基于UPLC-Q-TOF/MS和模式识别技术阐释樟帮特色黄连水炒吴茱萸的炮制科学内涵

目的 分析黄连水炒吴茱萸炮制前后的化学成分变化，为深入阐明该饮片的炮制机制提供科学依据。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF/MS），Titank C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）进行梯度洗脱（正离子模式：0~0.01 min，5%B；0.01~20 min，5%~35%B；20~25 min，35%~45%B；25~50 min，45%~95%B；50~52 min，95%B；52~52.1 min，95%~5%B；52.1~55 min，5%B。负离子模式：0~0.01 min，5%B；0.01~25 min，5%~30%B；25~40 min，30%~55%B；40~45 min，55%~95%B；45~47 min，95%B；47~47.1 min，95%~5%B），柱温40 ℃，流速0.25 mL·min^-1；电喷雾离子源（ESI），分别在正、负离子模式下扫描，扫描范围均为m/z 50~1 250。采用对照品比对、数据库匹配和文献参照对黄连水炒吴茱萸炮制前后化学成分进行鉴定，并通过MarkerView? 1.2.1软件对所得数据归一化处理，应用SIMCA-P 14.1软件对生品和炮制品的MS数据进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA），筛选炮制前后差异性成分。结果 共鉴定出50种化合物，其中黄连水炒吴茱萸48种、生品44种，炮制后新增了丹参素、降氧化北美黄连次碱、氧化小檗碱、原阿片碱、13-methylberberrubine、canadine共6种化合物，（S）-7-hydroxysecorutaecarpine、wuchuyuamide Ⅱ在炮制后未被检出，酚酸类和黄酮类成分在炮制后总体含量明显下降，柠檬苦素类成分含量总体有所上升，生物碱类成分含量总体下降不明显。PCA及OPLS-DA结果表明吴茱萸炮制前后化学成分的组成和含量存在明显差异，共筛选得到槲皮素、二氢吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等12个炮制差异性成分。结论 黄连水炒吴茱萸中主要含有酚酸、黄酮、柠檬苦素及生物碱类成分，其炮制前后化学成分的组成和含量均发生了一定变化，炮制辅料的加入和热水浸泡是造成这一差异的主要原因，可为该樟帮特色炮制品种的炮制机制阐释提供实验依据。     

基于HS-GC-MS考察苍术米泔水漂制前后挥发性成分的变化

目的 通过比较苍术经米泔水漂制前后的挥发性成分组成与含量变化，考察米泔水炮制对苍术挥发性成分的影响。方法 采用顶空气相色谱-质谱法（HS-GC-MS）检测北苍术、茅苍术及二者米泔水制品的挥发性成分，色谱条件采用程序升温（起始柱温50 ℃，维持2 min；以10 ℃·min^-1升温至120 ℃，以2.5 ℃·min^-1升温至170 ℃，以10 ℃·min^-1升温至240 ℃，维持3 min），进样口温度280 ℃，分流比为10∶1，溶剂延迟时间3 min；质谱条件为电子轰击离子源（EI），离子源温度230 ℃，扫描范围m/z 20~650，采用峰面积归一化法测定各成分的相对质量分数。运用SIMCA 14.1对所得样品数据进行主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA），通过变量重要性投影（VIP）值>1的原则筛选北苍术、茅苍术与其炮制品的差异性成分。结果 共鉴定出60种化合物，其中北苍术40种、制北苍术38种、茅苍术46种、制茅苍术47种。PCA及OPLS-DA均显示，4种苍术样品各自聚为一类，表明2种苍术经米泔水炮制后挥发性成分均发生明显变化，且北苍术和茅苍术的挥发性成分差异明显。2种苍术的生品与其炮制品比较，化合物组成基本不变，但含量有明显变化，差异性成分主要聚集在单萜类及倍半萜类化合物，且单萜类化合物含量多呈下降趋势。结论 北苍术、茅苍术经米泔水炮制后挥发性成分的含量发生了明显变化，蒎烯、3-蒈烯、4-异丙基甲苯、罗勒烯、萜品油烯、苍术酮、乙酸、糠醛可作为炮制前后的差异性标志物。     

北苍术米泔水炮制前后化学成分变化及其对脾虚泄泻大鼠肠道真菌菌群的影响

目的 探究北苍术Atractylodes chinensis米泔水炮制前后成分变化及其对大黄所致脾虚泄泻模型大鼠肠道真菌菌群的影响。方法 采用气相色谱串联四极杆质谱仪联用技术（GC-MS）和HPLC法对北苍术生品及其米泔水炮制品化学成分进行对比分析,利用ITS高通量测序技术,探究其对大黄所致脾虚泄泻模型大鼠肠道真菌群落变化的影响。结果 GC-MS和HPLC结果显示,炮制前后化学成分类型没有改变,而成分含量多有变化,其中挥发油类（茅术醇、β-桉叶醇、α-红药没醇、苍术酮）炮制后含量显著降低（P＜0.05）,多数酯类成分炮制后含量增加,可能与北苍术“炮制减燥”有关。高通量测序结果显示,属水平上,生北苍术组真菌群落结构与模型组相似,而米泔水制北苍术组更接近于空白组,说明米泔水制北苍术能够调节大黄所致的脾虚型腹泻,对于肠道真菌菌群的调控能力优于生北苍术。Pearson相关性分析表明,部分真菌菌群与活性成分含量相关,如线黑粉酵母属Filobasidium sp.、链格孢属Alternaria sp.真菌与米泔水制北苍术中白术内酯II含量显著正相关（P＜0.05）,与苍术酮含量呈显著负相关（P＜0.05）。结论 北苍术米泔水炮制前后化学成分含量存在差异,其中茅术醇、β-桉叶醇、苍术酮与北苍术炮制减燥及治疗脾虚泄泻疾病有密切关系,米泔水制北苍术对模型大鼠肠道真菌调控能力优于生北苍术,该研究结果可为扩大米泔水制苍术临床应用提供理论参考。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析不同变种来源葛花的化学成分差异性

目的 比较野葛花、粉葛花及葛麻姆花3个不同变种来源葛花的化学成分差异。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS），以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~20 min，10%~30%B；20~30 min，30%~55%B；30~35 min，55%~95%B；35~37 min，95%B；37~40 min，95%~10%B），流速0.25 mL·min^-1；运用电喷雾离子源（ESI），在正、负离子模式下分别进行扫描并采集MS数据，扫描范围m/z 50~1 500。结合文献信息及化学成分数据库对葛花化学成分进行鉴定，并通过MarkerView^TM 1.2.1软件对所得数据归一化处理，应用SICMA-P 14.1软件对3个变种来源葛花的MS数据进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA），筛选出不同变种来源葛花的显著差异性成分。结果 从3个不同变种来源的葛花中共鉴定35个化合物，其中异黄酮类成分22种，黄酮类成分6种，皂苷类成分7种；野葛花、粉葛花及葛麻姆花分别包含了32，35，33个。正、负离子模式下筛选得到葛花苷，鸢尾苷，6"-O-木糖鸢尾苷，黄豆黄苷，4''-甲氧基鸢尾黄素-7-葡萄糖苷，6"-O-木糖黄豆黄苷，葛花苷元，槐花皂苷Ⅲ，6"-O-丙二酰基黄豆苷，次葛花苷，鸢尾苷元，芦丁，大豆皂苷BB，牡荆素，鹰嘴豆芽素A，染料木苷，葛花亭，赤豆皂苷Ⅱ共18个差异化合物。结论 该研究首次对葛麻姆花中化学成分进行了较为系统的研究，发现葛麻姆花虽作为混伪品，但鸢尾苷和6"-O-木糖鸢尾苷的含量较高，具有较大的开发潜力。葛花苷、鸢尾苷等功效成分在3个变种来源的葛花之间具有显著差异，将这3个变种均作为葛花应用需谨慎考量。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的麻花秦艽不同部位化学成分分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分析青海不同地区麻花秦艽地上部分与根部的化学成分，完成其主要色谱峰和不同部分差异性成分的鉴定。方法 色谱条件为Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~1 min，1%~13%B；1~5 min，13%~18%B；5~7 min，18%~50%B；7~9.5 min，50%~60%B；9.5~11 min，60%~99%B；11~14 min，99%B；14~15 min，99%~1%B；15~16 min，1%B），流速0.3 mL·min^-1，柱温40 ℃。质谱条件为电喷雾离子源（ESI），负离子全扫描模式采集数据，检测范围m/z 50~1 200。结合对照品信息、文献信息及ChemSpider在线数据库，完成麻花秦艽地上部分化学成分的定性分析；通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）综合分析麻花秦艽地上部分与根部的分组趋势、相关性和差异性化学成分。结果 从麻花秦艽地上部分初步鉴定了24个环烯醚萜类、13个黄酮类、8个三萜类、6个氧杂蒽酮类、5个脂肪酸类、4个糖类、3个酚酸苷类、2个生物碱、2个甾醇类和1个木脂素共68个成分，其中有42个成分为首次在2020年版《中华人民共和国药典》规定的4种秦艽植物中报道；筛选出了8个差异性成分，即蔗糖、麦芽三糖、马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、异牡荆素。结论 麻花秦艽地上部分化学成分种类丰富，具有良好的药用价值潜力；其地上部分与根部的化学成分存在明显差异，且差异成分主要为活性成分环烯醚萜类，可为探究秦艽不同部分的药效差异提供依据。     

瓜拉纳化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析

目的 对瓜拉纳中的化学成分进行系统分析,为该植物的深入研究及开发利用提供依据。方法 参照国家标准及相关文献对瓜拉纳中所含的粗蛋白、粗脂肪、粗多糖、粗纤维等大分子成分进行含量测定,应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）对瓜拉纳的化学成分进行系统定性分析,采用ACQUITY UPLC-HSS-T3色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0~5 min,2%~10%B;5~6 min,10%~20%B;6~9 min,20%~30%B;9~9.5 min,30%~35%B;9.5~10.5 min,35%~45%B;10.5~13 min,45%~55%B;13~15 min,55%~80%B;15~19 min,80%~98%B;19~20 min,98%B;20~20.3 min,98%~2%B;20.3~23 min,2%B）,电喷雾离子源（ESI）,正、负离子模式进行检测,扫描范围m/z 50~1 500,根据精确相对分子质量及碎片信息,结合数据库匹配和对照品比对进行结构鉴定。结果 瓜拉纳中粗蛋白、粗脂肪、粗多糖及粗纤维质量分数分别为（0.63±0.03）%,（2.73±0.09）%,（3.23±0.12）%,（8.89±0.59）%。通过UPLC-Q-TOF-MS分析从瓜拉纳中共鉴定出42个成分,包括3个甲基黄嘌呤类成分,2个核苷类成分,1个氨基酸类成分,3个有机酸,33个黄酮类成分,其中3个化合物（L-色氨酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、大豆苷元）是从瓜拉纳中首次发现。结论 瓜拉纳中的营养成分含量丰富,作为功能食品来开发具有良好潜力。UPLC-Q-TOF-MS技术为鉴别瓜拉纳药材中化学成分提供简便、快速、准确的方法,其主要化学成分为甲基黄嘌呤类、原花青素类成分,可为瓜拉纳药材的质量评价及药效物质基础研究提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF-MS的泽泻盐制前后萜类化学成分分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）对泽泻盐制前后化学成分进行辨识,考察泽泻盐制前后萜类成分的变化。方法 采用UPLC-Q-TOF-MS检测,流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~0.01 min,20%B;0.01~5 min,20%~40%B;5~40 min,40%~95%B;40~42 min,95%B;42~42.1 min,95%~20%B;42.1~45 min,20%B）,电喷雾离子源（ESI）,正离子模式采集,扫描范围m/z 100~1 250,离子源温度500 ℃。利用PeakView 1.2.0.3软件进行数据分析,根据一级质谱精确m/z和二级质谱碎片信息,结合对照品和文献数据进行成分鉴定;质谱数据经MarkerView 1.2.1归一化处理后进行主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）,筛选得到差异性成分,根据相对峰面积分析差异性成分含量变化。结果 在正离子模式下共鉴定出了30个化学成分,其中原萜烷型三萜28个,倍半萜2个。PCA和OPLS-DA结果显示,泽泻盐制前后成分差异明显,共筛选得到23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇I、泽泻醇B、泽泻醇C、泽泻醇G、泽泻醇A、11-deoxy-alisol B 23-acetate、11-deoxy-alisol B、11-deoxy-alisol C和环氧泽泻烯10个差异性成分,其中泽泻醇G和泽泻醇A的含量盐制后明显下降。结论 利用UPLC-Q-TOF-MS可全面鉴定泽泻生品和盐制品中的化学成分。泽泻盐制前后部分成分含量存在差异,取代基团的不同是造成这一差异的主要原因,可为泽泻盐制前后功效变化的物质基础确定提供依据。     

基于序贯代谢方法的痛风定胶囊体内代谢分析

目的 采用序贯代谢方法，结合超高效液相色谱-高分辨质谱法（UPLC-HRMS），鉴定痛风定胶囊在大鼠体内的原型成分和代谢物。方法 采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~1 min，5%B；1~2.4 min，5%~10%B；2.4~13.5 min，10%~32%B；13.5~18.5 min，32%~90%B；18.5~19 min，90%~5%B；19~21 min，5%B），流速0.3 mL·min^-1，进样量2 μL，柱温35 ℃，运用加热电喷雾离子源（HESI），扫描范围m/z 100~1 500，正、负离子模式检测。通过比较给药血浆和空白血浆的差异，对由肠道灌流并行采血制备得到的肠代谢、肝代谢血浆样品及灌胃给药方法制备得到的综合代谢血浆样品中的原型入血成分和代谢产物进行鉴定。结果 从肠代谢、肝代谢及综合代谢样品中分别检测到了76、53、74个化学成分，从上述不同血浆样品中共鉴定出100个化学成分，包括64种原型入血成分（34个生物碱类、12个萜类、9个有机酸类、6个黄酮类与3个其他类成分）与36种代谢产物，代谢产物生成过程中涉及的代谢反应主要有葡萄糖醛酸化、去葡萄糖基化、脱氢化与羟基化。结论 痛风定胶囊中化学成分在肠道与肝脏处会发生一系列代谢反应，生成大量代谢产物，其中生物碱类可能是其主要成分群，可为该制剂体内药效物质基础的系统阐释奠定基础。     

基于序贯代谢的五味子入血及脑脊液成分分析

目的 基于序贯代谢方法，结合液质联用技术鉴定五味子入血和入脑脊液原型成分和代谢产物。方法 雄性SD大鼠在灌胃给药和在体肠灌流给药后收集其综合代谢、肠代谢、肝代谢血浆和脑脊液样品，利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC Q-Exactive Orbitrap MS）分析并比对五味子提取液、空白血浆、含药血浆、空白脑脊液、含药脑脊液样品谱图差异，采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~7 min，95%B；7~12 min，95%~35%B；12~17 min，35%~15%B；17~20 min，15%~12%B；20~22 min，12%~5%B；22~23 min，5%B；23~25 min，5%~95%B；25~28 min，95%B），加热电喷雾离子化源（HESI），正、负离子检测模式，扫描范围m/z 100~1 500。根据化合物的保留时间、特征碎片、分子式及对照品信息鉴定五味子入血及脑脊液的原型成分和代谢产物。结果 从五味子提取物中共鉴定出42个化学成分，包含木脂素、黄酮、氨基酸、鞣质等化合物，其中以木脂素类化合物为主。从不同部位获取的血浆样品中共鉴定出27种原型入血成分与14种代谢产物；在脑脊液中共鉴定出15种原型成分和9种代谢产物；代谢产物生成过程中涉及的代谢反应主要有去甲基化、甲基化、去甲氧基化和羟基化等。结论 通过对五味子在大鼠体内的原型成分与代谢产物的系统鉴定，为后续更好地挖掘五味子中治疗中枢神经系统疾病的药效物质基础提供了数据支撑。     

基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析

目的 采用血清药物化学方法研究青盐方的入血成分，并考察入血成分与雌激素受体（ER）的结合能，确认青盐方在大鼠体内的药效物质基础。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）比较青盐方70%乙醇提取物、各单味药70%乙醇提取物、空白血清、青盐方70%乙醇提取物给药后血清的指纹图谱差异，根据质谱的保留时间、相对分子质量，以及一级、二级离子碎片，判定青盐方在大鼠体内的入血成分，流动相选择0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~5 min，2%~20%B；5~10 min，20%~50%B；10~15 min，50%~80%B；15~25 min，80%~95%B；25~26 min，95%~2%B；26~30 min，2%B），流速0.3 mL·min^-1，进样量5 μL，电喷雾离子源，检测范围m/z 150~2 000，正、负离子扫描模式。采用分子对接技术表征入血成分与ERα、ERβ的结合能，进一步确认青盐方药效物质基础。结果 口服青盐方后，从血清中检测出30种入血成分，其中9种为原型成分，21种为代谢产物。经鉴定9种原型成分分别为水晶兰苷、车叶草苷、麦角甾苷、松果菊苷、β-蜕皮甾酮、尿囊素、去乙酰基车叶草苷酸、甜菜碱、咖啡酸，21种代谢产物包括有机酸、氨基酸、胆碱类等。上述9种原型成分与ERα的结合能分别为-6.7、-8.9、-6.0、-5.7、-5.3、-4.9、-7.3、-3.3、-6.3 kcal·mol^-1（1 kcal≈4 184 J），与ERβ的结合能分别为-6.6、-7.2、-7.7、8.0、-7.4、-5.5、-6.9、-3.6、-6.4 kcal·mol^-1。结论 水晶兰苷等9种入血的原型成分是青盐方在体内发挥雌激素样作用的活性成分，可为该方质量标准的制定及后续研发提供实验依据。