不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响

为了解不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响，采用本室建立的SD成年大鼠脊髓挤压伤、半横断伤和全横断伤模型，分别于术后第24h，7d,21d处死动物并设正常对照组，取L3节段脊髓制作20μm厚连续冰冻切片，间隔取片行苏木精染色，光镜下观察损伤位点尾侧端背角的形态改变,计数背角神经元数，结果：组间比较，挤压伤者较正常者神经元明显萎缩，胞体周围有空隙，神经元数无明显减少（P＞0.05），半横断伤和全横断伤者均出现大量空泡，未见丰满而轮廓清楚的神经元，残存的少数神经元明显萎缩，术后神经元数明显减少且以全横断伤者为甚（P＜0.01），组内比较，3种损伤术后各时相神经元数的变化均无显著性差异（P＞0.05），结果表明：不同类型损伤时对背角神经元存活的影响不同，全横断伤者最重，半横断伤者次之，挤压伤者相对较轻。     

髓复康对急性脊髓损伤恒河猴神经功能及病理变化的影响

目的观察髓复康（SFK）对急性脊髓损伤恒河猴神经功能及病理变化的影响。方法成年雄性恒河猴14只,其中10只用于制备T12胸髓左侧半横断损伤模型,并将其随机分为髓复康组（S组）和模型组（M组）,另外4只设为正常对照组（N组）。通过改良Tarlov法评估恒河猴脊髓神经功能恢复情况,采用HE染色及Nissl染色观察脊髓损伤区组织病理学变化。结果给药30 d后,髓复康组患肢神经功能恢复远远优于模型组;HE染色结果显示：S组脊髓损伤区面积小于M组,其脊髓损伤灶局限于患侧,而M组则多侵及对侧;Nissl染色结果显示：S组正常神经元的数量明显多于M组（P〈0.05）,但仍少于正常组,且差异显著。结论中药髓复康能有效缓解脊髓损伤后继发性损害的程度,促进了恒河猴神经功能的恢复。     

恒河猴脊髓半横断损伤后腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数的变化

目的 探讨脊髓损伤(SCI)对表皮生长因子(EGF)表达的影响及EGF在脊髓损伤再生修复中的作用.方法 18只成年恒河猴被随机分为假手术对照组,脊髓半横断损伤(hSCI)7 d、14 d、1月、2月和3月组,各损伤组于第11胸髓节段切断左侧半脊髓,在相应时间点取材,脊髓取损伤处近、远段5 mm两段,脑取损伤对侧皮质前运动区.制作冰冻切片,采用抗EGF多克隆抗体免疫组织化学SP法染色,观察并计数脊髓腹角及对侧大脑皮质前运动区EGF免疫阳性神经元数的变化.结论 恒河猴hSCI后3月内,损伤处脊髓近、远段损伤侧与未损伤侧腹角及对侧皮质前运动区EGF阳性神经元数均较假手术对照组减少(P＜0.05),表现为先降低后增加,晚期呈逐渐减少的变化趋势,不同部位EGF阳性神经元数波动不一致.结论 恒河猴hSCI后3月内脊髓损伤侧腹角EGF阳性神经元数明显减少;hSCI也会影响未损伤侧EGF的表达;损伤早期,邻近损伤处脊髓腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数急剧减少后均有自发回升.     

针刺对大鼠脊髓损伤后脊髓前角运动神经元功能的影响

目的探讨针刺对脊髓损伤(SCI)大鼠前角运动神经元功能恢复的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,改良Allen法压迫致伤T8、T9,随机分为实验组和对照组,伤后分别给予电针刺激大鼠双下肢足三里和悬钟、伏兔和三阴交穴,取治疗2,4,6周伤段脊髓进行PCR扩增和组织切片。利用RT-PCR技术检测伤区脊髓胶质源性神经营养因子(GDNF)mRNA基因体内表达的变化;应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察大鼠SCI后伤区脊髓前角运动神经元存活的数目和乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化;采用斜板试验和BBB评分法观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果实验组较对照组AChE活性显著增加(P<0.01);实验组脊髓前角大、中型神经元的数目较对照组明显增加(P<0.05);实验组GDNF mRNA基因体内表达较对照组明显增加(P<0.01);大鼠SCI 3周后针刺治疗组后肢运动功能评分均明显高于对照组(P<0.05)。结论针刺治疗对脊髓损伤后前角运动神经元的功能恢复有一定的促进作用。     

大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后HRP逆行示踪

目的：检测大鼠脊髓损伤脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰神经干细胞移植后，神经纤维的再通及后肢功能恢复情况。方法：大鼠L4脊髓全横断后，在横断处立即移植BDNF基因修饰神经干细胞，分四个时相点（1周，1、2、3个月）进行辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪，并观察损伤移植处的形态学变化及大鼠后肢运动功能恢复情况。结果：损伤移植处脊髓的形态学明显好转；损伤移植处上段脊髓中，移植1个月组有HRP阳性细胞，以后两组逐渐增多；移植组大鼠后肢运动功能明显恢复。结论：大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后，在损伤移植处有HRP阳性神经元和神经纤维，大鼠后肢运动功能明显恢复，提示BDNF基因修饰神经干细胞有修复大鼠脊髓损伤的作用。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复作用的研究

目的探讨三七总皂甙对大鼠脊髓半横断损伤后组织结构及运动功能恢复的作用。方法参考Ram—berg和Borgens法建立大鼠半横断型脊髓损伤模型，45只Sprague—Dawley大鼠均接受T10节段的脊髓损伤，然后被随机分为三七总皂甙、甲基强的松龙和空白对照组，所有大鼠分别在脊髓损伤后第1、3、7、14和21天接受斜板试验和BBB运动功能评分，观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。第22天将所有实验大鼠处死后取出脊髓损伤标本，进行组织学检查。结果45只实验鼠中符合设计要求的共40只，其中三七总皂甙（Panax notoginseng saponins，PNS）组13只，空白对照组14只，甲基强的松龙（Methylprednisolone，MP）组13只。三七总皂甙组大鼠的BBB评分及斜板测定均优于对照组，两者之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。电镜下三七总皂甙组大鼠脊髓损伤部位可见神经元核周体和神经纤维修复再生。对照组大鼠脊髓损伤区神经元胞体和轴突的超微结构发生明显的变性。结论三七总皂甙可以改善脊髓损伤区的组织结构并促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复．     

简易大鼠脊髓完全横断伤模型的建立

目的:建立一种简便、可靠的完全脊髓横断伤模型的制作方法.方法:成年SD大鼠21只,随机分为横断伤组、挫伤组、对照组,每组7只.显露T12脊髓,横断组用尖刀将其完全横断.挫伤组150克·厘米力(gcf)冲击致伤.对照组仅显露脊髓,不做特殊处理.在不同时间对各组大鼠行行为学(BBB)评分及组织学评价.结果:横断组大鼠后肢功能评分在损伤后3～4周趋于稳定,损伤后4周时BBB评分为(5.14±0.80)分;挫伤组后肢功能评分进行性增高,4周时BBB评分达到(11.21±2.21)分;对照组2周左右恢复正常.横断组大鼠组织学观察见损伤区无脊髓组织残留,神经丝(NF)免疫组化染色未见神经纤维通过损伤区.结论:通过完全脊髓横断可以制备出稳定性好、一致性高的脊髓损伤模型.完全脊髓横断后,损伤恢复3～4周左右趋于稳定,可作为慢性脊髓损伤修复的移植期.     

缺血时间对兔脊髓缺血损伤程度的影响

目的：探讨腹主动脉阻断不同时间对兔脊髓缺血损伤程度的影响,为筛选神经保护药选择适宜的模型.方法：30只新西兰大白兔随机分为5组（n=6）：脊髓缺血10 min（I10）,20 min（I20）,30 min（I30）,40 min（I40）及假手术（SHAM）组.再灌注后4,8,12,24,48 h行后肢运动功能评分.评分完毕后,取L5~L7脊髓组织行HE及TUNEL染色,光镜下观察HE染色结果并计数脊髓前角正常神经元与凋亡神经元.结果：①再灌注后个时间点I40组兔表现为完全瘫痪;I10组兔除一只不能站立外,其余全部正常,I20与I30组后肢运动功能介于I10组与I40组之间;②再灌注48 h脊髓切片HE染色显示I40组兔脊髓损伤严重,呈大量的空泡变性;I10组兔脊髓损伤轻微;I20和I30组兔脊髓损伤程度介于I10组和I40组之间;③I40组及SHAM组基本未见TUNEL阳性神经元;I20组脊髓前角TUNEL阳性神经元计数明显多于I40及SHAM组（P〈0.05）,与I10及I30组没有统计学差异.结论：I20组脊髓损伤适度,是筛选神经保护药适宜的脊髓缺血模型.     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

全横断脊髓损伤后不同时相腹角的形态学变化(摘要)

为了解全横断脊髓损伤后不同时相腹角的形态学变化 .将 2 1只ＳＤ大鼠分组制作全横断脊髓损伤模型 (Ｌ1) ,分别于伤后 2 4ｈ ,7ｄ及 2 1ｄ取出Ｌ2 脊髓作连续冰冻切片后苏木精染色 ,观察其腹角的形态学改变并与正常者比较 .结果 :伤后 2 4ｈ及 7ｄ者全横断脊髓相邻上下节段腹角出现大量空泡 ,神经元数明显较正常者减少 (Ｐ <0 0 5) .而伤后 2 1ｄ者空泡消失 ,似有大量胶质细胞增生 .结果表明 :全横断脊髓损伤早期即可致腹角绝大部分神经元丧失而代之以大量空泡 .以后 ,空泡可能被大量增生的胶质细胞所填充 .但伤后 2 1ｄ者神经元数有无改变…     

金腰带联合甲基强的松龙对脊髓损伤大鼠行为学及脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨金腰带和甲基强的松龙联合应用对脊髓损伤（SCI）大鼠的疗效及其对脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影
响,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法将雌性SD大鼠30只随机分为：（1）假手术组;（2）脊髓挫伤组;（3）甲基强的松龙
治疗组（术后8 h内肌注50 mg/kg,此后每天甲基强的松龙肌注量减少10 mg/kg）;（4）金腰带治疗组（50 mg/kg,每日1次灌胃）;
（5）金腰带和甲基强的松龙联合治疗组（两种药物及给药方法相加）。采用BBB评分系统对后肢运动功能进行评分。对大鼠脊髓损伤
术后4周的脊髓切片进行BDNF免疫组化染色,观察阳性细胞定位、分布以及数量变化。用方差分析进行多个样本间比较。结
果BDNF免疫反应阳性产物主要分布于脊髓灰质腹角和背角神经元。联合治疗组BDNF阳性神经元数量以及BBB评分分值
较假手术组、脊髓挫伤组、甲基强的松龙治疗组和金腰带治疗组均显著增高, 差异有统计学意义（P<0.05）。结论甲基强的松龙
和金腰带联合治疗脊髓损伤的疗效优于单纯甲基强的松龙治疗组和金腰带治疗组,其发挥疗效可能与上调BDNF表达有关。
     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

成年恒河猴中枢神经系统胶质细胞源性神经营养因子的分布

目的:探讨成年恒河猴中枢神经系统(CNS)胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的分布.方法:取3只成年雄性恒河猴CNS 制作冰冻切片,采用免疫组织化学SP法观察成年恒河猴CNS中GDNF分布.结果:GDNF免疫阳性物质主要位于神经元胞浆内,呈棕色.具有免疫阳性信号的神经元可见于大脑皮质、基底核、小脑皮质、小脑内的核团、中线核群、弓状核、橄榄核群、滑车神经核、舌下神经核、迷走神经背核、前庭核、耳蜗核、网状结构、脑桥核、脚间核、延髓下部中央管周围灰质、中脑导水管周围灰质、下丘中央核、薄束核、楔束核、脊髓的腹角、背角以及环绕脊髓中央管周围.此外,在中枢神经系统许多部位的白质可见GDNF阳性胶质细胞和神经纤维.结论:GDNF在恒河猴CNS中广泛分布,其功能可能涉及多种神经元和非神经细胞.     

IGF-1抑制SCI大鼠脊髓前角神经元凋亡的体内实验

目的：研究脂质体介导的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）体内转基因对急性脊髓损伤神经细胞凋亡的干预作用。 方法：雄性Wistar大鼠36只,使用半横断法制造脊髓损伤模型,随机分为IGF-1治疗组、模型组、空白对照组。将阳性脂质体LipofectAmine同重组质粒pcDNA-hIGF-1混合注入治疗组大鼠脊髓病灶,模型组大鼠在损伤区域注射pcDNA3.1、LipfectAmine和生理盐水混合液。利用免疫组化方法观察IGF-1蛋白表达,通过TUNEL染色进行凋亡细胞组织定量分析。BBB 法进行动物肢体功能评分。 结果：同模型组和空白对照组比较,治疗组神经细胞中IGF-1在伤后1和4周蛋白表达明显增加P<0.05）;TUNEL染色结果显示,治疗组神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.05）。BBB评分结果显示,肢体功能BBB评分伤后1和4周时,治疗组 (7.00±0.53、11.20±0.56)恢复明显优于对照组(4.40±0.49、8.70±0.4 4)（P<0.05）。 结论：IGF-1体内转基因可减少急性脊髓损伤大鼠的神经细胞凋亡,对急性损伤后的脊髓具有保护作用。     

表皮生长因子在成年恒河猴中枢神经系统的分布

目的 探讨表皮生长因子（EGF）在成年恒河猴中枢神经系统（CNS）的分布。方法 取成年雄性恒河猴CNS制作冰冻切片,用EGF特异性抗体的免疫组织化学SP法染色,观察EGF免疫物质在成年恒河猴CNS的分布。结果 EGF免疫阳性物质主要位于神经元胞浆内,这些具有较强免疫阳性信号的神经元见于大脑皮质、小脑皮质、小脑内的核团、海马各区、尾状核、豆状核、屏状核、间脑核群、黑质、脑神经核群、脑干网状结构、脑桥核、红核、上下橄榄核、薄束核、楔束核,脊髓的腹角、背角、侧角以及中央灰质。此外,在CNS各部位的白质中可见部分EGF阳性胶质细胞和神经纤维。结论 EGF免疫阳性物质在恒河猴CNS有广泛的分布,提示其功能可能涉及多种神经元和非神经细胞。     

树鼩脊髓灰质的细胞构筑研究 Ⅰ.胸段

本文用尼氏染色法,对树鼩胸段脊髓灰质的细胞构筑进行丁研究。结果表明,树鼩胸段的细胞构筑与人、猴、猫、兔、大鼠等哺乳动物的脊髓灰质基本相似。从后角尖到前角边缘可分为Ⅰ～Ⅸ层,第Ⅹ层围绕在中央管周围。各层神经元的数量、大小和形态呈现一定特征。本文还对胸区的中间外侧核、Clarke氏柱等特殊核团的细胞构筑进行了观察.     

酸性成纤维细胞生长因子在大鼠脊髓中的定位及脊髓损伤后的表达

目的：了解脊髓损伤（ＳＣＩ）后酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）的变化规律。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化染色方法，观察ＳＣＩ前后脊髓中ａＦＧＦ的动态变化，并以图像分析技术对这种变化进行定量分析。结果：在正常脊髓中，ａＦＧＦ定位于前角运动神经元胞浆中；ＳＣＩ后ａＦＧＦ明显增高。结论：ＳＣＩ后，脊髓自身产生大量的ａＦＧＦ，这种自身保护机理可能在ＳＣＩ后的自身修复与再生方面起重要作用。     

NOS1免疫阳性细胞在猕猴中枢神经系统内的分布

目的 研究神经元型一氧化氮合酶（NOS1）在灵长类动物中枢神经系统中的表达。方法 采用免疫组织化学技术,观察了一氧化氮合酶在正常猴喉脑和脊髓中的表达。结果 NOS1阳性神经元分布于中枢神经系统的广泛区域,包括大脑皮质、海马、齿状回、尾壳核、纹状体、小脑皮质、脊髓前角、后角和中央灰质。结论 NOS1在神经系统内有广泛的分布,其产物一氧化氮可能参与了对多种神经功能如学习记忆等的调节。     

金腰带治疗对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及行为学的影响

目的研究中草药金腰带治疗对脊髓损伤(SCI)大鼠行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)表达及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体水平的影响。方法 SD成年雄性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤组(SCI组)、脊髓挫伤后金腰带治疗组〔每日1次胃内灌服金腰带50mg/(kg.d),共7次〕。各组大鼠均在术后(0d、3d、10d、28d)进行后肢行为学评价(BBB运动功能评分)。术后13d,每组取8只大鼠麻醉后取损伤脊髓T10液氮中保存,采用[3 H]MK-801放射性配基分析法测定NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合数量(Bmax);取术后28d组大鼠损伤脊髓进行免疫组织化学染色,观察BDNF在脊髓的定位及表达变化。结果 BBB评分SCI组大鼠各时间点均低于假手术组(P均<0.05),而金腰带治疗组术后各时间点均高于SCI组(P均<0.05)。SCI后13d,脊髓内NMDA受体Bmax较假手术组增高(P<0.05),金腰带组较SCI组减少(P<0.05);SCI后28d损伤处脊髓腹角、背角BDNF阳性神经元数量较假手术组增加(P<0.05),金腰带治疗组BDNF阳性神经元数量较SCI组进一步增加(P<0.05)。结论金腰带治疗能有效改善SCI大鼠后肢运动功能,增加脊髓组织中BDNF的表达和通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤,对SCI有一定的治疗与保护作用。