大柴胡汤通过CREB/PGC-1α通路保护营养型肥胖大鼠肝脏粒体功能

目的 观察大柴胡汤对营养型肥胖大鼠环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子α（PGC-1α）通路的作用及肝脏线粒体的保护机制。方法 8周龄SD雄性大鼠120只,随机分为正常组20只和造模组100只。正常组给予大鼠维持饲料喂养,造模组给予高脂饲料喂养。造模成功大鼠随机分为模型组、阳性药（二甲双胍）组、大柴胡汤低、中、高剂量组（4.25,8.5,17 g·kg^-1）,每组20只。电子天平称取并比较各组大鼠体质量,计算Lee''s指数,分光光度法检测肝脏线粒体膜电位,电镜检测线粒体超微结构,蛋白免疫印迹法检测PGC-1α蛋白表达和CREB磷酸化作用。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量及Lee''s指数显著增加（P<0.01）,线粒体膜电位显著下降,PGC-1α蛋白表达和CREB磷酸化水平显著下降（P<0.01）;与模型组比较,大柴胡汤能够明显降低肥胖大鼠体质量和Lee''s指数（P<0.05,P<0.01）,提高肝脏线粒体膜电位（P<0.05,P<0.01）和保护线粒体结构完整性,上调PGC-1α蛋白表达和促进CREB磷酸化（P<0.05,P<0.01）。结论 大柴胡汤激活CREB/PGC-1α通路,保护线粒体结构与功能,有效抑制肥胖大鼠体质量增加。     

瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的线粒体功能障碍和AMPK/PGC-1α信号通路的影响

目的 观察瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的线粒体功能障碍及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α（PGC-1α）信号通路的影响。方法 70只雄性SD大鼠,随机选取6只作为正常组（CON）,其余给予高脂饲料结合注射异丙肾上腺素（5 mg·kg^-1·d^-1,7 d）,建立以高血脂为基础的缺血性心脏病模型。将造模成功者随机分为模型组（MOD）、瓜蒌薤白半夏汤高剂量（GXBD-H）组、瓜蒌薤白半夏汤中剂量（GXBD-M）组、瓜蒌薤白半夏汤低剂量（GXBD-L）组和美托洛尔（MET）组。其中,GXBD-H组、GXBD-M组和GXBD-L组大鼠分别给予11.2、5.6、2.8 g·kg^-1·d^-1的瓜蒌薤白半夏汤水煎液,MET组给予美托洛尔2.6 mg·kg^-1·d^-1,CON组和MOD组给予等体积纯净水,连续28 d。心导管法测量大鼠血流动力学;透射电镜分析心肌组织线粒体变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清脑钠肽（BNP）和心肌肌钙蛋白T（cTnT）水平;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1法）检测线粒体膜电位;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测线粒体DNA拷贝数的变化;分光光度计法检测心肌组织三磷酸腺苷（ATP）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织磷酸化AMPK（p-AMPK）、AMPK、PGC-1α、核呼吸因子1（NRF1）和线粒体转录因子A（TFAM）的表达水平。结果 与CON组比较,MOD组的左室收缩末期压（LVESP）和左室舒张末期压（LVEDP）明显升高（P<0.05,P<0.01）,以及心室收缩时室内压最大上升速率（+dp/dt_max）和左室舒张时室内压最大下降速率（-dp/dt_max）显著降低（P<0.01）;心指数和心肌间质纤维化面积均显著升高（P<0.01）及线粒体破坏损伤;血清BNP、cTnT和丙二醛（MDA）显著升高（P<0.01）,以及血清超氧化物歧化酶（SOD）水平显著降低（P<0.01）;心肌线粒体膜电位、DNA拷贝数和ATP水平均显著降低（P<0.01）;心肌组织的p-AMPK/AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平显著减少（P<0.01）。与MOD组比较,GXBD-H和GXBD-M组的LVESP、LVEDP、+dp/dt_max和-dp/dt_max明显改善（P<0.05,P<0.01）;心指数和心肌间质纤维化面积均明显降低（P<0.05,P<0.01）及线粒体损伤减轻;血清BNP、cTnT和MDA明显降低（P<0.05,P<0.01）,及血清SOD水平显著升高（P<0.01）;心肌线粒体膜电位、DNA拷贝数和ATP水平均明显增加（P<0.05,P<0.01）;心肌组织的p-AMPK/AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 瓜蒌薤白半夏汤可以降低心肌损伤模型大鼠的心功能和心肌病理形态变化,抑制线粒体功能障碍,并上调心肌组织p-AMPK/ AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白表达变化。该研究为深入探索经典复方防治心肌损伤的效应机制,提供了新的实验室证据。     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

强心康颗粒对慢性心衰大鼠心肌细胞病理形态学腺苷酸转位酶，PGC-1α mRNA表达的影响

目的:通过观察强心康颗粒对心衰大鼠心肌细胞病理形态学及心肌线粒体腺苷酸转位酶(ANT),过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达的影响来探讨其治疗心衰的机制。方法:选择健康雄性SD大鼠,应用腹腔注射阿霉素(3 mg·kg~(-1)),造成心衰大鼠模型,然后分为正常组,模型组,芪苈强心组(芪苈强心胶囊,0.65 g·kg~(-1)),曲美他嗪组(10.8 mg·kg~(-1))及强心康高、中、低剂量组(20,10,5 g·kg~(-1)),造模之后进行心功能的检测,验证模型是否成立,服药4周后,苏木素-伊红(HE)及电镜扫描观察心肌细胞病理形态学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察7组大鼠心肌细胞病理形态学及心肌ANT,PGC-1αmRNA表达的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠心率明显减慢,左心室最大上升和下降速率均降低,左心室收缩压显著降低,左室终末舒张压明显增加,收缩压、舒张压、平均血压显著降低(P0.01),表明心衰模型成立;模型组大鼠心肌细胞病变较明显,模型组大鼠心肌细胞病变改善明显,ANT,PGC-1αmRNA含量显著减少(P0.01)。与模型组比较,盐酸曲美他嗪组、芪苈强心组、强心康高、中剂量组的均能显著增加ANT,PGC-1αmRNA含量(P0.01);强心康低剂量组能明显增加ANT,PGC-1αmRNA含量,与模型组比较有统计学差异(P0.05)。结论:强心康颗粒可通过改善心肌细胞结构,增加ANT,PGC-1αmRNA含量来纠正心功能。     

补中益气汤通过Adipor1/AMPK/PGC-1α调节脂代谢治疗运动性疲劳

目的 探讨补中益气汤通过脂联素受体1（Adipor1）/磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）对运动性疲劳（EIF）小鼠骨骼肌中脂代谢的影响。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组、维生素C组。空白组不施加任何干预,其余组通过力竭游泳建立EIF模型。力竭游泳前1 h,空白组、模型组灌服0.2 mL蒸馏水,补中益气汤低、中、高剂量组分别灌胃4.1、8.2、16.4 g·kg^-1的补中益气汤,维生素C组灌胃0.04 g·kg^-1剂量维生素C,持续6周。实验6周后,计算小鼠体质量增长率、脏器指数、力竭游泳时间;酶比色法检测小鼠血清中尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）的水平;苏木素-伊红（HE）染色观察骨骼肌组织病理变化;透射电镜（TEM）观察骨骼肌组织超微结构;微板法检测血清中游离脂肪酸（NEFA）、甘油三酯（TG）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）测定骨骼肌中Adipor1、磷酸化（p）-AMPK/AMPK、PGC-1α和己糖激酶2（HK2）蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠的体质量增长率、胸腺指数降低,血清中BUN、CK、LD、LDH水平升高（P<0.01）,NEFA、TG含量下降（P<0.01）,骨骼肌组织Adipor1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α、HK2蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,补中益气汤高剂量组体质量增长率、胸腺指数、力竭游泳时间显著升高（P<0.01）,BUN、CK、LD、LDH显著下降（P<0.01）,NEFA、TG显著升高（P<0.01）,骨骼肌组织Adipor1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α、HK2蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;维生素C组胸腺指数、力竭游泳时间明显提高,BUN、CK、LD明显下降（P<0.05,P<0.01）,NEFA、TG显著升高（P<0.01）,骨骼肌组织Adipor1蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 补中益气汤能够延缓EIF的发生,其机制可能与调节Adipor1/AMPK/PGC-1α信号通路,提高骨骼肌对脂肪的利用率有关。     

温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的作用机制

目的 揭示温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的改善作用及其对沉默信息调节因子1（SIRT1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）/雌激素受体相关受体α（ERRα）能量信号通路的作用。方法 SPF级Wistar雄性大鼠90只,随机分为假手术组、模型组、温心方低、中、高剂量组;温心方低、中、高剂量组分别给予0.99、1.98、3.96 g·kg^-1的颗粒剂灌胃,假手术组和模型组均予以等体积生理盐水灌胃;预给药21 d后,模型组及温心方组采用冠状动脉左前降支结扎30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型,假手术组只穿线,不结扎;TTC染色观察心肌梗死面积,苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理形态,试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性、心肌组织ATP含量及线粒体复合体Ⅳ（CCO）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组心肌纤维断裂,排列紊乱,细胞胞质水肿,细胞核出现固缩、偏移;CK-MB、LDH活性明显升高（P<0.05,P<0.01）,ATP含量及CCO、SDH活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,心肌组织心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、mtTFA mRNA及蛋白表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,温心方预处理各组心肌梗死面积显著缩小,且以高剂量组最显著（P<0.01）,心肌组织病理形态有所改善,CK-MB、LDH活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,ATP含量及CCO、SDH活性均有提高,以高剂量组最显著（P<0.01）,心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达均有不同程度提高（P<0.05,P<0.01）。结论 温心方可通过调控SIRT1/PGC-1α/ERRα信号通路,改善心肌线粒体能量代谢,保护心肌缺血再灌注损伤。     

地黄引子改善AD大鼠脑组织线粒体生物合成与氧化损伤的机制

目的:探讨地黄饮子对阿尔茨海默病(AD)大鼠中枢神经线粒体生物合成能力、氧化损伤保护的作用机制以及对AD大鼠学习记忆能力的改善作用。方法:120只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、安理申组、地黄饮子高、中、低剂量组,除假手术组外均侧脑室注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)建立AD模型,各治疗组给予相应药物灌胃,假手术组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续30 d。通过大鼠避暗箱实验,Y迷宫实验对大鼠行为学进行观察。行为学实验后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)表达量和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平;测定脑组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ活性;测定丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:地黄饮子可显著改善AD大鼠学习记忆和工作记忆能力。与模型组比较,在避暗箱实验中,地黄饮子可使AD大鼠的停留潜伏期明显增加(P0.05,P0.01),而错误次数显著减少(P0.05,P0.01);Y迷宫实验中,地黄饮子可显著提高AD大鼠自发交替反应率(P0.05,P0.01)。地黄饮子显著增加AD大鼠脑组织PGC-1α表达量和CREB磷酸化水平,显著提高脑组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ活性(P0.01),而对呼吸链复合物Ⅱ活性无显著作用。地黄饮子能显著降低AD大鼠脑组织MDA含量(P0.01),提高抗氧化酶类SOD和GSH-Px活性(P0.05,P0.01)。结论:地黄饮子通过激活AD大鼠CREB/PGC-1α信号通路,提高线粒体生物合成能力,增加线粒体呼吸链酶系活性,改善线粒体功能损伤,同时通过增强抗氧化酶系活性,发挥提高机体抗氧化损伤,从而改善AD大鼠学习记忆和工作记忆能力。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg~(-1))、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P 0. 05,P 0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P 0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P 0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P 0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P 0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。     

基于AMPK/PPARα/PGC-1α信号通路探讨金合欢素改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱作用机制北大核心CSCD

目的:探究金合欢素对代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过果糖诱导自发性高血压(SHR)大鼠建立代谢综合征大鼠模型,灌胃给予金合欢素25、50 mg/kg, 7 w后检测收缩压(SBP)、胰岛素抵抗数指数(HOMA-IR),试剂盒检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)的含量;ELISA法检测腓肠肌组织中ATP含量;采用qPCR法测定大鼠腓肠肌中线粒体DNA(mtDNA)拷贝数;Western Blot法检测UCP 3、线粒体融合蛋白(MFN2)、线粒体裂变因子(MFF)、线粒体动力相关蛋白(Drp1)、线粒体途径凋亡指标蛋白(Cytochrome c)、能量代谢相关蛋白AMPK、p-AMPK、PPAR α、PGC-1α的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中LDL-C、TG含量显著升高(P<0.01),血清中HDL-C、腓肠肌质量、ATP含量、mtDNA拷贝数显著降低(P<0.01),腓肠肌组织线粒体中UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达显著下调(P<0.01),MFF、Drp1蛋白表达显著上调(P<0.01),腓肠肌组织中AMPK蛋白磷酸化表达、PPAR α、PGC-1α蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,金合欢素各组能明显改善代谢综合征大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中HDL-C、LDL-C、TG的含量;升高腓肠肌质量和ATP含量、mtDNA拷贝数,明显上调UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达,下调MFF、Drp1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),促进大鼠腓肠肌线粒体融合并抑制其分裂;上调AMPK蛋白磷酸化、PPAR α、PGC-1α蛋白表达(P<0.01)。结论:金合欢素可能通过激活AMPK/PPAR α/PGC-1α通路,促进代谢综合征大鼠骨骼肌线粒体融合并抑制其分裂,增强线粒体功能进而改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱。     

中药激活PPARα通路治疗高脂血症的活性成分及作用机制研究进展

高脂血症是由血脂代谢紊乱引发的血脂异常疾病,可分为原发性和继发性2类,目前临床诊断标准主要为血脂水平变化,是动脉粥样硬化、胰腺炎、冠心病等高危心血管疾病的诱因。过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）作为脂质代谢中承上启下的关键靶点,参与了包括脂肪酸降解、合成、运输、储存、脂蛋白代谢等多种代谢活动,激活PPARα可通过多种方式维持脂代谢平衡,是治疗高脂血症的重要途径。目前临床上治疗高脂血症主要使用他汀类、贝特类等化学药物,虽然可以在一定程度上减缓病势,但不良反应多且存在耐药性。笔者通过查阅近几年文献总结发现,中药激活PPARα通路治疗高脂血症效果显著且不良反应小,降脂活性成分包括黄酮类、生物碱类、酚类和萜类等多类型化合物,这些活性成分主要通过激活PPARα通路影响下游效应因子表达进而抑制总胆固醇合成和促进脂肪酸氧化,发挥治疗高脂血症的作用。该文系统综述激活PPARα通路的中药活性成分的结构类型及作用机制,为降脂中药新药的合理开发和临床应用提供指导。     

龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠骨骼肌中PGC-1α的影响

目的:研究慢性疲劳综合征的基本病机,建立慢性疲劳大鼠模型,观察龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠行为学指标和骨骼肌中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠40只,随机分为正常组、正常对照组、模型组、苁蓉益肾颗粒组、龟鹿益神颗粒组,每组8只。除正常组、正常对照组不造模外,其他3组采用慢性束缚、夹尾激怒和力竭游泳方法构建慢性疲劳大鼠模型。正常组和模型组按10 ml/(kg·d)给予生理盐水灌胃,正常对照组和龟鹿益神颗粒组按1 250 mg/(kg·d)给予龟鹿益神颗粒混悬液灌胃,苁蓉益肾颗粒组按417 mg/(kg·d)给予苁蓉益肾颗粒混悬液灌胃。每天观察并记录大鼠的体质量、饮水量、进食量、粪便形态及鼠毛色泽等情况,用ELISA法检测大鼠骨骼肌中PGC-1α的含量。结果:造模前,各组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数无明显差异。造模后,与正常组比较,模型组、龟鹿益神颗粒组、苁蓉益肾颗粒组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数显著减少,差异均有统计学意义(P0.05)。给药后,与正常组比较,模型组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数、骨骼肌中PGC-1α含量显著减少,正常对照组大鼠骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,龟鹿益神颗粒组和苁蓉益肾颗粒组大鼠体质量、力竭游泳时间、跨格次数、直立次数、骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与苁蓉益肾颗粒组比较,龟鹿益神颗粒组大鼠力竭游泳时间、骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:运用慢性复合因素复制慢性疲劳动物模型具有可行性。龟鹿益神颗粒可以改善慢性疲劳大鼠身心疲劳状态,提高慢性疲劳大鼠骨骼肌中PGC-1α含量。     

当归芍药散对AD大鼠线粒体稳态及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的：探讨当归芍药散对阿尔茨海默病(AD)大鼠线粒体形态和功能的影响及作用机制。方法：采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)构建AD模型大鼠。40只大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量(12、24、36 g·kg^-1)组,连续灌胃14 d后透射电镜观察大鼠海马区线粒体形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测活性氧(ROS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)、PGC-1α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、PGC-1α蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马区线粒体损伤明显,ROS产生和细胞凋亡率显著增高(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著下调,Drp...     

脑心安胶囊对慢性脑缺血致血管性认知障碍大鼠胶质细胞激活及炎性反应的调节作用

目的 以慢性脑缺血致血管性认知障碍（VCI）大鼠为模型,探讨脑心安胶囊对VCI大鼠脑内胶质细胞激活及炎性损伤的保护作用。方法 150只大鼠随机分为假手术组（20只）和造模组（130只）,采用双侧颈动脉结扎法（2-VO）造模。造模成功的87只大鼠,随机分为模型组、阳性药组（安理申,0.5 mg·kg^-1）,脑心安低、中、高剂量组（0.18,0.36,0.72 g·kg^-1）,每组17~18只大鼠。经灌胃给予脑心安8周后,采用Morris水迷宫和避暗箱实验检测脑心安对VCI大鼠记忆能力的影响,苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠大脑海马CA1区神经细胞结构变化,原位末端标记法（TUNEL）染色检测大鼠海马神经细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,离子钙结合衔接分子-1（Iba-1）表达水平,测定p38有丝分裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和核转录因子-κB（NF-κB）磷酸化水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定脑内炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力和记忆保持能力均明显下降（P<0.05,P<0.01）,大脑海马CA1区神经元出现明显损伤,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,GFAP,Iba-1表达均显著上调（P<0.01）,p38 MAPK,NF-κB磷酸化水平显著增加（P<0.01）,炎性因子IL-1β,TNF-α水平升高（P<0.01）。与模型组比较,脑心安各剂量组均能显著改善模型大鼠空间学习记忆能力和记忆保持能力（P<0.05,P<0.01）,改善海马CA1区神经元损伤,降低神经细胞凋亡率（P<0.05,P<0.01）,下调GFAP,Iba-1表达量（P<0.01）,降低p38 MAPK,NF-κB磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）,降低TNF-α,IL-1β水平（P<0.01）。结论 脑心安胶囊通过抑制慢性脑缺血诱发的大鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞活化,抑制p38 MAPK和NF-κB激活导致的中枢神经炎性损伤,改善慢性脑缺血导致的VCI。     

淡豆豉异黄酮通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路改善动脉粥样硬化小鼠脂质代谢的作用

目的 通过卵巢切除结合高脂饲料喂养制备动脉粥样硬化小鼠模型,观察淡豆豉异黄酮（ISSP）对小鼠脂质代谢的影响,并从调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝X受体α/腺苷三磷酸结合盒转运体A1（PPARγ/LXRα/ABCA1）信号通路的角度进一步探讨其作用机制。方法 将50只载脂蛋白E敲除（ApoE^-/-）小鼠随机分为模型组、西药组（阿托伐他汀钙,3.03 mg·kg^-1）、中药低、中、高剂量组（淡豆豉异黄酮,2.5、5、10 mg·kg^-1）,每组10只,以手术切除双侧卵巢同时喂食高脂饲料的方法制备动脉粥样硬化模型小鼠,另取10只ApoE^-/-小鼠,以手术切除卵巢旁脂肪同时喂食高脂饲料的方法作为假手术组,其中部分小鼠因术后感染死亡,最终确定每组为6只小鼠,术后1周开始各组灌胃相应药物或等量生理盐水。12周后检测血清及肝脏组织中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（NEFA）的含量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量;苏木素-伊红（HE）及油红O染色观察主动脉斑块形成及肝脏脂质沉积情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α及IL-6含量显著升高（P<0.01）,HDL-C水平显著降低（P<0.01）;肝脏指数明显升高（P<0.05）,肝脏脂肪空泡明显,脂质沉积显著,肝脏中TC、TG、NEFA含量显著增多（P<0.01）;肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,ABCG1 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,服用阿托伐他汀钙和淡豆豉异黄酮中、高剂量组可使小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α和IL-6含量显著降低（P<0.01）,HDL-C水平显著降低（P<0.01）;肝脏指数显著降低（P<0.01）,肝脏脂肪空泡及脂质沉积显著减少,肝脏中TC、TG、NEFA含量明显增多（P<0.05,P<0.01）;肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA及蛋白表达明显上调（P<0.05,P<0.01）。结论 淡豆豉异黄酮可能通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路调节脂质代谢,减少血清炎症表达及肝脏脂质沉积从而改善动脉粥样斑块的形成。     

补肾通络方改善骨质疏松大鼠糖代谢的作用及机制

目的:探讨补肾通络方对去卵巢骨质疏松大鼠脂肪、骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的干预效应及对糖代谢的作用机制。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组和手术组,分别为22只和60只,全部进行卵巢切除造模。术后70 d从2组分别随机选出10只大鼠处死后取右侧股骨,采用双能X射线骨密度仪进行检测。确认造模成功后,假手术组剩12只,手术组剩48只,手术组大鼠随机分为4组,分别为模型组、补肾方组、通络方组、补肾通络方组,每组12只。各给药组分别给予补肾方(5.4 g·kg~(-1)),通络方(0.9 g·kg~(-1)),补肾通络方(6.3 g·kg~(-1))进行灌胃,连续70 d。实验结束后,检测血糖和骨密度。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4 mRNA和蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组血糖略升高,骨密度显著下降(P0.01),脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4表达显著下降(P0.01)。与模型组比较,补肾通络方组大鼠血糖明显下降,脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4 mRNA和蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.01)。结论:补肾通络方通过促进脂肪及骨骼肌PGC-1α表达,增加GLUT4表达,提高糖代谢水平。     

基于PPAR-α/CPT-1信号通路的桑叶总黄酮调控T2DM大鼠肝脏脂质代谢作用及其机制

目的 观察桑叶总黄酮改善2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏脂代谢紊乱的药效学作用,并基于肝脏过氧化物酶增殖物激活受体-α（PPAR-α）、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（CPT-l）蛋白探讨其作用机制。方法 采用醇提法+大孔树脂纯化法提取、纯化桑叶总黄酮,并进行鉴定。利用高脂肪饮食（HFD）+链脲佐菌素（STZ）法建立T2DM大鼠模型,选择血糖≥11.1 mmol·L^-1的大鼠,以桑叶总黄酮高、中、低剂量（300、150、75 mg·kg^-1）分别灌胃给药8周,观察大鼠体质量及血糖情况。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝脏病理变化,生化法检测大鼠血清脂代谢指标总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏组织PPAR-α及CPT-1 mRNA和蛋白的表达。结果 桑叶总黄酮干预8周后,与正常组比较,模型组大鼠摄食量、肝脏指数、空腹血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠摄食量、空腹血糖、肝脏指数显著降低（P<0.01）。HE结果显示,正常组大鼠肝组织结构完整未见明显异常;模型组大鼠肝细胞空泡变性且有炎性浸润;桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠肝脏结构未见明显异常。血脂四项结果显示,与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高（P<0.01）,HDL-C水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组TC、TG、LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,HDL-C水平显著增加（P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶总黄酮可有效降低T2DM大鼠血糖,改善肝脏脂质代谢紊乱,其发挥降糖调脂的作用机制可能是通过激活调控PPAR-α和CPT-1蛋白、促进脂肪酸氧化分解,发挥调控脂质代谢,进而发挥降糖作用。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经内质网应激IRE1α/CHOP通路的影响

目的 基于肌醇需求酶1α（IRE1α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路,研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经在内质网应激方面的保护作用。方法 取60只大鼠予高糖高脂饲料喂养6周,然后按35 mg·kg^-1腹腔注射链尿佐菌素,3 d后检测大鼠随机血糖,连续检测3 d,将血糖持续≥16.7 mmol·L^-1的大鼠纳入实验,共48只。将48只大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,另设置10只为正常组。连续干预16周。16周后通过卢卡斯快蓝染色（LFB）光镜下观察各组大鼠坐骨神经结构,透射电镜观察各组大鼠坐骨神经超微结构,采用化学荧光法检测大鼠血清活性氧（ROS）含量,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应分别检测大鼠坐骨神经磷酸化IRE1α（p-IRE1α）蛋白、IRE1α mRNA、CHOP蛋白和mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中ROS含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠血清中ROS含量显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经出现病理改变;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经病理有所改善。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经（p-IRE1α）、CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经p-IRE1α、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经IRE1α、CHOP mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经IRE1α和CHOP mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可以通过抑制内质网应激IRE1α/CHOP途径相关蛋白和mRNA的表达,从而减轻内质网应激诱导的细胞凋亡,改善糖尿病大鼠坐骨神经结构和功能,从而防治糖尿病周围神经病变。     

基于GSK-3β/CREB信号通路探讨加味肾气丸减轻糖尿病小鼠肾间质纤维化的作用机制

目的 观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠肾功能及纤维化的影响,并基于糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/环磷腺苷效应原件（CREB）信号通路探讨其可能的作用机制。方法 雄性db/db小鼠50只,db/m小鼠10只。50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、加味肾气丸低、中、高剂量组。db/m小鼠10只为正常组。加味肾气丸低、中、高剂量组中药颗粒剂混悬液灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦混悬液灌胃,正常组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续干预12周。分别记录治疗前后小鼠的血糖和尿白蛋白肌酐比（UACR）及小鼠肾脏中GSK-3β、CREB、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维粘连蛋白（FN）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）蛋白的表达水平,并观测小鼠肾脏的病理损伤程度。结果 与正常组比较,模型组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）,CREB蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤严重;与模型组比较,肾气丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平均有不同程度下降（P<0.05）,CREB蛋白表达水平升高（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤有不同程度的减轻。结论 肾气丸可有效降低血糖、改善肾功能和纤维化,其作用机制与其抑制GSK-3β/CREB信号通路有关。     

川芎嗪通过PGC-1α途径抑制线粒体分裂与肾小管上皮细胞凋亡改善顺铂诱导的急性肾损伤

目的 探究川芎嗪(TMP)对顺铂(Cis)诱导的急性肾损伤(AKI)作用及其相关机制。方法 将60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(Ctl)、TMP组、Cis诱导的AKI模型组(Cis组)和TMP处理的AKI组(Cis+TMP组);检测各组小鼠血尿素氮(BUN)与血肌酐(Scr)含量,TUNEL染色检测小鼠肾组织细胞凋亡,透射电镜观察肾皮质组织中线粒体结构改变,DHE染色检测肾组织中活性氧(ROS)表达,Western blot检测肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)表达与动力相关蛋白1的磷酸化水平(p-Drp1^Ser637/Drp1);体外培养近端肾小管上皮细胞系HK-2,并将其同样分为Ctl组、TMP组、Cis组和Cis+TMP组;CCK-8检测各组细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS的表达,JC-1染色检测细胞线粒体的膜电位变化;Western blot实验检测细胞中PGC-1α的表达与p-Drp1^Ser637/Drp...     

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的 探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法 运用血清药理学方法,体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过氯化钴（CoCl₂）刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型,将细胞随机分为空白组、CoCl₂模型组（200 mmol·L^-1）、鳖甲煎丸低（0.55 g·kg^-1）、中（1.1 g·kg^-1）、高（2.2 g·kg^-1）和扶正祛瘀胶囊组（0.56 g·kg^-1扶正祛瘀胶囊）。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果 与空白组比较,CoCl₂刺激24 h后,RAW264.7细胞增殖受抑制明显（P<0.05）;与模型组比较,用相应含药血清处理24 h后,各用药组能促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）。与空白组比较,模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高（P<0.05）;与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平（P<0.05）。与空白组比较,模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显升高（P<0.05）,M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低（P<0.05）,CD163、IL-10蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组比较,模型组NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低（P<0.05）。与空白组比较,模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达;与模型组比较,鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论 鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化,减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤,从而延缓肝纤维化进展,其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。