消癌解毒方含药血清对人结肠癌细胞增殖及糖酵解过程的影响

目的:探讨不同浓度消癌解毒方含药血清对人结肠癌细胞增殖及糖酵解过程的影响及其作用机制。方法:8只新西兰兔随机分为含药血清组(消癌解毒方40 g·kg·~(-1)d~(-1))和空白血清组(等体积生理盐水),每组兔子连续灌胃3 d,制备消癌解毒方含药血清和空白血清。5%,10%,15%消癌解毒方含药血清处理人结肠癌HT-29与HCT-116细胞后,采用噻唑蓝比色法测定其对HT-29与HCT-116细胞生长的抑制作用,乳酸试剂盒检测HT-29与HCT-116细胞的乳酸生成量,葡萄糖试剂盒检测HT-29与HCT-116细胞的葡萄糖生成量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测己糖激酶(HK2),丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1),乳酸脱氢酶(LDHA)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:消癌解毒方含药血清能够抑制HT-29与HCT-116细胞增殖能力,15%消癌解毒方含药血清对人结肠癌HT-29与HCT-116细胞的抑制率分别为42.7%,50.2%。Western blot结果显示,与空白组比较,消癌解毒方含药血清可降低HK2,PDK1,LDHA,HIF-1α蛋白相对表达量(P0.05),且随浓度的增加表达降低。乳酸及葡萄糖试剂盒检测结果显示,与空白组比较,消癌解毒方含药血清可降低HT-29与HCT-116细胞的乳酸及葡萄糖水平(P0.05),且随浓度的增加乳酸及葡萄糖水平降低。结论:消癌解毒方含药血清可以通过抑制人结肠癌HT-29与HCT-116细胞糖酵解的过程从而抑制肿瘤细胞的增殖,其抑制糖酵解过程的机制可能与降低HIF-1α表达,进而减少糖酵解相关酶HK2,PDK1,LDHA表达有关。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

消癌解毒方体内抑瘤作用机制研究

目的:探讨消癌解毒方体内抗肿瘤作用的可能机制。方法:对荷瘤小鼠(H22肿瘤细胞株)用消癌解毒方煎剂剂量灌胃,观察光镜及电镜下肿瘤组织、细胞的形态,测定基质金属蛋白酶(MMP-2)含量。结果:消癌解毒方中剂量组凋亡细胞数量最大,并且所有消癌解毒方组中凋亡细胞除出现凋亡细胞一般的形态学改变,胞浆中可见大量吞饮空泡;消癌解毒方低剂量组外周血MMP-2水平显著降低(P<0.05),有统计学意义。结论:消癌解毒方对肿瘤抑制作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡,抑制MMP-2活性有关。     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.     

消癌解毒方对移植性肝癌大鼠免疫功能影响研究

目的:观察消癌解毒方对Walker256大鼠T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(natural kill,NK)的影响。方法:建立Walker256大鼠模型,50只雄性SD大鼠分为正常组,模型组,中药低剂量组,中药中剂量组,中药高剂量组,每组10只。造模后中药各剂量组进行中药干预,正常组,模型组未进行药物干预。在造模后第10天用流式细胞仪分别检测各组大鼠胸腺,骨髓,外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性。结果:消癌解毒方干预后,可见低剂量、中剂量组大鼠胸腺指数明显上升,中剂量组大鼠脾指数明显上升,与模型组比较,差异均有显著性(P0.05);中剂量、高剂量组大鼠骨髓、胸腺细胞与模型组相比,G0/G1期比例显著降低(P0.05),S期比例明显升高(P0.05);中剂量组CD4+/CD8+比值明显上升,与模型组相比,差异有显著性(P0.05);各剂量组NK活性明显增高(P0.01)。结论:消癌解毒方对Walker256大鼠胸腺指数、脾指数及骨髓、胸腺细胞周期有一定的调节作用,对淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及NK细胞活性有一定的调节作用。消癌解毒方具有免疫保护作用可能是其抗癌作用机制之一。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。     

消癌解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究

目的:观察消癌解毒方对结直肠癌细胞增殖的影响及并从诱导细胞自噬的角度探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测消癌解毒方对结直肠癌细胞增殖的影响并确定后续的干预时间及浓度;设立空白对照组,消癌解毒方高、中、低剂量给药组;各组给药48h后,Annexin V-PI双染流式细胞仪定量检测消癌解毒方对细胞凋亡的影响;单丹磺酰尸胺...     

消癌解毒方药效活性物质基础概述

消癌解毒方是治疗癌症的临床有效复方,它是在国医大师周仲瑛教授提出的癌毒学说指导下形成的。当前对于该方的研究主要围绕全方的药效活性,为了更全面地了解复方的化学组成概况,进一步探讨复方的药效机制,指导分析分离组方的效应物质基础,文章将各组分药的化学成分进行了系统地整理和概述,同时基于复方中不同药对的功效,对组分药的药效活性进行梳理和评价。     

消癌解毒方联合FEC化疗对乳腺癌患者临床疗效的影响

目的:观察消癌解毒方联合氟尿嘧啶+表柔比星+环磷酰胺(5-FU+EPI+CTX,FEC)化疗方案对乳腺癌患者的免疫功能、肿瘤指标、中医证候积分、不良反应发生情况的影响。方法:将60例乳腺癌患者随机分为研究组和对照组,研究组进行FEC(CTX 0. 6 g·m~(-2),d1,EPI 100 mg·m~(-2),d1,5-FU 0. 5 g·m~(-2),d1)方案化疗,同时服用消癌解毒方制剂,连续服用2个周期,对照组单纯进行FEC方案化疗。2个周期后分析并比较两组的免疫功能、肿瘤指标、中医证候评分、不良反应发生情况的差异。结果:治疗前两组免疫指标相当,治疗后研究组免疫指标优于对照组(P 0. 05);治疗前两组患者癌胚抗原(CEA)和糖类抗原153(CA153)水平比较差异无统计学意义,与本组治疗前比较,治疗后两组CEA,CA153水平均明显下降,且研究组下降幅度更为明显(P 0. 05);两组治疗前胸胁不适、潮热盗汗、急躁易怒、口干口苦、睡眠积分比较差异无统计学意义,与本组治疗前比较,治疗后研究组中医证候积分低于对照组(P 0. 05);研究组患者不良反应发生率均低于对照组(P 0. 05)。结论:消癌解毒方联合FEC化疗能提高患者的免疫能力和临床疗效,改善患者的临床症状。     

消癌解毒方抗肿瘤作用的实验研究

目的 观察周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药--消癌解毒方的抗肿瘤作用.方法 采用体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价消癌解毒方对S_(180)移植性肉瘤的抑制作用;以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价消癌解毒方对H_(22)移植性腹水癌的抑制作用.结果 消癌解毒方能明显抑制实体瘤重,并延长荷瘤小鼠存活时间.结论消癌解毒方对S_(180)、H_(22)诱发的移植性肿瘤具有一定的抑制作用.     

清热解毒中药对肠癌细胞株CEA表达的影响

目的:筛选出能明显影响肿瘤标志物CEA表达的清热解毒中药,指导临床应用。方法:用亚细胞毒浓度的药物作用于肠癌细胞一定时间后分别收集细胞培养液上清和细胞,分别采用夹心ELISA法和免疫组化法检测肠癌细胞培养上清CEA的表达。结果:所选取的清热解毒中药均有不同程度的抑制肠癌细胞生长的作用,并且随着中药浓度的递减,抑制率也相应的减低;夹心ELISA法检测培养上清夜CEA的表达在24h时,蚤休及黄连对CEA的浓度有明显的降低作用,有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测CEA的表达显示:与对照组相比,黄连对CEA表达的阳性染色率最低,蛇莓、蚤休阳性染色率相当,夏枯草、连翘阳性染色率最强。结论:清热解毒中药对肠癌细胞株CEA的表达具有一定的抑制作用。     

健脾消癌方对结肠癌肝转移裸鼠模型肿瘤微环境转移相关因子表达的影响

目的 研究健脾消癌方对结肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中趋化因子受体4（CXCR4）、转化生长因子-β（TGF-β）、整合素α_v β₅（ITGα_v β₅）、血清钙结合蛋白A4（S100A4）、血清钙结合蛋白A8（S100A8）、血清钙结合蛋白A9（S100A9）等肿瘤微环境转移相关因子蛋白表达的影响,探讨其抗结肠癌肝转移的可能作用机制。方法 将BALB/c裸鼠随机分为正常组、模型组、健脾消癌方低、中、高剂量组。建立人结肠癌肝转移裸鼠模型。健脾消癌方低、中、高剂量组分别灌胃5.4、10.8、21.6 g·kg^-1药液,模型组及正常组给予等体积蒸馏水灌胃,每天给药1次,连续给药3周。末次给药后24 h脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,并通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织中CXCR4、TGF-β、ITGα_v β₅、S100A4、S100A8、S100A9等肿瘤微环境中转移相关因子蛋白表达情况。结果 模型组、健脾消癌方低、中、高剂量组转移瘤面积占比分别为73%、72%、55%、42%。健脾消癌方高剂量组明显低于模型组（P<0.05）。与模型组比较,健脾消癌方高、中剂量组CXCR4、TFG-β、ITGα_v β5、S100A8、S100A9表达均明显降低（P<0.05）;健脾消癌方高、中、低剂量组S100A4表达均明显降低（P<0.05）。健脾消癌方低剂量组CXCR4、TFG-β、ITGα_v β5、S100A8、S100A9与模型组比较表达差异无统计学意义。结论 健脾消癌方能抑制结肠癌肝转移,其机制可能与降低CXCR4、TGF-β、ITGα_v β5、S100A4、S100A8、S100A9等肿瘤微环境中转移相关因子的表达相关。     

消癌解毒方干预W256移植瘤大鼠的血浆代谢组学分析

目的:采用代谢组学方法检测W256移植瘤大鼠血浆内源性代谢物异常变化及消癌解毒方对移植瘤大鼠代谢紊乱的调节作用,寻找移植瘤生长可能的生物标志物,探索消癌解毒方代谢性作用机制。方法:采用Wistar大鼠腹腔接种Walker-256瘤株制作腹水瘤模型,移植至大鼠腋下,成移植瘤模型;大鼠分为消癌解毒方低、中、高剂量组和模型组、空白组,收集给药后的第1,6,11天的血浆,采用GC-MS联用仪对血浆中内源性分子进行测定,采用偏最小二乘法判别分析对多变量数据进行分析并建立模型,结合数据库进行代谢物鉴定,进行t检验组间比较,并分析关联代谢通路变化。结果:与空白组相比,模型组大鼠在第11天时,有30个化合物发生了显著变化,给予消癌解毒方后,有10种内源性物质得到了不同程度的转归。结论:血浆中有30种内源性物质与W256肉瘤的生长密切相关,消癌解毒方可使造模后大鼠血浆中异常变化的化合物水平有不同程度的恢复,这10种化合物可能是该复方作用靶点,其发挥药效作用可能与调节相关代谢途径有关。     

中药复方脏毒清体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的:探讨中药复方脏毒清对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW480,用不同质量浓度的脏毒清(0.05,0.10,0.15,0.20,0.25 g·m L-1)进行干预12,24,36,48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。用不同质量浓度脏毒清(0.10,0.15,0.20 g·m L-1)作用SW480细胞24 h后,另设空白组,采用用荧光染色技术和流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬酶-3(Caspase-3),Caspase-9的酶活性,Western blot技术检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示脏毒清对其有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;与空白组比较,脏毒清0.10,0.15,0.20 g·m L-1组能明显诱导SW480细胞凋亡,Caspase-3及Caspase-9酶活性明显升高,促凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bal-2表达明显降低,均具有统计学意义(P0.01)。结论:脏毒清具有促进人结肠癌SW480细胞凋亡的作用,并通过线粒体凋亡途径发挥作用。