）,均1次/d,连续干预7 d。每日观测记录大鼠一般情况、稀便率及腹泻指数。获取大鼠结肠标本,采用免疫组化法（IHC）检测大鼠结肠GABA蛋白积分吸光度表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B2（Akt2）、磷酸化（p-）Akt及白细胞介素-1β（IL-1β）的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠PI3K、Akt2及γ-氨基丁酸A型受体β₂亚基（GABRB2） mRNA和蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠一般情况明显变差,稀便率及腹泻指数差异无统计学意义,GABA蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β表达含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA及蛋白表达均极显著升高（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组大鼠一般情况明显好转,稀便率及腹泻指数显著下调（P<0.01）,中药组、西药组PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β含量均明显下调（P<0.05）,中药组PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA均明显下调（P<0.05,P<0.01）,GABA、PI3K及GABRB2蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）;西药组PI3K及Akt2 mRNA和PI3K蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 加味人参乌梅汤能通过调节腹泻大鼠结肠GABA能信号通路,减少肠上皮细胞中Cl^-向肠腔流动,改善腹泻模型大鼠结肠水液代谢失衡状态,进而发挥其益气生津止泻效应。     

基于网络药理学和实验验证的二仙汤调治焦虑障碍的分子机制

目的 基于网络药理学方法预测二仙汤治疗焦虑障碍的潜在分子机制，并借助母婴分离结合束缚应激动物模型进行疗效及机制验证。方法 利用中医药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）和成分靶点预测数据库（SwissTargetPrediction）获取二仙汤的活性成分及作用靶点；通过基因数据库（GeneCards）、疗效药靶数据库（TTD）、在线人类孟德尔遗传病数据库（OMIM）和药物数据库（DrugBank）等获取焦虑障碍相关靶点，与药物靶点取交集获得药物-疾病交集靶点；利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图，并基于拓扑参数分析筛选核心靶点；通过Metascape平台对交集靶点进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。采用母婴分离结合束缚应激建立焦虑小鼠模型，在第21天（PD21）离乳至第97天（PD97）束缚完成期间给予二仙汤药混饲料干预。通过开放旷场实验、高架O迷宫实验评估小鼠焦虑状态。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血浆皮质酮（CORT）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠海马蛋白激酶B（Akt1）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、脑源性神经营养因子（BDNF）、突触后致密物-95（PSD95）及突触素（synaptophysin）的表达水平。结果 共获得二仙汤活性成分97种，作用靶点227个，焦虑障碍相关靶点3 863个，药物-疾病交集靶点161个，其中Akt1、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF）、mTOR等核心靶点可能与焦虑障碍密切相关。KEGG通路分析结果显示二仙汤治疗焦虑障碍主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及神经活性配体-受体相互作用等信号通路。动物实验结果显示，与模型组比较，二仙汤可显著增加小鼠中央区活动时间及穿越次数、开放臂停留时间及穿越次数、明显上调p-Akt1、p-mTOR、BDNF、PSD95、Syp的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 二仙汤调治焦虑障碍具有多靶点-多通路的作用特点，其机制可能与二仙汤通过影响Akt1、mTOR、IL-1β、IL-6、TNF等核心靶点及调控PI3K/Akt、MAPK及神经活性配体-受体相互作用等信号通路，改善神经炎症与突触可塑性有关。     

基于网络药理学及分子对接技术研究人参-陈皮配伍治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制＊

目的 研究人参-陈皮配伍治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）的主要活性成分和潜在的分子作用机制。方法 从TCMSP数据库中获取人参、陈皮的活性成分和潜在靶点，疾病靶点利用DrugBank、TTD、GeneCards数据库获取。“药物-化合物-靶点”互作网络可视化由Cytoscape3.6.1软件完成。通过绘制韦恩图得到人参、陈皮和COPD的共有靶点，运用Cytoscape平台获取共有靶点相互作用关系。通过DAVID数据库对共有靶点进行GO、KEGG富集分析。活性成分和关键靶点的分子对接由autodock vina实现，并采用体外抗炎活性实验进行验证。结果 从人参和陈皮中共筛选得到27个活性成分，800个疾病靶点，药物和疾病共有靶点70个。GO功能富集分析得到GO条目213个（P<0.01），KEGG通路富集筛选得到99条信号通路（P<0.01）。分子对接结果显示，甾醇类成分和黄酮类成分与关键靶点有较高的结合性。体外抗炎活性验证结果表明，川陈皮素、山奈酚、柚皮素、人参皂苷rh2能够减少炎症因子的分泌。结论 人参-陈皮配伍可通过多成分、多靶点和多通路调控炎症因子释放，达到治疗COPD的效果。     

基于网络药理学和动物实验探讨养心生脉颗粒治疗急性心肌梗死合并抑郁症的作用机制

目的 基于网络药理学和动物实验探讨养心生脉颗粒治疗急性心肌梗死合并抑郁症的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、中医药综合数据库（TCMID）、中国知网及SwissTargetPrediction收集养心生脉颗粒的化学成分和对应靶点,基于GeneCards和OMIM数据库检索急性心肌梗死和抑郁症靶点,韦恩图获取药物和疾病的交集靶点,采用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,导入Cytoscape 3.8.2软件绘制中药-成分-靶点网络和成分-靶点-通路网络,并利用DAVID 6.8数据库进行基因本体（GO）生物学过程和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结合网络药理学预测的核心靶点和关键通路,以冠状动脉左前降支结扎结合慢性不可预见性轻度应激（CUMS）方法制备大鼠急性心肌梗死合并抑郁模型,经养心生脉颗粒干预后,观察大鼠抑郁样行为、血流动力学变化及心肌组织病理情况,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测关键通路靶点,验证养心生脉颗粒治疗急性心肌梗死合并抑郁的疗效及作用机制。结果 通过网络药理学共筛选出养心生脉颗粒活性成分靶点1451个,急性心肌梗死靶点615个,抑郁症靶点590个,交集靶点54个。PPI网络及KEGG富集分析显示,多个关键靶蛋白如白细胞介素-6（IL-6）、蛋白激酶B1（Akt1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、IL-10、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等,以及5-羟色胺能突触（serotonergic synapse）、TNF信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、神经营养素（neurotrophin）信号通路等与炎症关系密切。选取关键蛋白Akt1、mTOR及PI3K/Akt信号通路进行动物实验验证。结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠的糖水偏嗜度下降,游泳不动时间增加,心肌损伤程度加重,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平明显下调（P<0.05,P<0.01）;与模型组相比,养心生脉颗粒低、中剂量组糖水偏嗜度增加,心肌损伤程度明显减轻,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平上调（P<0.05,P<0.01）。结论 基于网络药理学和动物实验验证,养心生脉颗粒可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路逆转急性心肌梗死合并抑郁大鼠的抑郁样行为,缓解心肌组织损伤。     

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的 观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键分子蛋白表达的影响，探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法 将126只SD大鼠随机分成2组，即空白组16只和造模组110只，空白组喂养基础饲料，造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型，共8周。造模成功后，视体质量情况，按顺序淘汰体质量过轻者，遴选出48只肥胖大鼠，随机分为模型组、奥利司他组（32.40 mg·kg^-1）、雷帕霉素组（2 mg·kg^-1）、温胆汤低、中、高剂量组（4.45、8.90、17.80 g·kg^-1），每组8只；另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组，各用药组按剂量（以生药量计算）给予灌胃，模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃，每天1次，共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee''s指数、脂体比和肥胖率，采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1（ULK1）、自噬效应蛋白1（Beclin1）、人自噬相关蛋白5（Atg5）、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ表达水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子（TGF）-β的表达；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症（TSC）1、TSC2的表达。结果 与空白组比较，造模组体质量和Lee''s指数显著升高（P<0.01），肥胖率>20%，有形体肥胖、活动度下降，食欲下降，皮毛无光泽、蓬松，便溏，对外界反应能力下降，饮水量减少等痰湿证表现，与正常组比较，模型组体质量、Lee''s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降（P<0.01），但ULK1表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低（P<0.05，P<0.01），且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低（P<0.01），奥利司他组TGF-β的表达显著降低（P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），但ULK1显著降低（P<0.01）。与雷帕霉素组比较，温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组炎性因子（除TNF-α外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤中剂量组炎性因子（除IL-16、MCP-1、IL-10外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。与奥利司他组比较，温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高（P<0.01），所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低（P<0.01），温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高（P<0.01），信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联，且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态，其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。     

解毒活血方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠斑块稳定性的影响

目的 研究解毒活血方是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路诱导巨噬细胞自噬抑制炎症反应稳定AS易损斑块。方法 30只高脂饲料喂养ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、解毒活血方（中药）低、中、高剂量组、雷帕霉素组,6只普通饲料喂养的ApoE^-/-小鼠为正常组,6只普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为空白组,造模7周后开始灌胃给药,中药组予解毒活血方溶液（5.35、10.7、21.4 g·kg^-1·d^-1）,雷帕霉素组予自噬诱导剂雷帕霉素（2 mg·kg^-1·d^-1）,连续给药4周,余各组予等容积生理盐水。检测血清血脂及炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉根部血管壁病理变化,免疫组化法测定巨噬细胞/单核细胞单克隆抗体（MOMA-2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平,透射电镜观测主动脉自噬体数量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬效应蛋白（Beclin-1）、自噬相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组血清血脂和炎症因子MCP-1、IL-6水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,自噬蛋白Beclin-1表达增加（P<0.05）,通路蛋白PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见明显粥样斑块,斑块内可见炎性细胞浸润,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱;自噬体和线粒体数量更少,且线粒体结构不完整。与模型组比较,中药组及雷帕霉素组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平和MCP-1、IL-6水平降低（P<0.05）,高密度脂蛋白（HDL）水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见少量粥样斑块,炎性细胞浸润程度及血管壁厚度减轻;自噬体和自噬溶酶体数量增多。结论 解毒活血方改善AS小鼠脂质代谢,增强巨噬细胞自噬活性,减轻AS炎症反应,提高易损斑块稳定性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

基于网络药理学和实验验证探索荆防合剂治疗甲型H1N1流感的作用机制

目的 预测荆防合剂治疗甲型H1N1流感的潜在靶点及作用机制，以期为荆防合剂临床应用提供参考依据。方法 通过中药系统药理学分析平台数据库（TCMSP）、SwissTargetPrediction、TargetNet数据库筛选荆防合剂抗甲型H1N1流感的活性成分及作用靶点，通过GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、DisGeNet数据库获取甲型H1N1流感靶点并统一使用UniProt KB数据库进行标准化，借助Venny 2.1.0在线平台获取两者交集靶点；采用Cytoscape 3.2.1软件建立“药物-成分-靶点”网络图并进行拓扑学属性分析；将交集靶点上传至STRING 11.5数据库获得蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）关系网络，并在Metascape平台中进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析。最后通过Autodock vina软件将度值靠前的活性成分和关键核心靶点进行对接验证，并用PyMOL软件进行可视化分析。采用BALB/C雌鼠进行实验验证，苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病变情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）因子水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组动物肺组织mRNA和蛋白表达水平。结果 荆防合剂中共有活性成分144个，获得靶点基因421个，甲型H1N1流感靶点2 956个，两者交集靶点199个，拓扑学分析显示，荆防合剂治疗甲型流感的核心成分为槲皮素、木犀草素和山柰酚，核心靶点为人前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、雌激素受体1（ESR1）、诱导型一氧化氮合酶2（iNOS2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARG）、环氧合酶-1（PTGS1）等。GO富集分析中生物学过程（BP）得到697个条目（P<0.01），分子功能（MF）得到59个条目（P<0.01），细胞组成（CC）得到21个条目（P<0.01）。KEGG富集分析中共得到132条信号通路（P<0.01）如磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等，大多与调节免疫性炎症有关。分子对接结果显示，荆防合剂的活性成分与核心靶点的结合能均<-5.0 kcal·mol^-1，证明其具有较好的结合活性。HE染色显示给药组动物肺组织明显改善，Real-time PCR和Western blot显示荆防合剂可降低肺组织中PI3K和Akt的表达水平。结论 荆防合剂可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗甲型流感病毒的作用，其中的活性成分槲皮素、木犀草素和山柰酚可能通过作用于PTGS2、ESR1、iNOS2、PPARG、PTGS1等靶点，进而对PI3K/Akt、MAPK等信号通路产生炎性控制及免疫调节作用。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨金骨莲提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的 探讨金骨莲提取物（JGL）对炎症的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白组（10%胎牛血清），脂多糖（LPS）模型组（0.5 mg·L^-1），JGL给药组（10，20，40，60，80，120，160，200，250，300 mg·L^-1），JGL给药组同时给予LPS刺激（0.5 mg·L^-1），培养24 h进行后续检测。采用细胞增殖与检测试剂盒（CCK-8）试剂检测JGL对RAW264.7细胞增殖活性的影响；采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6，IL-10和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测炎症相关因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS），前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）/环氧合酶-2（COX-2）的表达及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）途径关键蛋白的活化。结果 与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）刺激24 h后能显著促进RAW264.7细胞增殖（P<0.01），与模型组比较，JGL对细胞增殖无显著显著影响；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）能显著增加NO，IL-1β，IL-6，IL-10和TNF-α的释放（P<0.01），与模型组比较，JGL（20~300 mg·L^-1）给药24 h后能剂量依赖性显著抑制NO的释放（P<0.01）；与模型组比较，JGL各剂量组IL-1β，IL-6，IL-10均明显降低（P<0.05，P<0.01），但对TNF-α的释放未见明显的抑制作用；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）能显著诱导iNOS，PTGS2/COX-2基因表达（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，JGL各剂量组能下调iNOS，PTGS2/COX-2 mRNA的表达（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）组PI3K/Akt通路显著活化（P<0.01），JGL（10，20，40，80 mg·L^-1）显著降低PI3K p110和p-PI3K p85蛋白及Akt磷酸化水平（P<0.01），抑制PI3K/Akt通路活化。结论 金骨莲提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应，减少炎症因子的释放，其抗炎作用与抑制PI3K/Akt途径有关。     

基于PI3K/Akt/HIF-1α信号通路探讨补肾活血汤干预乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的作用机制

目的 利用网络药理学预测补肾活血汤干预乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的潜在作用机制，并通过体外细胞模型进行实验验证。方法 首先通过网络药理学筛选补肾活血汤的主要有效化学成分和作用靶点，进一步获取乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松相关的疾病靶点。将二者的共同靶点信息进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。其次利用生存分析网站（Kaplan-Meier Plotter）对关键靶点进行生存分析。最后通过体外实验噻唑蓝（MTT）比色法评估细胞增殖抑制活性，蛋白免疫印迹法（Western blot）验证关键靶点及通路，并使用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）评估关键靶点mRNA表达。结果 网络药理学研究共获得补肾活血汤活性成分716个，关键靶点249个，补肾活血汤和乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的共同靶点135个，其中蛋白激酶B（Akt）1、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是两个关键靶点，靶点共涉及生物过程531种，细胞组成62种，分子功能162种，参与乳腺癌、内分泌抵抗等细胞信号通路145条；靶点有效地富集在磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt和低氧诱导因子（HIF）-1两条信号通路。体外实验中，MTT比色法显示，与空白组比较，22.5、45、90 g·L^-1及45、90、180 g·L^-1质量浓度的补肾活血汤作用48 h后分别能不同程度的降低人Luminal A型乳腺癌细胞系MCF-7和T47D细胞增殖率和细胞运动能力。将0、15、60 g·L^-1的补肾活血汤干预MCF-7细胞48 h，Western blot实验表明，与空白组比较，不同质量浓度的补肾活血汤作用于MCF-7细胞中磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt和HIF-1α蛋白相对表达水平均降低（P<0.05，P<0.01），且呈浓度依赖性。采用Real- time PCR检测关键靶点HIF-1α的mRNA表达，结果显示，与空白组比较随浓度升高MCF-7细胞中HIF-1α的mRNA表达显著降低（P<0.01），且呈浓度依赖性。结论 补肾活血汤通过PI3K/Akt/HIF-1信号通路作用于关键靶点Akt1、HIF1A，进而干预乳腺癌内分泌治疗相关的骨质疏松。     

基于脂质与动脉粥样硬化通路探讨菟丝子防治卵巢早衰的作用机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术初步预测菟丝子防治卵巢早衰的活性成分、作用靶点及信号通路，并构建卵巢早衰动物模型，基于脂质与动脉粥样硬化信号通路探讨其作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、Swiss Target Prediction、Pharmmapper等数据库中获取药物的有效成分及对应靶点；使用GeneCards数据库收集疾病的相关靶点；利用Venny2.1.0在线工具筛选出药物与疾病的交集靶点，用STRING数据库及Cytoscape v3.7.2软件构建“药物-成分-靶点”与蛋白质-蛋白质互作网络（PPI）网络图；通过运行R语言脚本对交集靶点进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，利用分子对接技术将药物成分与靶点进行对接，并对其部分对接结果进行可视化；将小鼠随机分为正常组、模型组、菟丝子组与戊酸雌二醇组，采用慢性应激制备卵巢早衰模型，正常组与模型组给予等量生理盐水灌胃，菟丝子组给予菟丝子水煎剂2.6 g·kg^-1·d^-1，戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇溶液0.13 mg·kg^-1·d^-1，4周后取材，苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢的组织形态学改变，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E₂）、缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（AMH）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制因子α（IκBα）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等表达水平。结果 共筛选菟丝子防治卵巢早衰靶点171个，主要包括细胞肿瘤抗原（TP53）、蛋白激酶B1（Akt1）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶（SRC）、肿瘤坏死因子（TNF）、表皮生长因子受体（EGFR）等，KEGG通路富集分析预测菟丝子防治卵巢早衰主要涉及脂质与动脉粥样硬化、TNF信号通路、TP53信号通路等。动物实验表明，与卵巢早衰模型组比较，菟丝子组可明显上调AMH、E₂、HDL-C（P<0.05，P<0.01），显著下调LH、TC、LDL-C（P<0.01），显著降低IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平与ERK、NF-κB p65及其磷酸化水平（P<0.01）。结论 菟丝子可通过“多成分-多靶点-多通路”方式，调节激素水平改善卵巢功能，其机制可能与调控脂质与动脉粥样硬化信号通路有关。     

左金丸对DSS诱导的溃疡性结肠炎的作用及其机制

目的 基于网络药理学与实验验证探究左金丸（ZJW）治疗溃疡性结肠炎（UC）的作用及机制。方法 借助网络药理学与分子对接初步明确ZJW治疗UC的活性成分与潜在机制,将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组（300 mg·kg^-1）和左金丸低、中、高剂量组（1.82、3.64、7.28 g·kg^-1）,采用葡聚糖硫酸钠（DSS）构建UC模型,造模第3天开始灌胃给药,连续7 d,每日观察小鼠一般状态并评估疾病活动指数（DAI）。苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-10水平,并以蛋白免疫印迹法（Western blot）验证分子机制。结果 网络药理学预测发现磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路可能是ZJW调节UC的关键途径。分子对接结果表明ZJW关键成分与核心靶点之间均有良好的结合能力。动物研究结果显示,与正常组比较,模型组小鼠结肠长度显著缩短（P<0.01）,DAI评分、脾脏指数、结肠组织病理学评分与血清中TNF-α、IL-6水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,结肠组织PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）与B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达明显增加（P<0.05,P<0.01）,血清IL-10水平与结肠组织Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,左金丸各给药组小鼠UC症状明显改善,结肠组织病理损伤减轻,血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6水平显著下调（P<0.01）,结肠组织PI3K、p-Akt与Bax蛋白表达明显抑制（P<0.05,P<0.01）,血清IL-10水平与结肠组织Bcl-2蛋白表达显著提高（P<0.01）,以高剂量组效果最佳。结论 ZJW可有效缓解DSS诱导的UC,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路、调节凋亡相关蛋白表达相关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NLRP3通路的免疫调节作用

目的 探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体通路的作用及其机制。方法 60只雄性SD大鼠随机平均分为6组，分别为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组，NLRP3抑制剂（MCC950）组。除正常组外，其余采用孤养联合慢性不可预见性应激（CUMS） 21 d，制备抑郁大鼠模型。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低组分别灌胃13，6.5，3.25 g·kg^-1柴胡加龙骨牡蛎汤溶液，MCC950组腹腔注射1 mg·kg^-1，正常组、模型组灌胃等体积生理盐水，给药21 d期间持续追加造模。采用糖水偏好实验（SPT）和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马组织匀浆中白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-18含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马中NLRP3，凋亡相关微粒蛋白（ASC）及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组糖水偏好率显著降低（P<0.01），新奇摄食时间显著延长（P<0.01）；海马组织中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达显著增强（P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤高、中组糖水偏好率显著提高（P<0.01），新奇摄食时间显著缩短（P<0.01）；海马中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著降低（P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可减轻CUMS诱导的抑郁行为，其机制可能与抑制NLRP3炎症小体通路有关。     

基于网络药理学和体内实验验证霍山石斛治疗胃溃疡的作用机制

目的 通过网络药理学方法及体内实验研究探讨霍山石斛治疗胃溃疡（GU）的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库及文献中收集建立霍山石斛的成分库，寻找其主要活性化合物，并通过TCMSP等数据库预测作用靶点。从GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、DisGeNET等数据库中筛选GU相关基因，将成分靶点与疾病基因交集后构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，并进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。根据预测结果采用苏木素-伊红（HE）染色法、免疫组化、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）等实验验证霍山石斛对乙酸诱导GU大鼠模型的影响。结果 筛选出霍山石斛63种有效成分，得到霍山石斛治疗GU的靶基因37个，PPI分析得到多个霍山石斛治疗GU的可能核心靶点，并通过作用于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、肿瘤坏死因子（TNF）、核转录因子-κB（NF-κB）等信号通路和各种生物过程影响GU的发展。体内实验结果显示，霍山石斛可显著降低模型大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6）及TNF-α等炎性因子的水平（P<0.05，P<0.01），增加溃疡边缘的胃血流量（GBF），增加溃疡边缘表皮生长因子（EGF），表皮生长因子受体（EGFR）的表达（P<0.01），显著下调GU大鼠胃组织中PI3K，Akt蛋白和mRNA的表达，上调人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）蛋白和mRNA的表达（P<0.01）。结论 网络药理学分析及动物实验结果提示，霍山石斛可以通过调节EGFR/PI3K/Akt信号通路抑制组织炎症，增加溃疡边缘的胃微循环血流，促进细胞增殖和受损胃黏膜的修复。     

基于miRNA测序技术探讨补中益气汤治疗自身免疫性甲状腺炎的潜在机制

目的 探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠甲状腺组织miRNA表达的影响。方法 选择NOD.H-2^h4小鼠共30只，随机分为正常组、模型组、补中益气汤组（BG组），每组各10只。根据分组给予小鼠含0.05%碘化钠水8周构建小鼠AIT模型后，灌胃给药8周取材。观察每组小鼠甲状腺组织病理改变情况，并对每组小鼠甲状腺组织差异miRNA进行实验验证及生物信息学分析。结果 与正常组比较，模型组甲状腺组织炎性细胞浸润明显，血清甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，BG组甲状腺组织炎症程度减轻，血清TgAb水平显著降低（P<0.01）。与正常组比较，模型组小鼠白细胞介素（IL）-6、IL-17表达显著增高（P<0.01），IL-1β表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，BG组IL-1β、IL-6、IL-17表达明显降低（P<0.05）。与正常组比较，模型组得到154个差异表达miRNA；与模型组比较，BG组得到112个差异表达miRNA。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）结果表明miR-326-3p、miR-128-3p、miR-223-5p、miR-141-3p、miR-871-3p、miR-204-3p表达与测序结果趋势一致。基因本体（GO）功能富集于T细胞活化调节、氧化应激、miRNA结合等方面；京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、环磷酸腺苷（cAMP）信号通路等途径。差异miRNA预测得到3个关键基因，果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白（Smad3）、Janus相关激酶2（JAK2）、信号转导和转录激活因子3（STAT3）。结论 补中益气汤可能通过调节6种miRNA干预自身免疫性甲状腺炎。     

柴胡清肝汤干预NLRP3/IL-1β通路治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的作用机制

目的 探讨柴胡清肝汤（CHQGT）治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎（GLM）模型大鼠的作用机制。方法 将60只雌性大鼠分为正常组、模型组、醋酸泼尼松龙组（0.001 8 g·kg^-1）、柴胡清肝汤低、中、高剂量组（4.5、8.9、17.8 g·kg^-1），采用GLM病变组织与弗氏佐剂混合后的组织匀浆进行造模，造模成功后药物干预组均给予相应的处理因素，正常组、模型组给予等量生理盐水。14 d后肉眼观察小鼠乳腺变化；苏木素-伊红（HE）染色观察取材的乳腺组织病理学改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、白细胞介素-18（IL-18）的蛋白表达情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠肉眼可见乳房明显红肿，且乳腺炎症指数显著升高（P<0.01），病理学改变包括形成以乳腺小叶为中心的肉芽肿，伴见大量淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润，模型组大鼠乳腺组织中的NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA相对表达量显著增加（P<0.01），NLRP3、Caspase1、IL-1β和IL-18蛋白的表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组大鼠乳房红肿均有改善，柴胡清肝汤中、高剂量组及泼尼松龙组经治后炎症指数均有不同程度下降（P<0.05，P<0.01），乳腺的炎症程度明显改善，病理学方面巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞均有不同程度减少，柴胡清肝汤高剂量组、泼尼松龙组均能够明显下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），降低NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 柴胡清肝汤能够抑制炎症，治疗大鼠GLM，其可能机制与抑制NLRP3/IL-1β信号通路有关，这为“清消法”防治GLM提供了新的靶点。     

芍药汤通过抑制HIF-1α调节Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在溃疡性结肠炎辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡中的作用及芍药汤的干预机制。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（0.42 g·kg^-1），芍药汤组（11.1 g·kg^-1），抑制剂组（2-甲氧基雌二醇，0.015 g·kg^-1），芍药汤+抑制剂组，采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎模型，各组分别对应给予生理盐水，美沙拉嗪，芍药汤，抑制剂及芍药汤+抑制剂治疗7 d，观察各组大鼠一般情况和疾病活动指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-23水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织叉头状/翼状螺旋转录因子P3（FoxP3），维甲酸相关孤儿受体（RORγt），HIF-1α蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠疾病活动指数（DAI）评分，肠黏膜病理学评分显著升高（P<0.01），血清中的IL-10水平显著降低（P<0.01），IL-17和IL-23显著升高（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01），FoxP3蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芍药汤组DAI评分，肠黏膜病理学评分降低（P<0.05，P<0.01），血清中IL-10水平升高（P<0.01），IL-17，IL-23降低（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平降低（P<0.01），FoxP3蛋白表达升高（P<0.01）；与抑制剂组比较，芍药汤组及芍药汤+抑制剂组RORγt，FoxP3及HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 芍药汤可以有效治疗溃疡性结肠炎，其作用机制可能与抑制HIF-1α来调节Treg/Th17的重新平衡相关。     

基于网络药理学探讨桂枝加葛根汤防治血脂异常的机制研究及实验验证＊

目的 通过网络药理学技术预测桂枝加葛根汤防治血脂异常可能作用靶点和机制，并进行动物实验验证。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）或中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）检索葛根，桂枝，白芍，生姜，大枣，甘草的化学组分，活性成分的筛选标准以口服生物利用度（OB）>30%，化合物类药性（DL）>0.18或Score cutoff≥20。已筛选出的靶点名称应用数据库Uniprot对其标准化；同时在Genecards和OMIM两个数据库中检索血脂异常相关基因，并将上述预测靶基因合并作为疾病相关基因数据。采用Draw Venn Diagram在线程序将桂枝加葛根汤和血脂异常的靶基因取交集，获得桂枝加葛根汤和血脂异常的共同靶点。采用Cytoscape3.7.1绘制桂枝加葛根汤药物成分和血脂异常疾病靶点的网络图。在R3.6.0软件中安装程集包ggplot2、colorspace、clusterProfiler、pathview、stringi、DOSE等进行GO富集分析和KEGG富集分析。并进一步采用动物实验进行验证，选取SPF级SD雄性大鼠，运用高脂饲料喂养建立高脂血症模型，桂枝加葛根汤干预30天后检测各组大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，qRT-PCR法对TNF信号通路上的关键分子IL-6、IL-1β、PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8进行验证。结果 预测出桂枝加葛根汤可能作用靶点222个，动脉粥样硬化疾病相关基因1250个，桂枝加葛根汤和血脂异常的共同靶点119个。GO功能富集分析结果表明分子功能相关条目114个，细胞组分相关条目70个，生物过程相关的条目2143个。同时在KEGG通路富集到165条信号通路。然后对三组间大鼠的血脂水平进行比较，与正常组相比，模型组大鼠血清中HDL-C水平显著降低（P<0.01），LDL-C、TG、TC水平显著升高（P<0.01），可以证明造模成功；与模型组相比，桂枝加葛根汤组血清中HDL-C水平显著升高（P<0.05），LDL-C、TG、TC水平显著降低（P<0.01，P<0.05），说明桂枝加葛根汤可以改善大鼠血脂水平。与正常组比较，模型组肝脏组织PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、IL-1β mRNA表达均显著上升（P<0.01）；与模型组比较，桂枝加葛根汤组肝脏组织PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、IL-1βmRNA表达上均显著降低（P<0.01，P<0.05）。结论 桂枝加葛根汤通过多靶点、多通路治疗血脂异常，为进一步深入探讨其分子机制奠定基础，拓宽经方桂枝加葛根汤临床应用范围，为后续临床治疗血脂异常提供新的思路。