基于网络药理学探讨保肺康颗粒对肺纤维化大鼠模型PI3K/Akt信号通路的调节作用

目的 基于网络药理学及动物实验验证的方法探讨保肺康颗粒（保肺康）对治疗肺纤维化的作用靶点及机制。方法 借助相关中药药理学数据库和分析平台筛选保肺康的有效成分及靶点;于各疾病数据库中检索肺间质纤维化疾病相关靶点,提取保肺康与肺纤维化的共同靶点,利用蛋白相互作用数据库（STRING）构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,通过Cytoscape 3.8.0软件对关键靶点进行网络拓扑学分析,建立“保肺康关键活性成分-核心靶基因”网络,对核心靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析以探究保肺康治疗肺纤维化可能的分子机制。以博来霉素气管滴注的方式建立肺间质纤维化大鼠模型,分为正常组、模型组、保肺康组（27.18 g·kg^-1）、醋酸泼尼松组（1.17 mg·kg^-1）,灌胃21 d,对各组肺组织用苏木素-伊红（HE）染色进行形态学观察,运用免疫组化（IHC）对大鼠肺组织内的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（Akt）蛋白进行检测。结果 网络药理学方法筛选出保肺康治疗肺间质纤维化疾病关键基因18个,包括Akt1、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、核蛋白类癌基因（MYC）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）重组蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、表皮生长因子受体（EGFR）、核心结合因子2（RUNX2）等。KEGG富集分析预测保肺康主要是通过PI3K/Akt信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白细胞介素-17（IL-17）信号通路等发挥抗纤维化作用。IHC结果显示,与模型组比较,保肺康组内PI3K、Akt蛋白表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 保肺康在治疗肺纤维化上具有毒性低、多层次、多靶点的特点,其可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响肺纤维化程度,从而达到改善肺功能的作用。     

中医药干预PI3K/Akt信号通路治疗前列腺癌研究进展

前列腺癌（PCa）是男性泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路是一种致癌途径,在多种癌症中负责迁移、增殖和耐药。近年来,随着对PCa发病机制的不断研究,PI3K/Akt信号通路在PCa发展中的关键作用已备受关注。中医药以其多成分、多靶点、多途径的综合调节作用,在治疗PCa方面展现出巨大潜力。该文通过综述中医药干预PI3K/Akt信号通路在治疗PCa中的研究进展,探讨了PI3K/Akt信号通路在PCa中的表达,包括抑制PCa细胞凋亡、促进PC细胞周期运行和侵袭转移、促进肿瘤组织血管形成及介导雄激素受体（AR）等。同时,总结了干预调控该通路的单味中药主要包括白花蛇舌草、南方红豆杉、牛黄、白术等;中药活性成分主要有黄酮类、生物碱类、萜类、多酚类、木脂素类及其他类化合物;中药复方主要包括温肾散结方、健脾利湿化瘀方、益肾通癃汤、芪蓝方、西黄丸及加味参芪地黄汤等。以期为深入理解PCa的发病机制和寻找潜在的治疗靶点提供重要科学依据,并为PCa的临床研究和药物研制提供新的思路。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

目的 探讨小金丹提取物（XJD）对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法 以脂多糖（LPS）、白细胞介素-4（IL-4）刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞增殖活性检测（CCK-8）法检测10~80 mg·L^-1对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-6（IL-6）释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的mRNA表达;采用流式细胞分析法检测CD206表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路关键蛋白的活化。结果 10~80 mg·L^-1 XJD对0.5 mg·L^-1 LPS和20 μg·L^-1 IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。与空白组比较,LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括显著增加NO、IL-6释放（P<0.01）,明显上调M1型基因白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素氧化环化酶-2（COX-2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达（P<0.01）。同LPS诱导组比较,20~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著抑制NO、IL-6的释放（P<0.01）;10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-α mRNA表达（P<0.01）。与空白组比较,IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括CD206⁺巨噬细胞比例显著升高（P<0.01）,显著上调M2型基因精氨酸-1（Arg-1）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA表达（P<0.01）。同IL-4诱导组比较,10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著降低CD206⁺ M2型巨噬细胞比例（P<0.01）;显著下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β₁ mRNA表达（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3-激酶p110（PI3K-p110）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达均显著上调（P<0.01）;同LPS或IL-4诱导组比较,XJD能明显降低PI3K p110蛋白表达和p-Akt水平（P<0.05,P<0.01）。结论 小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化,机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。     

中药单体调控PI3K/Akt信号通路抑制膀胱癌的研究进展

膀胱癌是我国泌尿系发病率最高的恶性肿瘤,西医治疗疗效显著,包括长期、定期的内窥镜检查,膀胱内化疗,免疫治疗和膀胱根治术等,但其高复发率仍困扰着医患双方。在膀胱癌的形成、发展过程伴随着许多经典信号通路的参与,其中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路是重要的调控通路之一。中医药治疗是有效的的补充治疗方法,现代药理研究表明中药及其单体成分在肿瘤治疗中可以减轻患者的不适症状、延长患者生存时间以及提高生活质量。通过检索近10年的文献发现,多种天然药物来源的黄酮类、萜类、多糖、藤黄酸类、联苄类和生物碱类的研究证实了许多单体成分均具有抗膀胱癌活性,中药单体可以通过调控PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移、逆转耐药和自噬等过程发挥着不可或缺的作用。尽管部分中药单体在膀胱癌治疗方面的一些作用靶点及潜在机制已经明确,但这些中药单体的相关研究也仅停留在体外细胞实验及动物体内研究层面,研究者们面临着“中药单体转化于临床应用中”这一巨大挑战。基于国内外目前的研究,笔者归纳总结了近年来中药单体通过调控PI3K/Akt信号通路干预膀胱癌的研究进展,希望为膀胱癌药物治疗研究开拓新的思路,同时也为后续更深入的机制研究提供有益参考。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨哈蟆油对卵泡发育作用的影响

目的 探讨哈蟆油对大鼠卵巢卵泡发育、卵巢磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路及怀胎功能的影响,以及哈蟆油雌激素样作用机制。方法 雌性Wistar大鼠70只,随机分为正常组、戊酸雌二醇+黄体酮组（1 mg·kg^-1+40 mg·kg^-1）,克罗米芬（10 mg·kg^-1）组,哈蟆油高、低剂量（400,200 mg·kg^-1）组,连续灌胃8周。灌胃7周时,所有大鼠测定发情周期。灌胃8周时,每组取4只大鼠进行产仔实验,其余大鼠在测定出发情期当天采血,测定血清雌二醇（E₂）,孕酮（P）,睾酮（T）,促卵泡生成素（FSH）,促黄体生成素（LH）含量,摘取子宫、卵巢,称量重量计算器官指数,一侧卵巢制成病理切片,进行不同发育阶段卵泡及黄体计数,另一侧卵巢进行实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Westen blot）检测PI3K/Akt信号通路mRNA及蛋白变化。雌性昆明种小鼠40只,随机分为正常组、哈蟆油14 d组（400 mg·kg^-1）,哈蟆油28 d组（400 mg·kg^-1）,哈蟆油56 d组（400 mg·kg^-1）。哈蟆油各组小鼠分别在灌胃14,28,56 d后与雄性小鼠合笼饲养,18 d后观察两侧子宫内胎鼠数目及发育不良胎数目。结果 8周灌胃哈蟆油后,大鼠子宫指数明显降低（P<0.05）,血清LH明显降低（P<0.05）,卵巢中黄体数明显减少（P<0.01）,初级卵泡数明显减少（P<0.05）,卵泡闭锁率显著上升（P<0.01）,卵巢皮质层中出现短期内较多黄体或间质腺退化为间质的结构,卵巢PI3K和Akt mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA和人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）mRNA表达水平显著降低（P<0.01）;Akt蛋白磷酸化水平有降低趋势,差异无统计学意义;大鼠产仔数明显减少（P<0.05）。小鼠不同时长灌胃哈蟆油后,受孕率不同程度下降,服用14 d受孕率最低仅30%。灌胃哈蟆油28 d,左右子宫怀胎差值明显增大（P<0.05）。结论 哈蟆油长期灌胃后表现出与长期使用克罗米芬类似的使卵巢过度刺激进而呈现早衰的现象;短期灌胃出现怀孕率下降,一侧卵巢超数排卵,一侧卵巢排卵抑制等现象,对卵泡的影响机制需进一步研究。     

PI3K/Akt信号通路串扰在心肌缺血再灌注损伤中的作用及中医药防治进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是指由于一些原因导致心肌细胞缺血性损伤,然而在恢复血液供应后心肌细胞损伤进一步加重,从而引发再灌注性心律失常、心肌顿抑、微循环障碍和血液无复流等现象,是临床治疗中亟待解决的问题。因此,探索如何改善MIRI具有重要的临床意义。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路被认为是预防MIRI的重要级联信号通路,串扰在氧化应激、钙超载、自噬、炎症、内质网应激和线粒体障碍等多种机制中,并处于核心位点,与MIRI的严重程度密切相关。同时,中医药凭借其多靶点、多通路和毒副作用小的优势以及中医的辨证治疗、整体观念等特点,使其在防治MIRI方面有着独特的优势。大量研究已证实,该通路是众多中药复方、中药单体以及中药提取物常见的作用机制。因此,本文将阐述PI3K/Akt信号通路串扰在MIRI机制中的作用,重点对PI3K/Akt信号通路关键靶标与MIRI的关系进行综述,以便深刻理解其中错综复杂的关系,促进针对PI3K/Akt信号通路的新型药物的研发。最后总结中医药对该通路已有的研究成果,为MIRI的治疗及药物研发提供参考依据。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的 观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测华良姜素（0、5、10、25、50、100、150、300 μmol·L^-1）对HepG2细胞不同时间（24、48、72 h）的增殖抑制作用;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡试剂盒检测华良姜素（0、3、15、75 μmol·L^-1）对HepG2细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响;转录组学分析华良姜素（15 μmol·L^-1）对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证差异基因［TEK、血小板源性生长因子α受体（PDGFRA）、脾酪氨酸激酶（SYK）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽（PIK3CG）、Janus激酶3（JAK3）、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2（MAGI2）］mRNA相对表达。结果 与空白组比较,华良姜素组HepG2细胞的增殖降低（P<0.05,P<0.01）;凋亡率升高（P<0.01）;Bax蛋白表达水平升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2的蛋白表达水平降低（P<0.01）;转录测序得到59 000个受调控的表达基因,受调控显著差异表达基因125个,其中表达上调差异基因47个,表达下调差异基因74个,京都基因和基因组数据库（KEGG）分析显示,加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较,华良姜素组（15 μmol·L^-1）TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA 表达水平降低（P<0.01）。结论 采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖,初步验证其凋亡,可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础,同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路中医药治疗胃癌作用机制的研究进展

磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)及其下游的蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)组成的PI3K/Akt/mTOR信号通路在调控肿瘤细胞的生...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨三七粉对血脂异常的疗效机制

目的：观察中药三七粉治疗血脂异常的有效性和安全性及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的调节作用。方法：选取河南中医药大学第三附属医院2021年5月至2022年6月60例痰瘀互结型血脂异常患者,按照随机、双盲对照原则分为对照组和试验组各30例,对照组给予血脂康胶囊+三七粉安慰剂,试验组给予三七粉+血脂康胶囊安慰剂,连续用药6周。分别于0、3、6周评估临床疗效、中医证候积分及肝肾功能等安全性指标;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测外周血清血管内皮生长因子（VEGF）、激酶插入区受体（KDR）、表皮生长因子（EGF）、表皮生长因子受体（EGFR）表达,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测外周血单个核细胞中KDR、EGFR和PI3K/Akt的mRNA表达。结果：试验组总有效率为83.33%,对照组总有效率为89.66%,两组患者疗效相当,差异无统计学意义,且未见明显不良反应发生。与本组治疗前比较,试验组患者在3、6周时中医证候积分、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）表达均明显下降（P<0....     

青蒿素基于PI3K/Akt信号通路减轻卵清蛋白哮喘大鼠的气道炎症和气道重塑的分析

目的 探究青蒿素通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路减轻哮喘气道炎症和气道重塑的分子作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、青蒿素低、中、高剂量组,每组各10只。建立卵清蛋白（OVA）诱导大鼠哮喘模型,造模成功后,空白组、模型组分别每天给予尾静脉注射1.0 mL·kg^-1生理盐水,青蒿素低、中、高剂量组每天给予尾静脉注射青蒿素（12.5、25、50 mg·kg^-1）,持续7 d。采用氯化乙酰胆碱法测定气道阻力;流式细胞术测定各组肺泡灌洗液中细胞数量、种类变化;苏木素-伊红（HE）染色法测定气道内皮组织形态变化;CytoTox 96法测定细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体、白细胞介素（IL）-1β和IL-10含量表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组肺泡支气管组织磷酸化（p）-PI3K/p-Akt水平。结果 与空白组比较,模型组细胞总数、巨噬细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、淋巴细胞总数、中性粒细胞总数明显提高（P<0.05）;HE染色显示,大鼠气道黏膜水肿明显,炎症细胞大量浸润（P<0.05）;细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;炎性小体NLRP3、IL-1β、IL-10含量明显上升（P<0.05）;p-PI3K/p-Akt明显增高（P<0.05）。与模型组比较,青蒿素低、中、高浓度干预后,细胞总数、巨噬细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、淋巴细胞总数、中性粒细胞总数明显下降（P<0.05）;HE染色显示大鼠气道黏膜水肿程度减轻,炎症细胞浸润面积大幅减少（P<0.05）;细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;炎性小体NLRP3、IL-1β、IL-10含量明显下降（P<0.05）;p-PI3K/p-Akt水平显著降低（P<0.05）。结论 青蒿素可显著抑制NLRP3炎症小体激活并减少细胞焦亡,降低炎性细胞表达,可减轻哮喘大鼠的气道炎症表现及气道重塑,可能与p-PI3K/p-Akt调控有关,可为青蒿素治疗支气管哮喘提供实验依据。     

PI3K/Akt 信号通路与肌少-骨质疏松症发病的相关性研究

目的：基于生物信息学和动物实验探讨PI3K/Akt 信号通路与肌少-骨质疏松症（OS） 发病的相关性研究。方法：检索疾病相关数据库筛选OS 靶点,构建OS 靶点蛋白互作网络并筛选核心靶点,进行GO 和KEGG 富集分析。将6 个月龄SPF 级雌性SD 大鼠随机分为正常组、假手术组、假手术+地米组、去势组、去势+地米组,每组8 只。假手术组、假手术+地米组大鼠行假手术,去势组、去势+地米组大鼠行双侧卵巢切除术。术后1 周,假手术+地米组、去势+地米组大鼠腹腔注射地塞米松,连续2 周。造模后3 个月,各组大鼠分别进行前肢抓力测定、全身和股骨骨密度测定、股骨和腓肠肌PI3K 和Akt 蛋白表达测定。结果：生物信息学共筛选到130 个OS 相关靶点,OS 核心靶点筛选及KEGG 通路富集分析预测PI3K/Akt 信号通路可能参与OS 的发病。动物实验表明,与正常组和假手术组比较,去势+地米组大鼠前肢抓力、全身骨密度和股骨骨密度明显下降,股骨和腓肠肌的PI3K 和Akt 蛋白表达明显降低。结论：PI3K/Akt 信号通路受抑制与OS 的发病密切相关,为OS 药物研发提供干预靶点,为研究新型疾病病理机制提供研究范例。     

基于PTEN/PI3K/Akt信号通路探讨归芍运脾汤防治乳腺增生的机制

目的：基于磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路研究归芍运脾汤防治乳腺增生大鼠的作用机制。方法：将70只SPF级SD大鼠随机分为正常组(n=15)和造模组(n=55),造模组大鼠采用综合造模法(饥饱失常法+夹尾刺激法+苯甲酸雌二醇+黄体酮)复制乳腺增生模型,随后各取5只进行模型验证。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、枸橼酸他莫昔芬组和归芍运脾汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^-1·d^-1蒸馏水灌胃,归芍运脾汤高、中、低剂量组分别给予17.2、8.6、4.3 g·kg^-1·d^-1归芍运脾汤汤剂灌胃,枸橼酸他莫昔芬组给予4 mg·kg^-1·d^-1枸橼酸他莫昔芬灌胃,治疗30 d后观察大鼠一般生存状况,采用超声诊断仪测定乳腺组织厚度,采用旷场实验阳性反应进行行为学评价,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定乳腺组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl...     

益气温阳护卫汤调控PI3K/Akt/mTOR自噬途径治疗支气管哮喘大鼠机制

目的：观察益气温阳护卫汤（YWHD）对哮喘大鼠及支气管上皮细胞（16HBE）自噬和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的调控,探讨YWHD治疗支气管哮喘（BA）的作用机制。方法：48只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组及YWHD低、中、高剂量组,每组8只。大鼠腹腔注射卵清蛋白（OVA）+氢氧化铝混悬液和OVA雾化吸入2周,建立BA动物实验模型,正常组给予等体积生理盐水。动物肺功能仪检测乙酰甲基胆碱（Mch）激发的大鼠支气管最大气道阻力（Max Rrs）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素（IL）-4、IL-13、IL-6、IL-33、IL-25、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白E(IgE)水平;苏木素-伊红（HE）及马松（Masson）染色法观察大鼠肺组织支气管病理变化;免疫荧光法检测支气管自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、Beclin1水平,实验观察YWHD含药血清对IL-13诱导的16HBE细胞自噬作用,通过mRFP-GFP-LC3腺病毒感染示踪细胞自噬水平;蛋白...     

消瘰丸基于PI3K/Akt/mTORC1通路对实验性甲状腺肿大鼠的干预机制

目的：通过观察消瘰丸对实验性甲状腺肿大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(m TORC1)通路的影响,探究其对实验性甲状腺肿大鼠的治疗效果。方法：购买60只5月龄SPF级SD大鼠,雌雄各半,其中10只作为正常组,其余大鼠灌服丙基硫氧嘧啶(PTU)溶液构建结节性甲状腺肿大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、左甲状腺素钠片组、消瘰丸低、中、高剂量组各10只。左甲状腺素钠片组采用15μg·kg^-1的左甲状腺素钠片灌胃,消瘰丸低、中、高剂量组分别采用低剂量10 g·kg^-1、中剂量20 g·kg^-1、高剂量30 g·kg^-1消瘰丸灌胃,正常组、模型组采用等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。干预4周后采用5%苯巴比妥做常规腹腔注射麻醉后处死,显微镜观察大鼠病理组织学、采用罗氏电化学发光免疫分析仪检测血清甲状腺激素水平、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清细胞生长因子、采用高效液相色谱仪检测神经递质、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PI3K/Akt/...     

生慧颗粒通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路改善阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨生慧颗粒对阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆能力的影响。方法 将30只6月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、生慧颗粒组（7.02 g/kg）、多奈哌齐组（0.65 mg/kg）,每组10只;C57BL/6J小鼠10只,设为对照组,对照组和模型组均给予等体积生理盐水,每日1次,连续给药4周。采用Morris水迷宫检测学习记忆能力,HE染色观察海马CA1区病理形态变化,免疫组化检测海马CA1区Aβ1-42和P-Tau416的表达水平,Western Blot检测海马区PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其磷酸化蛋白和Beclin 1、p62、LC3蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠平台潜伏期、游泳总路程增加（P<0.01）,穿越平台次数和目标象限停留时间减少（P<0.01）;海马CA1区细胞数量减少、排列疏松,细胞层次减少;Aβ1-42和P-Tau416蛋白表达增多（P<0.01）;PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-m...     

血管软化丸调控PI3K/Akt/mTOR通路影响细胞自噬及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的通过观察血管软化丸对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法动物实验,观察各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,观察血管软化丸对小鼠主动脉组织Akt、mTOR mRNA和蛋白质表达。体外实验,观察血管软化丸含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-siRNA对小鼠RAW264.7巨噬细胞的影响,观察巨噬细胞自噬体的变化,观察含药血清对巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞Akt、mTOR、微管相关蛋白LC3-II及自噬相关蛋白Beclin 1的表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞分泌炎症因子水平的影响。结果动物实验显示:血管软化丸组动脉粥样硬化病变程度明显较轻。与对照组比较,血管软化丸组小鼠主动脉组织Akt和mTOR表达水平明显较低(均P<0.05)。体外实验发现,与对照组相比,血管软化丸含药血清组和各抑制剂组透射电镜下观察到自噬体数量明显较大(均P<0.05),巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II和Beclin1表达明显升高(均P<0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显较低(均P<0.05),巨噬细胞分泌的炎症因子IL-10水平明显高低(P<0.05),而炎症因子IFN-γ水平明显较高(P<0.05)。结论血管软化丸通过抑制炎症反应治疗动脉粥样硬化的分子机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节巨噬细胞自噬,减少斑块巨噬细胞浸润有关。     

基于网络药理学探讨黄芪-葛根药对对T2DM模型大鼠PI3K/Akt/FoxO1信号通路的调节作用

目的 基于网络药理学及实验验证探讨黄芪-葛根（芪葛）药对治疗2型糖尿病（T2DM）的作用机制。方法 借助中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）平台筛选黄芪、葛根的有效成分及靶点;于各疾病数据库中检索T2DM的相关靶点,提取药物与疾病的共同靶点,利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析并构建PPI网络图,并利用Cytoscape 3.7.1软件对关键靶点进行网络拓扑学分析。再利用DAVID在线工具对核心靶点进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析以探究其可能的分子机制。以高脂饲料喂养同链脲佐菌素尾静脉注射联合的方式建立糖尿病大鼠模型,分为正常组、模型组、二甲双胍组、芪葛药对高、中、低剂量组,灌胃4周后检测各组大鼠血清空腹血糖,空腹胰岛素（FINS）,天冬氨酸氨基转移酶（AST）,丙氨酸氨基转移酶（ALT）,甘油三酯（TG）,总胆固醇（TC）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,糖原,白细胞介素（IL）-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α水平,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝脏组织中胰岛素受体底物（IRS）-2,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,叉头框蛋白O1（FoxO1）蛋白的表达。结果 网络药理学方法筛选出芪葛药对治疗T2DM核心靶点131个,Akt1,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）1,TNF-α,IL-6等较为关键;KEGG富集分析预测该药对主要通过PI3K/Akt信号通路,TNF信号通路,FoxO信号通路等发挥降糖作用。与模型组比较,芪葛药对高、中剂量组空腹血糖及FINS水平均降低,糖原水平显著升高（P<0.05,P<0.01）;芪葛药对高、中、低剂量组AST,ALT,TG,LDL-C显著降低（P<0.05,P<0.01）;芪葛药对高、低剂量组TC水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较,芪葛药对高、中剂量组IL-6,TNF-α水平显著降低（P<0.05,P<0.01）;芪葛药对高剂量组IRS-2,Akt,p-Akt,PI3K,p-PI3K蛋白表达升高,FoxO1蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 芪葛药对在治疗T2DM上具有多成分-多靶点-多途径的特点,可能通过IL-6,TNF-α等靶点调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路影响胰岛素抵抗、糖原合成、糖异生、葡萄糖转运、炎症及免疫反应等过程对糖尿病进行治疗。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨金骨莲提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的:探讨金骨莲提取物(JGL)对炎症的抑制作用及其机制.方法:实验分为空白组(10％胎牛血清),脂多糖(LPS)模型组(0.5 mg·L-1),JGL给药组(10,20,40,60,80,120,160,200,250,300 mg·L-1),JGL给药组同时给予LPS刺激(0.5 mg·L-1),培养24 h进行后...