HIV-1感染者血浆丙酮酸对CD8+ T细胞功能的影响及临床意义

目的?探讨HIV-1感染者血浆丙酮酸对CD8+ T细胞功能的影响与疾病进展的关系。方法?入组11例健康对照（healthy controls, HCs）与55例接受长期抗逆转录病毒治疗的HIV-1感染者。通过液相色谱质谱联用法检测HCs与HIV-1感染者血浆丙酮酸水平，比较丙酮酸不同浓度组在HIV-1病毒库数量、CD8+ T细胞亚群比例、CD8+ T细胞功能间的差异。结果?与HCs（中位数416.71 ng/ml）相比HIV-1感染者（中位数539.16 ng/ml）血浆丙酮酸水平显著升高（P=0.0189）。与血浆低丙酮酸浓度组（低浓度组）相比，高丙酮酸浓度组（高浓度组）HIV-1细胞相关未剪接核糖核酸（HIV-1 cell associated un-spliced ribonucleic acid, HIV-1 CA RNA）、HIV-1 CA RNA/HIV-1 DNA的比值均显著升高；CD8+ T中央记忆T细胞（central memory T cells, TCM）比例显著升高；CD8+ T细胞表达TNF-α、IL-2、IFN-γ、CCL5的比例均降低，而表达CCL4的比例升高。血浆丙酮酸水平与CD8+ T细胞表达TNF-α（r=-0.3584，P=0.0106）、IL-2（r=-0.4975，P=0.0002）、IFN-γ（r=-0.4101，P=0.0031）、CCL5（r=-0.5655，P＜0.0001）的比例呈负相关，与CCL4（r=0.4711，P=0.0014）的比例呈正相关。结论 长期抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆丙酮酸水平升高，且丙酮酸水平与HIV-1病毒库的活跃程度以及CD8+ T细胞功能紊乱相关。     

慢性HIV-1感染者CD8细胞的铁死亡特点及其临床意义北大核心CSCD

目的 分析慢性HIV-1感染者外周血中CD8细胞的铁死亡水平,探讨CD8细胞铁死亡的临床意义。方法 利用流式细胞术检测HIV-1感染者和健康对照者外周血中CD8细胞的脂质过氧化水平,分析不同疾病状态下HIV-1感染者CD8细胞的不同记忆分化亚群及CXCR5+CD8细胞和CXCR3+CD8细胞的铁死亡情况,探究其变化特点及与疾病进展的关系。结果 纳入符合标准的30例未经ART的HIV-1感染者(TN),ART大于两年的免疫应答者(IR)17例,免疫无应答者(INR)9例与13例健康对照(HC),分析发现HC组和IR组相比TN组的CD8细胞的脂质过氧化水平显著升高(中位数TN vs. HC,0.068 85 vs. 0.041 16,P=0.000 8;TN vs. IR,0.068 85 vs. 0.045 06,P=0.001 6)。TN组CD8细胞EM亚群的脂质过氧化水平高于CM亚群、Naive亚群和EMRA亚群(中位数EM vs. CM vs. Na?ve vs.EMRA:0.083 14 vs. 0.061 19 vs. 0.071 27 vs. 0.063 09)。在TN组中,CXCR5+CD8细胞的脂质过氧化水平显著高于CXCR5-CD8细胞(中位数0.082 65 vs. 0.068 75, P<0.000 1),CXCR3+CD8细胞显著低于CXCR3-CD8细胞(中位数0.065 68 vs. 0.072 80,P<0.000 1)。TN组的CD8细胞脂质过氧化水平与CD4细胞计数具有显著负相关性(r=-0.470 1,P=0.008 8)。结论 在未经ART的HIV-1感染者中CD8细胞的铁死亡水平显著升高,其铁死亡水平与CD4细胞计数显著负相关,暗示了CD8细胞的铁死亡与HIV-1感染后的疾病进展程度有关。     

HIV感染者急性期血浆CXCL13水平与疾病进展的关系

目的 探究HIV感染者急性期血浆CXCL13水平与病毒载量及CD4细胞数量间的关系,评估其预测疾病进展及ART后免疫重建的能力。方法 选取中国医科大学附属第一医院急性期HIV感染者54例,对标本CXCL13水平、病毒载量和CD4细胞数量进行检测。结果 以set-point高低分组,set-point高组（lgVL≥3.5拷贝/mL）CXCL13水平明显高于set-point低组（lgVL<3.5拷贝/mL,P=0.013 5）,以感染一年的CD4细胞数量高低分组,CD4细胞高组（≥500个/μL）CXCL13水平明显低于CD4细胞低组（<500个/μL,P=0.005 7）,以ART一年的CD4细胞数量高低分组,CD4细胞高组（≥500个/μL）CXCL13水平明显低于CD4细胞低组（<500个/μL,P=0.025 7）,Kaplan-Meier生存分析显示急性期血浆CXCL13水平高的HIV感染者,其疾病进展更快,ART后免疫恢复更差（P=0.035 1;P=0.000 5）。结论 急性期血浆CXCL13水平可以预测HIV感染的疾病进展及ART后的免疫恢复。     

HIV-1急性期感染者肠道归巢CD4~+T淋巴细胞的变化特点

目的分析Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)急性期感染者肠道归巢CD4~+T淋巴细胞(简称CD4细胞)的变化特点及在HIV-1致病机制中的作用。方法共纳入26例HIV-1急性期感染者、31例HIV-1慢性期感染者和20例健康对照者。采用流式细胞仪检测三组样本的肠道归巢CD4细胞的比例和数量,并分析HIV-1急性期感染者肠道归巢CD4细胞与CD4细胞之间的相关性。结果与健康对照者相比,HIV-1急性期感染者肠道归巢CD4细胞的比例(平均值13.5%vs 11.0%,P0.05)和数量(平均值88.1vs 61.9,P0.01)均显著减少。HIV-1慢性期感染者肠道归巢CD4细胞的比例(平均值11.0%vs 8.1%,P0.01)和数量(平均值61.9vs 11.9,P0.000 1)均显著低于HIV-1急性期感染者。HIV-1急性期感染者肠道归巢CD4细胞的数量与外周血CD4细胞(r=0.53,P=0.006)和CD4/CD8细胞比例(r=0.51,P=0.009)呈显著正相关,与血浆中HIV-1病毒载量(r=-0.70,P=0.000 6)和机体T细胞免疫活化水平(r=-0.57,P=0.003)呈显著负相关。结论肠道归巢CD4细胞的丢失可能在HIV-1急性期感染的致病机制中起作用。     

HIV-1感染者CD73~+CD8~+ T细胞减少与T细胞异常活化的相关性研究

目的探讨HIV-1感染者外周血CD8~+T细胞上CD73的表达特点及其与T细胞异常活化和疾病进展的关系。方法研究入选65例HIV-1感染者和27例健康对照。通过流式细胞术检测研究对象外周血CD73~+CD8~+T细胞的频率和绝对计数,并将患者CD73~+CD8~+T细胞绝对计数和频率与其CD4~+T细胞计数、HIV-1载量以及CD38~+CD8~+T细胞频率进行相关性分析。结果与健康对照相比,HIV-1感染者外周血CD73~+CD8~+T细胞绝对计数和频率均明显降低(P均0.05);HIV-1感染者外周血CD73~+CD8~+T细胞绝对计数和频率与CD4~+T细胞计数呈正相关(r=0.555,P=0.001;r=0.342,P=0.005),与CD38~+CD8~+T细胞频率呈负相关(r=-0.384,P=0.002;r=-0.387,P=0.001);HIV-1感染者CD73~+CD8~+T细胞的绝对计数与HIV-1载量呈弱负相关(r=-0.261,P=0.035)。结论 HIV-1感染者外周血CD73~+CD8~+T细胞的减少不但与患者T细胞的活化程度呈显著负相关,而且与AIDS疾病进展相关。     

长期卧床高龄患者医院内感染前后血浆白蛋白水平及细胞免疫功能的变化

目的探讨长期卧床高龄患者医院内感染前后血浆白蛋白（ALB）水平及细胞免疫功能的变化及关系。方法选择2009年1月至2012年12月在广州军区广州总医院住院的长期卧床且住院期间发生院内感染的高龄患者共78例,按感染前、感染持续≥5d、感染持续≥10d以及感染进一步发展成严重脓毒症或脓毒性休克4个时期分为B组（n＝78）、C组（n＝52）、D组（n＝33）、E组（n＝25）;随机选择同期住院非长期卧床、无感染的高龄患者作为对照组（A组, n＝40）。分别检测不同时期患者血浆ALB水平、细胞免疫功能[包括外周血单核细胞表面人白细胞抗原-DR（HLA-DR）及T细胞亚群];统计处理时进一步将感染前患者（B组）按血浆ALB水平分为ALB正常组（B1组,n＝16）和ALB偏低组（B2组,n＝62）。结果与A组相比,B组血浆ALB显著降低（P＝0.000）;与A组及B组相比,C、D、E三组血浆ALB均显著降低（P＝0.000）。与A组相比,B1组细胞免疫功能差异无统计学意义（P＞0.05）,B2组HLA-DR的表达、CD3＋T细胞绝对值以及CD4/CD8比值均显著降低（P＝0.000）,CD8＋T细胞占CD3＋T细胞的百分数（CD8/CD3）显著升高（P＝0.000）,CD4＋T细胞占CD3＋T细胞的百分数（CD4/CD3）差异无统计学意义（P＞0.05）。与A组及B组相比, C、D、E三组HLA-DR的表达、CD3＋T细胞的绝对值、CD4/CD3以及CD4/CD8比值均显著减低（P＝0.000）,CD8/CD3显著升高（P＝0.000）;而且HLA-DR、CD3＋T细胞绝对值、CD4/CD3、CD8/CD3、CD4/CD8比值与血浆ALB水平的相关系数分别为r1＝0.791,r2＝0.638,r3＝0.534,r4＝-0.575,r5＝0.580（均P＝0.000）。结论长期卧床高龄患者医院内感染前血浆ALB已显著减低,感染后血浆ALB水平进一步下降,血浆ALB水平降低的患者其细胞免疫功能也下降,而且患者感染前后细胞免疫功能的下降与血浆ALB水平的降低密切相关。     

抗病毒治疗HIV-1感染者外周血CD39~+ NK细胞的表达特点

目的通过分析接受长期抗病毒治疗(ART)的1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者体内CD39~+NK细胞的频率和表型特征,探索其与主要临床指标的关系及临床意义。方法本研究入组10例健康对照(HCs)和28例长期接受ART的HIV-1感染者。利用流式细胞术检测NK细胞亚群分布以及NK细胞上CD39的表达情况,分析CD39+NK细胞亚群比例与CD4、CD8~+T淋巴细胞(简称CD4、CD8细胞)计数、以及CD4/CD8细胞比值的相关性。结果 28例长期接受ART的HIV-1感染者中,18例免疫重建成功患者(CRs)和10例免疫重建失败患者(INRs)。相较于HCs和CRs组,INRs组CD56dim亚群比例明显下降(平均值94.75%vs.82.65%,P 0.01;平均值93.20%vs.82.65%,P 0.001);INRs组CD39~+NK细胞的频率明显高于CRs组(平均值21.45%vs.7.79%,P 0.05)和HCs组(平均值21.45%vs.4.115%,P 0.001);长期接受ART的HIV-1感染者CD39+NK细胞占比与其CD4/CD8细胞比值呈负相关(r=-0.392 4,P=0.038 9)。结论免疫重建失败患者外周血中CD39+NK细胞表达频率明显高于免疫重建成功患者,HIV-1慢性感染者外周血CD39~+NK细胞表达增加伴随着CD4/CD8细胞比值的降低。     

IL-21对HIV-1感染者外周血CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞及IL-10表达水平的影响

目的探讨白细胞介素-21(IL-21)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路对1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血中调节B细胞(Breg)和IL-10表达水平的影响及与HIV-1感染疾病进展的关系。方法 CD40L单独或联合IL-21刺激联合抗反转录病毒治疗(cART)前后的HIV感染者及健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)20 min或120 h,用流式细胞术(FCM)检测CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞的比例变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中IL-21及IL-10水平,并用蛋白印迹试验(WB)结合FCM检测B细胞中STAT3的磷酸化水平。结果本次研究纳入的健康对照(HC)、未经治疗的HIV-1感染者及cART48周的HIV-1感染者各15例。相对于健康对照组,HIV-1感染者CD4~+T淋巴细胞数量显著降低(P0.000 1),cART后显著升高(P=0.035 7);HIV-1感染者血浆中病毒载量为(5.025±0.952 6)Lg10拷贝/mL,cART后其病毒载量被有效抑制;HIV-1感染者Breg的比例(P=0.003 6)及IL-10水平(P=0.003)显著上调,且cART前后HIV-1感染者的IL-10水平与IL-21均呈正相关[(r=0.582 3,P=0.022 5),(r=0.578 9,P=0.023 7)];IL-21联合CD40L刺激能诱导HIV-1感染者STAT3磷酸化(P=0.003 9),进而上调其CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞的比例(P=0.034 8)及IL-10的表达水平(P=0.015 3)。结论 HIV-1感染导致CD19~+IgD~+CD38~(hi)B细胞比例及IL-10表达水平均上调,且上调的IL-10水平与IL-21水平呈正相关。IL-21可能通过STAT3信号通路调控HIV-1感染者Breg细胞的分化及IL-10的分泌。     

慢性丙型肝炎患者血清趋化因子CXCL9和CXCL11的检测及其临床意义

目的探讨慢性丙型肝炎患者血清趋化因子CXCL9和CXCL11的变化规律及其临床意义。方法用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清CXCL9和CXCL11的浓度;荧光定量反转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测HCVRNA病毒载量;INNO-LiPA线性探针杂交法检测HCV基因分型;全自动生化分析仪检测肝功能。结果对照组（n=26）和慢性丙型肝炎组（n=48）血清CXCL9的浓度分别为（596．8±238．4）pg／mL和（2457．8±1650．7）pg／mL,血清CXCL11的浓度分别为（106．8±76．95）pg／mL和（307．54-259．4）pg／mL,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。在慢性丙型肝炎组内,CXCL9和CXCL11的水平在不同HCV1b基因型组和2a基因型组之间无显著差异。CXCL9和CXCL11浓度与血清ALT水平无相关性（CXCL9：r=-0．119,P=0．397;CXCL11：r=0．219,P=0．138）,与HCVRNA载量也无相关性（CXCL9：r=0．253,P=0．212;CXCL11：r=0．105,P=0．451）。结论CXCL9和CXCL11可能参与了慢性丙型肝炎感染导致的肝脏免疫损伤过程,ALT和HCVRNA与CXCL9和CXCL11浓度变化无明显相关性。     

CXCR5~+CD8~+ T细胞在HIV感染中的免疫特征及其与疾病进展关系的研究

目的探讨HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞的频率、功能变化及其与病情进展的相关性。方法收集40例HIV感染者和15例健康对照者,采用流式细胞分析术检测其外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率及IFN-γ和IL-10表达,并分析其与血浆HIV载量和外周血CD4~+T细胞计数的相关性。结果与健康对照组相比,HIV感染组外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率上调(P0.05),且与外周血CD4~+T细胞计数呈弱正相关(r=0.349,P=0.027),与血浆HIV载量呈弱负相关(r=-0.377,P=0.040);HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞IFN-γ表达与血浆HIV载量呈负相关(r=-0.514,P=0.002);而CXCR5~+CD8~+T细胞IL-10的表达在HIV感染者中明显上调(P0.05),与外周血CD4~+T细胞计数呈弱负相关(r=-0.317,P=0.046),与血浆HIV载量呈正相关(r=0.670,P=0.002)。结论 HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率功能变化与疾病进展密切相关。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体3DL1(KIR3DL1)阳性NK细胞在慢性HIV-1感染中的作用研究

目的了解杀伤细胞免疫球蛋白样受体3DL1(KIR3DL1)阳性自然杀伤细胞(NK细胞)在急性和慢性1型艾滋病病毒(HIV-1)感染中的作用。方法用流式技术检测急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1受体在NK细胞的表达,CD38、HLA-DR在NK细胞的共表达,及NK细胞分泌CD107a和TNF-α的水平。结果 1)急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞比例与正常对照者相当,但是慢性感染者KIR3DL1+NK细胞数量与病毒载量成反比(r=-0.439,P=0.009)。2)急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞共表达CD38和HLA-DR的比例均显著高于正常对照(P 0.000 1),且其总NK以及KIR3DL1+NK、KIR3DL1-NK细胞共表达CD38和HLA-DR的水平与HIV-1病毒载量均成正比、与CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数及CD4/CD8细胞比值均成反比(P均0.05)。3)急、慢性感染者和正常对照分泌CD107a的KIR3DL1+NK细胞比例均低于其各自的KIR3DL1-NK细胞(P 0.01)。急、慢性感染者KIR3DL1+NK细胞分泌CD107a的水平与正常对照相当,但是KIR3DL1-NK细胞分泌CD107a的水平均小于正常对照者,差异有统计学意义(急性:P=0.016;慢性:P=0.045)。4)急、慢性感染者和正常对照者分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的KIR3DL1-NK细胞比例与KIR3DL1+NK细胞相当,且急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞分泌TNF-α的水平与正常对照相当。慢性HIV-1感染者总NK包括KIR3DL1+和KIR3DL1-细胞分泌TNF-α的水平与病毒载量、CD4细胞计数均呈负相关性(P均0.05)。结论慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK和KIR3DL1-NK细胞均参与抑制病毒复制,可能与其分泌的TNF-α有关。然而CD38和HLA-DR在KIR3DL1+NK和KIR3DL1-NK细胞共表达上调可不利于抑制病毒复制。     

外周血非编码微小RNA与HIV-1感染者病情进展的关系研究

目的 检测HIV-1感染者外周血微小RNA-155(miR-155)水平,并研究其与疾病进展的关系.方法 收集121例接受抗病毒治疗(HAART) HIV-1感染者和43例未接受HAART的感染者,实时荧光定量PCR法测定miR-155表达水平,流式细胞术检测CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞数及其活化细胞的比例(CD4+CD38+％和CD8+CD38+％). 结果 HIV-1感染者特别是治疗无效组外周血单核细胞(PBMC),CD4+和CD8+T细胞中的miR-155水平显著升高(F=11.317,P＜0.01).治疗无效者和未HAART治疗者CD38+的CD4+和CD8+T细胞比例高于正常对照和治疗有效组(F=5.813,P＜0.05),miR-155表达水平与T细胞免疫活化正相关(r=0.581,P=0.037;r=0.732,P=0.001).结论 本研究提示HIV-1感染者外周血miR-155表达水平显著升高,并与T细胞免疫活化正相关,可以作为HIV-1免疫应答的指标之一.     

CD+8 T细胞激活分子CD38、HLA-DR与HIV-1载量的相关性研究

目的研究HIV/AIDS患者CD8^＋ T细胞表达激活分子CD38、HLA-DR水平与血浆病毒载量（VL）的相关性,以及用CD8CD38、CD8HLA-DR比例替代VL检测的可行性.方法用流式细胞术分析103例接受12个月高效抗逆转录病毒治疗（HAART）患者的CD＋8 T细胞表达CD38和HLA-DR水平;用分支DNA扩增技术检测血浆VL.用敏感性、特异性、准确性等参数分析能有效预测VL＜50拷贝/ml、VL＜500拷贝/ml、VL＞1000拷贝/ml和VL＞10 000拷贝/ml时CD8CD38和CD8HLA-DR的检测范围.结果103例艾滋病患者CD38、HLA-DR和VL在12个月治疗中均呈下降趋势;CD38和VL在HAART治疗前及治疗第1、3、6、9、12个月6个检测点的总相关系数为0.483（P＜0.001）、HLA-DR和VL的总相关系数为0.477（P＜0.001）.用CD8CD38和CD8HLA-DR的水平预测VL值有显著诊断价值：当CD38＜68.5%和＜72.5%时预测VL＜50拷贝/ml和＜500拷贝/ml有较高的灵敏度和特异性;当HLA-DR在＞39.5%和＞46.5%时预测VL＞1000拷贝/ml和＞10 000拷贝/ml有较高的灵敏度和特异性.结论在条件匮乏的艾滋病高发区,可以用CD8CD38和CD8HLA-DR激活亚群的结果来预测血浆VL,作为监测HIV疾病进展和评价抗病毒疗效的参考.     

人类免疫缺陷病毒感染者及艾滋病患者CD8+ CD38+ CD8+ HLA-DR+比IV载量的相关性研究

目的 研究人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者和获得性免疫缺陷综合征(AIDS,艾滋病)患者CD8+ T细胞激活分子CD38、人类白细胞Ⅱ类抗原(HLA-DR)与血浆HIV载量的相关性,分析用CD8+ CD38+、CD8+ HLA-DR+的比例替代HIV载量的可行性.方法 采集1998-2006年期间在北京协和医院初诊的HIV感染者或AIDS患者236例和56名同期健康献血员的抗凝静脉血,用流式细胞术分析CD8+ T细胞分别表达CD38和HLA-DR的比例,用分支DNA技术(bDNA)检测血浆病毒载量(VL).用受试者工作特征曲线(ROC)分别预测VL＞1×103拷贝/mL、＞1×104拷贝/mL和＞1×105拷贝/mL时CD8+ CD38+、CD8+ HLA-DR+比例的临界值范围.结果 236例患者的CD4+ T细胞计数138(16,262)×106/L,显著低于对照组(P＜0.01);CD8+ T细胞计数618(353,879),显著高于对照组(P＜0.05);CD8+ CD38+、CD8+ HLA-DR+的比例分别为85.4%(72.5%,92.2%)和40.3%(17.5%,59.7%),显著高于对照组(P＜0.01),与HIV载量的相关性分别为0.429(P＜0.01)和0.282(P＜0.01).用CD8+ CD38+＞80.4%预测VL＞1×103拷贝/mL的敏感度和特异度为80.6%和75.0%;用CD8+ HLA-DR+预测VL＞1×105拷贝/mL的敏感度和特异度为78.7%和81.4%.结论 对HIV感染或AIDS初诊的患者可以尝试用CD38和HLA-DR激活亚群来预测血浆HIV载量,这种替代检测方法具有一定的可行性.     

CD1d~(hi)CD5~+CD19~+B细胞在HIV-1感染者外周血中的表达

目的研究艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血中调节性B细胞(Breg)与T淋巴细胞数量、病毒载量及白介素-10(IL-10)的表达水平,分析其相关性并探讨Breg在HIV发病机制中的作用。方法选择30例未经抗病毒治疗的HIV-1感染者,分离外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测CD1dhi CD5+CD19+B细胞的比例、CD+4T淋巴细胞(简称CD4细胞)数量、CD+8T淋巴细胞(简称CD8细胞)数量,用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定其PBMC培养液上清中IL-10的表达水平,经反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测病毒载量,与同期选择的健康对照组比较。结果与健康对照组相比,HIV-1感染者的CD1dhi CD5+CD19+B细胞的比例均明显升高(P0.0001),其培养液上清中IL-10的表达水平也显著升高(P=0.0005)。另外,HIV-1感染者PBMC中的CD1dhi CD5+CD19+B细胞的比例与CD4细胞数量(r=-0.6084,P=0.0004)及CD4细胞/CD8细胞的比值(r=-0.8715,P0.0001)均呈显著负相关性,与血浆中病毒载量的水平(r=0.6825,P0.0001)及IL-10的水平均呈正相关性(r=0.7656,P0.0001),而与CD8细胞数量未见相关性(r=0.1183,P=0.5334)。结论CD1dhi CD5+CD19+B细胞比例与其相关细胞因子IL-10表达水平的上调可能参与HIV的发病机制。     

IL-6对肝细胞癌患者CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8~+T淋巴细胞中的表达,评估IL-6对HCC患者CD8~+T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。方法纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组),同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组),采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,分选CD8~+T淋巴细胞,ELISA法检测血浆IL-6水平,流式细胞术检测PD-1在CD8~+T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8~+T淋巴细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平,实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量,Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高~([(99.67±20.92) pg/m L vs (81.05±16.76) pg/m L,t=3.427,P=0.001 1])。虽然CD3~+CD8~+T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P 0.05),但PD-1~+CD8~+细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36%vs 2.20%±0.47%,t=5.335,P 0.000 1)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8~+T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖,但可降低PD-1表达(2.67%±0.91%vs 3.33%±1.12%,t=2.177,P=0.035),增加IFNγ分泌~([(13.50±3.82) pg/m L vs (10.82±1.37) pg/m L,t=3.170,P=0.002 8]),穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140,P值均0.000 1),同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P 0.000 1)。结论抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8~+T淋巴细胞的功能。     

正常T细胞分泌激活因子基因多态性与HIV-1感染者病毒载量、CD+4细胞计数和CD+4/CD+8比值的关系

目的分析正常T细胞分泌激活因子(RANTES)启动子和内含子等位基因,对艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血CD+4细胞计数、CD+4/CD+8比值和病毒载量的关系,以期探讨RANTES单核苷酸多态性(SNP)和艾滋病(AIDS)发病的关系.方法用流式细胞仪和real time法对40例汉族HIV-1感染者测定外周血CD+4、CD+8细胞计数和病毒载量,应用PCR-RFLP法进行基因分型.结果对RANTES-403、-28和In1.1三个位点等位基因与外周血CD+4T淋巴细胞计数、CD+4/CD+8+比值和病毒载量的关系的分析表明,具有RANTESIn1.1 C/C和T/C基因型的感染者,与较高的病毒载量、较低的C+4T细胞计数和C+4/CD+8比值有关.In1.1 T/T与T/C、C/C基因型的log10病毒载量的差异有非常显著的统计学意义(P＜0.01),但是不同基因型之间CD+4T淋巴细胞计数和CD+4/CD+8细胞比值则无显著性差异.log10病毒载量和CD+4T淋巴细胞计数(r=-0.447,P＜0.01)、CD+4/CD+8比值(r=-0.369,P＜0.05)有显著的负相关关系.结论所研究人群中,具有RANTES In1.1C的基因型者,与较高的病毒载量、较低的CD+4T细胞计数和CD+4/CD8+比值有关,它们是反映AIDS进程的主要指标,可能加速AIDS发病进程;而RANTES-403和-28等位基因的影响则处于相对次要的作用.     

HIV-1慢性感染者CD39~+PD-1~+CD4~+T淋巴细胞特点与抗病毒治疗疗效的关系

目的通过分析1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者不同疾病阶段CD39~+PD-1~+CD4~+T淋巴细胞(简称CD39~+PD-1~+CD4细胞)的特点及其与潜伏病毒库形成的关系,探讨CD39~+PD-1~+CD4细胞的临床意义。方法通过流式细胞术检测CD4细胞上CD39及PD-1的表达情况,分析CD39~+PD-1~+CD4细胞与CD4细胞计数、病毒载量及CD4细胞内病毒指标的相关性。通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测免疫重建成功患者(CRs)和免疫重建失败患者(INRs)的HIV库,分析CD39~+PD-1~+CD4细胞与HIV库的关系。结果入组11例健康对照(HCs)和69例HIV-1感染者,其中包括38例未抗病毒治疗(ART)者(TNs)、21例CRs、10例INRs。1)与HCs相比,TNs组患者CD39~+PD-1~+CD4细胞亚群占比显著升高(平均值0.99%vs. 2.50%);与TNs组相比,ART后,CRs组患者的CD39~+PD-1~+CD4细胞亚群占比显著降低(平均值2.50%vs. 0.86%);而INRs组患者该细胞亚群占比显著高于CRs组(平均值2.74%vs. 0.86%);2)在TNs组患者中CD39~+PD-1~+CD4细胞亚群占比与CD4细胞计数呈负相关(r=-0.359 6, P=0.026 6),与病毒载量呈正相关(r=0.451 1, P=0.004 5);3)ART两年以上患者CD39~+PD-1~+CD4细胞亚群占比与HIV脱氧核糖核酸(HIV DNA)正相关(r=0.565 9,P=0.047 3),与细胞相关的未剪接HIV核糖核酸(HIV us RNA)正相关(r=0.675 8,P=0.013 7)。结论 CD39~+PD-1~+CD4细胞与ART后免疫重建失败相关,其机制可能是CD39~+PD-1~+CD4细胞促进HIV建立潜伏病毒库。     

HIV-1感染者滤泡辅助性T细胞高表达CD32亚群的特点及临床意义

目的分析艾滋病病毒(HIV-1)感染者滤泡辅助性T细胞(Tfh)CD32高表达亚群(CD32~(hi)Tfh)的特点及其与疾病进展、病毒活跃复制的关系,以期探讨CD32~(hi)Tfh细胞亚群在艾滋病进展中的特点及临床意义。方法通过流式细胞术检测CD4~+T淋巴细胞(简称CD4细胞)及Tfh细胞亚群CD32~(hi)的比例,分析CD32~(hi)CD4细胞及CD32~(hi)Tfh细胞亚群百分比与免疫指标及外周单个核细胞(PBMCs)内病毒活跃复制指标的相关性。结果入组17例健康对照(HCs)和62例HIV-1感染者,其中未抗病毒治疗患者(TNPs)48例、抗病毒治疗完全应答患者(CRs)14例。(1)相较于HCs,TNPs组CD32~(hi)CD4细胞(平均值0.35%vs 0.12%,P0.000 1)及CD32~(hi)Tfh细胞亚群(平均值0.51%vs 0.21%,P=0.001 3)百分比显著增加;相较于TNPs,抗病毒治疗后,CRs组CD32~(hi)CD4细胞百分比显著增加(平均值0.35%vs 0.24%,P=0.030 7);(2)在TNPs中CD32~(hi)CD4细胞百分比与CD4细胞计数(r=-0.377 1,P=0.011 6)和CD4/CD8值(r=-0.328 6,P=0.029 4)呈负相关,与血浆HIV-1病毒载量(VL)呈正相关(r=0.367 4,P=0.014 9);TNPs患者CD32~(hi)Tfh细胞百分比与CD4细胞计数呈负相关(r=-0.376 3,P=0.023 7),与VL正相关(r=0.330 4,P=0.049 1);(3)TNPs患者CD32~(hi)CD4细胞及CD32~(hi)Tfh细胞亚群百分比与HIV脱氧核糖核酸呈正相关(r=0.534 4,P=0.042 4;r=0.575 0,P=0.027 4)。结论 HIV-1感染者体内CD32~(hi)Tfh细胞亚群增加可能与HIV-1活跃复制有关。     

广西地区未感染HIV婴儿T淋巴细胞及亚群的研究

目的探讨广西地区未感染艾滋病病毒（HIV）婴儿T淋巴细胞及亚群的基本特征,为初步排除并辅助诊断HIV阳性产妇所生婴儿是否感染HIV提供依据。方法收集68例未感染HIV婴儿（未感染组）和13例感染HIV婴儿（对照组）的抗凝全血,用四色荧光流式细胞术检测外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对数及其百分比,并计算CD4/CD8比值;用Nuclisens EasyQ方法检测血浆HIV-1病毒载量。结果 （1）未感染组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对数（细胞/mm3）的中位数分别为4 5702、8181、410;CD3、CD4、CD8的百分比中位数分别为61.42%、39.39%、18.40%;CD4/CD8比值的中位数为2.25;在未感染组中,男性婴儿与女性婴儿的T淋巴细胞及亚群的比较,各检测指标差异没有统计学意义（P〉0.05）;血浆HIV-1病毒载量均为未检测出水平。（2）对照组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对数的中位数分别为4 930、1 4603、326（细胞/mm3）;CD3、CD4、CD8百分比的中位数分别为69.95%、13.77%、54.69%;CD4/CD8比值的中位数为0.25;血浆HIV-1病毒载量的中位数为800 000（拷贝/ml）。（3）除CD3＋T淋巴细胞绝对数之外,未感染组与对照组的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对数、CD3、CD4、CD8百分比及CD4/CD8比值的比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在资源有限的情况下,参考婴儿T淋巴细胞及亚群的异常变化,可初步判断HIV阳性产妇所生婴儿是否感染HIV,T淋巴细胞及亚群的检测,可以作为一种辅助诊断HIV感染的手段。