Pembrolizumab联合卡铂对顺铂耐药卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响和机制研究

目的 探讨Pembrolizumab联合卡铂对顺铂耐药卵巢癌细胞(SKOV-3/顺铂)的增殖、凋亡的影响和机制.方法 CKK-8法检测SKOV-3/顺铂的耐药指数和半数抑制浓度(IC50).CKK-8法、流式细胞术(FCM)检测实验组和对照组的增殖、凋亡.蛋白免疫印迹法(western blotting)检测程序性死亡...     

曲古霉素A对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和调亡的作用及其机制.方法:不同浓度的TSA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4(Ac-H4)乙酰化水平,荧光定量PCR方法检测p21 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:随着TSA浓度增加,人宫颈癌Hela细胞内Ac-H4乙酰化水平增加(P＜0.05),p21 mRNA表达增加(P＜0.05),细胞增值率减少(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05).结论:TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性.     

紫杉醇脂质体联合卡铂同步放化疗治疗中晚期宫颈癌的疗效观察

目的 研究中晚期宫颈癌患者采用紫杉醇脂质体联合卡铂方案同步放化疗的临床治疗效果。方法 选取30例中晚期宫颈癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为试验组与对照组,每组15例。对照组应用紫杉醇联合卡铂方案同步放化疗,试验组应用紫杉醇脂质体联合卡铂方案同步放化疗。观察比较两组患者治疗3个月后的临床效果,治疗6个月后的肿瘤复发情况、无瘤生存情况,以及治疗后毒副反应发生情况。结果 试验组患者治疗3个月后的临床有效率为93.33%,明显高于对照组的60.00%,差异有统计学意义（P<0.05）。试验组患者治疗6个月肿瘤复发率为6.67%,明显低于对照组的40.00%,无瘤生存率（66.67%）明显高于对照组的26.67%,差异均有统计学意义（P<0.05）。试验组患者的毒副反应发生率为53.33%,与对照组的46.67%比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 对于中晚期宫颈癌患者应用紫杉醇脂质体联合卡铂方案同步放化疗,可以显著提升患者的临床疗效和无瘤生存率,降低肿瘤复发率,且不良反应可耐受,临床应用价值较高。     

紫杉醇联合顺铂对局部晚期宫颈癌的疗效研究

目的:研究新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NACT)紫杉醇联合顺铂方案(TP)对局部晚期宫颈癌的近期疗效,分析化疗前后细胞核增殖抗原PCNA及凋亡抑制基因Survivin的变化,探讨其对宫颈癌的治疗意义.方法:手术前行新辅助化疗的宫颈癌患者30例为研究组,直接手术的20例患者为对照组,分析近期疗效.应用免疫组化方法检测宫颈癌组织的PCNA及Sur-vivin表达.分析其改变与化疗的关系和意义.结果:①研究组TP方案的总有效率为70%;②研究组TP方案盆腔淋巴结转移率(3.3%)显著低于对照组(25.0%);③临床有效组的PCNA高表达率及Survivin阳性率在NACT后明显降低(P<0.05),临床无效组则无明显变化(P>0.05).结论:新辅助化疗,TP方案对局部晚期宫颈癌有效,可降低盆腔淋巴转移率,化疗有效者的PCNA及Survivin表达明显降低,可能成为评价TP方案疗效的指标.     

IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法将携带有目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌Hela细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率。同时以转染空载体pAd track CMV的Hela细胞和野生型Hela细胞作为空载体对照和阴性对照。结果经MTT法测定,三组之间OD值总体上有差异（P〈0.001）,IL-24组OD值明显低于空质粒组和阴性对照组（P〈0.001）,而空质粒组和阴性对照组的OD值无明显差异（P=0.661）;经流式细胞仪测定,三组之间的细胞早期凋亡率总体上有差异（P〈0.05）,IL-24组细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组（P〈0.05）,而空质粒组和阴性对照组的细胞早期凋亡率无明显差异（P〉0.05）;与空质粒组和阴性对照组相比,IL-24组G0/G1期细胞增多（P〈0.05）,S期细胞减少（P〈0.05）,而空质粒组和阴性对照组无明显差异（P〉0.05）。结论IL-24对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用。     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡信号传导通路的影响

目的:研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;研究VEGF-C受体KDR、信号通路PI3K、MAPK在VEGF-C对宫颈癌增殖和凋亡调控中的作用。方法:应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达;应用KDR-Ab、信号通路PI3K抑制剂LY294002、信号通路MAPK抑制剂PD98059预处理HeLa细胞,再进行VEGF-C刺激,观察上述指标的变化。结果:重组VEGF-C(50ng/μl)刺激HeLa细胞后增殖指数增加(2.13 vs 1),细胞周期S期比率增多[(64.26±0.20)%vs(30.91±0.09)%,P<0.05],细胞凋亡率降低(3.29±0.35 vs 7.44±0.55,P<0.05);Bcl-2、Cyclin D1表达增加(P<0.05)。KDR-Ab、LY294002预处理后与VEGF-C组相比增殖指数降低,细胞周期S期比率下降,凋亡指数升高,Bcl-2、Cyclin D1表达降低。PD98059预处理后,与VEGF-C组相比增殖指数降低、细胞周期S期比率下降、Bcl-2、Cyclin D1表达降低,但对VEGF-C诱导的凋亡无明显影响。结论:外源性VEGF-C作用于肿瘤细胞自身的KDR受体,激活细胞内信号传导通路MAPK途径和(或)PI3K途径诱导Cyclin D1表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,进而促进He-La细胞增殖;通过PI3K途径诱导Bcl-2表达,抑制凋亡。     

纳秒脉冲消融联合顺铂对人宫颈癌细胞Hela生长的影响及机制

目的:通过研究纳秒脉冲消融与顺铂对人宫颈癌细胞Hela的体外作用,探讨低剂量纳秒脉冲电场联合低浓度顺铂之间的相互作用及机制。方法:采用CCK8法检测纳秒脉冲消融、顺铂对细胞增殖的影响,选取低于半抑制率(IC_(50))的低剂量(6个、12个)脉冲电场和低浓度(1μg/ml、2μg/ml)顺铂,CCK8法检测两者联合后的抑制率,计算联合作用指数(IC值),取IC值最低时的脉冲次数和顺铂浓度,将实验分为对照组、单纯脉冲电场组、单纯顺铂组和脉冲电场联合顺铂组,Annexin V/PI双染细胞后流式细胞仪检测凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:纳秒脉冲消融与顺铂均抑制细胞生长,低剂量脉冲电场和低浓度顺铂的联合作用指数均0.9,表明两者有协同作用,脉冲电场联合顺铂组的凋亡率最高(P0.05),且该组Bax蛋白表达最高,Bcl-2蛋白表达最低(P0.05)。结论:低剂量脉冲电场联合低浓度顺铂具有协同作用,其中12个脉冲联合2μg/ml顺铂对肿瘤细胞抑制最显著,其机制可能与Bax高表达,促进细胞凋亡有关。     

辣椒碱对人宫颈癌细胞Hela和C-33A的抗肿瘤活性

目的:研究辣椒碱对Hela(HPV+)和C-33A(HPV-)细胞生长增殖和凋亡的影响,探讨辣椒碱对宫颈癌细胞的抑制作用与相关机制。方法:选取HPV(+)的Hela和HPV(-)的C-33A宫颈癌细胞株为研究对象。CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测辣椒碱对细胞生长的抑制作用、细胞周期和对细胞凋亡的影响;q PCR和Western blot法检测细胞凋亡相关基因m RNA和蛋白表达。结果:辣椒碱对宫颈癌Hela和C-33A细胞增殖抑制呈浓度和时间依赖性;辣椒碱能显著促进两种细胞凋亡,对Hela细胞的促凋亡效果更明显。辣椒碱处理后,两种细胞的细胞色素C(cytchrome C)和caspase3表达量显著增加,Bax表达量增加,Bcl-2表达量降低。结论:辣椒碱可显著抑制宫颈癌Hela和C-33A细胞增殖和促进细胞的凋亡,其机理可能是通过诱导细胞内活性氧类物质(ROS)增加、细胞色素C和Caspase3表达量增加等途径,最终诱导细胞凋亡。     

卡铂与卡铂加表阿霉素二线化疗铂类敏感的卵巢癌

为分析卡铂及卡铂加另一种无交叉耐药的药物(表阿霉 素)治疗一线化疗中对铂类为基础化疗敏感的卵巢癌患者有效率及毒性反应情况,搜集1991～1998年意大利Milan、Turin、Varese及Pavia等大学妇产科FIGO分期Ⅱ～Ⅳ期,应用顺铂或卡铂为基础的一线化疗有效,一线化疗6个月后出现肿瘤进展或复发的上皮性卵巢癌患者190例进行随机     

吴茱萸碱抑制人卵巢癌细胞SKOV3增殖的实验研究

目的:探讨吴茱萸碱对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度吴茱萸碱对SKOV3细胞增殖活性的影响;采用Annexin V-FITC/PI染色检测吴茱萸碱对SKOV3细胞凋亡的影响;Western blot法检测吴茱萸碱对SKOV3细胞内caspase-3和PARP活化的影响。构建卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型并给予吴茱萸碱灌胃,绘制肿瘤生长曲线、称取瘤重,检测肿瘤组织中caspase-3和PARP活化情况。结果:0.5、1、2、4μmol/L吴茱萸碱处理SKOV3细胞24h后,细胞活性较对照组分别减少(15.95±1.61)%、(33.82±4.03)%、(46.62±5.45%)和(63.82±5.42)%,且呈明显时间和浓度依赖性;0.5、1、2μmol/L吴茱萸碱作用SKOV3细胞24h诱导细胞凋亡率分别为(12.93±3.81)%、(26.27±3.31)%和(36.72±4.73)%,均高于对照组(8.08±1.04,P0.05);吴茱萸碱显著活化SKOV3细胞内caspase-3和PARP,诱导细胞凋亡发生。成功构建卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,给药14天后裸鼠皮下移植瘤体积明显小于对照组(P0.01),给药21天后移植瘤体积较对照组减少54.01%(P0.01)、瘤重减少42.03%(P0.01),给药组裸鼠移植瘤蛋白内cleaved caspase-3和cleaved PARP小片段活化部分显著增多。结论:吴茱萸碱显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3体外增殖和裸鼠皮下移植瘤生长,其作用机制与吴茱萸碱诱导细胞凋亡密切相关。     

CXCL12-CXCR4生物轴对宫颈癌Hela细胞株的影响

目的:探讨CXCR4在宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达情况,及CXCL12-CXCR4生物轴对Hela的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并研究CXCR4的特异性拮抗剂AMD3100对CXCR4的特异性阻断效果。方法:将宫颈癌Hela细胞株细胞进行体外培养。免疫组化检测Hela细胞中CXCR4的表达情况。采用MTT法研究不同浓度CXCL12对Hela细胞增殖的影响;Transwell法进行实验,判断在无血清培养液的生长条件下,不同浓度的CXCL12和CXCR4拮抗剂AMD3100对Hela细胞迁移、侵袭的影响。结果:CXCR4在Hela细胞的细胞膜、细胞质中有表达。1组Hela细胞的增殖数与2组及3组两两比较,差异有统计学意义(P0.05),4组Hela细胞的增殖数较2组、3组低,差异有统计学意义(P0.05)。与A组Hela细胞的迁移数和侵袭数相比,B组明显更高(P0.05);而C组Hela细胞的迁移数和侵袭数明显高于A组和B组;D组Hela细胞的迁移数和侵袭数均低于A、B、C3组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:CXCR4在Hela细胞的细胞膜、细胞质中均表达。CXCL12-CXCR4生物轴可促进宫颈癌Hela细胞株的迁移及侵袭,而CXCR4拮抗剂AMD3100能抑制这一过程,CXCL12-CXCR4生物轴在宫颈癌Hela细胞生长和转移过程中可能起着重要作用。     

STAT3抑制剂HO-3867与顺铂单独或联合使用对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为影响的研究

目的:确定转录活化因子3(STAT3)抑制剂H0-3867与顺铂单独或联合使用对子宫颈癌He-La细胞生物学行为的影响,并探索其作用机制.方法:培养子宫颈癌HeLa细胞,采用噻唑蓝(MTF)法检测不同浓度的H0-3867(0～10 μmol/L)和顺铂(0～20μg/ml)对HeLa细胞增殖的影响,根据结果确定实验浓度...     

自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用

目的：研究自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法：不同浓度顺铂作用Hela细胞后,丹磺酰戊二胺（MDC）法观察细胞中自噬体的形成,蛋白质印迹法（Western blot）检测自噬基因Beclin 1和LC3蛋白的表达;将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1（＋）-Beclin1转染Hela细胞,Western blot检测Beclin 1在Hela细胞中的蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测顺铂对Hela半数抑制浓度（IC50）的变化,流式细胞仪检测自噬细胞与凋亡细胞的百分率.结果：顺铂作用Hela细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现浓度依赖性（P＜0.05）;pcDNA3.1（＋）-Beclin 1转染Hela细胞后,Beclin 1蛋白表达增加（P＜0.05）,MTT检测IC50由转染前的1.0 mg/L下降到0.5 mg/L,凋亡细胞百分率和自噬细胞百分率均升高,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：自噬参与了顺铂对宫颈癌Hela细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性.     

桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法:选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养,分为不同浓度桦褐孔菌醇组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)和对照组(未加桦褐孔菌醇)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定两组对人卵巢癌SKOV3细胞株的作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜观察两组细胞形态学变化;通过免疫组化法比较两组核增殖抗原Ki-67的表达。结果:①作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的抑制率分别为(17.16±4.71)%、(35.16±4.26)%和(57.83±3.48)%,与对照组(0)比较差异有统计学意义(P<0.05)。②HE染色光镜下,桦褐孔菌醇组卵巢癌SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;倒置显微镜下,桦褐孔菌醇组SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力明显减弱。③作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的Ki-67阳性表达率分别为(64.67±3.98)%、(43.83±3.06)%和(34.00±2.61)%,与对照组(92.83±3.06)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:桦褐孔菌醇对人卵巢癌SK-OV3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用,并表现出浓度依耐性。     

新型重组高效复合干扰素对宫颈癌细胞的生长抑制及促凋亡作用

目的:探讨新型重组高效复合干扰素对宫颈癌Caski细胞的作用,并与同类型复合干扰素、普通重组Ⅰ型干扰素、化疗药物对比.方法:应用新型重组高效复合干扰素、复合α干扰素、干扰素α-2b和顺铂以0.156 μg/ml、0.625 μg/ml、2.5 μg/ml及10 μg/ml浓度作用于体外培养的Caski细胞72小时后,MTT法检测并计算细胞抑制率并比较.应用新型重组高效复合干扰素、复合α干扰素、干扰素α-2b和顺铂以0.156μg/ml、0.625μg/ml、2.5μg/ml浓度作用于体外培养的Caski细胞72小时后,以流式细胞仪检测Caski细胞的凋亡率并进行比较.结果:几种干扰素及顺铂均能导致Caski细胞生长抑制及促进细胞凋亡,相同浓度条件下,新型重组高效复合干扰素和顺铂对Caski细胞的抑制及凋亡作用强于复合α干扰素和干扰素α-2b的作用,尤以顺铂的作用最强.结论:重组高效复合干扰素对体外培养的宫颈癌Caski细胞的生长有抑制作用,并能促进Caski细胞凋亡;作用虽然不及化疗药物顺铂,但较同类型干扰素、普通重组Ⅰ型干扰素的作用强.     

野生型P53及其调控基因与子宫颈癌发病机制

P53基因是迄今发现与人类肿瘤的发生相关性最高的抑癌基因,在人类癌症中发生突变的频率高达50％。在子宫颈癌组织中表达则降低,且以野生型（wt）为主。wtP53第4外显子72密码的基因多态性与子宫颈癌发病机制密切相关。wtP53蛋白在子宫颈癌细胞中半衰期短,功能易失活,具有调节细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长的功能。其功能失活与多种基因,如E6,E7,MDM2和STAT3等基因的降解作用有关。     

微小RNA与宫颈癌

宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一,高危人乳头状瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发生的必要因素。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码的小RNA,参与了许多病毒致病和肿瘤发生过程。利用实验生物学及生物信息学方法对与肿瘤相关的miRNA进行研究是当前研究的热点。其中,在宫颈癌中目前已发现若干miRNA（如miR-21,-143,-146a,-199a等）的异常表达。综述miRNA与宫颈癌发生发展关系的研究。     

野生型P53及其调控基因与子宫颈癌发病机制

P53基因是迄今发现与人类肿瘤的发生相关性最高的抑癌基因,在人类癌症中发生突变的频率高达50%。在子宫颈癌组织中表达则降低,且以野生型(wt)为主。wtP53第4外显子72密码的基因多态性与子宫颈癌发病机制密切相关。wtP53蛋白在子宫颈癌细胞中半衰期短,功能易失活,具有调节细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长的功能。其功能失活与多种基因,如E6,E7,MDM2和STAT3等基因的降解作用有关。     

微小RNA与宫颈癌

宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一,高危人乳头状瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发生的必要因素。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码的小RNA,参与了许多病毒致病和肿瘤发生过程。利用实验生物学及生物信息学方法对与肿瘤相关的miRNA进行研究是当前研究的热点。其中,在宫颈癌中目前已发现若干miRNA（如miR-21,-143,-146a,-199a等）的异常表达。综述miRNA与宫颈癌发生发展关系的研究。