共刺激分子B7-CD28在肿瘤免疫研究中的进展

抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,共刺激分子发挥了相当重要的作用。B7-CD28是激发机体抗肿瘤免疫应答的共刺激信号,由于肿瘤细胞缺乏B7分子的表达,机体抗肿瘤作用显著降低。转基因治疗后,可以使机体重新获得对肿瘤的主动免疫应答能力。     

共刺激激动剂用于免疫佐剂

近年来,随着分子生物学、基因组学、蛋白质组学以及蛋白质工程技术的发展,越来越多潜在的疫苗抗原得到确认.为了最大限度发挥重组抗原疫苗的作用,迫切需要确定一些强有力的佐剂,这些佐剂应是可以安全地增强抗原的弱免疫原性,且自身副作用最小的物质.佐剂领域的研究进展很快,本文主要介绍了佐剂研究方面最新的进展:直接利用免疫系统自身共刺激通路发挥佐剂作用,着重阐述了基于CD40和CD28的佐剂应用.     

共刺激分子CD40在乳腺癌中的表达和生物学意义

TNF／TNFR超家族成员中的CD40／CD40L分子因其在特异性免疫应答中的重要作用和疾病的密切关系而备受瞩目,成为免疫学及肿瘤免疫研究中的热点。在人类的恶性肿瘤中,大多数的恶性淋巴细胞性肿瘤都表达CD40分子,但CD40在上皮性肿瘤细胞中的作用及其机制研究得很少,本文研究CD40在乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中的表达及其生物学意义,进而探讨CD40作为靶分子在乳腺癌生物治疗中的可行性。     

CD137/CD137L共刺激信号在自身免疫和肿瘤免疫中的应用研究进展

CD137广泛表达于人体免疫细胞或非免疫细胞中,起传递活化、增殖或凋亡信号以维持人体免疫平衡的作用。CD137配体(CD137L)是一种Ⅱ型跨膜蛋白,主要表达于抗原提呈细胞表面。该文介绍了有关CD137/CD137L的表达、功能与生物学特性及其在自身免疫性疾病及肿瘤疾病治疗中的最新研究进展。     

可诱导共刺激分子配体的研究进展

可诱导共刺激分子配体(ICOSL)及其受体可诱导共刺激分子(ICOS)在免疫应答和调节中发挥重要作用。ICOSL参与T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化,诱导Th1细胞和Th2细胞的细胞因子产生,ICOS/ICOSL共刺激通路在炎症反应性疾病及肿瘤相关疾病中起重要作用。本文对ICOSL的研究进展进行综述,以期提高对多种免疫相关性疾病的认识。     

协同刺激分子B7-H3在自发性流产患者中的表达及生物学意义

目的：研究可溶性B7-H3（sB7-H3）在正常、妊娠、自发性流产和复发性流产外周血血清中的含量,同时研究B7-H3在正常妊娠行人工流产者（孕3个月内）和自发性流产者（流产后3个月内）的绒毛膜和蜕膜表达情况,探讨协同刺激分子B7-H3在妊娠免疫中的生物学意义。方法利用ELISA的方法分析sB7-H3在正常未孕者、正常妊娠者、自发性流产者、复发性流产者血清含量。收集正常妊娠行人工流产术组的绒毛膜和蜕膜以及自发性流产组的绒毛膜和蜕膜,通过免疫组化的方法,分析B7-H3在不同组织中的表达情况。结果 sB7-H3在正常对照组、妊娠组、自发性流产组、复发性流产组的血清标本的平均含量之间差异有统计学意义（ P ＜0倐．05）。人工流产组和自发性流产组中B7-H3在绒毛膜的表达差异无统计学意义（ P ＞0．05）;在蜕膜上的表达人工流产组明显高于自发性流产组（ P＜0．05）;B7-H3在绒毛膜局部表达,在蜕膜组织各处均有表达。结论 B7-H3参与了妊娠免疫,并与自发性流产的发生相关。     

肝癌共刺激分子基因治疗的实验研究

目的：研究共刺激信号在肿瘤免疫中的作用。方法：脂质体介导DNA转移法将人B7基因转入人肝癌细胞株Smmc7721，建立新的细胞株B7 Smmc7721，PCR及逆转录PCR(RT-PCR)法鉴定。噻唑盐(MTT)比色试验体外检测白细胞介素-2(IL-2)激活的LAK细胞(LAK-C)对两种肝癌细胞的杀伤活性。结果：PCR，RT-PCR法证实B7 Smmc7721细胞稳定表达B7基因。LAK细胞对B7 Smmc7721细胞的杀伤活性明显高于Smmc7721。结果有统计学意义。结论：B7基因可以体外转染人肝癌细胞，并表达有活性的B7分子，B7分子可明显增强IL-2激活的LAK细胞的肿瘤杀伤作用，为进一步开展临床应用奠定基础。     

细胞因子对小鼠肺癌细胞MHC Ⅰ类分子和共刺激分子的调节作用

目的观察T细胞活化因子对小鼠肺癌细胞表达MHCⅠ类分子和共刺激分子的调节作用,探讨细胞因子增强特异性抗肿瘤应答的免疫效果。方法用rhIL-2和IFN-γ分别活化对数生长期的小鼠lewis肺癌3LL细胞48h,FACS检测细胞因子活化前后3LL细胞表达MHCⅠ类分子(H-2)和共刺激分子(CD80)的荧光强度。结果3LL细胞低表达H-2和CD80,经rhIL-2和IFN-γ活化48h后,3LL表达H-2和CD80的荧光强度明显增强,rhIL-2的活化的两种分子荧光强度高于IFN-γ。结论rhIL-2和IFN-γ能上调小鼠lewis肺癌3LL细胞表面MHCⅠ类分子和共刺激分子的表达,增强体内特异性抗肿瘤免疫应答。     

B7-CD28/CTLA4共刺激途径在再生障碍性贫血免疫机制中作用

T淋巴细胞是细胞免疫反应中的主要效应细胞,细胞免疫应答的中心环节是T细胞对抗原的识别和有效激活,即T细胞激活的的双信号机制,其中TCR与MHC-Ag复合物的结合为第一信号;递呈细胞(APC)提供的协同刺激信号为第二信号。T细胞上的CD28/ CTLA4与抗原递呈细胞上的B7分子[B7-1(CD80),B7-2(CD86)]是目前发现的最为重要的协同刺激分子,它们在自身免疫病患者T细胞及抗原递呈细胞上有异常表达,且参与致病过程。这些分子及其同系物与受体结合后,在T细胞免疫应答的不同阶段中起着重要的调节作用,涉及整个免疫系统中细胞免疫和体液免疫正向负向调节的诸多方面。正确理解这些通路将为自身免疫性疾病的治疗提供新的前景。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘共刺激分子 B7-1和B7-2的研究

目的：探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘巨噬细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平,探讨B7-1、B7-2和B7-1/B7-2在发病中的作用。方法采集28例子痫前期患者（包括12例轻度和16例重度）,12例妊娠期高血压患者,12例正常妊娠妇女的胎盘巨噬细胞,用流式细胞技术分别测B7-1、B7-2的表达率。结果子痫前期患者B7-1/B7-2（0．75＆#177;0．13）均高于其余各组（ P ＜0．05）,子痫前期组胎盘B7-1（19．50＆#177;4．05％）高于其它各组（ P ＜0．05）,结论妊娠期高血压疾病患者胎盘局部B7-1的过度表达及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其发生的重要原因。     

共刺激因子 B7同源体 4蛋白在胆囊腺瘤和胆囊腺癌中的表达

目的 研究B7-H4(B7同源物4)蛋白在胆囊腺瘤恶变为胆囊腺癌过程中的意义.方法 选取河南大学第一附属医院2005年6月至2015年6月符合条件胆囊腺癌病例共58例,采用免疫组织化学法检测B7-H4在胆囊腺瘤和胆囊腺癌中的表达.应用SPSS 17.O软件包对其表达分析,所有结果α=0.05(双侧)检验水准.结果 B7-H4蛋白在胆囊腺瘤阳性表达率为15.00％(6/40),在胆囊腺癌阳性表达率为67.24％(39/58),差异有统计学意义(χ2=26.017,P<0.05).B7-H4蛋白在胆囊腺癌低-中分化组阳性表达率为69.44％(25/36),在高分化组的阳性表达率为33.33％(4/12),差异有统计学意义(χ2=4.907,P=0.027).B7-H4在胆囊腺癌TNM(Ⅰ+Ⅱ)和TNM(Ⅲ+Ⅳ)中表达差异无统计学意义(χ2=2.379,P=0.123).B7-H4阳性表达与病人的年龄和性别无相关(χ2=0.005,P=0.944),与伴胆囊结石(χ2=7.608,P=0.006)、肿瘤长径(χ2=6.522,P=0.011)、淋巴结转移(χ2=3.928,P=0.047)相关.Kaplan-Meier生存分析:B7-H4阳性表达组中位生存率为26月,95％CI:20.661～31.339,B7-H4蛋白阴性表达组中位生存期为22月,95％CI:6.359～37.641,Log-Rank(Mantel-Cox)显示:B7-H4蛋白表达阳性者与表达阴性者三年生存期差异无统计学意义(χ2=0.187,P=0.665).结论 B7-H4蛋白在胆囊腺癌中表达明显高于胆囊腺瘤.B7-H4蛋白的阳性表达与胆囊腺癌的分化程度、肿瘤长径、胆囊结石及淋巴结转移相关,与胆囊病理分期、年龄、性别无相关.     

膀胱癌来源外泌体携带程序性死亡配体1和共刺激分子B7-H4的表达及初步鉴定

目的 提取并鉴定膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体,检测膀胱癌细胞来源外泌体中程序性死亡配体1(PD-L1)和共刺激分子B7-H4的表达,验证膀胱肿瘤通过外泌体在微环境中传递PD-L1和B7-H4.方法 体外培养膀胱尿路上皮癌BIU-87和T24细胞,超速离心法提取细胞上清液中外泌体,透射电子显微镜(TEM)观察外泌体大小及形态,BCA蛋白定量法测定外泌体蛋白浓度,蛋白质印迹法(WB)鉴定两种膀胱癌细胞的外泌体标志蛋白CD63和CD9,检测膀胱癌细胞来源外泌体PD-L1 (exo-PD-L1)和外泌体B7-H4(exo-B7-H4)的表达.最后,将膀胱癌细胞外泌体分别与膀胱正常上皮SV-HUC-1细胞共培养48h后,RT-PCR和WB分别检测SV-HUC-1细胞中PD-L1和B7-H4的mRNA和蛋白的表达情况.结果 BIU-87和T24细胞上清外泌体总蛋白浓度分别为1.88 μg/μL和1.84μg/μL,总质量分别为169 μg和166 μg.TEM观察外泌体直径为30～150nm的膜性囊泡,呈典型的"杯盘"形态.两种膀胱癌细胞上清液均检测出外泌体标志蛋白CD63及CD9.且两种膀胱癌细胞来源的外泌体中均携带PD-L1和B7-H4.当膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体分别与SV-HUC-1细胞共培养后,后者PD-L1和B7-H4的mRNA表达阴性,两者蛋白表达阳性.结论 成功提取并鉴定了膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体均携带PD-L1和B7-H4,且膀胱癌细胞释放的外泌体能在肿瘤微环境中传递PD-L1和B7-H4,可开展后续膀胱癌来源exo-PD-L1和exo-B7-H4的生物学功能研究.     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞共刺激分子4—1BB／4－1BBL的表达

目的 探讨免疫共刺激分子4-1BB/4-1BBL在过敏性紫癜（HSP）患儿外周血单个核细胞（PBMC）中的表达及其意义. 方法 34例仞发HSP患儿以临床表现有无明显肾脏损害分为紫癜性肾炎（HSPN）组13例,过敏性紫癜无肾脏受累（NO-HSPN）组21例,同期体检健康儿童20例为正常对照组.应用流式细胞仪（FCM）检测3组入选者PBMC中4-1BB和4-1BBL的蛋白表达水平. 结果 HSP患儿4-1BB[（1.32±0.51）%、（1.36±0.62）%]、4-1BBL[（6.07±1.67）%、（7.14±1.94）%]蛋白的表达明显高于正常对照组[（0.70±0.25）%、（3.64±1.28）%],差异均有统计学意义（P＜0.01）.加入植物血凝素（PHA）刺激后,3组4-1BB、4-1BBL蛋白水平的表达均明显增高[（46.54±8.19）%比（1.32±0.51）%,（50.31±5.17）%比（1.36±0.62）%;（16.31±3.80）%比（6.07±1.67）%,（17.79±2.73）%比（7.14±1.94）%;均P＜0.01],且NO-HSPN及HSPN组较正常对照组升高更明显.加入地塞米松后,HSP患儿4-1BB、4-1BBL蛋白水平的表达均明显减少[（0.62±0.29）%比（1.32±0.51）%,（0.68±0.33）%比（1.36±0.62）%;（3.06±1.33）%比（6.07±1.67）%,（3.71±1.27）%比（7.14±1.94）%;均P＜0.01],正常对照组的表达减少不明显. 结论 HSP患儿PBMC共刺激分子4-1BB、4-1BBL蛋白水平的表达异常增高,说明4-1BB、4-1BBI这一对共刺激分子可能参与HSP的起病,提示两者可以作为监测HSP患儿病情以及检测早期肾脏损害的免疫学指标.     

分泌人共刺激分子B7-2的重组卡介苗的构建及表达与鉴定

目的构建分泌表达人共刺激分子B7-2（hB7-2）的重组卡介苗（rBCG）。方法采用聚合酶链反应（PCR）以含hB7-2的质粒为模板扩增出hB7-2活性序列,利用基因重组技术插入pYL-MCS质粒构建出分泌型卡介苗穿梭表达载体pYL—hB7-2。用电穿孔方法将该质粒转入卡介苗得到rBCG,利用PCR扩增和测序检测其hB7-2的DNA表达,分别SDS-PAGE和ELISA法测定rBCG上清液中和菌内hB7-2蛋白。结果酶切鉴定、PCR扩增和DNA测序均表明rBCG含有的hB7-2DNA与文献结果一致,SDS—PAGE检测出有相应蛋白表达,ELISA法测定rBCG上清液中分泌的B7-2蛋白为3．8U／ml。结论构建的重组BCG可以分泌表达人共刺激分子hB7-2,能够提供激活免疫反应的共刺激信号,将会成为膀胱肿瘤免疫治疗的一种新型方法。     

原因不明复发性流产患者外周血共刺激分子B7-1、B7-2的异常变化

目的探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平及作用。方法流式法检测30例原因不明复发性流产女性（流产组）、25例正常妊娠女性（正常妊娠组）和20例正常未孕女性（正常未孕组）的外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平。结果流产组女性B7-1的表达水平显著高于其余2组（P〈0.01）;流产组女性B7-2的表达水平显著低于其余2组（P〈0.01）。结论外周血共刺激分子B7-1、B7-2的表达异常,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因。     

共刺激分子B7-CD28/CD152在过敏性哮喘中的作用

目的　观察 5 0例过敏性哮喘患者不同时期共刺激分子CD2 8、CD15 2 (CTLA4)、CD80(B7 1)、CD86 (B7 2 )和外周血T淋巴细胞及其亚群CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 、CD4+ /CD8+ 、CD2 1、CD2 5、HLA DR等变化 ,探讨这些分子在哮喘发病中的意义。方法　采用间、直接荧光标记流式细胞仪测定上述分子表达。结果　共刺激分子CD80、CD86在过敏性哮喘急性发作期明显上调 (P <0 0 5 ) ,CD2 8虽有升高趋势 ,但与健康对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而CD15 2在哮喘急性发作期、缓解期均无变化。急性发作期、缓解期过敏性哮喘病人外周血CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 、CD4+ /CD8+ 等T细胞亚群与对照组相比差异无显著性 ,但T细胞活化标记物HLA DR明显升高 (P <0 0 5 )。结论　共刺激分子B7 CD2 8/CD15 2可能参与了过敏性哮喘的发病过程 ;过敏性哮喘患者外周血T细胞及其亚群虽无比例失调但存在功能紊乱。     

IL-2对晚期胃癌树突状细胞共刺激分子表达的调节及机制

目的　观察中晚期胃癌患者外周血单核细胞来源的树突状细胞 (MoDC)表面共刺激分子的表达 ,探讨白细胞介素 2 (IL 2 )对共刺激分子的调节作用 ,及其相关的免疫机制。方法　分离、培养中晚期胃癌患者MoDC ,FACS分析IL 2活化前后MoDC表面共刺激分子表达的荧光强度 ,Western印迹分析IL 2对MoDC胞内核转录因子NF kB活化的影响。结果　培养 6d的中晚期胃癌患者MoDC表面共刺激分子B7 1(CD80 )和B7 2 (CD86)表达荧光强度明显低于正常人 ,分别占细胞群体的 ( 12 .5± 1.7) %和 ( 2 2 .5± 1.2 ) % ;而培养 5d经IL 2培养 2 4h的MoDC ,B7 1和B7 2的表达增强 ,分别为 ( 3 0 .0±2 .5 ) %和 ( 5 8.0± 3 .4 ) %。Western印迹分析可见 ,IL 2处理后 ,中晚期胃癌患者的MoDC胞内NF kBp5 0呈明显的活化状态。 结论　中晚期胃癌患者DC表面共刺激分子表达低下 ,IL 2能活化DC ,调节其共刺激分子的表达 ,且可能与信号转导途径的核转录因子NF kB活化有关     

妊娠期高血压疾病患者外周血共刺激分子PD-1的表达及临床意义

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders in pregnan-cy)是妊娠期特有的疾病.该病严重影响母婴健康,是孕产妇和围产儿病率和病死率的主要原因.至今病因未明[1].从免疫学观点看,妊娠被认为是成功的自然同种异体移植,正常妊娠的维持有赖于胎儿母体间免疫平衡的建立和稳定,如这种平衡被打破,即可导致发生免疫排斥反应,从而引起一系列的血管内皮细胞损伤,进而发生妊娠期高血压疾病[2～4].(下转第96页)     

原因不明复发性流产患者外周血Th1/Th2与共刺激分子B7-1、B7-2的关系

目的探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2、辅助性T淋巴细胞1(Th1)及辅助性T淋巴细胞2(Th2)的表达水平,分析B7-1、B7-2与Th1/Th2比率的关系。方法流式法检测20例原因不明复发性流产女性(流产组)、19例正常妊娠女性(正常妊娠组)和15例正常未孕女性(正常未孕组)的Th1/Th2和B7-1、B7-2的表达水平。结果流产组Th1/Th2(15.8±4.2)、B7-1的表达水平(11.4±1.6)%,显著高于其余2组(P<0.01);流产组B7-2的表达水平(17.5±2.0)%,显著低于其余2组(P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-1的表达水平之间存在显著正相关(r=0.9136,P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-2的表达水平之间存在显著负相关(r=-9571,P<0.01)。结论原因不明复发性流产患者B7-1、B7-2、Th1及Th2的表达水平显著异常,B7-1、B7-2与Th1/Th2比率显著相关,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因。