NF—κB在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中的作用

目的观察核因子KB（NF—κB）在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中活性的变化,并进一步阐明其作用。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧（5％CO2、1％O2、94％N2）＋兀糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞术、免疫组化法、免疫印迹法观察正常对照组、模拟缺血／再灌注损伤组（I—R组）、NF—κB的抑制剂PDTC预处理组（使用10μmol·L^-1PDTC预处删胃黏膜上皮细胞24h）于模拟缺血1h、再灌注6h后细胞凋亡及NF—κB的表达情况。结果①I—R组细胞凋亡率较正常对照组明显增高（P〈0．01）,PDTC预处理组细胞凋亡率较I—R组明显下降（P〈0．01）。②正常对照组胃黏膜上皮细胞核内极少有NF—κB表达,I—R组细胞核内NF—κB表达明显增加,PDTC预处理绀NF—κB核转化现象减轻,胞核染色明显减少。③I—R组与正常对照组比较,胃黏膜上皮细胞核NF—κB蛋白表达水平显著增高（P〈0．01）;PDTC预处理组与I—R组比较,NF—κB蛋白表达水平明显降低（P〈0．01）。结论模拟缺血／再灌注能增加人肖黏膜上皮细胞核内NF—κB的表达,NF—κB的激活具有促进细胞凋产的作用;PDTC叮以抑制细胞凋亡,对人胃黏膜上皮细胞模拟缺血／再灌注损伤有保护作用。     

不同浓度辣椒素对缺氧复氧后A549细胞凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨不同浓度辣椒素对A549细胞缺氧复氧后增殖活力和凋亡率的影响。方法 将培养的A549细胞随机分为7组：正常培养组（control组）;缺氧36h复氧24h组（HR组）,用5种不同浓度（0.25μM组,2.5μM,25μM,250μM,2500μM）辣椒素处理后缺氧复氧组（cap0.25+HR组、cap2.5+HR组、cap25+HR组、cap250+HR组、cap2500+HR组）。除了control组,各组A549细胞于含有1%O2 、94%N2、5%CO2的培养箱中培养36h,然后置于普通培养箱中复氧培养24h,建立细胞缺氧复氧模型,辣椒素处理组根据各种浓度在缺氧前给予辣椒素。使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活力。收集control组、HR组、cap25+HR组、cap250+HR组细胞,用Annexin V FITC/PI染色,流式细胞仪检测凋亡率。结果 与HR组比较,cap2.5+HR组、cap25+HR组、cap250+HR组细胞增殖活力增加（P＜0.05）,cap2500+HR组细胞增殖活力降低（P＜0.05）。与HR组比较,缺氧前给予辣椒素的A549细胞缺氧复氧后凋亡率降低（P＜0.05）,高浓度（250μM）保护作用更明显。结论 一定浓度范围内辣椒素可提高缺氧复氧A549细胞增殖活力,并抑制其凋亡。     

异丙酚对缺氧复氧损伤人血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶与核转录因子κB表达的影响

目的:探讨异丙酚对缺氧复氧损伤人血管内皮细胞凋亡及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法:培养至融合状态的脐静脉内皮细胞随机分为3组。正常对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)和缺氧复氧 异丙酚组(PR组),PR组按加入异丙酚浓度不同分为3个亚组(25PR、50PR、100PR组)。结果:PR组细胞凋亡降低,与HR组比较差异显著(P<0.01),50PR组、100PR组与25PR组比较差异显著(P<0.01)。PR组NF-κB和iNOSmRNA降低表达,与HR组比较差异显著(P<0.01);50PR组、100PR组与25PR组比较差异显著(P<0.01)。结论:异丙酚降低缺氧复氧损伤所致的内皮细胞凋亡,与其抑制缺氧复氧引起的NF-κB表达升高,减少iNOS生成有关。     

异丙酚对缺氧复氧损伤人血管内皮细胞caspase-3和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨异丙酚对缺氧复氧损伤所致人血管内皮细胞凋亡及caspase-3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法建立人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤模型。将细胞缺氧培养30min再复氧,或加入不同浓度异丙酚孵育30min后再进行缺氧复氧处理,在复氧不同时相点（2、6、24和48h）以流式细胞仪计数凋亡细胞数量,并采用免疫细胞化学方法检测caspase-3和Bcl-2蛋白表达的变化。结果缺氧复氧后内皮细胞呈现典型的凋亡形态,复氧2h凋亡细胞数量开始增加,复氧6h时升高显著,至24h达峰值;异丙酚明显抑制复氧后细胞凋亡的发生。正常体外培养人血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达较低,随复氧时间延长Bcl-2表达明显下调;25μmol/L异丙酚预处理可使复氧后内皮细胞Bcl-2表达升高,与相应缺氧复氧组比较差异有显著性（P〈0.01）,50、100μmol/L异丙酚组作用相似,不同浓度异丙酚作用呈现一定的剂量效应关系。缺氧复氧损伤使caspase-3蛋白表达增强,复氧24h后达高峰;异丙酚预处理以剂量依赖方式显著下调caspase-3表达（P〈0.01）。结论异丙酚降低缺氧复氧损伤所致的内皮细胞凋亡,可能与其抑制缺氧复氧引起的caspase-3活化、上调Bcl-2蛋白表达有关。     

EPO预处理在心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡作用研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡效应,进一步研究其可能机制.方法 建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、EPO组[缺氧复氧前24h培养液中加入终浓度10u/mL重组人EPO(rhEPO)]、EPO+吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)组(缺氧复氧前24h加入终浓度10u/mL rhEPO和5μg/mL PDTC)及PDTC组(缺氧复氧前24h加入终浓度5μg/mLPDTC).于缺氧复氧损伤前后观察各组心肌细胞存活率(MTT法),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性变化,RT-PCR检测损伤前后各组心肌细胞bcl-2 mRNA表达变化.结果 缺氧复氧损伤后各组细胞存活率较损伤前对照组显著降低(P<0.01),EPO组高于其余各组(P<0.01);损伤后各组心肌细胞凋亡率较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组凋亡率低于其余各组(P<0.01);损伤前EPO组心肌细胞NF-κB活性显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组NF-κB活性较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组低于其余各组(P<0.05);损伤前EPO组bcl-2mRNA表达水平显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组心肌细胞bcl-2mRNA表达水平均较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组仍高于其余各组(P<0.01).结论 EPO预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中具有显著抗凋亡效应;EPO预处理心肌细胞抗凋亡保护作用与预处理过程中NF-κB活化有关;EPO预处理过程中NF-κB活化,通过上调抗凋亡基因bcl-2表达,产生抗凋亡效应.     

瑞芬太尼对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的保护作用

目的探讨瑞芬太尼（remifentanil,REM）对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的作用及机制。方法将培养的人肝L02细胞分为正常对照组（c组）、单纯缺氧复氧组（0组）及瑞芬太尼处理组（R组）;其中R组又根据药物浓度不同分为7个亚组。C组正常培养,0、R两组缺糖缺氧处理5h后恢复正常条件培养12h,分别使用MTT比色法测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡情况、比色法测定细胞培养液LDH活力,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙浓度动态变化。结果5～40ng／ml的瑞芬太尼处理使缺氧复氧损伤L02细胞活力上升、细胞凋亡比例下降,5～30ng/ml的瑞芬太尼处理使培养液中LDH活力降低（P〈0．05）;40ng／ml瑞芬太尼处理后L02细胞内钙浓度上升时间延迟（P〈0．05）。结论5—40ng／ml的瑞芬太尼处理对缺氧复氧损伤肝细胞具有保护作用,可能与瑞芬太尼抑制细胞凋亡和减轻钙超载有关。     

PDTC联合泰素帝对SGC-7901人胃癌细胞抑制效应及其机制

目的研究PDTC合并泰素帝对SGC-7901人胃癌细胞的抑制效应及其机制。方法应用MTT法观察PDTC及泰素帝对SGC-7901细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测不同处理后SGC-7901细胞凋亡率的变化,采用实时荧光定量PCR法测定c-IAP2及XIAP基因表达的改变,采用Western印迹法检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达的改变。结果 PDTC组、泰素帝组及联合用药组的细胞活力都明显比对照组降低（P〈0.05）,与相应的泰素帝组相比,联合用药组降低明显（P〈0.01）;PDTC、泰素帝及联合用药组的凋亡率高于对照组（P〈0.01）,联合用药组细胞凋亡率明显升高,达到29.37%,与泰素帝及PDTC单药组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;PDTC组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组下降,泰素帝组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组升高,联合用药组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组、泰素帝组明显下降（P〈0.01）;泰素帝处理后胞核NF-κB P65含量增加（P〈0.01）,而PDTC联合作用后胞浆及胞核NF-κB P65含量较泰素帝组及对照组明显降低（P〈0.01）。结论泰素帝与PDTC均能抑制SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与PDTC可拮抗泰素帝的NF-κB激活、抑制其下游凋亡抑制蛋白基因表达有关。     

利多卡因对缺氧/复氧后肝细胞钙超载和细胞凋亡的影响

目的:探讨利多卡因预处理对L02肝细胞缺氧/复氧后肝细胞内钙离子变化和细胞凋亡的影响.方法:选用L02肝细胞缺氧/复氧损伤模型,随机分为缺氧/复氧组(Ⅰ 组)、利多卡因预处理组(Ⅱ组)和正常对照组(Ⅲ组);检测肝细胞缺氧4 h,复氧后10 h 细胞培养基中谷丙转氨酶(ALT)浓度、谷草转氨酶(AST)浓度、肝细胞内钙离子浓度、肝细胞凋亡率以及细胞形态结构变化.结果:缺氧/复氧后肝细胞内钙离子浓度升高,且与细胞凋亡率呈正相关(P＜0.05);Ⅰ,Ⅱ组细胞复氧10 h后肝细胞培养液中ALT浓度、AST 浓度、肝细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率较Ⅲ组均升高(P＜0.05),倒置显微镜和电子显微镜示肝细胞损伤,可见凋亡细胞;Ⅱ组细胞复氧10 h后肝细胞培养液中ALT浓度、AST浓度、肝细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率均低于Ⅰ组(P＜0.05),倒置显微镜和电子显微镜结果也显示Ⅲ组肝细胞比Ⅰ组损伤轻微.结论:利多卡因预处理可以缓解缺氧/复氧损伤后肝细胞内钙超载,降低细胞凋亡率.     

缺氧-复氧肾小管上皮细胞损伤的信号传导机制

目的 探讨肾小管上皮细胞在缺氧-复氧(H-R)损伤后的信号传导机制.方法 将不同方法处理的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、模型组和PDTC组,模型组和PDTC组再分别分成缺氧6、12、24 h组、缺氧24 h后分别复氧6、12、24 h组;检测细胞成活率、NF-κB p65蛋白表达、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组随缺氧时间延长细胞数量逐渐减少,24 h达高峰(P＜0.05),复氧后细胞数量略有增加;随缺氧时间延长NF-κB p65阳性蛋白表达增多,复氧6h组达高峰(P＜0.05);ICAM-1 mRNA及蛋白表达随H-R时间延长渐增高(P＜0.05).PDTC组中NF-κBp65蛋白和ICAM-1 mRNA及蛋白表达较模型组有明显下降(P＜0.05).结论 H-R诱导HK-2细胞中NF-κcB p65的活化,从而上调ICAM-1 mRNA及蛋白表达.     

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的：探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB（nuclear factor-kappa B,NF-KB）的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白（P-IκBα）表达的影响。方法将原代培养的嗅鞘细胞分为5组：正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂（PDTC,50μmol/L）组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。     

NF-κB在EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤保护效应中作用的研究

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的保护效应及其与预处理过程中NF-κB的关系.方法采用培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,细胞分组为:对照组,EPO预处理组(EPO组)(EPO 10 U/ml),EPO 吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理组(EPO PDTC组)(EPO 10 U/ml PDTC 5 μg/ml),PDTC预处理组(PDTC组)(PDTC 5 μg /ml),共4组,分别于缺氧/复氧损伤前后,检测培养液LDH含量,MTT比色法观察细胞活力及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡.采用EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性.结果 EPO预处理显著降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞培养液LDH含量,提高细胞存活率,并降低心肌细胞凋亡率,预处理过程中同时加入NF-κB阻断剂PDTC使EPO预处理的以上心肌保护效应显著减弱或消失.EMSA显示EPO预处理使H/R前心肌细胞NF-κB活性较对照组、EPO PDTC组、PDTC组显著升高(P<0.05),EPO PDTC组心肌细胞NF-κB活性与PDTC组和对照组无显著差异(P>0.05).缺氧复氧损伤后各组心肌细胞NF-κB活性较正常对照组显著升高(P<0.01),但EPO组的NF-κB活性低于其余各组(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05).结论 EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护效应,这一作用与EPO预处理过程中NF-κB的活化有关,NF-κB的活化可能通过其负反馈调节机制抑制H/R后心肌细胞NF-κB活性的升高.     

预吸氧、缺氧和复氧时大鼠脑组织iNOS表达变化的研究

目的：观察在不同浓度预吸氧条件下,大鼠脑皮质在预吸氧、缺氧和复氧后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达.方法：大鼠72只随机分成3组,A预吸氧组;B缺氧组;C复氧组,每组随机分成4个亚组,分别给予21%,50%,75%,98%氧气.免疫组化法观察iNOS表达;病理组织学方法观察脑组织损伤程度.结果：免疫组化发现缺氧组阳性细胞率增加,B2组阳性率最低.病理组织学发现缺氧后B2组损伤程度轻于B1组（P＜0.01）,复氧后C4组损伤最重.结论：较低浓度预吸氧可增强脑细胞的抗氧化损伤能力,而高浓度预吸氧则作用相反;iNOS表达的变化可能是不同浓度预吸氧引起脑细胞抗氧化能力改变的作用机制之一.     

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

摘要：目的探讨白藜芦醇苷（polydatin，PD）对缺氧复氧（hypoxia／re—oxygenation，H／R）肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法在缺氧仓中充人95％N2、5％CO2混合气体模拟缺氧环境，将人近曲肾小管上皮细胞（humankidneyproxi—realtubularepithelialcell，HK2）根据不同处理分为4组：正常对照组、H／R组、PDTC组和PD处理组，除对照组外每组均予以先缺氧24h后复氧6h处理；MTT法检测细胞成活数，免疫组化法检测NF—κBp65蛋白表达情况，RT—PCR检测ICAM—1mRNA转录，ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H／R组，统计学差异显著（P〈0．05）。PD处理组NF—KBp65蛋向阳性表达，ICAM-1mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组，有统计学差异（P〈0．05）。PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异（P〉0．05）。结论PD对H／R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用。     

TRAIL联合PDTC对SGC-7901细胞生长抑制和凋亡诱导的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及TRAIL联合核转录因子核因子-κB（NF-κB）活性特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制和凋亡诱导作用,并寻找逆转TRAIL耐药的方法。方法采用不同浓度的TRAIL及TRAIL联合PDTC作用于胃癌细胞后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色方法观察药物作用前后NF-κB表达情况。结果单独使用TRAIL时,随着浓度从50μg/L增加到500μg/L,细胞的生长抑制率和凋亡率逐渐增加（P〈0.05）,但这种作用是非线性的。TRAIL联合0.05μmol/L、0.1μmol/L PDTC后肿瘤细胞的生长抑制率和凋亡率较单用TRAIL显著下降（P〈0.05）;而联合1μmol/L、10μmol/L PDTC后其作用较上有所上升（P〈0.05）。联合作用组p65蛋白在胞核中染色的强度低于单纯使用TRAIL组（P〈0.05）。结论TRAIL对胃癌细胞株SGC-7901具有一定程度的生长抑制和凋亡诱导作用;NF-κB信号转导途径可能具有双向调节作用,大剂量PDTC可能逆转胃癌细胞对TRA...     

The research of effects and mechanism of the proliferation at myocardium microvascular endothefial cells on hypoxia-reoxygen

目的:研究缺氧复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)活力的影响及机制.方法:培养大鼠MMECs,制作缺氧复氧模型模拟缺血再灌注损伤.随机分为4组(n=24),正常对照组(N组)不作任何处理、缺氧复氧组(HR组)、LY294002预先给药+缺氧复氧组(LY294002组)、PDTC预先给药+缺氧复氧组(PDTC组),均进行缺氧2h复氧2h.复氧2h时后MTT法测定细胞活力,Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构.结果:与N组比较,HR组细胞活力降低(P＜0.01);与HR组比较,LY294002组细胞活力降低(P＜0.05),PDTC组细胞活力降低(P＜0.01);与LY294002组比较,PDTC组组细胞活力降低(P＜0.01).结论:缺氧复氧可导致MMECs活力明显降低;PI3K/Akt/NF-κB信号通路参与了缺氧复氧调控过程,该通路可促进MMECs活力增强.     

在GDNF基因修饰的骨髓基质细胞与缺氧复氧神经细胞的共培养中神经细胞凋亡的变化

目的：探讨胶质源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的骨髓基质细胞（BMSCs）对缺氧复氧神经细胞的保护作用。方法：GDNF基因修饰的BMSCs（BMSCs/GDNF）经诱导后与缺氧复氧神经细胞共培养,采用Hoechst33258检测神经细胞凋亡在共培养细胞中的表达。结果：BMSCs/GDNF组的神经细胞凋亡率显著低于BMSCs组和缺氧组（P〈0.05）。结论：BMSCs/GDNF通过抑制缺氧复氧神经细胞凋亡发挥神经保护作用。     

纯氧与空气复苏对缺氧新生大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

【目的】为了比较纯氧与空气复苏对缺氧新生大鼠的复苏效果,探讨新生大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达在缺氧复苏中的作用。【方法】采用sD新生大鼠建立缺氧模型,并分组进行纯氧与空气复苏。实验分为正常对照组（无预缺氧和复氧实验）、纯氧复苏组（PO组）和空气复苏组（RA组）。取肝组织,HE染色光镜观察肝组织病理变化,TUNEL法测定肝细胞凋亡指数,免疫组化检测肝组织Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。【结果】与正常对照组相比,PO组可见‘肝细胞肿胀,肝细胞有部分细胞器缺失,肝细胞呈明显的片状坏死,有炎性细胞浸润,肝细胞索排列紊乱。RA组肝细胞索排列基本正常,肝细胞损伤程度,炎细胞浸润及肝细胞肿胀都较PO组轻。PO24h及72h亚组的细胞凋亡指数分别为（11．2&#177;3．2）％和（9．2&#177;1．0）％,RA24h及72h亚组的细胞凋亡指数分别为（9．0&#177;2．9）％和（7．4&#177;1．9）％,均低于相应的PO各亚组（P〈0．01）。PO24h及72h亚组Bcl-2蛋白表达（11．55&#177;1．06）％和（10．49&#177;1．03）％,均低于对应的RA各亚组,RA24h及72h亚组Bcl-2蛋白表达分别为（13．06&#177;2．35）％和（11．71&#177;1．69）％。PO24h及72h亚组Bax蛋白表达分别为（4．81&#177;1．13）％和（4．62-t-O．79）％,均高于对应的RA各亚组,RA24h及72h亚组Bax蛋白表达分别为（4．08&#177;0．31）％和（3．88&#177;0．48）％。PO组与RA组的细胞凋亡指数、Bcl-2及Bax蛋白表达及Bcl-2／Bax比值差异具有统计学意义（P〈0．01）,各组内亚组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。【结论】纯氧复苏较空气复苏后新生大鼠肝细胞的凋亡更严重。纯氧复苏促进Bax基因的表达上调,空气复苏可使凋亡抑制基因Bcl-2表达上调,暗示纯氧复苏对新生大鼠肝的损伤要重于空气复苏。     

血红素氧合酶-1对体外氧糖剥夺海马神经元Caspase-12表达抑制作用的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率的检测,HO-1、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1可抑制氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的表达,从而抑制神经元的凋亡.     

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡及JNK表达的影响

目的探讨二氮嗪（DZ）预处理能否抑制C-Jun氨基末端激酶（JNK）表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。方法原代培养9～10d的SD大鼠海马神经元随机分为5组：对照组、DZ0,30,100μmol／L和DZ100μmol／L＋5-羟癸酸（5-HD）100μmol／L预处理组。除对照组外,其余4组神经元自缺氧前2d开始,每天实施以上对应浓度DZ预处理1h。连续3d。于体外缺氧4h复氧48h后,采用四唑蓝比色法测定海马神经元活力,AnnexinV—FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blotting法检测JNK蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧复氧后海马神经元的活力下降,凋亡率增大,JNK蛋白表达增强（P〈0．05）。与其他预处理组比较,DZ100μmol／L预处理组的神经元活力高,凋亡率低（P〈0．05）,其他预处理组间比较无统计学意义：DZ预处理后,JNK蛋白表达减低,且DZ100μmol／L组表达弱于DZ30μmol／L组（P〈O．05）。同时给于5-HD预处理后,DZ未能抑制JNK蛋白表达。结论DZ预处理可能抑制JNK表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。     

异丙酚、氯胺酮对大鼠大脑皮层星形胶质细胞缺氧复氧损伤的影响

目的观察异丙酚和氯胺酮对缺氧复氧大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤的影响。方法取新生2～3dWistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（Nor组），缺氧6h后复氧24h组（Ano组），加异丙酚50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Pro组），加氯胺酮50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Ket组），加异丙酚和氯胺酮各50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（PK组）。检测皮层星形胶质细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）、凋亡及丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活性，并观察细胞形态学的改变。结果与Nor组比较，Ano组细胞大量凋亡，[Ca^2＋]i和MDA含量升高，SOD和GSH活性均降低（均P〈0．01），未凋亡的星形胶质细胞增生肥大。与Ano组比较，Pro组、Ket组和PK组凋亡均明显减少，[Ca^2＋]i和MDA含量降低，SOD和GSH活性均有不同程度的恢复和升高（P〈0．05，P〈0．01），细胞无明显增生肥大。Pro组和Ket组间比较差异无统计学意义（P〉0．05），Pro组和Ket组分别与PK组比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论异丙酚和氯胺酮均可通过抑制缺氧复氧损伤大鼠海马星形胶质细胞内钙超载和脂质过氧化反应，清除自由基而发挥保护作用，且两者有协同作用。