THE INFLUENCE OF HUMAN SINGLE CHAIN INTELEUKIN-12 GENE TRANSDUCTION ON THE BIOLOGICAL BEHAVIOR OF HEPATOMA 7721 CELLS

Objective. To investigate the anti-tumor effects of human single chain interleukin-12 (hscIL-12). Method. pcDNA/hscIL-12 recombinant was transfected into human hepatic carcinoma cells (7721 cells) by lipofectin method. The 7721/hscIL-12 cells which secrete hscIL-12 stably, were obtained via G418 selection, and in vitro the influence of hscIL-12 gene transduction on the growth of tumor cells was evaluated by cellcycle analysis. In vivo, genetically engineered 7721 cells (7721/hscIL-12, 7721/pcDNA) and parental cells were implanted into BALB/c nude mice, respectively. 7721/pcDNA and 7721/hscIL-12 groups were divided into two sub-groups on day 8: one was administered with hPBL twice, 6 days at interval; the other was given equalvolume of PBS. Mice were sacrificed on day 26, and spleens and tumors were taken out for histologic assay. Results. hscIL-12 produced stably by 7721/hscIL-12 cells had bioactivity, and it was proved by Western blot, immunocytochemistry, and in situ hybridization. In vitro, compared with 7721 and 7721/pcDNA, the7721/hscIL-12 grew much more slowly. FACS assay showed apparent G1 arrest of 7721/hscIL-12 cells. In ani-mal experiment, on day 8 after inoculation, the tumors of 7721 and 7721/pcDNA group were up to 5 -7mm,while those of 7721/hscIL-12 group were 2 -4mm. When treated with hPBL, the tumor of 7721/hscIL-12 groupdisappeared completely. Histologically, the tumors from 7721/hscIL-12 without hPBL treatment had numerouslymphocyte infiltration, the tumor cells displayed depression looking, atrophy, focal necrosis and apoptosis, whereas the tumors of 7721 and 772l/pcDNA groups grew thrivingly.Conclusion. hsclL-12 transduced 7721 cells could induced significant antitumor immune response which resulted in tumor regression totally when the hPBL was inoculated, and also hscIL-12 has certain effects on mice immune system. These findings suggest that hscIL-12 and hscIL-12 gene therapy might have promising prospects in clinical application.     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖影响

目的 观察沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖的影响.方法 分别应用浓度为3.125、6.250、 12.500、 25.000、 50.000、 100.000及200.000 mg/L的沙利度胺溶液作用于SMMC-7721细胞,同时以等体积的RPMI 1640培养液为空白对照组,MTT法测定各组细胞增殖抑制率.结果 沙利度胺浓度从3.125 mg/L依次增至200.000 mg/L,其对SMMC-7721细胞增殖抑制率从11.70%依次增加至34.21%.25.000 mg/L以上浓度沙利度胺组的吸光度值与空白对照组比较差异有显著性(F=3.093,q=4.02～5.37,P<0.05、0.01).结论 沙利度胺能抑制SMMC-7721细胞的生长,且随着药物浓度的增加,细胞抑制作用逐渐增强.     

山豆根水提物对体外培养人肝癌细胞增殖及代谢的影响

目的:研究中药山豆根(SSCC)提取物对体外培养的人肝癌细胞的抑癌活性。方法:SSCC经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得SSCC提取物。人肝癌SMMC-7721细胞经SSCC提取物处理不同时间后,以MTT法测SSCC提取物对人肝癌细胞线粒体代谢活性的影响,以细胞记数法观察了其对细胞增殖的影响。结果:1经SSCC提取物处理48h,其A570光吸收降为对照组的62.1%,72h为9.64%;2SSCC提取物处理7d后,人肝癌细胞数明显低于对照组;3经SSCC提取物处理24h后,在更换为正常培养基恢复培养过程中,细胞数呈现缓慢增长;4经SSCC提取物处理24h后其有丝分裂指数为对照组的50.6%。结论:中药SSCC提取物能抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,降低线粒体代谢活性。     

甲胎蛋白促人肝癌Bel7402细胞增殖的机制研究

目的:观察甲胎蛋白促肿瘤细胞增殖的信号转导方式。方法:用从人脐带血清中提取的甲胎蛋白,作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,运用MTT染色计数法,流式细胞仪测定细胞周期和3H-脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等指标检测细胞增殖状况;放射受体分析细胞膜上甲胎蛋白受体存在和数目;免疫结合法检测细胞内cAMP浓度;Westernblot分析P21ras蛋白的表达。结果:甲胎蛋白(10～80mg·L-1)作用24h后,人肝癌Bel7402细胞有不同程度的促增殖作用;在人肝癌Bel7402细胞膜上存在2种不同的解离平衡常数(Kd)的甲胎蛋白受体,Kd分别为Kd1=1.3×10-9mol·L-1(89400位点/细胞)和Kd2=9.9×10-8mol·L-1(582000位点/细胞)。AFP能显著提高Bel7402细胞内的cAMP浓度,对P21ras的表达也有明显的促进作用。甲胎蛋白的单克隆抗体能阻断这种作用。结论:甲胎蛋白具有促人肝癌Bel7402细胞增殖的作用,这种作用是由受体介导的cAMP信号转导途径实现的。     

免疫制剂对肝癌大鼠单核巨噬细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响

以ＥＤＮ诱发大鼠实验性肝癌，同时连续１２周分别腹腔注射干扰素α－２ｂ，卡介苗，济南假单胞菌苗和ＩＦＮ和ＢＣＧ二者联用，对照组给予生理盐水。在诱癌过程第８，１２，１６周从同只大鼠体内分离出高纯度的腹腔巨噬细胞，血单核细胞，肺巨噬细胞和脾巨噬细胞，并分别与人肝癌细胞联合培养，采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定免疫制剂在４种效应细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响。     

柴胡提取物对人肝癌细胞和小鼠S-180肉瘤的抑制作用

目的 :研究柴胡水提物对体外培养的人肝癌 SMMC-772 1细胞线粒体代谢活性、细胞增殖及小鼠移植性 S-1 80实体瘤的影响。方法 :中药柴胡 ( BCDC)经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得柴胡提取物。人肝癌 SMMC-772 1细胞经不同浓度柴胡提取物处理不同时间后 ,检测了各实验组和对照组细胞的有丝分裂指数、细胞增殖及线粒体活性几方面的变化。S-1 80肉瘤小鼠连续 9d腹腔注射 3 3 .3 mg/ kg体重 BCDC提取物 ,停药 1 5d后 ,杀死小鼠称量瘤重。结果 :1经 3 55mg/ L BCDC提取物处理人肝癌 SMMC-772 1细胞 2 4 h,其线粒体活性为对照组的 50 .2 6% ,处理 72 h为 2 4 .82 %。2以 3 55mg/ L BCDC提取物处理 7d中 ,人肝癌细胞数分别是血清对照组( FCS)的为 57.5% ,4 5.88% ,3 7.0 6% ,2 8.3 7% ,2 0 .90 % ,1 2 .89% ,1 4.1 8% ;无血清对照组 ( NON)的 65.0 9% ,62 .2 4 % ,56.99% ,4 9.0 8% ,4 0 .78% ,2 6.78% ,2 8.4 1 %。 3经 BCDC提取物处理 2 4 h后 ,即使更换正常培养基 ,人肝癌细胞数在 96h的恢复培养中仍低于处理前的细胞数。 4有丝分裂指数实验组为 0 .3 0 ,对照组分别为 5.3和5.4 ( P<0 .0 0 1 )。 5BCDC提取物对小鼠 S-1 80实体瘤抑制率为 87.2 1 %。     

天花粉蛋白与胂酸基乙酸抑制肝癌细胞SMMC-7721的协同作用

目的:了解天花粉蛋白(TCS)与胂酸基乙酸(ASAC)对SMMC-7721细胞生长的协同抑制效果.方法:不同浓度的两药单独或联合分别作用于生长良好的SMMC-7721细胞24h、48h和72h,然后以MTT比色法测定每组药物对SMMC-7721细胞的抑制率.结果:联合用药组的抑制率比单独用药组更大,在第48h和72h联合用药组抑制率较单药用药组有显著差异.结论:TCS与ASAC这两种促癌细胞凋亡的药物对SMMC-7721细胞生长具有周期协同抑制作用,联合用药可减少用药量,提高抑癌效果.     

LAK细胞对人肝癌细胞及乙型肝炎病毒的杀伤活性

由健康人外周血制备的ＬＡＫ细胞加ｒＩＬ－２体外培养时间分别为４天和７天，其对人肝癌细胞的杀伤活性分别是５８．７％及４３．２％；其对人肝癌细胞所分泌的ＨＢＶ表面抗原和ｅ抗原也有一定的杀灭活性；结果揭示，ＬＡＫ细胞对与肝炎病毒密切相关的肝癌治疗有着潜在的临床意义。     

胂酸基乙酸与10-羟基喜树碱对肝癌细胞 SMMC-7721生长的协同抑制作用

目的:了解胂酸基乙酸(ASAC)与10-羟基喜树碱(10-HCPT)对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的协同抑制效果.方法:两药组合和单药以不同浓度分别作用于生长良好的SMMC-7721细胞,分别在第24h、48h和72h终止作用,以MTT实验测定每组药物对SMMC-7721细胞的抑制率大小.结果:协同作用组比单药组的抑制效果好.在第48h和72h协同组有显著性差异(P<0.05).结论:ASAC与10-HCPT这两种促癌细胞凋亡的药物对SMMC-7721细胞生长具有周期协同抑制作用.     

人类巨细胞病毒感染对U251细胞HOXB1基因表达的影响

目的：通过研究人神经胶质瘤U251细胞株的HOX基因表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对U251细胞HOXBI基因表达的影响，以探讨HCMV致畸的可能机制。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。结果：U251细胞表达HOXBI基因；HCMV感染后，U251细胞HOXBI基因表达明显上调；ATRA能显著上调HCMV感染后U251细胞HOXBI基因的表达。结论：HCMV感染能诱导U251细胞HOXBI基因表达上调，HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肝癌细胞株SMMC7721增殖及DAPK mRNA表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响。方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0μmol/L)的5-Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平。结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F=242.40,P<0.01);半定量RT-PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P<0.01)。结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖。     

蒙药复方菖蒲四味体外抑制人肝癌细胞活性的研究

目的：探索蒙药复方菖蒲四味两种提取物体外对人肝癌细胞（SMMC-7721）的生长影响。方法：体外培养条件下,分别用不同浓度的蒙药复方菖蒲四味乙醇和石油醚提取物处理人肝癌细胞（SMMC-7721）,采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞的活性。结果：蒙药复方菖蒲四味的两种提取物对体外培养的SMMC-7721细胞在12.5～200μg/mL剂量内均具有剂量依赖性的抑制作用,与空白对照组比较,差异显著（P〈0.01）;阳性对照药环磷酰胺亦可显著地抑制SMMC-7721细胞的增殖。体外增殖抑制作用的强弱为石油醚提取物样品2〉乙醇提取物样品1。结论：两种提取物对SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,有进一步研究的潜在价值。     

EFFECT OF 5-AZA-CDR ON CELL PROLIFERATION AND MRNA EXPRESSION OF DAPK IN HUMAN HEPATOMA CELL LINE SMMC7721 CELLS

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响.方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0 μmol/L)的5- Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT- PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平.结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F =242.40,P＜0.01);半定量RT- PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72 h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P＜0.01).结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖.     

抗人卵巢癌单链抗体基因的构建

构建抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２单链抗体基因。方法，将通过ＰＣＲ方法体扩增并经测序验证的重链，轻链可变区基因先后重组入原核表达质粒ＰＴＨＡ９０相应的位点上，中间通过一连接肽（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３基因连接构建成单链抗体基因。     

人肿瘤浸润淋巴细胞用TNF－a基因作逆转录病毒的转导

通过逆转录病毒将肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）基因转导到取自卵巢癌和胰腺癌病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）。我们发现ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ（ＴＮＦ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平比新霉素磷酸转移酶基因转导的ＴＩＬ（ｎｅｏ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平更高。尤其重要的是ＴＮＦ－ＴＩＬ对某些建株的肿瘤细胞株和自身肿瘤细胞的细胞毒性作用也比ｎｅｏ－ＴＩＬ更强。ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ有希望在临床上用于癌症的过继免疫治疗。     

人肿瘤浸润淋巴细胞用TNF－a基因作逆转录病毒的转导

通过逆转录病毒将肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）基因转导到取自卵巢癌和胰腺癌病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）。我们发现ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ（ＴＮＦ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平比新霉素磷酸转移酶基因转导的ＴＩＬ（ｎｅｏ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平更高。尤其重要的是ＴＮＦ－ＴＩＬ对某些建株的肿瘤细胞株和自身肿瘤细胞的细胞毒性作用也比ｎｅｏ－ＴＩＬ更强。ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ有希望在临床上用于癌症的过继免疫治疗。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢上皮癌细胞杀伤作用的研究

目的:探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1-tk)基因转染,联合抗病毒药物羟甲基无环鸟苷(ganciclovir,GCV)和无环鸟苷(acyclovir,ACV)对人卵巢上皮癌(OEC)细胞系TYK的杀伤作用.方法:用lipofectionreagent介导法将PINTK5质粒转移入包装细胞PA317中,用滴度最高的PA317病毒上清液转染TYK细胞,运用MTT法及光镜、电镜检测GCV、ACV对目的细胞的体外杀伤效应.结果:将PLNTK5质粒转入PA317细胞后,得到了稳定的产病毒细胞株.TYK细胞可被病毒上清液转染,转导HSV1-tk基因可显著增强ACV、GCV对TYK细胞的杀伤作用.结论:逆转录病毒可介导HSV1-tk基因转染TYK细胞并获稳定表达,ACV、GCV对携有HSV1-tk基因的卵巢癌细胞有明显的体外杀伤作用.     

甲胎蛋白对NIH3T3细胞和人肝癌Bel7402细胞增殖的促进作用

目的:观察甲胎蛋白对细胞增殖的影响。方法:用从人脐带血清中提取的甲胎蛋白,作用于体外培养的NIH3T3细胞和人肝癌Bel7402细胞,运用MTT染色计数法,细胞周期时相测定和3H脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等指标检测细胞增殖状况。结果:甲胎蛋白(10～80mg·L-1)作用24h后,对NIH3T3细胞、人肝癌Bel7402细胞均有不同程度的促增殖作用,甲胎蛋白的单克隆抗体能阻断这种作用。结论:甲胎蛋白是促进某些新生细胞或肿瘤细胞增殖的内源性物质。     

Nucleostemin基因对人食管癌Eca-109细胞株转染条件优化的探索

目的:探讨PCDNA4/C-NS-silencer质粒载体用于人食管癌Eca-109细胞株转染的最优化条件.方法:用RT-PCR方法检测基因的转染效率,分别研究不同DNA量/脂质体体积比值、不同质粒DNA-转染试剂复合物与靶细胞作用时间等情况对转染效果的影响.结果:当DNA量/脂质体体积比值在1:8,质粒DNA-转染试剂复合物与靶细胞作用时间为8h时细胞转染效率最高.结论:成功建立了NS基因转染人食管癌Eca-109细胞株转染的最优化条件.     

古抑菌素A对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响

目的：探讨去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对人肝癌HepG2细胞生长的作用以及FHIT表达的影响。方法：体外培养人肝癌细胞株HepG2,分为对照组和不同浓度（5、50、250、500、1000nmol/L）TSA组,作用24h和48h后在倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测TSA对HepG2细胞增殖的影响,实时荧光定量RT-PCR法检测FHIT基因的表达。结果：倒置显微镜下,经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢,出现凋亡早期改变,与对照组相比,TSA可明显抑制HepG2的增殖,且呈时效和剂量依赖关系（P〈0.01）,荧光定量PCR结果显示TSA可以使FHIT表达上调（P〈0.01）。结论：TSA对肝癌HepG2细胞体外生长有明显抑制作用,可能与促进FHIT表达有一定关系。