细胞因子激活的巨噬细胞对细胞内利什曼原虫的杀伤性

采用重组γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）、α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）和白细胞介素－３（ＩＬ－３）诱导巨噬细胞的活化，观察其对杜氏利什曼原虫的杀伤活性。结果，ＩＦＮ－γ（４００００Ｕ／Ｌ）处理巨噬细胞４８小时后，感染社氏利什曼原虫的巨噬细胞百分率为３４％，每个受染巨噬细胞内利什曼原虫无鞭毛体数平均为３．９个；而未经处理的对照组巨噬细胞，前者为６２％，后者平均为６．８个。两组数据差异有显著意义。ＩＦＮ－γ加ＴＮＦ－α（４００００Ｕ／Ｌ）处理巨噬细胞４８小时后，其巨噬细胞受染率仅为１６％，而每个受染细胞内平均原虫数目仅１．２个。但ＩＬ－３（１／１００）单独或与ＩＦＮ－γ联合均不能提高巨噬细胞的杀原虫作用。提示重组的ＩＦＮ－γ或ＴＮＦ－α均可激活巨噬细胞，两者联合对巨噬细胞的活化具有协同、增强作用。     

细胞因子激活的巨噬细胞对细胞内和利什曼原虫的杀伤性

采用重组γ－干扰素、α－肿瘤坏死因子和白细胞介素－３诱导巨噬细胞的活化，观察其对杜氏什曼原虫的杀伤活性。结果，ＩＦＮ－γ处理巨噬细胞４８小时后，感染杜氏利什曼原虫的巨噬细胞百分率为３４％，每个受染巨噬细胞内利什曼原早无鞭毛体数平均为３．９个；而未经处理的对照组巨噬细胞，前者为６２％，后者平均为６．８个。     

IL-2基因修饰对巨噬细胞杀瘤活性的影响

目的;观察ＩＬ－２基因修饰对小鼠腹腔巨噬细胞免疫效应功能的影响。方法：通过重组腺病毒介导,在体外将ＩＬ－２基因转染至小鼠腹腔巨噬细胞,检测ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平及其杀伤活性。结果：ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平显著提高,对巨噬细胞敏感株Ｌ１２１０细胞以及Ｒｅｎｃａ细胞的杀伤活性增强。结论：ＩＬ－２基因居噬细胞的细胞毒效应。本研究为ＩＬ－２     

腺病毒介导的细胞因子基因转染对小鼠巨噬细胞功能的影响

探讨重组腺病毒介导的细胞因子基因转染对巨噬细胞体外抗肿瘤免疫功能的影响。方法通过重组腺病毒的介导，将白细胞介素４（ＩＬ－４）及巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）基因转染至小鼠腹腔内巨噬细胞，并检测其上清中ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ的水平；同时检测基因转染后巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，及其分泌的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、ＩＬ－１、一氧化氮（ＮＯ）水平与主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）Ⅱ类分子的表达情况。结果基因转染后４小时，巨噬细胞即可表达较高水平的ＩＬ－４和（或）Ｍ－ＣＳＦ，转染后１８小时，巨噬细胞上清中ＩＬ－４水平为９５Ｕ／ｍｌ，Ｍ－ＣＳＦ为３５Ｕ／ｍｌ；转染后巨噬细胞杀伤活性明显升高，两者联合应用并以内毒素脂多糖（ＬＰＳ）协同刺激时，这一升高更为明显；其上清中ＴＮＦ、ＩＬ－１及ＮＯ水平均有不同程度的升高；ＭＨＣⅡ类分子的表达在ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ联合转染组有所增强。结论巨噬细胞中ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ基因的表达可以增强其抗肿瘤免疫功能。     

NKC、IL-2、IL-6和TNFα在海洛因依赖者戒毒过程中的变化及意义

为了解在强制戒毒过程中,外周血自然杀伤细胞（ＮＫＣ）活性及单个核细胞分泌的ＩＬ－２ 活性变化,以及外周血清中ＩＬ－６ 及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）水平的变化,对５１ 例吸毒成瘾者采用生物活性测定法（ＭＴＴ）测定了ＮＫＣ活性及ＩＬ－２活性,用ＥＬＩＳＡ法测定了外周血清中ＩＬ－６ 及ＴＮＦα水平。结果：海洛因依赖者ＮＫＣ３０．１１±５．２％ ;ＩＬ－２ ８．０６±１．６６ＩＵ／ｍ ｌ;ＩＬ－６ ６１．１７±１２．０７ｐｇ／ｍ ｌ;ＴＮＦα９１．８３±１９．１９ｐｇ／ｍ ｌ。正常对照上述各项指标分别为４４．８９±４．７５％ ,１５．９１±３．８３ＩＵ／ｍ ｌ,２２．１８±９．３１ｐｇ／ｍ ｌ,３０．５５±１１．９４ｐｇ／ｍ ｌ。经强制戒毒后ＮＫＣ和ＩＬ－２ 活性及ＩＬ－６ 和ＴＮＦα水平逐渐恢复正常,与戒毒时间呈明显相关。     

非胰岛素依赖性糖尿病患者血中IL─2和TNF─α水平评价

测定ＮＩＤＤＭ患者５０例,正常对照组６０例的血清ＩＬ－２和ＴＮＦ－α值,结果ＮＩＤＤＭ患者血中ＩＬ－２和ＴＮＦ－α值分别为６．９３±３．４２ｎｇ／１和１．０２±０．６５ｎｇ／１．较正常对照组稍低,但两组差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示早期、无并发症的ＮＩＤＤＭ患者无显著免疫功能紊乱,ＩＬ－２,ＴＮＦ－α等细胞因子在糖尿病特别是ＮＩＤＤＭ的发生,发展中所起作用有待进一步探讨。     

4种细胞因子对K562/S及其耐药细胞株K562/A02积蓄柔红霉素的影响

目的通过检测４种常用细胞因子对白血病细胞株Ｋ５６２／Ｓ及其多药耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素（ＤＮＲ）能力的影响,评价细胞因子在抗白血病细胞多药耐药性方面的应用前景。方法用流式细胞仪及荧光法检测重组人α－干扰素（ＩＦＮ－α）、白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、重组人粒－单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对Ｋ５６２／Ｓ及Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素能力的影响。结果ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＧＭ－ＣＳＦ作用后Ｋ５６２／Ｓ及Ｋ５６２／Ａ０２细胞株对柔红霉素的积蓄无改变,而ＩＦＮ－α可显著提高耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＤＮＲ浓度,在１５０ｍｉｎ时升高了４.０１倍（Ｐ＜０.０５）。结论小剂量（５００Ｕ／ｍｌ） α－干扰素作用后,多药耐药细胞株 Ｋ５６２／Ａ０２对抗肿瘤药物ＤＮＲ的积蓄作用大大提高,提示ＩＦＮ－α具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用。     

多发性硬化患者外周血单个核细胞IL—2,IFN—γ和TNF—αmRN…

应用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）和狭缝印迹分子交发技术，研究１７例多发性硬化（ＭＳ）患者外周血单个核细胞ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ表达。结果发现存３种细胞因子的ｍＲＮＡ表达的高于健康对照组，治疗后病程处于稳定期的ＭＳ患者ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ表达恢复正常水平，但ＩＬ－２ｍＲＮＡ仍保持高水平，此结果表明炎性细胞因子（ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α）参与ＭＳ发病过程，并可作为     

静脉丙种球蛋白地小鼠病毒性心肌炎T细胞亚群,NK细胞及部 …

为探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）免疫发病机理及静脉丙种球蛋白（ＩＶＩＧ）治疗ＶＭＣ的作用机理,将ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、ＩＶＩＧ保护组及ＩＶＩＧ治疗组,观察ＩＶＩＧ对小鼠脾脏Ｔ细胞亚群、ＮＫ细胞、ＩＬ－１、ＩＬ－２及外周血ＴＮＦ活性的影响。结果：与正常对照组比较,病毒模型组ＮＫＣ活性及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８均明显降低,ＩＬ－１、ＩＬ－２及ＴＮＦ活性明显升高,而ＩＶＩＩＧ保护组一     

LBP2对大鼠免疫功能影响的体外实验研究

研究了ＬＢＰ２（ｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－２）对ＳＤ大鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）功能的影响，以探讨ＬＢＰ２的免疫调节机制．ＭΦ吞噬中性红试验研究表明，ＬＢＰ２在体外具有浓度（０３２～２０ｍｇ／Ｌ）依赖性增强大鼠腹腔ＭΦ吞噬中性红的能力．另外，采用生物活性检测法测定了细胞因子的水平，将大鼠ＭΦ用ＬＰＳ（１０ｍｇ／Ｌ）和ＬＢＰ２共同孵育１８～２４ｈ后，培养上清及细胞内ＩＬ－１和ＴＮＦ水平均随ＬＢＰ２浓度的增加而增加，表明ＬＢＰ２对ＭΦ合成和释放ＩＬ－１，ＴＮＦ具有明显促进作用．ＬＢＰ２对ＭΦ功能的影响可能是其免疫调节作用的机制之一．     

抗杜氏利什曼原虫单克隆抗体识别抗原分子的检测

本文报道用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法,对杜氏利什曼原虫新疆株前鞭毛体中McAbs识别的抗原成分进行了检测。我们制备的抗杜氏利什曼原虫新疆株McAbs(A-9、A-11、C-11、E-12和H-10)共识别7条特异性抗原区带,抗原分子量分别为77000、74000、59000、54000、48000、43000和41000。     

人参炔醇重塑巨噬细胞表型调控乳腺癌细胞生物学行为

目的: 探讨人参炔醇对巨噬细胞表型和功能的调控作用及对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法: 用人参炔醇处理4T1乳腺癌细胞,观察各项生物学行为变化;用4T1乳腺癌细胞培养上清液预处理RAW264.7 巨噬细胞系48 h,诱导其向M2型巨噬细胞极化;极化后的巨噬细胞再分别经不同浓度人参炔醇(0,8,16 μg/mL)处理24 h,用qRT PCR、蛋白质印迹、流式细胞术、ELISA法联合检测各组表型、抗原递呈相关分子MHCⅡ类分子、CD80、CD86表达改变、分泌谱变化,以及细胞系迁移、侵袭等。结果： 与0 μg/mL组相比,乳腺癌细胞系经8,16 μg/mL人参炔醇处理后,细胞增殖率明显降低(P均＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P均＜0.05),癌细胞趋化作用减弱; M2型巨噬细胞经16 μg/mL人参炔醇刺激后,细胞表型逆转,Arg 1表达明显降低(P均＜0.01),iNOS表达明显增加(P均＜0.01),MHCⅡ、CD80、CD86表达升高;并伴随IL 1β、TNF α表达升高(P均＜0.01),IL 4、IL 8、IL 10表达降低(P均＜0.05);经人参炔醇处理的巨噬细胞能够明显减少乳腺癌细胞的迁移与侵袭。结论： 人参炔醇可重塑巨噬细胞表型和功能,从而间接改变乳腺癌细胞生物学行为。     

外周血巨噬细胞功能状态检测方法的建立

目的：运用荧光标记的抗细胞表面抗原和抗细胞因子抗原，结合固定、破膜处理技术，建立四色荧光染色法流式细胞术检测巨噬细胞功能状态的方法。方法：应用流式细胞术检测了l例肝素正常对照，l例肝素抗凝的慢性活动性乙型肝炎外周血(PBMC)CDl4^ 巨噬细胞的吞噬率以及前向角光散射(细胞大小)FSC值、侧向角光散射(颗粒度)SSC值、细胞话化相关表面抗原(CD69)、核细胞增殖相关抗原(Ki—67)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达率。结果：SSC、吞噬率、CD69、Ki—67和TNF—α表达率在同一样本表达水平一致。结论：采用流式细胞术检测细胞颗粒度、吞噬率、Ki—67和TNF—α的表达率，是又一灵敏、快速、客观评价外周血CD14^ 巨噬细胞功能状态的方法。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

结核分枝杆菌higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫机制的研究

  目的  探究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫的作用。  方法  从Mtb H37Rv基因组上扩增获得目的基因,与载体连接后电转化入耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, Ms）构建重组菌,对空载菌 Ms_vec和重组菌 Ms_higBA进行应激实验和Raw264.7小鼠巨噬细胞感染实验,检测细菌菌落形成单位（CFU）和细胞因子白介素（interleukin, IL）-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40,干扰素（interferon, IFN）-γ,肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α和诱导型一氧化氮合酶（inductible nitric oxide synthase, iNOS ）的转录水平变化。  结果  成功构建Ms_higBA重组菌。应激实验结果表明higBA确能提高细菌在体外培养特定条件下的生存能力。胞内感染实验证明higBA能提高细菌在巨噬细胞内存活能力,影响细胞因子的转录水平。  结论  Mtb的higBA基因在细菌应激反应和胞内感染免疫中发挥了作用。     

Identification of leishmania by kinetoplast DNA minicircle and cloning of minicircle.

To develop a specific and sensitive method for the identification of Leishmania species and strains in China, Kinetoplast DNA (kDNAs) from 10 different isolates of Leishmania donovani and other species were analyzed by Southern and Dot hybridization. Our results showed significant diversities within different species and strains of Leishmania, which may be a useful criterion for taxonomic analysis. By Southern blot under different stringency conditions, we estimated that there is greater sequence heterogeneity between L. donovani isolated from dog and from human being in the same endemic focus than within the same isolate. Our Dot blotting assay with kDNA probe labelled by photobiotin differentiated species and isolates of Leishmania with as little as 10(4) parasites; so it is useful for field identification. The heterogeneity between isolates of L. donovani from patients in hilly and plain areas may have practical implications for disclosing the difference in endemicity. For the purpose of obtaining a large quantity of homogeneous minicircle, it was cloned and produced by recombinant pUC18.

     

SpA 刺激单核巨噬细胞表达早期致炎因子的实验研究

目的：探讨金黄色葡萄球菌蛋白A（SpA）对单核巨噬细胞表达早期致炎因子 TNF‐α、IL‐1和IL‐6的影响。方法用一定浓度SpA与THP‐1细胞培养不同时间,用MTT法测定SpA对THP‐1细胞增殖的影响;用ELISA测定培养液中TNF‐α、IL‐1和IL‐6的水平;用RT‐PCR检测细胞TNF‐α、IL‐1和IL‐6相应mRNA的表达,并对结果进行统计学分析。结果 SpA对THP‐1细胞增殖的影响与其作用剂量有关。SpA可促进巨噬细胞分泌 TNF‐α、IL‐1和IL‐6及表达相应mRNA ,且呈一定剂量‐效应和时间‐效应关系。SpA刺激巨噬细胞分泌TNF‐α、IL‐1、IL‐6和表达相应mRNA均在12 h达高峰。SpA刺激组TNF‐α、IL‐1和IL‐6的表达和释放均显著升高（P＜0．01）。结论 SpA可明显促进单核巨噬细胞表达和分泌早期致炎细胞因子 TNF‐α、IL‐1和IL‐6。SpA在启动金葡菌性脓毒症及促进其发展中,具有不可忽视的作用。     

燮痹方对佐剂大鼠Th1/Th2型细胞因子的调节作用

目的 :探讨燮痹方抑制大鼠佐剂性关节炎与调节Th1/Th2型细胞因子平衡作用。方法 :采用具有平调寒热、燮理阴阳、通经除痹作用的燮痹方 ,以火把花根为阳性对照组 ;建立AA大鼠模型 ,随机分为燮痹方高剂量组、燮痹方低剂量组、芬必得组、火把花根片组、模型组、正常组 6组 ,观察各组对大鼠关节肿胀度和Th1/Th2型细胞因子及IL 1β、IL 2、TNF α的影响。结果 :燮痹方各组与模型组、火把花根片组、芬必得组相比 ,能显著减轻关节肿胀度 ,明显降低IL 1β、TNF α ,尤其能明显降低IFN γ/与IL 4比值。结论 :燮痹方能提高抗炎作用 ,并与调节Th1/Th2型细胞因子失衡有关。     

负向免疫调节分子TIPE2调控巨噬细胞亚型治疗狼疮小鼠的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子诱导蛋白8样因子-2(TIPE2)调控系统性红斑狼疮(SLE)巨噬细胞极化的 作用和对实验狼疮小鼠的治疗作用.方法 将小鼠分别用活化淋巴细胞来源的DNA(ALD-DNA)诱导狼疮小鼠模型 ,分为AAV-scr组和AAV-TIPE2组,从小鼠尾静脉注射AAV-TIPE2或AAV-scr病毒溶液.检测极化的巨噬细胞 TIPE2 mRNA和蛋白表达、小鼠血清抗dsDNA抗体滴度、尿蛋白及肾病理指数.结果 (1)转染AAV-TIPE2细胞的 TIPE2 mRNA和蛋白表达水平分别是AAV-scr组的(13.5±1.6)倍和(10.8±1.6)倍;(2)AAV-TIPE2组M2巨 噬细胞特异分子MGL+为59.6%,AAV-scr组MGL+细胞为8.4%;AAV-TIPE2与AAV-scr转染的巨噬细胞M2/M1比 值之比为16;(3)重组TIPE2基因的腺病毒相关载体在转染HEK-293中稳定表达,小鼠体内外实验证实AAV-TIPE2能诱导ALD-DNA狼疮小鼠巨噬细胞向M2极化;(4)AAV-TIPE2组血清抗dsDNA抗体、尿蛋白及肾病理等活 动指标明显低于AAV-scr组(P<0.01).结论 TIPE2诱导巨噬细胞极化为M2表型,缓解ALD-DNA诱导狼疮小鼠的 病情,可以作为ALD-DNA诱导狼疮小鼠的一种有前景的治疗方法.     

毒热平注射液对病毒感染小鼠免疫功能的影响

目的研究毒热平注射液对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47（H1N1）感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型,用不同浓度毒热平注射液治疗后,采用MTT法测定脾脏T细胞增殖能力;ConA诱生IFN-γ并用ELISA方法检测INF-γ含量;中性红比色法测定腹腔巨噬细胞的吞噬能力;用ELISA试剂盒测定肺匀浆中细胞因子IL-4及IL-10的含量。结果毒热平注射液各剂量组均能明显上调病毒感染组小鼠的T细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞的吞噬能力和INF-γ活性（P〈0.01）;各剂量组显著下调小鼠肺匀浆的IL-4和IL-10的活性。结论毒热平注射液可通过调节机体的免疫功能发挥抗病毒作用。