VAPB在肝癌中的表达与促增殖作用研究

目的:研究囊泡相关膜蛋白相关蛋白B(VAPB)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖与凋亡中的调控作用。方法:(1)分别用生物信息学分析与免疫组化实验,分析VAPB在肝癌癌组织与癌旁组织中的表达。(2)用实时荧光定量PCR(RT-PCR)与蛋白质印迹实验,检测肝癌细胞株与正常肝细胞株中VAPB的表达。(3)分别用MTS细胞活力实验与EdU细胞增殖实验,检测通过转染siRNA下调VAPB表达对肝癌细胞生长的影响。(4)用流式细胞仪检测通过转染siRNA下调VAPB对肝癌细胞凋亡的影响。结果:(1)与癌旁组织相比,VAPB在肝癌组织中的表达显著升高。(2)与正常肝细胞株相比,VAPB在4株肝癌细胞株中的表达均显著上调。(3)下调VAPB表达后,肝癌细胞的活力与增殖能力均被显著抑制。(4)下调VAPB表达诱导了肝癌细胞的凋亡。结论:肝癌组织与细胞中VAPB表达异常升高,VAPB可促进体外肝癌细胞的活力与增殖能力,同时抑制肝癌细胞的凋亡。     

急性运动轴索型神经病患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的采用蛋白质组学技术研究急性运动轴索型神经病(AMAN)患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响。方法分别以16例AMAN患者和16名健康献血者的血清对原代培养大鼠脊髓运动神经元进行干预,24 h后行双向凝胶电泳,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定神经元发生变化的蛋白,表达水平上升或下降超过30%的点判定为差异蛋白质点。结果 AMAN患者血清干预与健康献血者血清干预的大鼠脊髓运动神经元比较,有21种差异表达蛋白,其中内质网蛋白29、不均一核糖核蛋白H、蛋白酶体α亚基1、3-磷酸甘油醛脱氢酶、电压门控阴离子选择性通道蛋白1为凋亡相关蛋白。结论在AMAN患者血清作用下,大鼠脊髓运动神经元的细胞凋亡相关蛋白表达发生了变化。     

急性运动轴索型神经病患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 采用蛋白质组学技术研究急性运动轴索型神经病(AMAN)患者血清对大鼠脊髓运动神经元凋亡相关蛋白表达的影响.方法 分别以16例AMAN患者和16名健康献血者的血清对原代培养大鼠脊髓运动神经元进行干预,24 h后行双向凝胶电泳,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定神经元发生变化的蛋白,表达水平上升或下降超过30%的点判定为差异蛋白质点.结果 AMAN患者血清干预与健康献血者血清干预的大鼠脊髓运动神经元比较,有21种差异表达蛋白,其中内质网蛋白29、不均一核糖核蛋白H、蛋白酶体α亚基1、3-磷酸甘油醛脱氢酶、电压门控阴离子选择性通道蛋白1为凋亡相关蛋白.结论 在AMAN患者血清作用下,大鼠脊髓运动神经元的细胞凋亡相关蛋白表达发生了变化.     

内质网应激及蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12信号通路介导的细胞凋亡在糖尿病肾病发病机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症,主要表现为血糖升高、蛋白尿、肾功能下降,也是患者后期肾功能衰竭的主要原因。临床上主要通过控制血压和血糖水平来抑制DN的进展,但效果不佳。现有研究发现,内质网应激及其介导的细胞凋亡是引起DN的重要原因,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)信号通路在其中发挥关键性作用,其中PERK是内质网应激启动的标志,CHOP是内质网应激由抗凋亡作用开始转为促凋亡作用的重要分子,caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的最终执行分子。本文就内质网应激及相关信号通路介导的细胞凋亡在DN发病机制中的作用进行综述。     

内质网应激与支气管哮喘

内质网应激是细胞对于内源性应激的一种适应性反应,由未折叠蛋白所诱导,其机制被称为未折叠蛋白反应(UPR)。哺乳动物UPR包含3个经典的分支通路,分别以胰腺内质网激酶(PERK)、需肌醇跨膜激酶/核酸内切酶1(IRE1)和活化转录因子6(ATF6)作为近端效应物,能够促进蛋白质折叠和转运,停止蛋白质的翻译合成,降解清除错误蛋白,并可启动凋亡程序诱导不能修复错误蛋白的细胞凋亡,从而维持内环境与组织细胞功能的稳态。支气管上皮内含多种蛋白质合成分泌旺盛的细胞类型,本身易出现内质网应激;支气管哮喘时,气道炎症状态等因素的存在被认为可以诱发UPR,并与气道炎症反应互为因果,交互作用。目前的研究认为,在支气管哮喘发病中,气道上皮细胞的钙稳态失调、透明质酸与黏蛋白的异常分泌、细胞因子对炎细胞的募集作用以及免疫调节状态的异常等环节与内质网应激存在密切的关系。本文即对内质网应激与哮喘的相关研究作一综述。     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B及其抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)作为蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)中一员,在胰岛素和瘦素信号转导中发挥关键的负调控作用。最近研究表明,PTP1B与内质网(ER)应激、胰岛β细胞增殖以及胰岛素分泌有重要的关联;且与2型糖尿病(T2DM)和肥胖症的发生、发展密切相关,其靶向抑制剂已成为治疗这些代谢性疾病的研究热点。本文以PTP1B的结构特点及其与T2DM和肥胖症的关系为基础,根据结合位点将PTP1B抑制剂进行分类,并对其最新研究进展进行综述,旨在为靶向PTP1B的抗T2DM和肥胖症药物研发提供参考。     

YAP调节细胞增殖和凋亡作用机制的研究进展

Hippo信号通路首先在果蝇属中发现,在哺乳动物高度保守,通过调节细胞增殖和凋亡维持器官大小和机体内环境的稳态。Yes相关蛋白(YAP)是Hippo信号通路的关键效应分子,作为转录共激活因子扮演着癌基因和抑癌基因的矛盾角色。YAP去磷酸化后活化,入核参与细胞增殖和凋亡的调节;其中涉及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、Wnt/β联蛋白(Wnt/β-catenin)等信号通路。该文对哺乳动物Hippo-YAP信号通路调节细胞增殖和凋亡作用机制的研究进展予以综述。     

T淋巴细胞内质网应激在脓毒症中的作用

T淋巴细胞凋亡在脓毒症发生、发展过程中起重要作用,与脓毒症免疫抑制密切有关,如何减少T淋巴细胞凋亡是影响脓毒症患者预后的重要因素。内质网(endoplasmic reticulum, ER)是重要的细胞器,负责促进蛋白质的折叠、组装,并参与多种生理活动。在应激和炎性条件下,内质网失去功能稳态,被称为内质网应激(ER stress)。在内质网应激期间,未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)被激活,使内质网功能恢复到正常的平衡。然而,一旦应激超过UPR的代偿能力或延长,就会引发细胞损伤、甚至凋亡。越来越多的证据表明,内质网应激是导致脓毒症T淋巴细胞凋亡的重要病理生理机制之一,本文就脓毒症中T淋巴细胞内质网应激和UPR信号通路的相关研究进展进行综述,讨论T淋巴细胞内质网应激作为脓毒症免疫治疗新靶点的临床意义和价值。     

原发性干燥综合征与未折叠蛋白反应

原发性干燥综合征(primary sjgren′s syndrome,pSS)是一种主要侵犯外分泌腺的慢性自身免疫性疾病,治疗方法多为经验性用药,缺乏循证医学的证据。有研究认为pSS本质上就是一种上皮细胞炎,唾液腺上皮细胞(salivary gland epithelial cells, SGECs)在pSS中起着重要的致病作用,它是内质网伸展最广的细胞之一,当细胞受损或处于压力条件下时,便会诱发内质网应激,蛋白质错误折叠率和未折叠率增高,细胞为恢复正常的生理功能,保持内质网的稳态,便会激活相关凋亡通路,诱导细胞凋亡,产生未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。UPR通常会激活3条信号通路:PERK、IRE1和ATF6,以帮助内质网蛋白质的正确折叠,使内质网功能在应激的早期处于一个正常生理平衡状态。当内质网长期、连续应激时,便会激活多条凋亡信号,持续的凋亡会引起细胞的死亡和代谢紊乱,造成严重的损伤。     

内质网应激与膜性肾病

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是调节蛋白质合成、折叠及组装的重要场所。各种原因如ER中Ca2+缺乏均可引起ER功能紊乱,使蛋白质从ER向高尔基体的转运受阻[1],最终引发内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。细胞通过激活未折叠蛋白反应(the unfolded protein response,UPR)保护ERS引起损伤的细胞,强烈或持久的ERS又可启动UPR的促凋亡信号。肾病尤其是膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的发生发展与ERS密切相关,文中主要阐述ERS在MN发病机制中的作用。     

上皮性卵巢癌AIB1蛋白表达水平及其与凋亡相关性的初步研究

目的观察AIB1蛋白在上皮性卵巢癌中的表达,并探讨其与凋亡调节蛋白P53、Bcl-2表达之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测24例正常卵巢、24例卵巢良性肿瘤、18例卵巢交界性肿瘤及69例上皮性卵巢癌中AIB1、P53、Bcl-2蛋白的表达,同时测定卵巢癌中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态,分析AIB1的表达与P53蛋白、Bcl-2蛋白、ER、PR的表达间有无相关性。结果1AIB1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中阳性表达率分别为8.33%、25.00%、38.89%、65.22%,卵巢癌中AIB1蛋白的阳性表达率高于其他卵巢组织(P<0.05)。AIB1蛋白在卵巢癌中过表达的发生率为36.23%,低分化、临床晚期、淋巴结受累的病例较之中、高分化、临床早期、无淋巴结转移的病例AIB1蛋白的过表达发生率升高(P<0.05)。2相关性分析显示AIB1蛋白与P53、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.342,P=0.004;r=0.311,P=0.009),与ER、PR的表达无相关性。结论上皮性卵巢癌中,AIB1蛋白的表达率明显升高,与卵巢癌的恶性生物学行为关系密切。AIB1蛋白可能通过非激素依赖途径影响了凋亡调节蛋白如P53、Bcl-2的表达,从而参与了上皮性卵巢癌的发生发展过程。     

周围神经65KD蛋白对培养鼠胚脊髓运动神经元的影响

目的：为了解周围神经损伤后期远侧端特异性表达的６５ＫＤ蛋白对鼠胚脊髓神经元的影响。方法：选用ＳＤ大鼠坐骨神经横断后２周的动物模型，自然凝胶系统电泳分析损务后神经远侧端中的蛋白组分，将６５ＫＤ蛋白区带胶条与１４天鼠胚脊髓运动神经元联合培养，结果：损伤后２周的坐骨神经元侧端中特异性地出现表达增强的６５ＫＤ蛋白；与含６５ＫＤ蛋白区带胶条联合培养的脊髓运动神经元细胞存活数量多，突起生长旺盛，结论：坐骨神经     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响

目的 研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响.方法 将培养7 d的大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、正常培养+血晶素组(C+H组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素组(D+H组).C组正常培养方法 培养.C+H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24 h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24 h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Mirol、Miro2和Milton蛋白表达,神经元凋亡的检测.结果 C+H组神经元H0-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Mirio2和Milton蛋白表达高于C组(P＜0.01),神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学差异(P＞0.05);D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于C组(P＜0.01),神经元存活率低于C组(P＜0.01),神经元凋亡率高于C组(P＜0.01);D+H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于D组(P＜0.01),神经元存活率高于D组(P＜0.01),神经元凋亡率低于D组(P＜0.01).结论 HO-1增加海马神经元线粒体运动调节蛋白Mirol、Miro2和Milton的表达,抑制神经元的凋亡.     

未折叠蛋白应答通路调控机制的研究进展及其临床应用前景

未折叠蛋白应答(unfolded protein response,UPR)是应激条件下细胞中内质网的一种保护性反应.在哺乳动物中,其主要通过内质网跨膜蛋白(IRE1、PERK及ATF6)转导的3条信号通路发挥效应,并依赖相关蛋白、因子进行正负反馈调控,以维持细胞功能正常.如果应激持续存在,UPR调控失衡,诱导细胞凋亡或死亡,引发相关疾病.不少研究选取UPR通路中的关键因子作为疾病治疗靶点,取得一些进展,提供了新的临床思路,具有广阔的应用前景.     

内质网应激与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的相关性研究

目的 探讨CAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、海马葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和caspase-12在蛛网膜下腔出血（SAH）后的表达及其在早期脑损伤（EBI）中的作用。方法 选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组（6只）、假手术组（36只）与SAH组（36只）。将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72h,采用简单随机抽样法选取6只大鼠,神经功能缺陷评分后处死。比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、CHOP、GRP78、caspase-12相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平、脑水肿严重程度及神经功能缺陷评分情况。结果 通过Western blot法检测CHOP、GRP78和caspase-12的表达,SAH组与空白对照组、假手术组在12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,且在SAH后24h达到峰值。TUNEL法检测大鼠海马区神经元凋亡显示,SAH组与对照组、假手术组在6、12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,在电镜下,SAH后24h节点可见明显的神经元凋亡。SAH组12、24、48、72h的神经功能缺陷评分及脑水肿程度明显重于空白对照组及假手术组,在24h达高峰,差异均有统计学意义（P<0.05）。SAH组大鼠的CHOP、GRP78和caspase-12 Western blot法检测结果与脑水肿严重程度及神经元凋亡结果之间呈极显著正相关,与神经功能缺陷评分呈极显著负相关（P<0.05）。结论 SAH后72h内确实造成了EBI,同时发生了内质网应激,内质网应激与EBI严重程度之间均呈正相关,揭示内质网应激在SAH后EBI的病理过程中发挥了重要作用。     

泛素折叠修饰因子1作用的研究进展

泛素折叠修饰因子1(Ufm1)是最近发现的一种类泛素蛋白,其三级结构与泛素十分类似,但其氨基酸序列与泛素只有16%的相似性。Ufm1及其修饰系统广泛、稳定地存在于多细胞生物中。Ufm1结合到靶蛋白需要通过一系列的酶级联反应,首先Ufm1被Uab5激活,然后转移给Ufc1及Ufl1,最后Ufm1与靶蛋白结合,并对其进行加工、修饰。Ufm1及其修饰系统参与了内质网应激及其诱导的凋亡,同时也参与了细胞周期、细胞存活、脂肪酸β氧化等生物过程的调控,为进一步研究Ufm1的功能提供了新的方向。     

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子（KCl25mmol*L-1）的培养基中转移至低钾培养基（KCl5mmol*L-1）中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段,SAPK/JNK分析盒测定c-JunN-末端蛋白激酶(JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB203580通过抑制细胞凋亡,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元,c-Jun表达和磷酸化水平升高了,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB20358025μmol*L-1的低钾培养基中,c-Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB203580抑制JNK活性,降低c-Jun的磷酸化而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

尼膜同对戊四氮致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p~(53)蛋白表达的影响

目的 :探讨尼膜同对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与 p53蛋白表达的影响。方法 :采用戊四氮致痫大鼠模型 ,以原位末端标记 ( TUNEL)法检测凋亡细胞 ;免疫组化法检测 p53蛋白。观察大鼠癫痫发作后 48h其海马 CA1区神经细胞凋亡和 p53蛋白表达变化及尼膜同对它们的影响。结果 :戊四氮致痫后 ,大鼠海马 CA1区凋亡细胞和 p53蛋白表达均明显增加 ,p53蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r=0 .846,P<0 .0 0 1 ) ;尼膜同干预后 ,凋亡细胞数及 p53蛋白表达均显著性降低 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :尼膜同对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制 p53蛋白表达而实现的     

血管内皮生长因子防止脊髓运动神经元凋亡的研究

目的研究成年大鼠脊髓损伤后血管内皮生长因子对运动神经元的神经保护作用以及Caspase-3 mRNA表达与运动神经元凋亡的关系。方法用72只SD大鼠制作成脊髓损伤模型,随机分为对照组、应用VEGF组和VEGF拮抗组。伤后6、12、24h和3、7、14d取材。应用原位杂交、TUNEL技术研究运动神经元的凋亡。结果Caspase-3 mRNA在VEGF组脊髓组织中的表达下调,在VEGF拮抗组中表达增高。TUNEL阳性细胞计数显示脊髓损伤后VEGF拮抗组有多量神经元丢失,而VEGF组神经元丢失数量明显减少。结论VEGF可以防止成年大鼠脊髓损伤后运动神经元的凋亡,其作用可能是由Caspase-3介导的。     

丙戊酸钠对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的:观察丙戊酸钠对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法:采用清洁级SD大鼠30只,行右坐骨神经横形切断后即刻原位吻合术,制成周围神经损伤模型后,随机分为丙戊酸钠口服组(A组)、生理盐水对照组(B组)。分别于术后1,4,7,14,28 d取材,应用TUNEL法检测细胞凋亡数,用免疫组化技术检测脊髓运动神经元Bcl-2的表达,并对脊髓凋亡细胞以及阳性运动神经元进行计数。结果:坐骨神经切断后4,7,14 d,实验组脊髓运动神经元Bcl-2吸光度明显高于对照组(P<0.05);坐骨神经切断后7,14 d,实验组脊髓神经元凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。结论:丙戊酸钠对鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元具有保护作用。