血管紧张素Ⅱ对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ及其Ⅰ型受体（AT1）拮抗剂洛沙坦（losartan）对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法：体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞，在不同浓度的血管紧张素Ⅱ、losartan、PD123319作用下，观察成纤维细胞的生长情况，并绘制生长曲线，采用MTT法和3H—TDR掺入释放法分别检测成纤维细胞增殖和DNA含量的情况。结果：血管紧张素Ⅱ在浓度为10^-8mol／L-10^-5mol／L时，成纤维细胞的细胞数量明显增多，DNA含量增加（P〈0．05）；losartan能几乎完全抑制AngⅡ的这种作用，PD123319对此作用几乎没有影响。结论：AngⅡ可促增生性瘢痕成纤维细胞的增殖，该作用主要通过AngⅡ的Ⅰ型受体介导完成，AT1的拮抗剂有望在增生性瘢痕防治中发挥重要作用。     

血管紧张素对增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白合成的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其Ⅰ型、Ⅱ型受体阻断剂和钙调神经磷酸激酶（CaN）的阻滞利环胞素A（CsA）对增生性瘢痕来源的成纤维细胞纤维连接蛋白mRNA和蛋白表达的作用。方法：体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞，分别将一定浓度的AngⅡ（10^-9～10^-5mmol／L），和AngⅡ10^-6mmol／L加上不同阻滞剂losartan、PD123319、环胞素A（浓度均为10^-5mmol／L）加入细胞培养液中刺激48h，分别采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Westernblot印迹方法检测增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白（FN）的mRNA及蛋白表达。结果：体外成功地培养增生性瘢痕成纤维细胞。经AngⅡ刺激48h后，FN mRNA和蛋白表达量明显增高，增高程度与AngⅡ浓度呈正比；加入losaartan和环胞素A后，FN原mRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组下降，而加入PD123319后，FNmRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组无明显改变。结论：AngⅡ可促增生性瘢痕成纤维细胞的FN合成，可能在增生性瘢痕的发展过程中起重要作用，该作用主要通过AngⅡ的Ⅰ型受体介导完成，该作用可能与CaN信号通路有关。     

单核巨噬细胞集落刺激因子对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：研究单核巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GMCSF）对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,探讨其促进创面愈合的机制并为临床准确定量应用该因子促进创面愈合提供理论依据。方法：分别应用浓度为0、25、50、75、100、150ng/mlGMCSF培养液孵育离体培养的人皮肤成纤维细胞,作用24h后四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的活性。选择最适浓度GMCSF干预细胞,用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期变化;应用ELISA检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果：GMCSF在浓度为25～100ng/ml之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以50/ml最为显著;成纤维细胞在最适浓度GMCSF干预24h后,细胞大多处于DNA合成前期和合成期;与空白组比较,GMCSF组Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌明显增加（P〈0.01）,且Ⅰ、Ⅲ型胶原比值下降（P〈0.01）。结论：GMCSF在浓度为25～100ng/ml对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,且能刺激成纤维细胞合成大量Ⅰ、Ⅲ型胶原,这可能是其加速创面愈合的机制之一。     

rhbFGF和rhEGF对成纤维细胞的促增殖作用

目的：掌握人皮肤成纤维细胞的培养技术，了解该细胞的生长特性；研究rhbFGF和rhEGF在不同浓度下对人皮肤成纤维细胞增殖的影响，为临床准确定量应用这两种因子修复创面、加速创面愈合提供理论依据。方法：体外培养人皮肤成纤维细胞，用不同浓度的rhbFGF和rhEGF干预细胞，四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的活性，选择最适浓度生长因子干预的细胞，用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况。结果：不同浓度的rhbFGF和rhEGF分别对成纤维细胞干预48h后，显示rhbFGF在50μg／L浓度时MTT值最大，rhEGF在80μg／L浓度时MTT值最大；并检测出在最适浓度下细胞倍体的含量。结论：应用最佳浓度的rhbFGF和rhEGF可以更快的促进创面愈合，减少瘢痕的形成。     

硒化壳聚糖促创面愈合作用的初步研究

目的：通过研究硒化壳聚糖对体外培养皮肤成纤维细胞增殖的影响来评判其对创面愈合的作用。方法：用不同剂量（25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L）硒化壳聚糖作用于成纤维细胞,光镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR、3H-脯氨酸掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖及胶原合成影响;LDH漏出率用于检测药物对细胞有无损伤;并以等体积细胞培养液处理为对照组。结果：各浓度药物处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加,细胞倍增时间缩短,促进细胞对3H-TdR和3H-脯氨酸的掺入（P〈0.05,P〈0.01）,降低LDH漏出率（P〈0.05,P〈0.01）。结论：硒化壳聚糖可促进体外培养皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,进而促进创面愈合。     

血管紧张素Ⅱ受体在增生性瘢痕成纤维细胞增殖中的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)Ⅰ型(angiotensinⅡtype1,AT1)和Ⅱ型(angiotensinⅡtype2,AT2)受体在人增生性瘢痕成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织标本AngⅡ受体的表达,用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和放射性配体受体结合测定法检测增生性瘢痕成纤维细胞AngⅡ受体的表达,用3H-TdR的掺入法检测AngⅡ对成纤维细胞增殖的影响。结果增生性瘢痕组织的成纤维细胞可见AT1和AT2受体表达,阳性染色信号较正常皮肤增强。放射性配体受体结合测定法显示在培养的增生性瘢痕成纤维细胞AT1和AT2受体密度分别为(10.69±2.15)fmol/106个细胞,(4.9±1.05)fmol/106个细胞。RT-PCR结果显示培养的人增生性瘢痕成纤维细胞表达AT1和AT2受体。在培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,AngⅡ明显促进成纤维细胞3H-TdR的掺入率,AT1受体阻断剂Valsartan明显抑制AngⅡ的这种促进作用,AT2受体拮抗剂PD123319明显增强AngⅡ的这种作用。结论增生性瘢痕成纤维细胞表达AT1和AT2受体,AngⅡ通过激活AT1和AT2受体对成纤维细胞的增殖产生调节作用,AngⅡ产生异常和受体表达比例失衡可能导致瘢痕的过度增生和瘢痕疙瘩的形成。     

血管紧张素Ⅱ对转化生长因子β诱导的人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对人皮肤成纤维细胞增殖及对转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)诱导的成纤维细胞增殖作用的影响,并初步探讨可能的信号机制. 方法 取自愿捐献的正常皮肤组织标本,采用胶原酶法行成纤维细胞培养.取第4～5代细胞,按实验设计分别加入不同浓度的Ang Ⅱ(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7 mol/L)、 TGF-β(0.1、1.0、10.0 ng/ml)、1×10-10 mol/L Ang Ⅱ+ 0.1 ng/ml TGF-β共8组;对照组仅加入等量DMEM.以3H-TdR掺入法测定细胞增殖,Western blot法检测抗细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)活性变化,观察不同浓度的Ang Ⅱ或/和TGF-β对培养的成纤维细胞3H-TdR掺入量和ERK磷酸化的影响. 结果 与对照组比较Ang Ⅱ(1×10-9、1×10-8、1×10-7 mol/L)或TGF-β(1.0、10.0 ng/ml)均能促进成纤维细胞的3H-TdR掺入量(P＜0.05);1×10-10 mol/L Ang Ⅱ或0.1 ng/ml TGF-β单独使用不影响成纤维细胞的3H-TdR掺入量,但二者联合使用提高了成纤维细胞的3H-TdR掺入量(P＜0.05).1×10-7 mol/L Ang Ⅱ、10.0 ng/ml TGF-β增加皮肤成纤维细胞的ERK磷酸化,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).1×10-10 mol/L Ang Ⅱ或0.1 ng/ml TGF-β单独刺激成纤维细胞并未影响ERK磷酸化,而二者联合使用增加ERK磷酸化,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).应用抗ERK抗体显示各组ERK含量一致. 结论 Ang Ⅱ不仅能作为促有丝分裂素直接促进成纤维细胞分裂增殖,同时也可作为调节因子促进TGF-β的促增殖作用.Ang Ⅱ和TGF-β通过各自特异性受体共同作用于ERK,使磷酸化增加是其产生协同作用可能的机制之一.     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子促进猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的实验研究

将基因重组的碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）作为外源性生长因子来观察比较不同浓度的ｂＦＧＦ对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响。结果表明连续用药３～５天后，创面外观及电脑图像分析显示，ｂＦＧＦ对猪深Ⅱ度烧伤创面的愈合有一剂量效应。创面活检标本经用流式细胞计数仪做细胞ＤＮＡ的周期分析表明，用ｂＦＧＦ后创面细胞的Ｇ１期比例下降，Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期比例增多；其变化规律与创面所用的ｂＦＧＦ浓度有关，并与电脑图像分析所得的数据相一致。提示浓度合适的ｂＦＧＦ能明显地促进创面的愈合。     

成纤维细胞生长因子促进放烧复合伤创面愈合的实验研究

采用重组的碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ），观察其对大鼠重度放烧复合伤皮肤创面愈合的作用。结果提示：ｂＦＧＦ治疗组第６０天创面完全愈合的百分率较对照组提高２８．５％，５０％烧伤面积愈合所需的平均时间较对照组提前９天。病理学检查发现，ｂＦＧＦ可刺激成纤维细胞增殖及胶原合成，促进毛细血管增生和肉芽组织形成。在早期，ｂＦＧＦ尚可增强创面炎症反应，提高机体白细胞吞噬功能，加速脾细胞ＮＫ活性的恢复。     

血管紧张素Ⅱ对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶活性的影响

目的：本研究硼察血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶（extracellular　signal-regulated kinase，ERK）活性的影响，旨在探讨其影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为的信号机制。方法：取自愿捐献的增生性瘢痕组织标本，采用胶原酶法行成纤维细胞培养。用免疫荧光组织化学法检测细胞AT1和AT2受体的表达。取第3～4代细胞，并按实验设计，分别加入10^-2mol／L Ang Ⅱ，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L Valsartan，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L PD123319，10μmol／L Valsartan，10μmol／LPD123319共5组：对照组仅加入等量DMEM。以Western Blot法检测培养的细胞细胞外信号调节激酶（extracellular Signal-regulated kinases，ERK）活性变化，观察在阻断AT1或AT2受体情况下AngⅡ对培养的瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化的影响。结果：免疫荧光组织化学染色结果显示培养的增生性瘢痕成纤维细胞同表达AT1和AT2受体。AngⅡ可增加培养的增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化。在一定剂量范围内，AngⅡ浓度增加，细胞ERK磷酸化程度增加。与对照组比较10^-7mol／L Ang Ⅱ显著增加瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，且差异有统计学意义（P〈0．05）。10μmol/L AT2受体拮抗剂PD1233191可显著增强AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化（P〈0．05）：10μmol／L的AT1受体拮抗剂Valsattan可显著抑制AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化；Valsattan或PD1233191单独刺激细胞并未明显影响ERK磷酸化（P〉0．05）。应用抗ERK抗体显示各组ERK含量一致。结论：AngⅡ通过其受体AT1和AT2可调控增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，AngⅡ对增生性瘢痕成纤维细胞ERK活性的影响可能是AngⅡ调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为可能的信号机制之一。     

芦荟生肌膏精提液对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响

目的:观察芦荟生肌膏精提液对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响。方法:在不同浓度的芦荟生肌膏精提液的作用下,通过MTT法检测芦荟生肌膏精提液对内毒素(LPS)刺激的成纤维细胞增殖的影响,并在光镜下观察各组细胞的形态学改变。结果:与对照组比,LPS刺激组形态学观察有明显改变,LPS显著抑制成纤维细胞的增殖(P0.001);与LPS刺激组相比,加入不同浓度中药精制提取液后,可以不同程度地减轻LPS的抑制作用,成纤维细胞的增殖恢复,各组形态学观察也有相应程度的改变,其中以大剂量组最为明显(P0.01)。结论:内毒素(LPS)可以显著抑制体外成纤维细胞的增殖,镜下表现为细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长。芦荟生肌膏精提液对LPS刺激的成纤维细胞增殖有保护作用,可以拮抗LPS的抑制作用,恢复成纤维细胞的增殖,提示芦荟生肌膏可以通过促进成纤维细胞的增殖而促进直肠创面组织的愈合。     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子促进猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的实验研究

将基因重组的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为外源性生长因子来观察比较不同浓度的 bFGF 对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响。结果表明连续用药3～5天后,创面外观及电脑图像分析显示,bFGF 对猪深Ⅱ度烧伤创面的愈合有一剂量效应。创面活检标本经用流式细胞计数仪做细胞 DNA的周期分析表明,用 bFGF 后创面细胞的 G_1期比例下降,S 期和 G_2 M 期比例增多;其变化规律与创面所用的 bFGF 浓度有关,并与电脑图像分析所得的数据相一致。提示浓度合适的 bFGF 能明显地促进创面的愈合。     

高三尖杉酯碱对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

观察高三尖杉酯碱（ＨＨ）对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测不同浓度ＨＨ（μｇ／ｍｌ）作用不同时间对体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。当ＨＨ浓度为０．１２μｇ／ｍｌ时即可抑制体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的生长,０．６６μｇ／ｍｌ时即可产生５０％的抑制效应,１０μｇ／ｍｌ时可完全抑制成纤维细胞的生长,且抑制率随时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。ＨＨ可抑制体外瘢痕组织成纤维细胞的增殖且抑制作用呈剂量时间依赖性。     

超脉冲CO2激光手术创口延迟愈合的成纤维细胞的病理及超微结构特点

目的观察超脉冲CO_2激光手术创口愈合过程中成纤维细胞的病理和超微结构特点,探讨超脉冲CO_2激光手术创口延迟愈合的机理。方法采用6 W功率超脉冲CO_2激光及常规机械方法(常规组)对大鼠背部皮肤致创,随机分成术后9个时相点对组织进行病理观察,并计数成纤维细胞;同时,对其中6个时相点的创缘成纤维细胞进行超微结构观察。结果创口愈合时间常规组于术后8.96 d愈合,6 W激光组愈合延迟至术后12.81 d,两组间有明显差异(P<0.01)激光组创伤愈合过程中成纤维细胞细胞增殖受抑制,术后5 d时成纤维细胞数量少于对照组(P<0.05);常规组成纤维细胞计数高峰为术后第7天,6 W激光组成纤维细胞计数高峰为术后第10天,7 d以后激光组成纤维细胞数量持续超过常规组。电镜观察结果显示,激光组伤口成纤维细胞增殖出现滞后,持续时间长。结论激光引起了创伤周围组织的热损伤,导致了愈合过程中的成纤维细胞增殖的时相改变、早期成纤维细胞增值功能受抑制等,从而使激光创口愈合延迟。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。     

成纤维细胞生长因子在烧伤创面内变化的临床观察

目的 探讨临床烧伤创面愈合过程中成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）的变化及其作用。方法采用免疫组织化学方法,对烧伤创面肉芽中心部、肉芽与愈合皮肤的交界部、愈合皮肤和自身正常皮肤,以及Ⅲ度烧伤创面不同部位和Ⅱ度烧伤创面愈合过程中ＦＧＦ表达变化进行了观察。结果 Ⅲ度烧伤创面不同部位ＦＧＦ表达强度不同,以创面的肉芽中心部ＦＧＦ含量最多,肉芽与愈合皮肤的交界部ＦＧＦ含量次之,愈合皮肤ＦＧＦ含量较少;每个创面ＦＧ     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子促进猪深Ⅱ度烧伤创面…

将基因重组的碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）作为外源性生长因子来观察比较不同浓度的ｂＦＧＦ对猪深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响。结果表明连续用药３－５天后，创面外观及电脑图像分析显示，ｂＦＧＦ对猪深Ⅱ度烧伤创面的愈合有一定剂量效应。创面活检标本经用流式细胞计数仪做细胞原周期分析表明，用ｂＦＧＦ后创面细胞的Ｇｒ期比例下降，Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期比例增多；其变化规律与创面所用的ｂＦＧＦ浓度有关，并与电脑图像分析所     

P物质抑制剂辣椒素和bFGF抗体对增生性瘢痕成纤维细胞增殖协同抑制作用的实验研究

目的：探讨P物质抑制剂-辣椒素及bFGF抗体单独或联合使用对体外培养的人体增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：体外培养12例增生性瘢痕组织的成纤维细胞,分别加入不同浓度的辣椒素或/和bFGF抗体,培养24h后观察细胞形态学变化,并用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：所有不同浓度的辣椒素（2.5,5,20,40,60,80mg/L）均能使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用随剂量增大而增加。中高浓度bFGF抗体（40,80mg/L）也可促使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用也随剂量增大而增加。辣椒素与bFGF抗体联合应用对成纤维细胞抑制作用较单独使用效果更显著（P﹤0.05）。结论：辣椒素及bFGF抗体可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增加,两者联合使用有协调作用,本研究结果可能在增生性瘢痕的治疗提供新的思路和手段。     

影响碱性成纤维细胞生长因子促进烧伤创面愈合因素的探讨

采用大白鼠１５％Ⅲ度烧伤模型，探讨了影响碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）促进烧伤创面愈合的因素。结果发现，烧伤创面早期切痂可保持ｂＦＧＦ的活性。４０天创面愈合率达８４．０％，而未切痂组愈合率仅９，Ｏ％。肝素可增强ｂＦＧＦ促进创面肉芽组织生长、毛细血管增生、纤维母细胞增殖及细胞ＤＮＡ合成。创面感染的控制有利于保护ｂＦＧＦ的活性。伤后１周开始使用ｂＦＧＦ为适宜时期。     

内皮素对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的实验研究

目的：探讨内皮素（ET）在瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成中的作用及一氧化氮（NO）、粉防已碱（Tet）的拮抗效应。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，以^3H-TdR掺入法测定细胞增殖；以^3H-脯氨酸掺入量判断细胞胶原合成。结果：ET呈浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成，随着ET浓度（2．5－100ng/ml）的增加，^3H-TdR掺入值较对照组分别增加了1．8、4．0和4．9倍；^3H－脯氨酸掺入值较对照组分别增加了1．1、3．1和3．8倍（P＜0．01）。用NO供体亚硝基乙酰青霉胺（S-nitroso-N-acetyl penicillamine,SNAP)50μg/ml单独处理成纤维细胞，对^3H-TdR掺入值无明显影响（与对照组相比，P＞0．05），但对^3H-脯氨酸掺入值有下调作用；SNAP可拮抗ET－1（25ng/ml）刺激细胞增殖作用（抑制率为22．89％，P＜0．05）；对ET－1的促胶原合成作用无明显影响（P＞0．05）。Tet在不抑制细胞DNA合成的药物浓度（3μg/ml）即可明显减少瘢痕成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入值，并能显著降低由ET介导的瘢痕成纤维细胞^3H-TdR掺入值（抑制率为33．21％，P＜0．01）。结论：ET对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成具有显著促进作用，此效应可部分被SNAP、Tet所阻抗。