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用聚合酶链反庆法检测宫颈癌中人乳头瘤病毒16型转化基因E7,检出阳性率为10/22,其中4例进行PCR-SSCP分析发现该基因与标准对照株存在明显变异。核苷酸序列分析证实有两处发生碱基突变。研究提示,PCR方法能快速检测宫颈癌中人乳头瘤 转化基因,可作为宫颈癌的辅助诊断方法,SSCP分析能发现病毒株间小变异的基因片段。 相似文献
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宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7蛋白致癌机理初探 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16-E7蛋白对视网膜母细胞瘤基因(Retinoblastoma)Rb蛋白及E2F-1的作用的机制,探讨HPV16-E7蛋白与宫颈癌发生的关系。方法 采用聚合酶链反应检测宫颈癌及正常宫颈组织中HPV16感染等,用蛋白印迹技术对HPV16 DNA阳性的宫颈癌组织中是否存在HPV16-E7蛋白和R6蛋白-E2F-1形成的复合物进行检测。正常宫颈组织作为对照, 相似文献
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目的 探讨宫颈透明细胞癌中高危型HPV感染情况.方法 提取1例37岁宫颈透明细胞癌患者手术切除组织蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况.结果 该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性.结论 利用巢式PCR方法分型检测宫颈透明细胞癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高. 相似文献
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运用杂交瘤技术,我们成功地建立了两株能稳定分泌小鼠抗人乳头瘤病毒16E6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。经鉴定单克隆抗体均属IgG1k。试验结果表明,所得单克隆抗体仅与HPV16E6融合蛋白反应,不与HPV16E7、L1、L2融合蛋白以及L1-L2真核表达蛋白反应,也只与Caski细胞反应,不与Hela细胞反应。初步结果说明,该抗体是HPV16E16蛋白特异性的McAb。 相似文献
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尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒的检测 总被引:5,自引:0,他引:5
用免疫组织化学、DNA原位杂交和聚合酶链反应技术,检测人生殖器尖锐湿疣和女阴假性湿疣组织中人乳头状瘤病毒衣壳抗原(HPV-Ag)和病毒核酸序列(HPV-DNA),并观察了HPV在尖锐湿疣组织中的分布特点与病变组织学改变的关系。结果显示尖锐湿疣中HPV-Ag阳性率为71.4%(35/49);原位杂交HPV6/11DNA阳性率为96.5%(28/29);PCR扩增后尖锐湿疣HPV6/11/16/18DNA阳性率为100%(53/53);假性湿疣HPV6/11/16/18DNA阳性率为21.4%(3/14)。观察HPV-Ag和HPV-DNA分布,表明HPV增殖性感染和尖锐湿疣特异的病理改变密切相关。 相似文献
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应用聚合酶链反应检测食管癌组织中人乳头瘤病毒 总被引:1,自引:2,他引:1
目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与我国河南地区食管癌发生的相关性.方法 应用HPV L1通用引物GP5+/6+、HPV16E6和HPV18E6型特异性引物多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),检测林州市食管癌组织中HPV存在状况.结果 31例食管癌组织中,29例检测到HPV阳性,阳性率为93.5%;其中19例检测到HPV16 E6基因,阳性率为61.3%,8例为HPV18 E6基因阳性,阳性率为25.8%,5例HPV16E6和18E6基因均阳性,为混合感染.HPV16和18型阳性率为71.0%.结论 我国河南省林州市食管癌组织中有HPV存在,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要病因. 相似文献
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人乳头瘤病毒16型E6和E7基因特征分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 对北京15例宫颈癌病变组织中的人乳头瘤病毒(HPV)16型E6和E7基因进行扩增及序列测定,分析E6和E7基因突变特征,并探讨宫颈癌病变中HPV16的感染情况.方法 自行设计HPVl6型E6和E7基因扩增引物,采用PCR法扩增15例宫颈癌组织中HPV16 E6和E7片段,将PCR产物克隆到TA载体,进行序列测定.通过Sequencer、Bioedit、Mega等生物学软件对E6和E7基因进行核苷酸和氨基酸序列分析.结果 15例宫颈癌中8例鳞癌检出E6和E7基因,检出率为8/15.2例腺癌、1例腺鳞癌和其他4例鳞癌中均未检出HPV16 E6E7 DNA.8例鳞癌中的4例检出的HPVl6为亚洲类似株,在E6基因178位(T→G,D25E)和E7基因647位(A→G,N29S)发生突变;另外4例为欧洲类似株,其中1例(BJ16)的HPV16在E6基因335位点发生突变(C→T,H78Y).结论 HPV16是致宫颈癌的重要因素;宫颈鳞状细胞癌HPV16感染的发生频率较腺癌和腺鳞癌高;E6基因178位点可能是区分亚洲株和欧洲株的重要位点;E6基因178位点和E7基因647位点是突变频率较高的位点,可能导致HPV16致癌能力发生改变. 相似文献
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运用杂交瘤技术,我们成功地建立了两株能稳定分泌小鼠抗人乳头瘤病毒16E6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,经鉴定单克隆抗体属IgG1k。试验结果表明,所得单克隆抗体仅1与PV16E6融合蛋白反应。不与HPV16E7、L1、L2融合蛋白以及L1-L2真核表达蛋白反尖,也只与Caski细胞反应,不与Hela细胞反应,初步结果说明,该抗体是HPV16E16蛋白特异性的McAb。 相似文献
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利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPVl6)E6E7融合基因(fmE6E7),研制治疗HPVl6相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后,插人真核表达质粒获得pVRl012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫,5lCr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性Cytotoxic T lymphocyte,CTL),间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,与单独野生型E7基因免疫相比,E6E7融和基因可更好的活化CTT反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPVl6治疗性DNA疫苗的靶基因。 相似文献
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聚合酶链式反应快速检测E型肉毒神经毒素基因 总被引:2,自引:0,他引:2
目的E型肉毒中毒是人类肉毒中毒的主要型别之一,本试验旨在建立用于E型肉毒梭菌鉴定的PCR方法。方法用人工合成的寡核苷酸引物扩增E型肉毒神经毒素基因的一段368bp的DNA片段,快速检测E型肉毒神经毒素基因,对梭状芽胞杆菌属的40株保藏菌株及33份土壤标本进行了鉴定,用E型肉毒梭菌CMCC(B)64501对其灵敏度进行了检查。结果从所有E型神经毒素原性菌株或标本均能扩增出目的片段,且能用特定的限制性内切酶切成相应的片段。其它菌株均未能扩增出目的片段。灵敏度试验可从30个菌体扩增出目的片段。结论此方法用于E型神经毒素原性梭菌的鉴定具有较高的灵敏度及特异性。 相似文献
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实时聚合酶链反应熔解曲线分析检测APC基因突变 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法。方法采用SYBR Green I为实时聚合酶链反应(PCR)指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因(270bp),并通过熔解曲线分析确定产物;再以上述片段为模板扩增特定长度的小片段(40/35bp),以0.5℃/step的速率,获得从65℃到99℃的熔解曲线以检测APC-1309位5bp缺失突变。结果临床标本检测结果表明:18例结直肠肿瘤患者石蜡组织标本中检出APC_1309位5bp缺失突变7例,20例正常人外周血标本检测结果均为阴性。结论实时PCR熔解曲线法设计简单,操作简便,结果可靠,可望应用于临床APC基因突变检测,并可推荐用于其他基因突变的检测。 相似文献
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We describe a simplified and sensitive polymerase chain reaction (PCR)-based method for the quantification of low-abundance RNA for mouse cytokine receptor genes. Accurate quantification is achieved in a two-step protocol which uses a synthetic RNA as an internal standard. The proper titration of the amount of mRNA molecules is followed by a kinetic analysis which ensures precise measurement. This quantitative PCR method provides a rapid and reliable way to quantify the amount of cytokine receptor mRNA in samples containing as few as 1000 molecules of RNA for a cytokine receptor target gene. We illustrate our approach by quantifying mRNA levels for two families of cytokine receptor genes in the fetal liver and bone marrow of the mouse. Our results reveal early and abundant expression of the genes encoding the signal transducing subunits interleukin-2 receptor γ and gp130. Their expression seems to precede that of the genes encoding the specific subunits of these interleukin receptor systems. 相似文献
14.
C Lynas S D Cook K A Laycock J W Bradfield N J Maitland 《The Journal of pathology》1989,157(4):285-289
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目的 应用聚合酶链反应,检测人乳头状瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)基因与结肠癌及癌区周边组织的相关性。方法 将结肠镜检获取的72例活检标本进行病理检测,其中结肠癌46例,非癌26例(结肠癌周边组织标本10例),标本用蜡块包埋与固定液两种方法固定,用聚合酶链反应(PCR)特定DNA片段体外扩增法。结果 结、直肠癌人乳头状瘤毒基因检测阳性率434%,结、直肠癌周边组织阳性率10%,非癌组织阳性率为0%。结论 癌区组织基因(HPVs)检测率较高,与非癌对照组相比,差异有显著性(P<0.05),癌组织中HPVs主要以HPV1633型和HPV18型为主,统计学分析表明结、直肠癌的发生、发展与HPV感染有一定的相关性,尤以HPV16型关系更为密切。 相似文献
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Angela Rohwedder Oliver Keminer Carlo Hendricks Jrg Schaller 《Journal of medical virology》1997,51(2):119-125
Paraffin sections of 11 formalin-fixed trichilemmomas were investigated for the presence of human papillomavirus (HPV) DNA by the polymerase chain reaction (PCR) with the degenerated consensus primer pairs. PCRs were conducted with different annealing temperatures. When the annealing temperature was reduced from 55°C to 50°C, amplification products of the expected size were obtained for all 11 cases investigated. Determination of the HPV type was performed by cloning and sequencing of the amplification products. The sequence analysis of the eleven cloned amplicons gave the following data: based on sequence comparison with published amino acid sequences, the best homology was found to epidermodysplasia verruciformis (EV)-associated HPVs (supergroup B). In four specimens an HPV type 23 related type was found; five specimens contained HPV sequences which did not match with one of the known HPV types, but had the closest homology to HPV types 15, 17, and 37. Three of the HPV variants which had not been characterised, displayed identical sequences. Two additional HPV amplification fragments displayed 100% homology to HPV-6b. These results demonstrate, for the first time, the presence of HPV DNA in trichilemmomas. The sequence data suggest that HPV variants or types in trichilemmoma are members of the EV-associated HPV supergroup B. J Med Virol 51:119–125, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc. 相似文献
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子宫颈癌组织中HPV16癌基因及p53基因的检测 总被引:4,自引:0,他引:4
利用HPV16E6、E7基因特异性引物,PCR技术及抗癌基因p53外显子7特异性引物,PCR-SSCP技术对35例进展期子宫颈癌组织进行研究,发现:(1)35例标本中HPV16E6、E7DNA的总检出率为71.42%(25例),其中同时检出E6、E7为31.42%(11例),另外8.57%及31.42%(3例及11例)仅分别检出E6、E7序列。(2)全组未见1例有p53基因外显子7的点突变及等位基因缺失。该结果说明HPV16与本地区妇女子宫颈癌发生有密切关系,并且癌组织中HPV16E6、E7亚基因的分布是不均一的,p53基因外显子7的改变并不常见。在实验中我们还建立了使用生物素标记的dUTP进行PCR-SSCP的技术。 相似文献
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目的 解决因TTV在样本中的水平极低而导致从高背景核酸样本中检测TTV DNA存在非特异性扩增的问题。方法 采用辛和素生物素系统将TTV特异的核酸片段包括被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的TTV DNA,从而建立特异核酸捕获-PCR检测TTV DNA方法,并以10份血清(4份TTV DNA阳性)和肝组织配对标本为对象与抽提法进行比较,阳性产物进行DNA序列分析,最后评价特异核酸捕获-PCR的特异性。结果 抽提法在血清和肝组织中的检出率分别为4/10和9/10。RFLP初步分析产物具有特异性,但经DNA序列分析证实的检出率仅分别为2/10和3/10。采用特异核酸捕获-PCR检测的结果与抽提法经DNA序列分析后的结果一致,获得的电泳条带也更为清晰。结论 特异核酸捕获-PCR方法能显著提高TTV DNA检测的特异性,特别是针对高背景核酸标本,表明该方法在其他低水平病原体检测及高背景核酸样本检测中也有广泛的应用前景。目前广泛采用的TTV DNA检测方法如不进行DNA序列分析则可导致过高地估计了TTV的感染率。. 相似文献
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间接法原位PCR检测喉鳞癌组织HPV感染 总被引:1,自引:1,他引:0
建立稳定的原位PCR方法,并探讨HPV感染与喉鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂变、PCR和间接原位PCR技术,检测了50例喉鳞癌中的HPV感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性者6例(12%),原位杂交阳性者13例(26%),PCR阳性者10例(20%),原位PCR阳性者17例(34%),综合上述方法的检出率为42%(21例)。结论HPV感染与喉癌有着明显的关系,间接原位PCR在检测HPV感染 相似文献