粪肠球菌和屎肠球菌的医院感染分布及耐药性

肠球菌广泛存在于自然界,可寄生于人类的胃肠道和女性生殖道,是人和动物肠道正常菌群的一部分,是仅次于葡萄球菌的重要院内感染病原菌[1],较多出现在有严重基础疾病的老年人和免疫力低下的患者中,主要引起尿路、腹腔、盆腔感染,还可引起菌血症、心内膜炎、呼吸系统感染.由于其固有的耐药性,对头孢菌素类、克林霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、低浓度的氨基糖苷类抗生素即使在体外实验可表现出敏感,但临床治疗往往无效[2],所致感染治疗困难.肠球菌属中粪肠球菌和屎肠球菌占临床分离的绝大多数[3].本文就医院感染标本中分离出的粪肠球菌和屎肠球菌的来源和耐药性进行分析,以期为临床治疗肠球菌医院感染提供参考依据.     

临床分离屎肠球菌对8种抗生素的耐药性分析

目的了解广东、河北、甘肃等地临床分离的39株屎肠球菌对8种抗生素的耐药性及产β-内酰胺酶的情况。方法采用纸片琼脂扩散法检测屎肠球菌耐药情况;用头孢硝噻吩法检测屎肠球菌产β-内酰胺酶情况。结果 39株屎肠球菌对红霉素的耐药率最高,达到94.87%,其次是高浓度庆大霉素和青霉素,分别为84.62%和79.48%,环丙沙星的耐药率也达到76.92%,米诺环素为38.46%,而氯霉素则体现出较好的敏感率,其耐药率为17.95%,尚未发现有耐万古霉素及呋喃妥因的菌株,两者耐药率均为0。39株屎肠球菌β-内酰胺酶阳性率为0。汕头地区分离屎肠球菌呈多重耐药性,对青霉素、红霉素、环丙沙星和高浓高度庆大霉素耐药率达100.00%。结论临床分离的屎肠球菌多重耐药性严重,尤其是汕头地区分离的细菌,临床应根据药敏结果合理选用抗感染药物。     

青藏高原牦牛携带屎肠球菌及其毒力基因和耐药性检测

目的 了解青藏高原牦牛携带屎肠球菌(Enterococcus faecium)情况,以及耐药性和毒力基因。方法 使用链球菌培养基分离细菌;使用生化反应和16s rDNA序列分析方法鉴定;采用PCR方法检测从牦牛粪便中分离的屎肠球菌携带细胞溶血素(cytolysin,cylA)、明胶酶E(gelatinase, gelE)、表面蛋白(enterococcal surface protein, esp)、胶质蛋白粘附素collagen-binding-adhesin of Enterococcal faecium,acm)、聚集物质(aggregation substance, asa1)及透明质酸酶(hyalronidase,hyl)6种毒力基因的情况;应用K-B纸片法对屎肠球菌分离株进行16种抗生素的敏感性分析;参照PulseNet 脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)实验方法对屎肠球菌分离株进行PFGE分型分析。结果 我们从320份牦牛粪便分离到33株屎肠球菌。这些菌株中毒力基因asa1的阳性率最高,为6.1%,acm和hyl次之,均为3.0%,其他毒力基因皆未检出。33株牦牛屎肠球菌中,有19株菌株具有抗生素耐药性,包括4株多重耐药菌株和15株单耐菌株。牦牛屎肠球菌对利福平耐药率最高,为48.5%;对其他抗生素的耐药率从高到低依次为青霉素G15.2%、四环素12.1%、强力霉素12.1%、红霉素9.1%、环丙沙星6.1%、氨苄西林6.1%、高浓度庆大霉素6.1%、磷霉素6.1%、左氧氟沙星6.1%。所有菌株对万古霉素、替拉考宁和氯霉素均敏感。细菌染色体DNA酶切片段的PFGE分析发现,33株屎肠球菌分离株共产生30种PFGE带型,可分为A-H 8个聚类群,耐药菌株分布在6个聚类群中。结论 青藏高原牦牛携带屎肠球菌,呈现高度遗传多态性,部分菌株携带毒力基因,对多种抗生素耐药。研究提示,屎肠球菌可能会通过牦牛相关食品传播。     

耐万古霉素肠球菌临床菌株毒力基因携带情况及差异

目的检测不同种类耐万古霉素肠球菌(VRE)毒力基因携带情况及其差异,为研究VRE致病机制提供基础。方法采用微量稀释法检测浙江地区490株屎肠球菌和862株粪肠球菌临床分离菌株对万古霉素的耐药性。采用PCR检测VRE菌株ace、asa1、cylA、efaA、esp、gelE、hyl七种毒力基因。结果 10%(49/490)屎肠球菌株和0.8%(7/862)粪肠球菌株为VRE。万古霉素耐药屎肠球菌株中,5株未检出任何毒力基因,其余44株仅可检出asa1、esp、gelE和hyl基因,其中esp基因(73.5%,36/49)和hyl基因(53.1%,26/49)为优势基因,以单或双基因为主要携带模式。万古霉素耐药粪肠球菌株中可检出除hyl基因以外其他6种毒力基因,且每株菌均同时携带3~6种致病基因。结论本地区VRE以屎肠球菌为主,耐万古霉素屎肠球菌和粪肠球菌毒力基因携带率、携带种类和模式均有明显差异。     

肠球菌耐药性的检测与分析

肠球菌是引起临床感染的常见病原菌之一，固有多种抗生素抗性，临床上常采用协同用药治疗肠球菌感染，例如采用青霉素、氨于青霉素或万古霉素与氨基糖贰类药物联合使用，但是当肠球菌获得了氨基糖式类活性酶后，会发展成高度氨基糖忒类耐药性（MIC，≥2000μg／ml）．而失去协同作用。为了解当地临床分离的肠球菌耐药情况．我们对认1993～1995年我院分离的48珠肠球菌对氨基糖咸类（由大霉素和链霉素）的高度耐药性以及青霉素、氨个青霉素、四环素、氟哌酸、万古霉素的敏感性进行了测定，并对其结果进行了初步分析，现报告如下。材料与方法…     

2009～2013年齐齐哈尔市粪肠球菌基因序列进化研究及耐药性分析

目的研究化脓性胆管炎患者胆汁培养粪肠球菌基因序列,分析其对6种氟喹诺酮类药物的耐药性。方法对2009~2013年齐齐哈尔医学院附属三院ERCP治疗的化脓性胆管炎患者胆汁标本分离的60株粪肠球菌进行基因序列分析,并利用琼脂稀释法检测分离菌对6种氟喹诺酮类药物（FQs）的MIC50,MIC90和耐药率。结果本组粪肠球菌对6种氟喹诺酮类药物耐药率分别为：莫西沙星15.0%,加替沙星18.3%,左氧氟沙星25.0%,氧氟沙星和环丙沙星均为35.0%,诺氟沙星48.3%。粪肠球菌耐药株中的gyrA在喹诺酮类药物耐药决定区的第83位和87位氨基酸发生突变,分别为S83I,E87G。parC第80位氨基酸发生突变S80I,产生对氟喹诺酮类药物耐药。结论莫西沙星和加替沙星对粪肠球菌具有良好的抑制作用,但由于部分粪肠球菌菌株基因已发生突变,其耐药性还需进一步观察,同时还需开发更有效的具有抑制此类细菌DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的氟喹诺酮类药物。     

屎肠球菌透明质酸酶全长基因的克隆表达和免疫原性

目的构建屎肠球菌透明质酸酶（hyaluronidase，hyl）基因重组表达质粒，在大肠埃希菌中表达获得重组蛋白，探讨Hy1蛋白经口服免疫小鼠后，机体产生的免疫应答。方法PCR扩增hyl基因片段，克隆至pQE-30质粒上，构建重组质粒pQE-hyl，转化E，coli DH5α，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白Hy1；Western印迹分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后，Hy1和屎肠球菌全菌蛋白TX0016分别给小鼠灌胃进行免疫，ELISA法检测小鼠血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA。用TX0016进行腹腔攻击已免疫的小鼠，观察其免疫保护性。结果经测序hyl基因全长1662bp，为编码553个氨基酸残基的多肽。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析相对分子质量约为60000。可溶性表达占全菌的38％以上，经亲和层析后可获得纯度为92％以上的重组蛋白。Western印迹证实了其免疫反应性。灌胃免疫小鼠后，ELISA法检测结果Hy1组血清IgA、IgG、粪sIgA、肠黏液sIgA分别为0．365±0．048、0，431±0，064、0．743±0，056和1．112±0．113，对照组则分别为0，051±0．013、0．098±0．019、0．102±0，032和0，187±0，051，差异有统计学意义（P〈0．01）。用半数致死量（I，D50）的细菌量攻击后，Hy1免疫组小鼠的存活率为70％，而对照组为50％。结论融合蛋白Hy1经口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答，产生高水平的sIgA，发挥局部黏膜免疫作用。     

248株肠球菌对抗菌药物的敏感性分析

目的了解全身感染和伤口分泌物感染的粪肠球菌、屎肠球菌对抗菌药物的敏感性,为临床提供治疗依据。方法采用微量稀释法对248株自临床送检的血液、尿液及其他标本分离的肠球菌进行药敏试验,测定其MIC值。结果248株肠球菌属中,粪肠球菌187株、屎肠球菌61株,两者的比例为3.06∶1。粪肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、青霉素G的敏感率为63.2%～99.1%,高于屎肠球菌的16.7%～31.9%;屎肠球菌对四环素的敏感率为40.3%,高于粪肠球菌的19.3%;2种肠球菌对红霉素的敏感率分别是13.9%和8.3%,对利奈唑烷和万古霉素的敏感性均＆gt;95%;分离自伤口分泌物的粪肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、青霉素G、四环素的敏感性略高于血液分离菌,分离自伤口分泌物的屎肠球菌对氨苄西林、红霉素、高浓度庆大霉素、青霉素G、四环素的敏感性低于血液分离菌,伤口分泌物和血液分离得到屎肠球菌对利奈唑烷均100.0%敏感。结论粪肠球菌、屎肠球菌对不同的抗菌药物的敏感性差异较大,治疗时应根据耐药特点及菌种间的耐药性差异选择相应的药物和方案,目前万古霉素和利奈唑烷仍然是治疗肠球菌属感染的有效药物。     

屎肠球菌Hyl蛋白的免疫保护性研究

目的用基因工程方法获得屎肠球菌类透明质酸酶(Hyalronidase,Hyl)蛋白,经口服免疫小鼠后,探讨机体产生的免疫应答和抗感染保护作用。方法Hyl用Ni2+-NTA柱纯化后,作为抗原给小鼠灌胃进行免疫,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。并用屎肠球菌TX0016腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性。结果重组蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,灌胃免疫小鼠后。ELISA检测结果血清IgA、IgG,粪sIgA,肠粘液sIgA明显高于对照组(P<0.01)。通过细菌攻击后,小鼠的平均存活时间也明显长于对照组。结论重组蛋白Hyl经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部粘膜免疫作用和抗菌保护作用。Hyl有望作为预防屎肠球菌口服疫苗的候选抗原。     

肠球菌生物学性状及耐药性的调查

目的　了解湖北地区肠球菌的耐药性 ,指导临床用药。方法　对 9所大型综合医院感染标本中分离的肠球菌进行鉴定和药敏试验 ,并以“WHONET4”软件分析。结果　 335株肠球菌中 ,粪肠球菌检出率居首位 (77 9% ) ,屎肠球菌次之(9 2 % )。氨苄青霉素耐药肠球菌 (ARE)分离率为 17 0 % ,氨基糖苷类高水平耐药肠球菌 (HLAR)为 38 2 % ,未检出耐万古霉素肠球菌 (VRE)。结论　湖北地区肠球菌耐药性呈上升趋势 ,应加强肠球菌的鉴定及耐药监测     

Effect of Bacillus subtilis,Enterococcus faecium,and Enterococcus faecalis supernatants on serotonin transporter expression in cells and tissues

BACKGROUND Bacillus subtilis(B.subtilis),Enterococcus faecium(E.faecium),and Enterococcus faecalis(E.faecalis)are probiotics that are widely used in the clinical treatment of irritable bowel syndrome(IBS).Whether the supernatants of these three probiotics can improve gastrointestinal sensation and movement by regulating the serotonin transporter(SERT)expression needs to be clarified.AIM To investigate whether B.subtilis,E.faecium,and E.faecalis supernatants can upregulate SERT expression in vitro and in vivo.METHODS Caco-2 and HT-29 cells were stimulated with probiotic culture supernatants for 12 and 24 h,respectively.A male Sprague-Dawley rat model of post-infectious irritable bowel syndrome(PI-IBS)was established and the rats were treated with phosphate-buffered saline(group A)and three probiotics culture supernatants(groups B,C,and D)for 4 wk.The levels of SERT were detected by quantitative PCR and western blotting.RESULTS The levels of SERT at post-treatment 12 and 24 h were significantly elevated in Caco-2 cells treated with B.subtilis supernatant compared with those in the control group(aP<0.05).Those levels were markedly upregulated in Caco-2 cells stimulated with E.faecium and E.faecalis supernatants at 24 h(aP<0.05).In addition,SERT expression in groups B,C,and D was significantly higher than that in group A in the 2nd wk(aP<0.05).Increased SERT expression was only found in group D in the 3rd wk(aP<0.05).However,there was no significant difference in SERT expression between the groups in the last week(P>0.05).CONCLUSION The supernatants of B.subtilis,E.faecium,and E.faecalis can upregulate SERT expression in intestinal epithelial cells and the intestinal tissues in the rat model of PI-IBS.     

粪肠球菌ace阳性和阴性菌株体外生物被膜形成能力比较

目的 比较粪肠球菌ace基因阳性、阴性菌株的生物被膜形成能力,探讨粪肠球菌ace基因是否有利于细菌生物被膜的形成。方法 微量滴定板法检测46株临床分离粪肠球菌的生物膜形成能力,PCR方法检测其ace基因,比较生物膜阳性组、阴性组粪肠球菌ace基因检出率;将粪肠球菌ATCC29212(ace⁺)、野生株U8-ace^-、空质粒对照株EU8-ace^-、转化株ZU8-ace⁺接种到96孔板,培养3 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h,结晶紫染色,测定OD₅₇₀,微量滴定板法比较ATCC29212(ace⁺)、U8-ace^-、EU8-ace^-以及ZU8-ace⁺的生物被膜形成能力;将ATCC29212(ace⁺)、U8-ace^-、EU8-ace^-、ZU8-ace⁺在含盖玻片的细胞培养皿内培养6 h~72 h,共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察比较ace⁺、ace^-粪肠球菌形成的生物膜平均厚度和密度。结果 生物膜阳性组粪肠球菌ace基因检出率为76.67%,高于生物膜阴性组31.25%的检出率,差别有统计学意义 (χ²= 9.04,P> 0.05);微量滴定板法显示不同时间点ATCC29212(ace⁺)以及转化株ZU8-ace⁺的OD₅₇₀值都大于U8-ace^-的OD₅₇₀值,P< 0.01,而EU8-ace^-与U8-ace^-比较,OD₅₇₀值无统计学差别,P> 0.05;CLSM观测的ace⁺ 粪肠球菌在不同阶段所形成的生物膜的平均厚度、密度均高于ace^-粪肠球菌,P< 0.01,空质粒对照株与野生株比较,生物膜的厚度、密度无统计学差别,P> 0.05。结论 粪肠球菌胶原黏附素ace基因或有利于肠球菌生物被膜的形成。     

Infant intestinal Enterococcus faecalis down-regulates inflammatory responses in human intestinal cell lines

AIM： To investigate the ability of Lactic acid bacteria （LAB） to modulate inflammatory reaction in human intestinal cell lines （Caco-2, HT-29 and HCT116）. Different strains of LAB isolated from new born infants and fermented milk, together with the strains obtained from culture collections were tested.METHODS： LABs were treated with human intestinal cell lines. ELISA was used to detect IL-8 and TGF-β protein secretion. Cytokines and Toll like receptors （TLRs） gene expression were assessed using RT-PCR. Conditional medium, sonicated bacteria and UV killed bacteria were used to find the effecter molecules on the bacteria. Carbohydrate oxidation and protein digestion were applied to figure out the molecules＇ residues. Adhesion assays were further carried out.RESULTS： It was found that Enterococcus faecalis is the main immune modulator among the LABs by downregulation of IL-8 secretion and upregulation of TGF-β. Strikingly, the effect was only observed in four strains of E. faecalis out of the 27 isolated and tested. This implies strain dependent immunomodulation in the host. In addition, E. faecalis may regulate inflammatory responses through TLR3, TLR4, TLR9 and TRAF6. Carbohydrates on the bacterial cell surface are involved in both its adhesion to intestinal cells and regulation of inflammatory responses in the host. CONCLUSION： These data provide a case for the modulation of intestinal mucosal immunity in which specific strains of E. faecalis have uniquely evolved to maintain colonic homeostasis and regulate inflammatory responses.     

200株鲍氏不动杆菌感染的分布与耐药性检测分析

目的 分析鲍氏不动杆菌感染分布情况以及耐药性检测结果 .方法 以2017年4月-2019年5月我院住院及门诊患者脓液、尿液、血液、痰液等标本中分离出的鲍氏不动杆菌200株作为研究分析鲍氏不动杆菌对象.结果 呼吸道为鲍氏不动杆菌主要感染部位,检出率为77%,明显高于其他感染部位(P<0.05).结论 鲍氏不动杆菌对多种抗生素均具有非常明显的耐药性,因此必须保证抗生素应用的规范性和合理性,根据药敏试验结果 为患者选择抗生素,有助于保证抗感染效果.     

Novel vancomycin resistance gene cluster in Enterococcus faecium ST1486, Belgium,June 2021

We identified a novel van gene cluster in a clinical Enterococcus faecium isolate with vancomycin minimum inhibitory concentration (MIC) of 4 µg/mL. The ligase gene, vanP, was part of a van operon cluster of 4,589 bp on a putative novel integrative conjugative element located in a ca 98 kb genomic region presumed to be acquired by horizontal gene transfer from Clostridium scidens and Roseburia sp. 499. Screening for van genes in E. faecium strains with borderline susceptibility to vancomycin is important.     

铜绿假单胞菌临床分布特征及耐药性探讨

目的:分析2008年度临床分离131株铜绿假单胞菌(PAE)的临床分布特点及药敏情况,为临床合理使用抗生素提供参考。方法:收集2008年度武汉市第一医院的PAE临床分离菌株,分析其来源与分布,并采用K-B法进行药敏试验。结果:PAE标本检出率最高的是咽拭子28.24%(37/131),临床科室检出率居首位的是重症监护病房(ICU)22.14%(29/131)。PAE对头孢他啶(81.68%)和亚胺培南(67.94%)敏感率高,对氯霉素(4.58%)、复方新诺明(7.63%)、四环素(9.92%)耐药率高。结论:PAE对抗生素耐药相当严重,头孢他啶和亚胺培南是临床上对PAE进行经验性治疗时的较好选择。     

呼吸机相关肺炎病原菌及其耐药性

目的 探讨呼吸机相关肺炎(VAP)病原菌及其耐药性。方法 采用回顾调查43例VAP的临床资料、病原菌的构成及其耐药性。结果 3年来VAP的发生率为44．3％，培养出的病原菌98株，77．5％为革兰氏阴性(G^-)杆菌，其中以铜绿假单胞菌、鲍曼氏不动杆菌、大肠埃希氏菌为主，对多种抗生素耐药。18．4％为革兰氏阳性(G )球菌，以金黄色葡萄球菌最为常见；4．1％为真菌，均为白色念珠菌。结论 VAP病原菌以G^-杆菌为主，其对多种抗生素的耐药情况严重。在治疗VAP时应重视病原菌培养和药敏试验的结果，合理应用抗生素。     

福建省鼠伤寒沙门氏菌的耐药性变迁趋势的监测

本文首次报道福建省不同来源鼠伤寒沙门氏菌的耐药状况及近十年来的变迁趋势。结果表明:引起人类疾病的鼠伤寒菌具有耐药谱宽、多重耐药严重及耐药率高等特点,其耐药状况明显高于外环境、动物及健康带菌者菌株。近年来,福建省鼠伤寒菌耐药率不断上升,多重耐药菌株急剧增多,耐药谱迅速增宽,对常用抗生素广谱耐药。因此,定期进行鼠伤寒菌的耐药性监测,选择有效药物,并积极寻求消除耐药性质粒的方法,是防治鼠伤寒菌病急待解决的课题。     

Current Clinical Practice: Application of Resistance Reversal Agents in Hematologic Malignancies

The clinical application of resistance reversal drugs for patients with hematologic malignancies is reviewed. The phenomenon of multidrug resistance versus other mechanisms are discussed. The pump-like mechanisms of P-glycoprotein, multidrug resistance associated protein, lung resistance protein and of other ATP binding cassette transporter proteins are reviewed briefly, as well as the important substrate drugs and pump-blocking compounds. The problems associated with resistance protein assays in clinical samples and the concept of prognostic versus therapeutic clinical relevance are described, within the context of selected hematologic malignancies. Toxicities and treatment outcomes of phase II and III trials of reversal agents in lymphoma, multiple myeloma, myelodysplastic syndromes, acute myeloid leukemia and blast phase of chronic myeloid leukemia are reviewed. Finally, current options for on-study management of relapsed or refractory hematologic malignancy patients are discussed.