猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

观察猪囊尾保护性原ｃＣ１ ＤＮＡ疫苗诱导的小鼠免疫应答,及对仔猪的免疫保护作用。方法：将全长ｃＣ１ ｃＤＮＡ插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３,构建了重组质粒ｐ３－ｃＣ１,肌注小鼠,ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清抗ｃＣ１抗体ＩｇＧ及ＩｇＧ２ａ水平,并进行仔猪的免疫保护实验。结果：免疫小鼠第３周出现特异性ＩｇＧ应答,第８周ＩｇＧ水平达到最高;小鼠血清的ＩｇＧ２ａ检测显示,第２周ＩｇＧ２ａ应答即为阳性,且长时间     

核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

目的：观察核酸疫苗ｐｃＤＮＡ３－γｃＣ１免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法：分离、培养囊尾蚴混合细胞,用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果：非接种组,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。结论：首次观察到到疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象,为阐明治疗型核酸疫苗的作用机制提供了新的依据。     

猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

研究猪囊蚴副肌球蛋白核酸疫苗诱的免疫应答。方法将ｐｃＤＮＡ３－ＡｇＢ核酸疫苗肌注４－６周龄的昆明种小鼠,从２周后开始用ＥＬＩＳＡ方法小鼠体内ＩｇＧ和ＩｇＧ２ａ的水平。另外将该核酸疫苗注射Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,体外培养小鼠脾细胞,用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和特异性抗原刺激,ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞因子ＩＬ－２和ＩＬ－４的水平,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪进行攻击实验,计算组对     

ESAT6抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

目的:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗,并观察其在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答.方法:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗pVAX-ESAT6,并将其肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,用ELISA方法检测小鼠的血清抗体(IgG、IgG2a/IgG1)水平,并在体外用特异抗原刺激小鼠脾细胞,检测其分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定小鼠细胞毒性T淋巴细胞反应.结果:pVAX-ESAT6 DNA疫苗诱导了抗原特异的体液免疫应答和细胞免疫应答,抗体亚型检测显示IgG2a与IgG1的比值为(2.28±0.4),脾细胞分泌的细胞因子水平检测显示IFN-γ的水平(360士45 Pg/ml)高于IL-4的水平(124±16 Pg/m).结论:成功地构建了pVAX-ESAT6 DNA疫苗,它能在小鼠中诱导抗原特异的免疫应答,应答类型以Th1型占优势.     

猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。     

IL-12对乙型肝炎DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响

目的　观察编码鼠 IL - 12的真核表达载体对 HBVDNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响 .方法　肌肉注射 DNA疫苗 ,EL ISA法检测小鼠血清抗 HBs,4h5 1 Cr释放法检测小鼠脾细胞 CTL杀伤活性 .结果　免疫 8wk后 ,单纯注射 p CR3.1- S及共注射 IL - 12真核表达载体的小鼠血清 45 0 nm A值分别为 0 .87± 0 .1及 1.6 7± 0 .15 .CTL 细胞杀伤活性分别为 (5 0 .5± 6 .4) %及 (73.3± 8.8) % ,两组均有明显差异 (P<0 .0 1) ,脾细胞悬液经抗 CD4+ 单克隆抗体处理后 CTL 细胞杀伤活性分别为 (48.3± 5 .9) % ,(75 . 6±9.1) % ,抗 CD8+单克隆抗体处理后分别为 (10 .6± 1.4) % ,(16 .9± 2 .3) % .结论　 IL - 12的真核表达载体能够提高小鼠对 DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由 CD8+执行 .基因疫苗可能用于预防及治疗 HBV感染     

猪囊尾蚴DNA疫苗在猪组织中的分布

目的：分析猪囊尾蚴DNA疫苗pcDNA3-cC1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法：分别于疫苗接种后1d、7d、4周、8周，提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸`腺外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总DNA，通过PCR的方法检测疫苗质粒在各组织中的分布及随时间变化的情况。结果：疫苗接种后的第1天几乎所有组织中都检测到质粒；但随着时间的延续；仅在注射部位的肌肉和皮肤中检测到质粒的存在，并保持到8周以上。结论：肌注疫苗质粒后，实验猪组织中的游离质粒在短时期内就被清除。     

泛素-结核抗原融合基因DNA疫苗诱导小鼠较强的细胞免疫应答

目的:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗(pE)和泛素基因与ESAT6抗原基因融合的DNA疫苗(pUE).方法:分别将构建的DNA疫苗肌内注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)、细胞因子(IFN-γ、IL-4)和细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL),比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度.结果:pE组小鼠血清IgG水平高于pUE组(P＜0.01),但IgG2a/IgG1比值低于pUE组[(2.28±0.40) vs (3.87±0.60),P＜0.05].与pE组相比,pUE组小鼠IFN-γ分泌水平增高(P＜0.01),IL-4分泌水平下降(P＜0.01);pUE增强了CTL活性.提示融合基因DNA疫苗诱生的抗原特异的体液免疫应答不及单基因DNA疫苗,但其能诱导更强的细胞免疫应答.结论:泛素-ESAT6融合基因DNA疫苗对于防治结核病可能比单基因DNA疫苗更为有效.     

DNA疫苗的结构与免疫应答的关系

DNA疫苗已被广泛用于抗病毒、 抗细菌、 抗寄生虫及抗肿瘤的研究。近几年研究表明, 虽然DNA疫苗具有广泛的优越性, 但免疫效果还不够理想、 均一。如何优化DNA疫苗的结构, 诱导机体产生理想的免疫应答, 成了目前最主要的课题。本文对近年DNA疫苗结构与功能的关系作一综述。一、 DNA疫苗的基本结构DNA疫苗是能在机体细胞内复制, 并表达出目的基因产物, 刺激机体产生保护性免疫的环状裸DNA。在结构上, 主要由载体DNA和目的基因DNA二部分组成。载体DNA可由细菌质粒DNA、 噬菌体DNA及病毒DNA或cDNA改造而成, 其结构上…     

HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗     

Humoral immune response to HCV core DNA vaccine in mice

DNAvaccine,alsocallednucleicacidvaccine,isarecombinanteukatyoticexpressionplasmidencodingcertainantigenofpathogen.DNAvaccinecanexpressantigenandinducecellularandhumoralimmuneresponsesaftervaccinationbyintramuscularinjectionorplasmid--coatedmicroparticlebombardment.Itshightemperaturestability,lowexpenseofmassproductionandtheabilitytoinducestrongimmuneresponsesevenfortheuseintherapyhavemadeDNAvaccineanexcitingwayfornewvaccinedevelopment['J.InordertofurnishevidenceforHCVDNAvaccinesuitablefo…     

pT-ureB及pT-hpaA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照,末次免疫后第2、4、6周分别用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度。结果两免疫组在末次免疫后第2周均可出现特异性IgG,抗体滴度随时间逐渐增高;末次免疫后第6周,两免疫组的抗体滴度与对照组相比较,差异极显著(P<0.01);且pT-ureB免疫组抗体滴度显著高于pT-hpaA(P<0.01)。结论pT-ureB具有良好的免疫原性,诱导体液免疫应答的能力优于pT-hpaA。     

重组蛋白CTB表位对HCV多表位DNA疫苗的小鼠中免疫应答的影响

将一12aa的CTB表位连接于丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV)复合多表位抗原基因PCX的5'端,再克隆于真核表达载体pcDNA3中,获得重组质粒pcDNA3/CTB-PCX,利用表达IL-12的pWRG/mIL-12作为佐剂,肌注免疫小鼠后6W,用重组蛋白GZ-PCX加强免疫1次,第6W时可检测到较高水平的抗GZ-PCXIgG,最高滴度达1：10^3,与对照pcDNA3/PCX相比无显升高,提示CTB表位并无明显的增强PCX基因特异性体液免疫应答的作用。重组蛋白GZ-PCX可有效提高抗体水平,促进CD^8 T细胞增殖。免疫小鼠可诱发针对GZ-PCX融合蛋白的迟发性超敏反应（DTH）,免疫后小鼠体重正常,肝脾未见明显肿大。具有良好安全性。     

HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV)adr亚型基因疫苗pCMV-S2.S(PS），观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法：将PS注射于C57BL／6小鼠胫骨前肌内，应用ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体以及采用^51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果：注射基因疫苗1周后，血清中抗HBs抗体转阳，4周后抗体达到高峰，并以高水平维持至少8周；第12周时PS诱导小鼠产生了良好的HBV特异的细胞免疫应答（P＜0.05）。结论；所构建的HBV adr亚型基因疫苗PS能够诱导小鼠产生较好的体液和细胞免疫应答。     

Immune responses in wild-type mice against prion proteins induced using a DNA prime-protein boost strategy

Objective To break immune tolerance to prion (PrP) proteins using DNA vaccines.Methods Four different human prion DNA vaccine candidates were constructed based on the pcDNA3.1 vector:PrP‐WT expressing wild‐type PrP,Ubiq‐PrP expressing PrP fused to ubiquitin,PrP‐LII expressing PrP fused to the lysosomal integral membrane protein type II lysosome‐targeting signal,and PrP‐ER expressing PrP locating the ER.Using a prime‐boost strategy,three‐doses of DNA vaccine were injected intramuscularly into Balb/c mice,fol...     

乙肝病毒adr型基因疫苗诱导小鼠体液免疫应答

目的：构建乙肝病毒adr型基因疫苗pCMVS2-S,观察其免疫小鼠的特异性体液免疫应答。方法：将构建的乙肝病毒基因疫苗注射于C57BL/6小鼠胫骨前肌肉,运用ELISA检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体。结果：注射基因疫苗1周后,血清中抗HBs抗体转阳,1个月后抗体达到高峰,并以高水平维持至少2个月。结论：基因疫苗pCMVS2-S诱导C57BL/6小鼠产生较好的体液免疫应答。